孕妇风疹病毒荧光定量PCR检测的研究

目的研究泉州地区孕妇风疹病毒的感染情况,为进一步诊断、预防和治疗提供科学的依据。方法应用实时荧光定量PCR技术对泉州地区800例孕妇血清中风疹病毒RNA（RV-RNA）进行量化的检测。结果检出阳性患者47例,阳性率为5.88%（47/800）。阳性患者的基因拷贝数均大于参考值（2.00%,每毫升拷贝数）,患者每毫升拷贝数范围位于1.31×10^2～9.38×10^8之间。结论荧光定量PCR检测风疹病毒有其众多的优越性,这对正确诊断、判断预后、研究母婴传播、指导临床都具有重要的理论意义和使用价值。     

脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用

目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针,建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法,且对体系进行优化;对该法进行灵敏性、特异性验证;采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测,并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995;灵敏性比普通PCR高100倍,且仅能特异性检出 EMCV;对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法,该法灵敏性高、特异性好,可用于EMCV的检测及定量分析。     

热带假丝酵母菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用初步评价

目的建立、优化快速检测临床标本中热带假丝酵母菌的实时荧光定量PCR方法 ,并对其临床应用进行初步评价。方法用自行设计的高效引物、探针检测5种临床标本中的热带假丝酵母菌,对该方法的敏感性、特异性进行评价,并与真菌培养法进行比较。结果检测临床标本中热带假丝酵母菌的灵敏度可达10 copies/ml,与人类基因组、细菌及其他真菌无交叉阳性反应。与真菌培养法的检测一致性好（Kappa值为0.916,P〈0.01）。结论实时荧光定量PCR检测热带假丝酵母菌灵敏度高、特异性强,可直接用于各种临床标本中热带假丝酵母菌的检测,而且可大大缩短报告时间,为临床诊断提供可靠依据。     

荧光定量分型PCR、多重PCR和测序检测HBV基因型的方法学比较

目的 比较荧光定量分型PCR、直接测序和多重PCR三种HBV基因分型法,对本实验室建立的荧光定量分型PCR方法进行评价.方法 用多重PCR、直接测序和荧光定量分型PCR法检测113份HBV DNA阳性的临床样本.结果 荧光定量分型PCR和直接测序法检出率100%,多重PCR法检出率94.69%,6份样本未能分型.荧光定量分型PCR和多重PCR的Kappa系数0.915,荧光定量分型PCR和直接测序法的Kappa系数0.742,一致性均较好.对B/C基因型混合感染样本,荧光定量分型PCR法检出28例(24.78%),多重PCR法检出19例(16.81%),直接测序法检出13例(11.50%).结论 荧光定量分型PCR分型结果准确可靠,对基因型混合感染样本的检出率明显高于多重PCR及直接测序法,是一种高效、简便、快速、准确的HBV基因分型法,适用于大规模流行病学调查.     

实时荧光定量PCR在检测人ANP基因表达的应用

目的建立心房钠尿肽（ANP）基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行初步评价。方法以基因表达产物为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,对样本中的心房钠尿肽含量进行相对定量,比较不同样本组的基因表达水平。结果所建立的实时荧光定量PCR方法熔解曲线中熔解峰单一。肺癌患者胸腔样本的ANP含量为对照样本的4.68倍,血清样本为对照样本的16.03倍。结论所建立的ANP实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性。肺癌患者胸腔液和血清中ANP的含量明显增高。     

实时荧光PCR法检测HER2基因扩增方法的建立

目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法（FISH）检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。     

用逆转录套式PCR检测风疹病毒RNA

目的：介绍一种简便的快速准确检测标本中风疹病毒ＲＮＡ的分子撑方法髟于诊断孕妇感染和胎和的先天性感染风前病毒。方法：选择风疹病毒基因组中编码膜糖蛋白Ｅ１基因中的一个片段作为靶序列进行Ｂ Ｒｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ扩增，扩增片段的长度用Ｋｏｄａｋ数码凝胶分析软件１Ｄ２．０３版本进行分析，并用内切酶酶切进行证实。结果：风疹病毒在早孕妇女中的阳性率为１．６３％；在中妊娠羊水中的阳性率为１．１７％。在畸形的儿或死     

实时荧光定量PCR在细胞因子mRNA检测研究中的应用

RR-FQ-PCR技术是一种最新PCR技术,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点.本文就RT-FQ-PCR概念、原理、方法、研究进展及其在细胞因子mRNA检测中的应用等作一综述.     

