尿路及胸腹水癌细胞基因检测

目的 在形态学基础上开展更加灵敏准确的体液肿瘤细胞基因变异临床应用转化项目。方法常规形态学诊断后，应用多重荧光PCR、基因测序和FISH法分别检测尿液细胞DNA微卫星的不稳定性（microsatellite instability．MSI）和缺失、胸／腹水癌细胞表皮生长因子受体（EGFR）基因突变。结果29例尿液样本中的10例泌尿系肿瘤患者有4个低度MSI，5个高度MSI，1例为正常，1例膀胱癌尿液发现P16缺失／CSP17三体；诊断阳性敏感度达90％。而7例膀胱癌术后尿液复查患者，9例泌尿系统炎症，血尿和膀胱异型增生患者及3例正常体检者中仅发现一例微卫星不稳定现象，阴性特异性达95％。30例肺癌患者的胸／腹水细胞中有3例分别检测出EGFR基因第19外显子746—750del缺失1例，752—759del缺失1例，18外显子281del缺失1例及c—kit基因第11外显子558—565del缺失1例。结论应用多重PCR，FISH和基因测序法检测体液肿瘤细胞的基因突变缺失及DNA微卫星的不稳定性，可早期确诊和提高体液癌细胞阳性率（90％），细胞HE染色后也可进行微卫星和基因测序检测，适于晚期肿瘤胸腹水和膀胱癌治疗后复查，是无创性的诊断高度敏感特异的分子病理临床应用新项目。     

武汉地区非小细胞肺癌EGFR基因突变相关性研究

目的调查武汉地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因型分布特点,探究肺癌组织EGFR基因突变与患者吸烟习惯、肿瘤病理学类型、肿瘤分化程度以及淋巴结转移与否的相关性。方法收集185例NSCLC患者石蜡组织切片,采用常规聚合酶链反应(PCR)方法检测EGFR基因18、19、20、21四个外显子,DNA测序分析确定EGFR基因突变类型。结果 185例NSCLC患者中,男性EGFR突变率为7.3%,明显低于女性的17.8%,差异有统计学意义(P0.05);吸烟患者FGFR基因突变率为7.7%,明显低于不吸烟者的20.0%,差异有统计学意义(P0.01),其中腺癌EGFR突变率为15.3%(18/118),腺鳞癌突变率为10.0%(3/30),鳞癌突变率为5.4%(2/37);共检测出7种类型突变,分别为Gln787Gln、Leu858Arg、E746-A750del、S752-I759del、A750-I759del、Gly719Ser、Ser768Ile。结论武汉地区NSCLC EGFR基因的突变形式主要为点突变及缺失突变。EGFR基因突变与患者性别有关,与肿瘤病理学类型、肿瘤分化程度和淋巴结转移与否无明显关系。     

焦磷酸测序分析表皮生长因子受体21号外显子基因突变方法的建立

目的建立表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)21号外显子基因突变的焦磷酸测序方法。方法用纯野生和纯突变的EGFR21质粒DNA按比例配制7份不同突变比例的DNA样本和1份正常人血液样本,对焦磷酸测序技术检测EGFR21基因突变方法进行验证,制备175例非小细胞肺癌标本g DNA,应用Qigene Pyro Mark Q24焦磷酸测序仪进行EGFR21基因的焦磷酸测序。结果建立了可同时检测EGFR基因21号外显子L858R和L861Q突变的焦磷酸测序方法,175例非小细胞肺癌标本中共检测出EGFR21突变型样本29例,总突变率为16.57%(29/175),其中L858R突变占14.29%(25/175),L861Q突变占2.28%(4/175)。结论 EGFR21基因突变的焦磷酸测序新方法具有快速、简便、灵敏度和准确度高的优点,特别适合于科研和临床批量检测的需要。     

