多重聚合酶链式反应在脓毒血症病原体检测中的应用

目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)在脓毒血症病原体检测中的灵敏度、特异性及检测时间,为多重PCR在脓毒血症病原体检测中的应用提供理论依据。方法采用多重PCR和血培养检测医院40例脓毒血症患者血液中的病原体,并比较两种检测方法的灵敏度、特异性、检测速度、检测菌种的差异,并以同期40名健康体检者血标本作为对照;采用SPSS 15.0软件进行数据处理,检测阳性结果以率的形式表示,并进行χ2检验。结果对照组中两种方法的阳性率差异无统计学意义,脓毒血症组多重PCR检测的阳性率为55.0%,血培养为82.5%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),且血培养检测出18例脓血症患者中共有11例PCR检测为阳性,占61.1%;多重PCR特异性为80.7%,灵敏度为95.7%;脓毒血症组多重PCR的平均检测时间为(6±0.56)h,血培养法为(30.78±1.45)h,差异有统计学意义(P<0.05);从22份阳性血培养中共分离出4种病原菌,分别为金黄色葡萄球菌10株、铜绿假单胞菌7株、鲍氏不动杆菌3株、表皮葡萄球菌2株,多重PCR均能检测上述病原菌的DNA。结论在脓毒血症病原学的检测中,多重PCR较血培养具有更高的敏感性和特异性,检测时间也较血培养明显缩短,有利于脓毒血症病原体的快速检测,指导临床用药。     

样品库PCR法检测大学生沙眼衣原体感染状况的研究

目的 了解大学中沙眼衣原体((Chlamydia Trachomatis,CT)感染状况,探索有效的CT筛查方法,为制定中国青少年中的STDs的预防措施提供科学依据。方法 于1999年在北京某综合性大学学生中,随机抽取2050人,进行间卷调查并调查人群中的Cr感染率。结果 在1935份有效尿样中,共检出阳性3例,检出率为1.6％。结论在低CT感染率人群中进行筛查,样品库(Pooling)法为一行之有效的筛查方法,并提示在大学生中,生殖健康之重点应为安全性知识、性道德的宣传。     

聚合酶链式反应与细胞培养在女性生殖道沙眼衣原体感染诊断中的比较分析

目的:比较荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)与细胞培养对女性生殖道沙眼衣原体感染的检测效果。方法:对门诊300例无生殖道感染症状女性患者的宫颈分泌物分别采用FQ-PCR与细胞培养法进行沙眼衣原体的检测。结果:两种方法均为阳性32例,占10.67%。两种方法均为阴性252例,占84.00%。FQ-PCR阳性而细胞培养阴性13例,占4.33%。细胞培养阳性而FQ-PCR阴性3例,占1.00%。细胞培养的敏感性为72.92%,FQ-PCR的敏感性为93.75%;两种方法的阳性符合率为66.67%,阴性符合率为94.03%。两种检测方法的结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FQ-PCR和细胞培养两种方法各有优劣,均可适用于沙眼衣原体感染的诊断,临床工作者可根据自己的实际情况进行选择。     

连接酶链反应技术在淋球菌和沙眼衣原体检测中的应用

[目的]研究1种既高度敏感又高度特异的淋球菌和沙眼衣原体的实验室诊断方法。[方法]采用连接酶链反应技术(LCR)对受捡者的尿液标本进行淋球菌和沙眼衣原体的检测。[结果]在1128份标本中，共检测出淋球菌阳性样品8份，阳性捡出率为0．71％(8／1128)，沙眼衣原体阳性标本38份，阳性检出率为3．37％(38／1128)，其中共有5份标本为淋球菌和沙眼衣原体双阳性标本，阳性检出率为0．44％(5／1128)。[结论]作为1种探针检测技术，连接酶反应技术可用于淋球菌、沙眼衣原体等多种病原体的实验室检测。     

