p53腺病毒注射液联合得力生对H22腹水瘤的作用

目的:探讨p53腺病毒注射液(Ad-p53)联合中药得力生治疗腹水瘤的作用。方法:建立H22肝癌腹水瘤昆明小鼠模型,建模48h后分组给予Ad-p53、得力生及两药联用。用药1周后检测体重、腹围、腹水量、腹水瘤细胞计数,流式细胞仪测定瘤细胞凋亡百分比以及细胞周期情况。结果:Ad-p53、得力生单用组,除体重以外的上述指标与对照组比较均有统计学差异(P<0.05),析因分析两药联用也有统计学差异(P<0.05)。结论:腹腔注射Ad-p53、得力生均可抑制H22细胞生长并减少腹水形成,Ad-p53与中药得力生联合腹腔内给药对治疗腹腔转移癌有协同作用。     

HDVtk／GCV自杀基因系统治疗小鼠腹水瘤的研究

目的：研究ＨＳＶｔｋ／ＧＣＶ系统对腹水瘤的治疗作用。方法：采用ＸＴＴ、动物实验、透射电镜和流式细胞仪等方法。结果：ＨＳＶｔｋ（＋）的Ｐ３８８ｔｋ细胞对ＧＣＶ的敏感性约为其亲本Ｐ３８８细胞的３７倍,且对其邻近的ＨＳＶｔｋ（－）的Ｐ３８８细胞或Ｓ细胞具有旁观者效应,当Ｐ３８８ｔｋ细胞与Ｐ３８８细胞或Ｓ细胞混合培养,５／μｇ／ｍｌ ＧＣＶ处理后,Ｐ３８８ｔｋ细胞占混合细胞的１０％,就可杀伤５０％的混合细     

重组人p53腺病毒联合治疗晚期恶性肿瘤的临床观察

目的：探讨重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）治疗恶性肿瘤的疗效及安全性。方法：对67例晚期无法行手术切除的恶性肿瘤患者,或术后肿瘤转移、无法再手术的患者,采用瘤内注射、血管介入和静脉滴注rAd-p53联合化疗和放疗,至少1个疗程以上,通过临床观察、KPS评分、CT或MRI检查以及随访,评价rAd-p53联合化、放疗的临床疗效。结果：67例患者治疗有效率为47.8%,疾病控制率为89.6%,其中CR患者4例,分别为卵巢癌1例,皮肤癌1例,鼻咽癌2例。rAd-p53联合放疗41例,联合化疗26例,有效率分别为56.1%和34.6%（P〈0.05）,疾病控制率分别为95.1%和80.8%（P〈0.05）。全组中位生存时间为60个月（6～117个月）;联合治疗后,全组中位生存时间为24个月（2～34个月）。不良反应主要为自限性发热,另有个别胃肠道反应及肌肉酸痛。结论：rAd-p53对多种恶性肿瘤具有一定疗效,临床应用安全;局部给药联合放疗可能比联合化疗更能提高肿瘤的局控率。     

重组腺病毒p53基因治疗肺癌的研究进展

肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，为恶性肿瘤死亡的首要病因，对肺癌采用传统治疗包括化疗、放疗和手术方法总的生存率不到15％；另外，化疗、放疗在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有明显的毒性，这就需要我们发展新的治疗策略来达到治疗目的。自2004年1月世界首个基因治疗药物——重组人p53腺病毒注射液(今又生)正式在我国上市以来，肿瘤基因治疗引起全世界高度瞩目。本文就近年来重组腺病毒p53基因(Ad-p53)治疗肺癌的研究进展作一综述。     

重组腺病毒p53基因治疗肝癌研究进展

目的：探讨重组腺病毒p53基因（recombinant humanAd—p53,rAd—p53）治疗肝癌的抗肿瘤机制及临床应用。方法：应用PubMed、万方和CNKI数据库,以“肝癌、重组腺病毒p53基因、基因治疗、实验研究和临床应用”为关键词,检索1994—06—01—2013—11—31文献739篇,纳入标准：1）p53基因与肝癌发生的相关性;2）重组腺病毒p53基因抗肿瘤机制;3）重组腺病毒p53治疗肝癌的实验研究;4）重组腺病毒p53治疗肝癌的临床应用研究。根据纳入标准选择符合分析的文献36篇。结果：p53基因是公认的肿瘤抑制基因,具有促使肿瘤细胞自杀和帮助缺陷细胞修复的作用。rAd—p53是复制缺陷型5型腺病毒载体与人p53基因重组的肿瘤基因治疗制品。rAd-p53通过多种途径发挥抗肿瘤作用,包括使肿瘤的细胞周期阻滞和发生程序性死亡,促进放射线对肿瘤细胞引起的细胞周期阻滞和凋亡,刺激机体产生抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤血管内皮生长因子,控制肿瘤的血管生成,使注射部位瘤组织产生局部血供障碍和坏死。此外,还能增加肝癌细胞的放化疗敏感性,间接增强抗肿瘤疗效。rAd-p53基因疗法为肝癌治疗开辟了崭新的途径,多项-l盘床研究疗效良好。结论：rAd—p53基因对肿瘤的作用机制体现了在抗肿瘤治疗方面的有效性,并在基础研究及临床应用中均取得了显著进展,再肝癌的防治中将取得更大的突破。     

