Batroxobin reduces intracellular calcium concentration and inhibits proliferation of vascular smooth muscle cells

Background Batroxobin (BX), a serine protease used in defibrinogenation and thrombolysis, also has an effect on c-fos gene and growth factor. This study attempted to determine the effects of BX on the proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) and calcium metabolism. Methods VSMCs were treated with BX at concentrations of 0.1, 0.3, or 1.0 mmol/L and cell numbers were determined at 0, 24, 48, and 72 hours. Intracellular calcium concentration (［Ca2+］i) was measured using direct fluorescence methods. Results BX was found to suppress proliferation of VSMCs in a dose-dependent fashion with inhibition rates of 18% and 31% by 48 and 72 hours, respectively. In addition, BX decreases basal ［Ca2+］i significantly. The basal level in untreated cells was 162.7±33.8 nmol/L, and decreased to 131.5±27.7 nmol/L, 128.3±28.5 nmol/L, and 125.6±34.3 nmol/L with the three concentrations of BX, respectively. Noradrenaline (NE)-induced ［Ca2+］i stimulation was also attenuated by BX (0.1 mmol/L BX, 20%±8% inhibition; 0.3 mmol/L BX, 54%±11% inhibition; 1.0 mmol/L BX, 62%±15% inhibition). The ability of NE to stimulate ［Ca2+］i was attenuated in cultures in Ca2+-free medium, as was the ability of BX to blunt NE-induced stimulation.Conclusion These findings demonstrate that BX can effectively inhibit proliferation of VSMCs, probably by blocking the release and uptake of Ca2+, thus influencing ［Ca2+］i.     

组胺刺激的气道平滑肌细胞钙离子浓度和长度变化及机制

目的　观察组胺刺激后大鼠气道平滑肌细胞 (ASMC)内钙离子浓度 ( [Ca2 +]i)和长度的变化 ,并初步探讨其机制。方法　以Fluo 3/AM作为细胞内游离Ca2 +示踪剂 ,通过激光共聚焦显微镜观察不同浓度组胺对大鼠ASMC [Ca2 +]i和长度的影响 ,观察胞外Ca2 +、G蛋白、蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白 (MAPK)在组胺上述生理效应中的作用。结果　组胺刺激后 ,[Ca2 +]i变化呈现双相反应。组胺刺激后 [Ca2 +]i快速上升至峰值 ,随后稍下降 ,进入一个维持期。 [Ca2 +]i增加的峰值 ( 13.39%± 3.35 %、36 .35 %± 13.35 %、6 4 .6 8%± 11.4 2 % )与组胺浓度 ( 1× 10 -6、1× 10 -5、1× 10 -4mol/L)显著相关 (P <0 .0 5 )。无钙培养基不影响组胺刺激的 [Ca2 +]i上升 ,而在有钙培养基中加入乙二醇二乙醚二胺四乙酸 (EGTA)也不影响组胺刺激诱导的 [Ca2 +]i上升。随组胺浓度 ( 1× 10 -6、1× 10 -5、1× 10 -4mol/L)的上升 ,ASMC最大缩短程度 ( 2 3.14 %、37.6 2 %、4 1.75 % )仅有增加的趋势 (P >0 .0 5 ) ,但在同一组胺浓度下 ,其 [Ca2 +]i变化与细胞缩短程度显著相关 (P <0 .0 1)。百日咳毒素对组胺刺激ASMC [Ca2 +]i和长度变化均有明显的抑制作用。Staurosporine和PD0 980 5 9对组胺刺激的 [Ca2 +]i变化均无明显影响     