实时荧光定量PCR检测幼儿腹泻腺病毒

目的:建立实时荧光定量PCR方法,并检测腺病毒Ad40或Ad41感染的粪便标本。方法:用T-A克隆技术构建含腺病毒基因的载体作为标准模板,采用Taqman探针标记技术,建立实时荧光定量PCR方法。采集幼儿腹泻标本248例,分别用直接免疫荧光法和实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40和Ad41,比较两种方法的阳性检出率。结果:实时荧光定量PCR灵敏度和准确度(95.60%和96.80%)均高于直接免疫荧光法(78.5%和82.40%)(P0.05),而两者特异度差异无统计学意义(97.30%vs 96.70%,P0.05)。248例待检样本,直接免疫荧光法检出率为2.42%(6/248),实时荧光定量PCR检出率为7.66%(19/248),明显高于直接免疫荧光法(χ2=3.675,P0.05)。结论:成功建立实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40或Ad41方法。其灵敏度、准确度和阳性检出率经均优于直接免疫荧光法,且简便快速。     

实时荧光定量PCR的应用体会

对于病毒的监测和疾病的诊断,定性检测已不能满足临床需要,实时荧光定量PCR技术(realtime quantitative PCR)于1996年由美国Aplied Biosystems公司推出.     

乙型肝炎病毒基因分型荧光PCR检测及临床应用

目的:了解乙型肝炎病毒基因分型、分布及其与肝功能损害、病毒复制水平的关系.方法:采集69例乙肝患者血样,采用荧光聚合酶链反应(PCR)检测乙肝病毒基因分型,通过荧光探针识别基因型特异性序列,采集分析荧光信号确定病毒基因型,分别检测谷丙转氨酶(ALT)水平、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和HBV DNA含量.结果:69例乙肝患者中B型26例,C型43例.B型和C型患者的ALT水平分别为(453.54±447.93)U/L和(330.23±306.90)U/L(P＞0.05);HBeAg阳性数分别为11例和23例(P＞0.05);HBV DNA含量分别为(38.74±36.49)×104拷贝/ml和(34.53±34.09)×104拷贝/ml(P＞0.05);不同临床类型乙肝患者中两种基因型的分布没有显著差异(P＞0.05).结论:本地区乙肝患者病毒基因型主要为B型和C型;二种基因型ALT水平、HBeAg表达水平、病毒复制水平以及肝炎病情均无显著性差异.     

实时荧光PCR直接检测样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌应用研究

目的 探讨实时荧光PCR直接检测病人样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的应用价值.方法 对80例经VITEK2COMPACT药敏鉴定系统鉴定为有金黄色葡萄球菌生长(其中MRSA40例,MSSA40例)及20例未检出金黄色葡萄球菌的患者样本进行实时荧光PCR扩增,检测样本中金黄色葡萄球菌特异性核酸片段(耐热核酸酶基因nuc)及耐药基因(mecA)并与药敏鉴定比较,判断实时荧光PCR法检测MRSA的敏感性及特异性;对于两种方法检测结果不一致的18例样本重新接种培养,收集金黄色葡萄球菌菌株进行实时荧光PCR扩增,检测nuc基因及mecA基因,以期发现两种方法检测结果差异原因.结果 100例临床样本两种方法检测结果一致共82例,其中MRSA一致40例,MSSA一致22例,非金葡20例;两种方法检测结果不一致18例,均为PCR基因检测为MRSA而药敏鉴定为MSSA.MRSA检测药敏鉴定阳性40例,检出率为40％,PCR基因检测阳性58例检出率为58％;PCR基因检出率明显高于药敏鉴定,二者结果差异有显著性(P＜0.05);以药敏鉴定为标准,PCR基因检测MRSA的敏感性为100％,特异性为70％;18例金黄色葡萄球菌菌株实时荧光PCR检测MRSA结果与药敏鉴定一致.结论 实时荧光PCR直接检测患者样本中MSSA具有高度敏感性及特异性,但检测MRSA会受到样本中其他含有mecA基因菌的干扰,对于临床结果解释需慎重.即便如此,该方法对于MRSA检测在院感防控方面仍有重要意义.     