重组腺病毒p53基因治疗消化道恶性肿瘤的观察及护理

p53基因作为一个抑癌基因,具有稳定人类基因组、调控细胞生长周期、促进受损细胞程序性凋亡等功能[1,2]。它的突变是多种肿瘤发生的共同基础,尤其直肠癌高达75%[3]。人类同源重组腺病毒p53注射液(商品名:“今又生”),是世界上首个上市的基因治疗产品。我院自2004年至今应用该产     

腺病毒介导HSV-tk联合野生型p53

应用自杀基因治疗肿瘤是一种有效的手段和方法，但p53基因突变的肿瘤细胞可以对抗自杀基因转换前药对瘤细胞的杀伤作用。     

化疗联合中药得力生治疗中晚期恶性肿瘤临床疗效观察

目的:观察化疗联合得力生注射液治疗中晚期恶性肿瘤的疗效.方法:中晚期恶性肿瘤患者60例作为观察组,同期单纯化疗的65例中晚期恶性肿瘤患者作为对照,对近期疗效、生活质量、外周血常规、消化道反应进行观察.观察组在化疗的基础上加用得力生注射液每次50ml加入5%葡萄糖注射液500ml静脉缓滴,每天一次,连续2周.两组均每3-4周重复,3个周期后评价疗效.结果:观察组和对照组近期有效率分别:65%和59%,差异无显著意义(P>0.05);两组的生活质量改变、外周血象变化及消化道反应相比均有显著性差异,观察组明显优于对照组.结论:得力生注射液联合化疗治疗中晚期恶性肿瘤能减轻化疗相关毒副作用,提高患者的生活质量.     

重组人p53腺病毒治疗结肠腺癌腹壁转移1例

患者,男,65岁。2002年11月行乙状结肠癌根治术术后病理:腺癌,Ⅱ级,侵及深度不详,淋巴结1/3转移。     

重组人p53腺病毒联合表阿霉素抑制胃癌细胞的体外研究*

目的:研究基因治疗药重组人p53腺病毒（rAd-p53）与化疗药表阿霉素（EPI）对胃癌细胞的体外作用,探讨基因治疗联合化疗对胃癌的疗效。方法:胃腺癌MGC-803 细胞分对照组、rAd-p 53组、EPI 组、联合用药四组,通过观察细胞生长曲线、流式细胞分析、瑞氏染色、细胞免疫化学染色,研究比较各组细胞生长、细胞周期、细胞形态学、P53蛋白表达。结果:与对照组相比,rAd-p 53在用药1、2、3、6d 后对MGC-803 细胞抑制率为34.52% 、10.53% 、58.98% 、79.17% ,EPI 为60.71% 、67.29% 、73.21% 、95.14% ,联合两药抑制率依次为59.52% 、66.17% 、67.15% 、99.31% ,联合用药抑制率显著高于单药处理（P 均<0.01）。 流式细胞分析发现,rAd-p 53主要将细胞周期阻滞于G2/M期（44.24%）,Sub-G 1 凋亡峰升高,联合EPI 治疗G2/M期（81.73%）及Sub-G 1 峰增高更明显（P 均<0.01）。 瑞氏染色可见,rAd-p 53治疗组MGC-803 细胞仅有少数聚集,细胞形态不规则,胞质深染,可见凋亡细胞;EPI组细胞呈小片状聚集,形态结构较完整,与对照组无明显差别;联合用药组细胞数明显减少,形态不规则,胞质深染,凋亡细胞数更多。免疫细胞化学染色可见,P53蛋白于rAd-p 53治疗组细胞核及胞质中表达,联合EPI 作用效果更显著;对照组与EPI 组P53蛋白于细胞核表达。结论:rAd-p 53对胃癌MGC-803 细胞有抑制作用,促进细胞凋亡,可提高胃癌MGC-803 细胞对化疗药EPI 的敏感性,二者有协同作用。      