14，15-DHET对牛主动脉内皮细胞中内皮型 一氧化氮合酶表达影响的研究

目的：探讨14,15-二羟基二十碳三烯酸（14,15-DHET）对牛主动脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶表达以及血管形成的影响。方法：将牛主动脉内皮细胞（bovine aortic endothelial cells,BAECs）按照不同14,15-DHET处理浓度分组为0（对照组）、0.1、0.5、1、5 μmol/L组,刺激时间均为24 h;按照时间梯度分组为0（对照组）、4、8、12、24 h,刺激浓度均为5 μmol/L,检测其内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的蛋白表达水平,同时将人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）按照不同14,15-DHET浓度分组为0（对照组）和5 μmol/L（处理组）,刺激24 h后观察14,15-DHET对血管形成的影响。结果：在浓度梯度组中用0.1、0.5、1、5 μmol/L的14,15-DHET处理BAECs后细胞内eNOS蛋白表达水平（1.456±0.008、2.202±0.045、3.931±0.170、4.588±0.179）与对照组相比均明显升高（P＜0.05）;在时间梯度组中用5 μmol/L的14,15-DHET处理BAECs 4、8、12、24 h后细胞内eNOS蛋白表达水平（1.521±0.021、1.922±0.061、3.642±0.173、4.813±0.134）与对照组相比均明显升高（P＜0.05）;使用5 μmol/L的14,15-DHET刺激HUVECs后,处理组小管总长度和小管分枝总长度（13 715.000±448.092,12 538.000±574.182）与对照组（10 426.000±950.537,8 672.000±1 025.486）相比均明显升高（P=0.043,P=0.035）。结论：本研究结果表明14,15-DHET可以增加牛主动脉内皮细胞的eNOS蛋白表达,并且有促进血管形成的作用。     

溶血磷脂酸通过Rho信号转导途径增强肝癌细胞的侵袭转移

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对恶性肿瘤细胞Rho蛋白及侵袭转移的影响。方法将SMMC7721细胞株培养后,制成单细胞悬液。在培养液中分别加入2、5、25μmol/L的LPA,为3个实验组。未加LPA为对照组。用Rho蛋白活性测定试剂盒检测溶血磷脂酸诱导SMMC7721细胞Rho蛋白活性,用Western印迹测定Rho蛋白表达,用黏附基质分析、重建基底膜侵袭模型等方法来研究药物处理后细胞侵袭、黏附、运动能力的改变。结果经溶血磷脂酸处理后,SMMC7721细胞中Rho蛋白表达增加,25μmol/L组蛋白量变化尤为明显,5h时为空白对照组的1.5倍,20h后增加至2.4倍。24h后Rho蛋白活性也明显增强,从102%±34%增加至408%±95%(P<0.01)。同时细胞的侵袭能力显著增强,对照组侵袭细胞数为531.2±65.6,25μmol/L溶血磷脂酸组为789.7±117.5(P<0.01)。60min时5和25μmol/L组细胞黏附率分别为77.9%±16.7%和83.6%±19.3%(P<0.05),80min时达到93.8%±25.6%和91.2%±29.7%,与对照组相比有显著统计学意义(P<0.01)。结论LPA主要通过Rho信号转导增强肝癌细胞的体外侵袭转移能力。     

E-4031 对豚鼠心室肌细胞 Na+/Ca2+交换电流的影响

采用全细胞电压钳技术的斜坡脉冲程序 ,观察E - 4 0 3 1对豚鼠心室肌细胞膜Na /Ca2 交换电流的影响。结果表明E - 4 0 3 10 0 1,0 1和 1 0 μmol/L分别使膜电位 5 0mV时的Na /Ca2 交换电流相应增加 ( 11± 6) % ,( 5 9± 13 ) %和 ( 112± 2 5 ) % ,提示E - 4 0 3 1对Na /Ca2 交换电流的增强作用为其在抗心律失常治疗中具有正性肌力作用的重要机制     

自体血回收机对回收红细胞的破坏作用及川芎嗪保护作用的研究

目的　探讨回输自体血中红细胞的功能及川芎嗪对其的保护作用。方法　将 60例自体输血病人按随机数表的方法分为两组 ,每组 30例。Ⅰ组为实验组 ,于收集自体血前 30min经静脉滴注川芎嗪 4mg/kg ,然后在冲洗液内加入 5 %的川芎嗪 ,并用相同浓度的川芎嗪生理盐水洗涤红细胞。Ⅱ组为对照组 ,操作步骤同Ⅰ组 ,但冲洗液和洗涤液中不加川芎嗪。观察红细胞回输率、红细胞的形态、红细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i) ,并进行统计学处理。结果　两组病人红细胞洗涤前 [Ca2 + ]i组间差异无显著意义 ,洗涤后两组红细胞 [Ca2 + ]i都较洗涤前有明显的升高 (Ⅰ组为 34nmol/L± 1 0nmol/Lvs 48nmol/L± 1 7nmol/L ,Ⅱ组为 38nmol/L± 9nmol/Lvs76nmol/L± 2 3nmol/L) ,两组间差异有显著意义 (P <0 .0 5) ;其中Ⅱ组洗涤后 [Ca2 + ]i升高更明显 (P <0 .0 1 ) ;Ⅰ组自体血回输率明显高于Ⅱ组 (69%± 8%vs 50 %± 1 6 % ,P <0 .0 5) ;变形红细胞和红细胞碎片较Ⅱ组少。结论　红细胞在回收和洗涤过程中有一定的破损及功能异常 ,川芎嗪可能通过其钙阻滞作用、负性电荷作用、抗氧化作用等对回收、分离、洗涤的红细胞有保护作用 ,在自体血回输过程中应用能够提高回输血的质量和回输率 ,减少红细胞的破坏     