风疹病毒母婴传播定量PCR阈值与出生婴儿临床表现的相关性研究

目的探讨风疹病毒母婴传播定量PCR阈值与出生婴儿临床表现的相关性研究。方法应用荧光定量PCR技术,对23例ELISA初筛为RV-IgM抗体阳性的孕母及其婴儿血清中RV-RNA含量的检测。结果当孕妇血清中RV-RNA含量小于或等于7.93×102±2.03×102拷贝/μL时,婴儿出生时无临床表现,血清中未检测到RV-RNA;当孕妇血清中病毒含量在3.89×103±1.10×103拷贝/μL时,婴儿出生时可出现不同程度的较为典型的临床表现及迟发表现,血清中即可检测到RV-RNA,组间差异有显著性(P<0.01)。结论孕妇与婴儿血清中RV-RNA含量成正相关,亦与婴儿临床表现成正相关。PCR定量孕妇血清中病毒含量在3.89×103±1.10×103拷贝/μL时,可为导致婴儿感染的参考阈值,这有助于早期诊断和判断预后,这对指导临床具有重要的理论意义和实用价值。     

实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的　探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法 .方法　采用实时荧光定量PCR技术 ,检测唐氏患者 2 3例、正常人 33例 ,定量分析比较ΔCt值 .结果　正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异 (p <0 .0 0 1) ,并建立了相应的参考值范围 .结论　实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点 ,可用于快速诊断唐氏综合征     

Development of TaqMan real-time PCR assay for detection and quantitation of reticuloendotheliosis virus

A highly sensitive real-time PCR method was developed in this study for reticuloendotheliosis virus (REV) detection and quantitation. The real-time PCR method, with a minimum detection limit of 10 proviral DNA copies, was 100 times more sensitive than the conventional PCR. It was also shown to be highly specific, as no positive signals were detected for other common avian DNA viruses. The coefficients of variation of intra- and inter-assay reproducibility were both less than 2%. The chicken β-actin gene was co-amplified and used as the internal control to monitor the efficiency of DNA extraction and PCR amplification. Specific pathogen free chickens were infected with REV at different ages and the blood was detected with the real-time PCR method. High levels of proviral DNA were detected in the blood of REV-infected chickens during the experiment and chickens infected early had higher proviral loads from 2 weeks post-infection compared with late infected chickens. This study provides an excellent research and diagnostic tool that can be used for REV detection and quantitation.     

Cloning and Sequence Analysis of Envelope Glycoprotein E1 Gene of Rubella Virus, JR23 Strain

Rubella virus (RV), the only member of the Rubivirusgenus in the family Togaviridae, is a single stranded, pos itive sense RNA virus. The structural gene in the 3′endof the genomic RNA encodes 3 virion proteins: the capsidprotein (C), and two envelop glycoproteins, E1 and E2.E1 gene is 1484 bp in length, encoding the hemagglutina tion activity and immune antigenic sites of RV. Studies in dicate that the degrees of variance in E1 gene sequence aresimilar to that of the complete gen…     

9382例孕妇风疹病毒近期感染的检测分析

目的为了解孕妇风疹病毒(RV)近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对9382名孕妇和 125名孕前检查的健康妇女静脉血标本进行了RV-IgM检测。结果在9382名上述孕妇中检测出RV-IgM阳性标本50例, 阳性率为0．53％,在125例健康妇女中未检测到RV-IgM阳性标本。结论在孕妇中风疹病毒有一定的近期感染率。     

Homogenization with heat treatment: A cost effective alternative to nucleic acid extraction for herpes simplex virus real-time PCR from viral swabs

Most laboratories use expensive commercial kits to purify nucleic acids and remove PCR inhibitors that may be present in clinical specimens. In this study a simple homogenization with heat treatment of herpes simplex virus types 1 and 2 (HSV-1/2) was shown to be equivalent to commercial kit-based nucleic acid extraction methods. With a cost of less than $1 USD per extraction, this method provides an economical, rapid, and effective method to recover HSV-1/2 DNA from swabs suitable for real-time HSV PCR.     

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的效果评价

目的 观察应用实时荧光PCR检验法检测乙肝病毒DNA的效果,为临床提高诊断乙型肝炎病毒的准确性提供思路。方法 选取2015年11月~2018年7月于本院就诊的458例乙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均经标准的abbot药盒检测确诊,其中大三阳患者241例,小三阳患者217例。患者入院后均采集空腹静脉血,制样本后采用酶联免疫吸附检验法和实时荧光PCR检验,比较两种检验方法对患者乙肝类型的阳性检出率。结果 实时荧光PCR检验法对大三阳的阳性检出率为95.43%,小三阳的阳性检出率为69.58%,均高于酶联免疫吸附检验法的85.06%、55.76%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 实时荧光PCR检验法可直观的反映乙型肝炎病情状况,具有较高的诊断效果,临床医师可在实际工作中根据患者经济、病情等综合因素进行选用。