重组人p53腺病毒联合肿瘤坏死因子对乳腺癌Ca761细胞的抑制作用

目的：探讨重组人p53腺病毒注射液（rAd/p53）联合肿瘤坏死因子（TNF）对荷瘤小鼠体内外的乳腺癌细胞Ca761的抑制效果。方法：MTT法,流式细胞术检测细胞凋亡率,观察rAd/p53和TNF对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用。建立乳腺癌Ca761细胞小鼠移植瘤模型,瘤内分别注射rAd/p53和TNF及两药联合,观察对肿瘤生长的影响,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果：rAd/p53和TNF体内外均可显著抑制乳腺癌Ca761细胞的生长,可以促进乳腺癌细胞Ca761株的凋亡。两药联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用。结论：重组人p53腺病毒注射液（rAd/p53）治疗Ca761乳腺癌细胞移植瘤是有效的,TNF也可抑制其生长,rAd/p53和TNF联合应用有协同作用,为临床乳腺癌的综合治疗提供了依据。     

p53 249 突变Knock-in 动物模型的建立及其在肝癌发病中的作用

目的:观察p53 249突变在肝细胞癌变发生诱导的作用.方法:利用基因打靶技术在小鼠胚胎干细胞(ES)中引入p53 249编码子Arg(精氨酸)至Ser(丝氨酸)突变,然后经显微注射到小鼠囊胚中,并将注射后的囊胚植入假孕小鼠的子宫.得到嵌合小鼠后与BL/6小鼠杂交得到p53 249 Knock-in小鼠.观察分析该小鼠的生长及肝脏肿瘤发生情况及病理改变.同时用DEN(二乙基亚硝胺)分别处理及饲养含249突变的Knock-in小鼠和不含突变的野生型小鼠,观察比较两组小鼠的生长情况,30周后处死小鼠,研究两组小鼠肝脏癌变情况及病理改变.结果:p53 249编码子突变小鼠的生长和野生型小鼠生长没有明显差别.观察一年时间解剖小鼠,未见小鼠肝脏有肿瘤发生.当使用DEN处理和饲养两组小鼠时,突变组小鼠15周以后出现不同程度的饮食减退,精神不佳,体重下降等表现,而对照组小鼠无明显异常.30周处死小鼠发现90%(18/20)的突变组小鼠有肝脏肿瘤发生,病理显示为肝细胞肝癌,同时伴有肝硬化表现.而对照组小鼠仅5%(1/20)发现有肝脏肿瘤发生.结论:p53 249编码子突变在肝癌发病过程中起着非常重要的作用.     

p53蛋白表达和基因突变在所谓肺硬化性血管瘤组织中的意义

背景与目的所谓肺硬化性血管瘤（so-called pulmonary sclerosing hemangioma，PSH）是一种至今不能肯定其来源及性质的少见肺肿瘤。虽然目前普遍认为PSH是一种良性肿瘤，但却发现有少数PSH可发生浸润和转移。p53蛋白表达和基因突变是反映肿瘤生物学行为的有用指标。本研究的目的是检测PSH组织中p53基因突变及p53蛋白的表达情况及其意义。方法应用免疫组化S-P法、激光捕获显微切割（laser capture microdissection，LCM）技术、单链构象多态性（single-stranded conformation polymorphism，SSCP）及DNA测序分析方法（5～8外显子）检测19例PSH中多角形细胞和表面立方细胞的p53蛋白表达和基因突变情况。结果19例PSH组织中p53蛋白阳性表达率为21．1％（4／19），SSCP及测序分析检测p53基因突变率分别为26．3％（5／19）和42．1％（8／19）。p53蛋白阳性表达的4例PSH组织，测序分析显示3例标本有突变发生，2例为错义突变，1例同时发生错义突变和移码突变；而p53蛋白阴性表达的15例PSH组织中，5例标本经测序证实亦发生了突变，4例为移码突变，1例为错义突变。在有突变的8例PSH组织中，单一多角形细胞突变5例，单一立方细胞突变2例，多角形细胞和立方细胞同时突变1例。结论PSH组织p53蛋白阳性表达并不能完全反映p53基因突变的真实情况；p53基因突变或蛋白表达异常均可发生在PSH组织中的两种不同的细胞内；p53基因的高突变率提示PSH可能具有潜在的恶性生物学行为。     

乳腺增生病p53基因第8外显子突变及p53蛋白表达

目的：探讨p53基因在乳腺癌发生早期的作用。方法：用免疫组化检测36例乳腺单纯增生，31例不典型增生，30例乳腺癌组织中p53蛋白表达，用PCR－RFLP检测p53基因第8外显子第278密码子突变。结果：乳腺单纯性增生，不典型增生和乳腺癌中p53蛋白表达率分别为0，22．6％，46．7％。p53基因第8外显子的突变率分别为0，3．2％，10．0％，均为杂合子突变。结论：乳腺癌不典型增生中存在p53蛋白表达和该基因第8外显子突变，该突变可能在乳腺增生病向乳腺癌进展过程中起一定作用。     