早产儿骨转化及早期补钙对骨转化的影响

目的 :动态观测早产儿骨转化生化标志物血骨钙素 (OC)、碱性磷酸酶 (AKP)、 型胶原羧基端肽(ICTP)的变化及早期补钙对它们及血钙 (Ca)、尿 Ca、血磷 (P)、尿 P的影响。方法 :对 4 0例早产儿分补钙组 (2 0例 ,出生早期给予 10 %葡萄糖酸钙 4 ml/ kg.d-1静脉输注 )与对照组 (2 0例 ) ,在出生 2 4 h及 11日龄 ,分别用 EL ISA法、放射免疫法及全自动生化分析仪测定血清 OC、ICTP、Ca、P、AKP浓度和尿 Ca、P及肌酐值。同时以 2 2例正常足月儿和早产儿对照。结果 :出生 2 4 h,早产儿血 AKP、ICTP分别为 (2 14 .35± 6 7.0 6 ) IU、(6 2 .88± 4 .0 7)μg/ L高于足月儿 [(14 7.86± 4 4.87) IU、(5 7.36± 6 .34)μg/ L ,P<0 .0 1];ICTP与胎龄及出生体重呈负相关 (r=- 0 .5 2 8、- 0 .6 14 ,P<0 .0 1) ;OC为 (6 48.77± 2 38.89) nmol/ L低于足月儿 [(85 1.6 8± 2 38.6 9) nmol/ L ,P<0 .0 1],而且与胎龄、出生体重呈正相关 (r=0 .35 9、0 .376 ,P<0 .0 5、<0 .0 1)。出生 11日龄 ,早产儿对照组 OC为 (94 7.2 5± 335 .4 7)nmol/ L,高达足月儿 [(94 1.6 5± 2 97.2 8) nmol/ L],而 ICTP[(6 5 .4 4± 6 .2 4 ) μg/ L]始终高于足月儿 [(5 7.10± 3.4 8)μg/ L];补钙组 OC及 ICTP分别为 (84 4.5 9± 2 6 7.2 4 )     

蛋白激酶C抑制剂对精氨酸升压素调控心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响

目的　观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红 (chelerythrine)对精氨酸升压素 (AVP)介导的心脏成纤维细胞 (CF)增殖及p2 7蛋白表达的影响 ,探讨AVP促CF增殖的细胞内信号传导机制。方法　以培养的新生SD大鼠CF为实验模型 ,实验分 3组基础状态组 ;10 -7mol/LAVP组 ;10 -7mol/LAVP +10 -6mol/L白屈菜红组。每组 4只SD大鼠。采用胰酶消化、差速贴壁法培养CF ,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶标记细胞DNA、p2 7蛋白的单抗和标记了FITC的二抗标记细胞内的p2 7蛋白 ,采用流式细胞分析仪 (FCM)技术测定细胞周期及p2 7蛋白表达的阳性率。结果　 ( 1)10 -7mol/LAVP和 10 -6mol/L白屈菜红共同作用 48h ,MTT比色法测定的CF的A值 ( 0 32± 0 0 1)明显低于 10 -7mol/LAVP组 ( 0 39± 0 0 1,P <0 0 1) ;( 2 )AVP与白屈菜红共同作用组CF的S期细胞百分率 ( 4 4%± 1 7% )和细胞增殖指数 ( 2 0 9%± 1 2 % )分别明显低于AVP组 ( 15 5 %± 1 4%和31 4%± 1 5 % ) ,而G0 /G1期细胞百分率 ( 79 1%± 1 2 % )明显高于AVP组 ( 6 8 6 %± 1 5 % ) ,两组间比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;( 3)AVP与白屈菜红共同作用组CF的p2 7蛋白表达阳性率( 91 7%± 2 2 % )明显高于AVP单独作用组 ( 6 3 3%± 1 9% ) ,二     