人工神经网络分析预测非小细胞肺癌患者EGFR基因突变的模型建立及其关联因素分析

目的应用人工神经网络法(ANN)建立预测非小细胞肺癌(NSCLC)患者EGFR基因突变模型及分析其关联因素,为NSCLC治疗提供数据。方法采用扩增阻滞突变系统检测434例NSCLC患者样本的EGFR基因外显子19缺失、外显子20 T790M突变、外显子21 L858R突变,应用ANN建立NSCLC患者EGFR基因突变预测模型及分析其关联因素。结果显示434例NSCLC患者EGFR基因外显子19、20、21总突变率为42.6%,其中腺癌EGFR基因突变率明显高于鳞癌、大细胞癌,女性突变率明显高于男性。最终ANN预测模型变量包括吸烟、吸烟指数、病理类型、胸水CEA、性别、血液CEA,该模型曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.806、64.00%、73.50%。进一步分析显示较高胸水CEA、腺癌、吸烟人群、高血液CEA水平、高吸烟指数、女性肺癌患者更易发生EGFR突变。结论 NSCLC患者EGFR基因突变率较高;本研究建立了ANN预测NSCLC患者EGFR突变预测模型,具有较好的诊断效能。     

原发性肝癌表皮生长因子受体突变的研究

目的对原发性肝癌患者EGFR基因进行检测,分析EGFR基因突变与原发性肝癌及患者年龄组成的关系。方法对2 507例确诊原发性肝癌的石蜡包埋组织样本用PCR扩增法和双向测序法检测EGFR基因突变状态。结果 2 507例患者仅检测出620例(24.74%)EGFR基因20外显子同义突变Q787Q(2361G>A)和263例(10.49%)19内含子点突变(2284-60T>C);EGFR基因突变与患者性别、病理类型无关(P>0.05),与患者的年龄段组成明显相关(P<0.05),且基于年龄段的分布,20外显子突变与19内含子突变呈显著正相关(P<0.05)。结论本研究中未发现EGFR基因热点突变。同义突变位点Q787Q尚存在进一步需要被证实的功能。20外显子突变和19内含子突变与患者年龄分布有明显相关性,可为原发性肝癌患者提供更具体的个体化治疗方案。     

衢州地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析

目的探讨衢州地区非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变特点的相关性。方法选取2017年1月至2018年2月衢州市人民医院收治的106例NSCLC患者的石蜡包埋组织,采用PCR-荧光探针法检测EGFR基因第18～21号外显子基因突变情况。结果 106例NSCLC患者总突变率为43.40%,第18、19、20、21号外显子突变率分别占突变总数的2.17%,41.31%,4.34%,52.18%,女性EGFR基因的突变率高于男性,差异有统计学意义(χ~2=5.52,P=0.02),无吸烟史患者高于有吸烟史患者,差异有统计学意义(χ~2=4.76,P=0.03),腺癌患者高于鳞癌患者,差异有统计学意义(χ~2=10.59,P=0.01),EGFR基因的突变率与NSCLC患者的年龄无相关性(χ~2=0.65,P=0.42)。结论衢州地区NSCLC患者EGFR基因突变以19号外显子的缺失和21号外显子的点突变为主,女性、无吸烟史及腺癌的NSCLC患者EGFR基因突变率较高,可接受以EGFR为靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂治疗。     

焦磷酸测序法和直接测序法检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的比较研究

目的比较PCR-直接测序法和PCR-焦磷酸测序法检测表皮生成因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)基因突变的一致性和差异性,探寻适应于临床检测体细胞EGFR基因突变的方法,为非小细胞癌患者的个体化用药提供理论依据。方法采用双盲的方法应用PCR-直接测序法和PCR-焦磷酸测序法检测13例(17个突变点)已知突变比例DNA样本中EGFR外显子18、19、20和21的突变情况,分析2种检测方法对各种突变的检出率和检准率;另选择实验室收集的100例非小细胞肺癌组织标本,分别采用直接测序法和焦磷酸测序法检测EGFR外显子18、19、20和21的突变情况,结果比较采用卡方检验。结果 2种检测方法对于检测EGFR18、19、20和21的结果差异有统计学差异,但焦磷酸测序法的准确度和灵敏度更高,操作更加简便。结论与直接测序法相比,PCR-焦磷酸测序法更加适用于临床检测体细胞基因突变,能够更好地识别突变比例较低的组织样本,对临床指导非小细胞肺癌TKI类药物个体化用药与预测其药物疗效都具有重要意义,值得临床进一步推广应用。     