p53与血管生长抑素基因共转染对SG7901细胞生长的抑制作用

背景与目的：p53基因为抑癌基因，血管生长抑素（angiostatin，Angio，AS）基因能抑制血管内皮细胞生长和血管新生，间接抑制肿瘤的生长。本研究探讨以pV1TRO2质粒为载体共转染野生型人p53和人Angio基因（pV1TRO2-hp53-hAngio）对人胃癌细胞生长的影响。方法：用脂质体转染法将pV1TRO2-hp53-h-Angio转染人胃癌细胞系SG7901。以RT—PCR法检测转染后细胞目的基因的表达，通过细胞集落形成试验、MTT生长曲线、流式细胞仪调亡检测观察其生物学特性变化。结果：野生型p53基因或AS基因转染后均能抑制转染细胞的生长（细胞集落形成试验及MMT，P〈0．05），而共转染两种基因的细胞生长抑制诱导凋亡效果优于单个甚因转染（细胞集落形成试验及MMT，P〈0．05）。结论：p53和AS基因具有协同抑制肿瘤细胞生长作用，提示联合基因可能有利于肿瘤的基因治疗。     

重组人p53腺病毒联合肿瘤坏死因子对乳腺癌Ca761细胞的抑制作用

目的:探讨重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)联合肿瘤坏死因子(TNF)对荷瘤小鼠体内外的乳腺癌细胞Ca761的抑制效果.方法:MTT法,流式细胞术检测细胞凋亡率,观察rAd/p53和TNF对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用.建立乳腺癌Ca761细胞小鼠移植瘤模型,瘤内分别注射rAd/p53和TNF及两药联合,观察对肿瘤生长的影响,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查.结果:rAd/p53和TNF体内外均可显著抑制乳腺癌Ca761细胞的生长,可以促进乳腺癌细胞Ca761株的凋亡.两药联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用.结论:重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)治疗Ca761乳腺癌细胞移植瘤是有效的,TNF也可抑制其生长,rAd/p53和TNF联合应用有协同作用,为临床乳腺癌的综合治疗提供了依据.     

Synergistic growth inhibition by combination of adenovirus mediated p53 transfer and cisplatin in ovarian cancer cell lines

Objective

This study was to investigate the synergistic growth inhibitory effect by combination of adenovirus mediated p53 gene transfer and cisplatin in ovarian cancer cell lines with different p53 gene mutation patterns.

Methods

Three ovarian cancer cell lines, p53 deleted SKOV3, p53 mutated OVCAR-3, and PA-1 with wild-type p53 were transduced with human adenovirus vectors carrying p53 gene (Ad-p53) and treated with a sublethal concentration of cisplatin before and after Ad-p53. The cell number was counted daily for 5 days after Ad-p53 transduction. Western blotting was used to identify p53 and p21 protein expressions, and flow cytometric analysis was performed to investigate any change of DNA ploidy after Ad-p53 transfer.

Results

Ad-p53 transduced cells successfully expressed p53 and p21 proteins after 48 hours of Ad-p53 transduction. Synergistic growth inhibition by combination of Ad-p53 and cisplatin was detected only in SKOV3 and OVCAR-3 cells, but not in PA-1 cells. In p53 deleted SKOV3 cells, cisplatin treatment after Ad-p53 showed higher growth inhibition than the treatment before Ad-p53 transduction, and reverse relationship was observed in p53 mutated OVCAR-3 cells. In SKOV3 cells, the fraction of cells at G2/M phase increased after cisplatin treatment, however, it decreased dramatically with Ad-p53 transduction.

Conclusion

The synergistic growth inhibition by combination of Ad-p53 and cisplatin may depend on the p53 status and the temporal sequence of cisplatin treatment, suggesting judicious selective application of this strategy in clinical trials.     

慢性粒细胞白血病p53基因功能检测

目的：通过以ｐ２１作为标志物的功能检测方法了解慢性粒细胞白血病中ｐ５３基因功能状况。方法：采用ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测未经阿霉素诱导及阿霉素诱导后慢粒患者白血病细胞中ｐ５３及ｐ２１蛋白表达。结果;对２５例慢性患者白血病细胞进行了检测,显示５例ｐ５３基因功能异常,其中１例为慢性期,显示ｐ５３基因为野生型,但无功能;１例加速期;３例急变期,分别为急粒变,急单变和多克隆急变,在急淋变中未见。     

白血病细胞p53基因蛋白表达的研究

为研究Ｐ５３基因突变与人类白血病的关系，应用免疫组化方法对４５例不同类型的白血病标本进行了Ｐ５３蛋白的检测。结果发现Ｐ５３蛋白表达阳性率为２４．４％，其中在急生髓系白血病为１８．２％，而在急性淋系白血病中为２７．３％，急性髓，淋两系白现间Ｐ５３蛋白的表达差异无显著性，Ｐ５３蛋白的表达量与病人年龄，外周血血红蛋白水平，白细胞计数，血小板计数间也无显著性相关。