17β-雌二醇对血管内皮细胞增殖的影响

【目的】从膜雌激素受体(membraneestrogenreceptor,mER)的角度探讨17β雌二醇(17β-estradiol,E2)对血管内皮细胞(vascularendothelialcells,VEC)增殖的影响,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在促VEC增殖中的作用。【方法】在培养小牛胸主动脉内皮细胞(BAECs)上,应用犤3H犦-Tdr掺入法测定DNA合成,免疫印迹法检测磷酸化MAPK蛋白(磷酸化p42/p44)表达,流式细胞仪检测mER。【结果】不同浓度的E2(0.001～1μmol/L)作用于BAECs24h,均能使犤3H犦-Tdr掺入率增加,以0.01μmol/LE2作用最强。雌激素受体(estrogenreceptor,ER)阻断剂他莫昔芬(tamoxifen)(0.1μmol/L)或MAPK特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)预处理BAECs1h,均明显抑制0.01μmol/LE2诱导的BAECsDNA合成;E2(0.01μmol/L)、E2BSA(0.01μmol/L)作用于BAECs15min后均能激活p42/p44磷酸化MAPK蛋白,他莫昔芬可明显抑制E2、E2BSA的作用;流式细胞仪检测结果显示阳性处理组和阴性对照组间荧光强度均值差异有统计学意义。【结论】BAECs膜上存在mER,E2可通过mER介导发挥其快速激活MAPK信号通路的非基因效应,进而促进VEC增殖。     

噻庚啶抗内毒素休克的作用

目的　研究噻庚啶抗内毒素休克作用和机制。方法　静脉注射脂多糖 (LPS) 5mg/kg复制大鼠内毒素休克模型 ,Northern杂交分析TNFαmRNA表达 ,放免法测定血浆TNFα 的含量 ,黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶法测定血浆SOD活性 ,TBA法测定血浆MDA含量 ,激光扫描共聚焦显微技术测定单细胞内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + i])。结果　噻庚啶显著提高休克大鼠的平均动脉血压 (MABP)及 2 4h的存活率 ,抑制LPS诱导的大鼠肝脏TNFαmRNA的表达这 (18+ 10vsLPS +saline 38± 10 ,P <0 0 1)和血浆TNFα 水平 [(7 8± 2 4 ) μg/LvsLPS +saline (2 1 5± 3 2 )μg/L ,P <0 0 1) ],提高血浆SOD活性 [(10 37 2± 112 8)NU/LvsLPS +saline (6 15 4± 92 6 )NU/L ,P <0 0 1],降低血浆MDA的含量 [(5 2± 1 1) μmol/LvsLPS +saline (9 8± 1 5 ) μmol/L ,P <0 0 1],并能显著抑制TNFα诱导的内皮细胞 [Ca2 + ]i 升高。结论　噻庚啶通过抑制TNFα 基因表达 ,抑制脂质过氧化和防止细胞内Ca2 + 超载具有良好的抗内毒素休克作用。     

17β－雌二醇对血管内皮细胞增殖的影响

【目的】 从膜雌激素受体(membrane estrogen receptor，mER)的角度探讨17β雌二醇(17β-estradiol，E2)对血管内皮细胞vascular endothelial cells，VEC)增殖的影响，以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在促VEC增殖中的作用。【方法】 在培养小牛胸主动脉内皮细胞(BAECs)上，应用[3H]-Tdr掺入法测定DNA合成，免疫印迹法检测磷酸化MAPK蛋白(磷酸化p42／p44)表达，流式细胞仪检测mER。【结果】 不同浓度的E2(0．001～1μmol／L)作用于BAECs 24h，均能使[3H]-Tdr掺入率增加，以0．01μmol／L E2作用最强。雌激素受体(estrogen receptor，ER)阻断剂他莫昔芬(tamoxifen)(0．1μmol／L)或MAPK特异性抑制剂PD98059(50μmol／L)预处理BAECs 1h，均明显抑制0．01μmol／LE2诱导的BAECsDNA合成；E2(0．0lμmol／L)、E2BSA(0．01μmol／L)作用于BAECs 15min后均能激活p42／p44磷酸化MAPK蛋白，他莫昔芬可明显抑制E2、E2BSA的作用；流式细胞仪检测结果显示阳性处理组和阴性对照组间荧光强度均值差异有统计学意义。【结论】 BAECs膜上存在mER．E2可通过mER介导发挥其快速激活MAPK信号通路的非基因效应，进而促进VEC增殖。     

蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡以及半胱氨酸蛋白水解酶3活化的实验研究

目的探讨蛋白酶体功能缺陷是否能诱导多巴胺能细胞发生凋亡及其可能的作用机理。方法应用高选择性的蛋白酶体抑制剂lactacystin(0、1μmol/L、5μmol/l或10μmol/L)处理大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞株24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力的改变。10μmol/Llactacystin作用24h后,Hoechst荧光染色观察凋亡细胞的核形态学改变,流式细胞仪测定细胞凋亡百分率。用Western印迹法检测10μmol/Llactacystin作用0、24或48h时PC12细胞内半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段的动态变化。结果5μmol/L或10μmol/Llactacystin作用24h后,PC12细胞的活力(87%±6%和26%±6%)显著低于对照组(P<0.05)。Hoechst荧光染色显示10μmol/Llactacystin作用24h后部分细胞呈现凋亡细胞核形态学改变;流式细胞仪证实31.4%±4.0%的PC12细胞发生了凋亡,与对照组(7.5%±0.8%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western印迹法显示对照组细胞内仅有极少量的半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段表达;10μmol/Llactacystin作用48h的PC12细胞内半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段的表达明显较多。结论蛋白酶体抑制剂lactacystin能诱导多巴胺能细胞PC12发生凋亡,半胱氨酸蛋白水解酶3蛋白酶的激活可能参与lactacystin诱导的PC12细胞凋亡过程;蛋白酶体的功能缺陷在帕金森病发病机制中可能发挥重要作用。     

新型气体信号分子硫化氢对左向右分流大鼠一氧化氮/一氧化氮合酶体系的影响

目的探讨内源性硫化氢(H2S)对左向右分流大鼠一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为分流组,分流+炔丙基甘氨酸(PPG)组,假手术组和假手术组+PPG组,每组8只。分流组及分流+PPG组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺建立左向右分流动物模型。术后4周,测量大鼠平均肺动脉压(MPAP);测定血浆NO、肺组织H2S、NO含量及NOS活性;用Western印迹方法测定肺组织eNOS含量。结果分流术后4周,分流组与假手术组比较,大鼠MPAP无明显变化;分流组与假手术组比较血浆NO(23·2μmol/L±3·6μmol/Lvs17·9μmol/L±3·4μmol/L,P<0·05)、肺组织H2S(37·6μmol/mg±2·1μmol/mgvs14·4μmol/mg±1·8μmol/mg,P<0·05)、肺组织NO(38·5±6·5μmol/μgvs31·8±6·5μmol/μg,P<0·05)、肺组织NOS活性(15·1U/mg±2·4U/mgvs12·0U/mg±1·4U/mg,P<0·05)及肺组织eNOS含量(0·3±0·1vs0·2±0·1,P<0·05)均明显升高。分流+PPG组大鼠MPAP较分流组及假手术组分别升高了15·82%和20·55%(19·5mmHg±1·7mmHgvs16·4mmHg±1·7mmHg和19·5mmHg±1·7mmHgvs15·5mmHg±1·3mmHg,P<0·05),肺组织H2S含量降低(28·8μmol/mg±2·2μmol/mgvs37·6μmol/mg±2·1μmol/mg,P<0·05),而血浆NO(27·8μmol/L±4·8μmol/Lvs23·2μmol/L±3·6μmol/L,P<0·05)、肺组织NO(46·0μmol/μg±6·0μmol/μgvs38·5μmol/μg±6·5μmol/μg,P<0·05)、NOS活性(20·9U/mg±3·9U/mgvs15·1U/mg±2·4U/mg,P<0·05)及eNOS含量均明显升高(0·4±0·1vs0·3±0·1,P<0·05)。结论内源性H2S可能通过抑制NO/NOS体系调节左向右分流大鼠肺动脉压力。     