肺腺癌患者EGFR基因突变情况及影响因素分析

目的 探讨肺腺癌患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及与临床、影像学及病理学特征的相关性。方法 选择2017年8月至2021年7月在海南省某肿瘤医院诊治的370例肺腺癌患者作为研究对象,根据EGFR基因检测结果分为野生型组和突变型组,将2组患者的性别、年龄、分期、腺癌类型、IASLC分级、组织学亚型、CT影像学特征等对EGFR突变的影响进行单、多因素分析。结果 经EGFR基因检测,共有EGFR基因突变患者172例,EGFR野生型患者198例,基因突变率为46.49%;其中EGFR基因19号外显子突变75例,占突变组43.60%;EGFR基因21号外显子突变97例,占突变组59.40%。经多因素Logistic回归分析,女性、有吸烟史、有毛刺征、有空气支气管征、乳头型浸润型黏液性腺癌是EGFR突变的危险因素（均P<0.05）,微浸润腺癌是EGFR突变的保护因素（P<0.05）。EGFR基因19号外显子、21号外显子突变患者的临床资料、影像学及病理学特征均无明显差异（均P>0.05）。结论 肺腺癌患者EGFR基因突变具有相关的影像学、病理学特征,对制定患者的个性化...     

胃癌微卫星不稳定和KRAS基因突变与肿瘤免疫微环境的关系

目的 检测胃癌患者微卫星不稳定(MSI)和KRAS基因突变状态,探讨两者相互关系及对肿瘤免疫微环境的影响。方法 收集胃癌90例,采用多重荧光PCR法检测MSI,ARMS-PCR法检测KRAS基因第2号外显子突变,通过流式细胞分析术检测部分胃癌术后标本TILs CD8和PD-1表达水平。结果 MSI在胃癌中总发生率43.3%,KRAS基因突变率为8.89%,两者均在性别、年龄、肿瘤分期方面差异无统计学意义(P>0.05),两者之间不存在明显相关性(r=-0.037)。在不同MSI状态或KRAS基因突变背景下,胃癌组织TILs中CD8表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。KRAS基因突变与PD-1表达水平无明显相关性(P>0.05)。MSI-H组PD-1表达水平显著高于MSI-L组和MSS组(P<0.01)。结论 MSI发生和KRAS基因突变是胃癌形成过程中的相对独立事件,MSI-H表达的胃癌患者可能受益于肿瘤免疫治疗。     

一例色素失禁症女婴的NEMO基因突变

目的检测一例色素失禁症(incontinentia pigmenti,IP)新生儿及其父母核因子-κB关键调节基因(nuclear factor-κB essential modulator,NEMO)突变。方法采集患儿及其父母外周血,提取DNA;采用多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,PCR)检测NEMO基因是否存在频发突变共有序列NEMO△4-10缺失,并对NEMO基因所有外显子进行Sanger测序。结果患儿存在NEMO基因外显子4-10的杂合性缺失,父母双方均不存在NEMO基因突变,该突变为新发突变;Sanger测序表明患儿另一拷贝NEMO基因外显子及父母NEMO基因外显子均未检出有意义的突变。结论该IP患儿检出NEMO基因外显子4-10杂合性缺失,PCR扩增和Sanger测序联合检测NEMO基因突变对IP临床遗传咨询有一定的应用价值。     

Radiation-induced genomic instability: radiation quality and dose response

Genomic instability is a term used to describe a phenomenon that results in the accumulation of multiple changes required to convert a stable genome of a normal cell to an unstable genome characteristic of a tumor. There has been considerable recent debate concerning the importance of genomic instability in human cancer and its temporal occurrence in the carcinogenic process. Radiation is capable of inducing genomic instability in mammalian cells and instability is thought to be the driving force responsible for radiation carcinogenesis. Genomic instability is characterized by a large collection of diverse endpoints that include large-scale chromosomal rearrangements and aberrations, amplification of genetic material, aneuploidy, micronucleus formation, microsatellite instability, and gene mutation. The capacity of radiation to induce genomic instability depends to a large extent on radiation quality or linear energy transfer (LET) and dose. There appears to be a low dose threshold effect with low LET, beyond which no additional genomic instability is induced. Low doses of both high and low LET radiation are capable of inducing this phenomenon. This report reviews data concerning dose rate effects of high and low LET radiation and their capacity to induce genomic instability assayed by chromosomal aberrations, delayed lethal mutations, micronuclei and apoptosis.     

子宫内膜癌miR-129-2甲基化与微卫星不稳定性的关系研究

目的探讨子宫内膜癌患者miR-129-2甲基化状态与微卫星不稳定性的关系及其与子宫内膜癌临床病理特征间的关系。方法选取2017年3月-2019年3月温州市中心医院接受治疗的子宫内膜癌患者51例作为子宫内膜癌组,另选取因绝经期阴道不规则出血和月经紊乱需行子宫内膜病理检查者59例作为对照组,检测两组子宫内膜癌组织中miR-129-2基因启动子甲基化状态与微卫星不稳定状态,检测两者与子宫内膜癌临床病理参数相关性,检测miR-129-2基因启动子甲基化状态与微卫星不稳定状态之间相关性,采用Logistic分析影响子宫内膜癌发生危险因素。结果与对照组相比,子宫内膜癌组miR-129-2基因Cp G岛发生甲基化率、微卫星不稳定阳性率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-129-2甲基化状态、微卫星不稳定状态与子宫内膜癌分化程度、临床分期、远处转移密切相关,差异有统计学意义(P<0.05);根据微卫星不稳定状态,将子宫内膜癌患者分成微卫星不稳定阴性组36例,微卫星不稳定阳性组15例,两组miR-129-2甲基化比例差异无统计学意义(P>0.05);Logistic分析显示,miR-129-2甲基化、微卫星不稳定是子宫内膜癌发生危险因素(OR=2.726,1.898,P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中miR-129-2基因甲基化、微卫星不稳定性可能参与子宫内膜癌进程,miR-129-2基因甲基化与微卫星不稳定性无明显相关性。     

PCR-SSCP筛检非小细胞肺癌EGFR基因突变的临床应用

目的对PCR-SSCP筛检非小细胞肺癌EGFR基因突变的临床价值进行评价分析。方法随机抽取在2010年1月—2012年7月间该院收治的非小细胞肺癌临床患者病例100作为研究对象,分别采取DNA测序法和PCR-SSCP法对研究对象展开EGFR基因突变检测,并将DNA测序法作为金标准,对PCR-SSCP的准确性进行评价。结果经统计得知,有DNA测序法检出32例患者中发生EGFR基因突变者31例,检出率为31.0%,经PCR-SSCP法检测出突变者34例,检出率为34.0%,两组差异不存在统计学意义(P>0.05)。结论采取PCR-SSCP法对非小细胞肺癌EGFR基因突变进行筛检的准确性较高,值得对其给予关注。     

The first molecular analysis of a Hungarian HNPCC family: a novel MSH2 germline mutation

BACKGROUND: Hereditary nonpolyposis colorectal cancer is an inherited disease characterized by onset at an early age, an excess of synchronous and metachronous large bowel tumors and a variety of extracolorectal malignancies. Basal and squamous cell carcinomas of the skin are not customarily included in the tumor spectrum of the syndrome. The disease is caused by a germline mutation in one of the DNA mismatch repair genes, most commonly MSH2 or MLH1, and typically presents with microsatellite instability and frequent loss of mismatch repair protein expression in the tumor tissue. PATIENT: The case of a 62-year old woman who had a history of colon cancer at the age of 46 years, endometrial cancer at the age of 56 years, baso-squamous, and squamous cell cancer of the face at the ages of 53, 54, 62 and 58 years, respectively, and rectal cancer at 60 is reported. Her family fulfills the Amsterdam criteria for the diagnosis of hereditary nonpolyposis colorectal cancer. The baso-squamous cell, the squamous cell, the endometrial and the rectal cancers were assessed for the microsatellite instability status and the expression of the MSH2 and MLH1 mismatch repair proteins, and the p53 tumor suppressor protein by immunohistochemistry. Mutational screening using an automated capillary DNA sequencer was performed by the direct genomic sequencing of 17 fragments of the MSH2 gene, which covers promoter, all exons and flanking intronic regions. RESULTS: All cancers displayed microsatellite instability and were positive for the p53 protein. The immunohistochemical staining in the baso-squamous cell, the squamous cell, the rectal and endometrial cancers were negative for MSH2 and positive for MLH1 proteins. DNA sequencing analysis revealed a mutation c.2292G > A in exon 14 of the MSH2 gene, which is altering the 764. amino acid, the tryptophan to STOP codon (p.W764X). Thus the MSH2 protein is presumably truncated by 171 aminoacids. CONCLUSION: To the best of authors' knowledge, this is the first molecular characterization of a Hungarian hereditary nonpolyposis colorectal cancer family. According to the Human Mutation Database and International Collaborative Group of HNPCC Database, this mutation is novel, has not been reported previously. Cutaneous baso-squamous and squamous cell cancers may present as part of the HNPCC phenotype. Detection of the loss of mismatch repair protein expression and mismatch repair gene mutation mapping, represents a significant improvement of the diagnosis of this syndrome in Hungary. These examinations identify the mutation carriers who are at an increased risk of developing cancers.     