缺血预处理改善心肌钙超载后胰岛素抵抗

目的步探讨缺血预处理对心肌细胞钙超载后胰岛素敏感性的影响。方法采用Langendorff灌流装置逆行主动脉插管灌注,胶原酶消化法分离获取成年大鼠心肌细胞。将心肌细胞分5个组:正常对照组,实验组1(ionomycin0.5μmol/L),实验组2(ionomycin0.5μmol/L+IP),实验组3(ionomycin1.0μmol/L),实验组4(ionomycin1.0μmol/L+IP),应用同位素示踪技术观察胰岛素刺激大鼠心肌细胞的葡萄糖摄取效应,评价心肌细胞的胰岛素敏感性。结果各组心肌细胞活性比率无明显降低(P0.05)。对照组心肌细胞静息[Ca2+]i为(117.80±22.41)nmol/L,实验1,2组心肌细胞经过(ionomycin0.5μmol/L)处理1h后,[Ca2+]i明显高于对照组,但两组间无统计学差异(260.49±33.06)nmol/L,(278.03±23.46)nmol/Lvs(117.80±22.41)nmol/L;实验3,4组心肌细胞经过(ionomycin1.0μmol/L)处理1h后,实验3,4组心肌细胞[Ca2+]i明显高于实验1,2组和对照组,但两组间无统计学差异(391.91±20.01)nmol/L,(379.91±23.92)nmol/Lvs(260.49±33.06)nmol/L,(278.03±23.46)nmol/Lvs(117.80±22.41)nmol/L,(P0.05)。胰岛素(20IU/L)能促进各组心肌细胞的葡萄糖摄取,分别为(56.86±6.89)μmol/105cells/10min,(31.10±7.62)μmol/105cells/10min,(40.12±6.90)μmol/105cells/10min,(22.26±5.92)μmol/105cells/10min,(32.33±6.06)μmol/105cells/10min。胰岛素刺激各实验组心肌细胞葡萄糖摄取较对照组心肌细胞葡萄糖摄取降低(P0.05),胰岛素刺激实验组2,4心肌细胞的葡萄糖摄取虽较对照组降低,但是与无缺血预处理相比葡萄糖摄取有所增加(P0.05)。结论缺血预处理对ionomycin导致的心肌细胞的钙超载没有影响,但是能改善钙超载心肌细胞的胰岛素抵抗。     

五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响

目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较。结果1μmol/L Aβ25~35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P<0.05);1μmol/L Aβ25~35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P<0.05),但较单纯Aβ25~35作用后明显下降(P<0.05)。结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用。     

慢性肾炎患者外周血CD62P表达的临床意义

目的　探讨慢性肾炎患者外周血CD62P的表达同慢性肾炎进展的关系。方法　慢性肾炎患者 52例根据BUN、Cr分为Ⅰ组 :肾功能不全代偿期 (BUN≤ 9mmol/L ,Cr≤ 178μmol/L) 2 0例 ,Ⅱ组 :氮质血症期 (9mmol/L2 0mmol/L ,Cr >445μmol/L) 13例 ,用流式细胞仪分别测定 3组患者外周血CD62P的表达 ,并同正常对照组进行比较。结果　 3组外周血CD62P的表达分别为 9.12 %± 2 .5%、7.13 %± 2 .1%、3 .41%± 1.5% ,均高于正常对照组的 1.87%± 0 .65% (P <0 .0 1,P <0 .0 5) ,Ⅰ、Ⅱ组又显著高于Ⅲ组 (P <0 .0 1)。各组间血小板的常规指标比较无明显差异 (P >0 .0 5)。结论　慢性肾炎患者外周血CD62P的表达与肾脏病变的发生、发展有密切关系     

β淀粉样蛋白1-40对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用

目的　观察 Aβ1 - 40 对大鼠皮层神经元的毒性作用。　方法　原代培养大鼠皮层神经元 ,分别采用AO- EB染色、TU NEL染色和 DNA凝胶电泳 ,观察不同终浓度的 Aβ1 - 40 对培养的神经元凋亡的诱导作用。　结果　在荧光显微镜下可见 ,经 AO- EB染色后凋亡的神经元胞核染色质着绿色荧光呈固缩状、圆珠状或新月状 ,Aβ1 - 40 三个浓度 (2 0 ,4 0和 80μg/ml)作用不同时间的凋亡率依次为 :2 4 h 2 0 .17%± 0 .76 % ,2 5 .17%± 3.82 % ,2 8.33±2 .84 % ;4 8h 2 2 .33%± 1.4 4 % ,38.83%± 1.2 6 % ,36 .6 7%± 1.0 4 % ;72 h 17.5 0 %± 1.80 % ,2 6 .5 0 %± 1.32 % ,30 .6 7%± 1.2 6 %。 TUNEL染色结果显示胞核内散在分布断裂的 DNA片段 ;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。　结论　 Aβ1 - 40 可诱导大鼠皮层神经元凋亡 ,以 4 0μg/ml作用 4 8h的诱导效果最为明显     

大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的　研究大黄素 (Emodin)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法　酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,用与钙离子特异性结合的Fluo 3 Am标记细胞内游离钙离子 ,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测钙荧光强度 (FluorescentIntensity ,FI)的变化 ,以平均荧光强度代表 [Ca2 + ]i。结果　在静息状态下 ,大黄素 1～10 0 μmol L对 [Ca2 + ]i 均无影响 ;大黄素 1μmol L对KCl 6 0mmol L诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有促进作用 ,平均荧光强度由 1876 .7± 5 5 1.3增加至 2 90 4 .8± 739.1(n =8,P <0 .0 5 ) ;10 μmol L对其无影响 ;10 0 μmol L则表现为抑制作用 ,平均荧光强度降至 12 14 .1± 334.8(n =8,P <0 .0 5 )。结论　大黄素低浓度 (1μmol L)对KCl诱导的细胞内钙增高有促进作用 ;高浓度 (10 0 μmol L)则表现为抑制作用。因此 ,大黄素对心肌细胞内钙具有双向调节作用     

单纯血浆置换治疗慢性重型肝炎疗效观察

目的 :观察人工肝血浆置换疗法对慢性重型肝炎的疗效。方法 :采用北京 WL XGX- 888型血液净化—人工肝支持系统设备对 6例慢性乙型肝炎患者血浆置换治疗共 17次 ,每次置换同型血浆 2 0 0～ 30 0 ml,分别观察治疗前后临床症状、肝功能、电解质及凝血功能等相关指标的变化。结果 :人工肝治疗后症状改善总有效率为 10 0 %。生化指标、总胆红素 (TBil)、转氨酶 (AL T、AST)。碱性磷酸酶 (AL P)、总胆汁酸 (TBA)及凝血酶原时间 (PT)改善显著 ,其下降幅度分别为 2 78.6 1±15 9.0 8μmol/ L,10 5 .1± 112 .2 4 μ/ L,71.73± 6 0 .2 5 u/ L,78± 4 7.6 7μmol/ L,5 1.82± 5 9.81μmol/L和 8.12± 2 5秒 (P<0 .0 0 1,0 .0 5 ,0 .0 5 ,0 .0 0 1,0 .0 5及 0。0 0 1)。凝血酶原活动度 (PTA)上升显著 ,其上升幅度为 15 .4± 10 .1% (P<0 .0 0 1) ,但术后 72小时总胆红素反弹 ,甚至超过术前水平 ,总成活率为 33% (2 / 6 )。治疗前后蛋白、胆固醇、电解质及血细胞无显著性变化 (P>0 .0 5 )。术中及术后并发症发生率为 35 .3% ,其中荨麻疹、低血压最常见。讨论 :血浆置换为重症肝病治疗的有效手段之一 ,早期可提高疗效 ,关键在肝细胞坏死程度。     

单个结肠平滑肌细胞的制备

目的 :探讨离体肠道平滑肌细胞分离方法。方法 :采用混合酶法分离豚鼠结肠平滑肌细胞 ,通过台盼蓝染色法检查细胞成活率 ,并应用Ca2 + 荧光指示剂Fura 2 AM测定静息状态下结肠平滑肌细胞内游离钙浓度( [Ca2 + ]i)。结果 :成功地分离出单个结肠平滑肌细胞 ,其存活率为 ( 96.7± 2 .6) % ,在静息状态下且细胞外Ca2 + 浓度为 1.5mmol L时 ,豚鼠结肠平滑肌细胞 [Ca2 + ]i 为 ( 10 8± 9.4 )nmol L (n =6) ;细胞外Ca2 + 浓度为 0时 ,[Ca2 + ]i为( 72± 11.8)nmol L (n =6)。结论 :酶法分离的单个结肠平滑肌细胞活性好 ,可应用于肠道平滑肌细胞电生理、药理学研究。