结直肠癌RAS、BRAF基因状态与临床病理特征的关系

目的分析中国人群结直肠癌患者中KRAS、NRAS及BRAF基因突变状态与临床病理特征之间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2020年11月于福建省肿瘤医院接受治疗的370例结直肠癌患者的肿瘤组织标本,检测KRAS、NRAS、BRAF基因突变状态及MMR蛋白表达状态,分析基因突变状态与结直肠癌临床病理特征的关系。结果370例患者中存在KRAS基因突变155例(41.9%),NRAS基因突变19例(5.1%),BRAF基因突变40例(10.8%),其中1例患者突变类型为G469V,其他均为V600E突变。KRAS基因在女性、高中分化患者中突变率高(P<0.05)。NRAS基因突变多见于低分化、浸润型患者(P<0.05)。BRAF V600E突变在右半结肠癌、年龄小于50岁、低分化、浸润型、淋巴结及远处转移患者中的突变率高(P<0.05)。结论KRAS基因突变与性别、分化程度有关,NRAS基因突变与分化程度、肿瘤大体分类有关,BRAF基因V600E突变与肿瘤原发部位、年龄、分化程度、肿瘤大体分类、区域淋巴结及远处转移有关。对结直肠癌患者进行KRAS、NRAS及BRAF基因的检测,为了解中国患者热点基因突变分布情况和临床精准诊疗提供理论依据。     

miR-125b-1基因与人肺癌临床病理特征及其预后的关系

目的研究miR-125b-1基因突变与人肺癌临床病理特征和预后的关系，探讨miR-125b-1基因在人肺癌发生、发展过程中的可能作用。方法采用聚合酶链反应．单链构象多态性分析（PCR—SSCP）检测肺癌原发灶癌组织miR-125b-1基因突变情况。结果miR-125b-1在癌旁正常肺组织中未发现异常，在肺癌组织中存在基因突变，突变率33．1％（40／121例），miR-125b-1基因突变与癌的淋巴结转移及临床分期呈正相关（r=0．29，0．24，P〈0．01），与其他临床病理特征无关。miR-125b-1基因突变组肺癌患者的术后长期生存率显著低于高表达组（P〈0．05）。结论肺癌组织中存在着miR-125b-1基因突变，miR-125b-1基因突变在肺癌的发生发展中可能起着重要作用。     

表皮生长因子受体基因突变检测方法及质量评价

表皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸激酶受体,它介导的信号转导途径调节细胞的生长、增殖和分化。EGFR基因突变的检测能为肿瘤靶向治疗提供依据。EGFR突变有多种检测方法,如何评价这些方法,规范产品,提升产品质量,保障临床检测质量,更好地为临床服务,是检测机构对试剂质量检测和考核的目标。本文就EGFR基因突变检测方法以及质量评价要点进行简要阐述。     

深圳地区当地与外来人口乳腺癌BRCA1基因突变位点的比较

目的:探讨深圳地区当地与外来人口乳腺癌BRCA1基因突变发生率及突变位点差异。方法:入选202例明确诊断为原发性乳腺癌女性患者,其中深圳地区64例,外来人口138例,收集两组人群一般资料进行比较,PCR/DNA方法检测两组人群BRCA1基因突变发生率及突变位点;采用Logistic回归分析影响乳腺癌发病率的危险因素。结果:①外来患者平均年龄较深圳本地患者小(P<0.05),两组人群乳腺癌病理类型分布、乳腺癌家族史百分率差异均有统计学意义(P<0.01)。②深圳本地乳腺癌患者存在基因突变为22例(占34.4%),存在5个BRCA1基因突变位点;外来患者存在基因突变为54例(占39.1%),存在4个BRCA1基因突变位点,两组人群BRCA1基因突变发生率差异有统计学意义(P<0.05);两组人群中有3个基因突变位点相似。③Logistic回归分析提示乳腺癌发病率与阳性家族史、地区差异以及基因突变相关。结论:深圳地区当地与外来患者乳腺癌BRCA1基因突变发生率及突变位点存在差异,这可能导致两组人群发病年龄及病理类型存在差异的原因。