ZNA探针在沙眼衣原体核酸定量检测中的研究

目的探讨ZNA (ZIP Nucleic Acid)探针的PCR性能及其在沙眼衣原体(CT)核酸定量检测中的研究。方法使用CT阳性质粒, 比较偶联不同ZIP数量的ZNA探针的PCR扩增曲线差异;比较ZNA探针与29mer普通Taqman探针(DNA长探针)、20mer普通Taqman探针(DNA短探针)、MGB探针在PCR扩增曲线、反复冻融稳定性及低浓度质粒检出率的差异;使用CT阳性临床样本, 比较ZNA探针与DNA长探针、DNA短探针、MGB探针扩增曲线差异及低浓度样本检出率的差异。结果 (1)偶联5个ZIP单位的ZNA探针Ct值和荧光值最优, 与偶联1个ZIP的探针相比:Ct值提升1.34 (灵敏度提升2.37倍), 荧光值提升30%。(2)偶联5个ZIP的ZNA探针的扩增效率是优选的普通Taqman探针和MGB探针的2.14～2.64倍, 荧光值高17%～90%。(3)四组探针冻融稳定性结果显示, ZNA探针的稳定性最佳, 低浓度(1×104拷贝/mL)的Ct值偏离最小(CV%= 1.4), 优于DNA长探针、DNA短探针、MGB探针(CV%= 1.7～3.7)。(4)用35例C...     

多重聚合酶链反应方法在结核杆菌检测中的应用

[目的]建立结核病诊断及快速检测方法。[方法]将结核杆菌标准菌株、临床病例标本、对照标本采用多重PCR体系进行检测，以研究多重PCR方法对上述菌株检测的敏感性和特异性。[结果]多重PCR体系检测结核杆菌DNA的灵敏性最低为30～210个结核杆菌，对结核病病例和对照标本检测的灵敏度为94．6％，特异度为100％。[结论]多重PCR技术用于结核分支杆菌的鉴定简便、快速、特异，适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。     

血清库在鼻咽癌研究中的应用

一、一般资料：（１）血清标本来源：①广东鼻咽癌高发区９８１８０名３０～５９岁健康人从１９８６～１９９８年进入队列时血清。②队列人群中ＥＢＶＶＣＡ／ＩｇＡ（ＥＢ病毒壳抗原抗体ＩｇＡ）阳性（滴度≥１∶５）人群和阴性（滴度＜１∶５）对照者进入队列及其后每次监测血清。③队列人群中检出鼻咽癌患者发病前、发病、治疗后血清。④队列人群中高癌家族（两代人中有２例以上鼻咽癌）患者及健康成员血清。（２）血液采集、血清分离与保存：①队列人群按筛查方案分层监测，每次监测除头颈物理检查外，抽血３ｍｌ。②全血在现场即离心分…     

荚膜多糖基因聚合酶链反应在肺炎链球菌临床诊断中的应用

目的 评价荚膜多糖基因(capsular polysaccharide synthesis locus,CPS)聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)在肺炎链球菌病例临床诊断中的应用价值。 方法 收集保定市各医院诊断为肺炎病例的临床标本,其中痰液1 850份、血液1 850份、脑脊液245份,分别进行cpsA基因PCR检测和传统细菌培养,比较两种方法对肺炎链球菌的检测结果。同时根据cps基因血清特异性区域设计引物,采用多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,MP-PCR)对210株肺炎链球菌分型,并与荚膜肿胀试验结果进行比较分析。 结果 cpsA基因PCR检测法在3945份临床标本中检出肺炎链球菌600例,检出率为15.21%,高于细菌培养法。以细菌培养法为参考标准,cpsA基因PCR检测肺炎链球菌的灵敏度为97.67%,特异度为89.54%。且在两种方法中痰液中肺炎链球菌检出率均高于血液与脑脊液,差异具有统计学意义(P<0.05)。210株肺炎链球菌中,198株被MP-PCR法分出血清型,分型率为94.29%,高于荚膜肿胀试验。两种方法鉴定血清型别一致率达80.81%。其中有7株被荚膜肿胀试验鉴定为其它型别:63株多重PCR鉴定为19F的菌株中,有5株被荚膜肿胀试验鉴定为6A;35株多重PCR鉴定为19A菌株中,有1株被荚膜肿胀试验鉴定为19F;8株多重PCR鉴定为14的菌株中,有1株被荚膜肿胀试验鉴定为19A。 结论 cpsA基因PCR检测和cps基因血清特异性区域的MP-PCR检测在肺炎链球菌检出和分型上优于传统细菌培养法和荚膜肿胀试验,可用于肺炎链球菌的临床诊断,且标本以痰液为宜。     

LCR技术在检测淋球菌和泌尿生殖道沙眼衣原体感染中的应用

连接酶链反应技术(Ligase Chain Reaction,LCR)与PCR技术相似,是近年来发展的一门新的分子生物学技术,LCR技术与PCR相比所不同的是,其使用了两对引物对靶序列作扩增,同时在扩增过程后,还应用微粒子酶免疫技术(MEIA)对扩增产物进行测定,进一步提高了检测的敏感性和特异性。本文就近年来LCR技术在临床检测淋球菌(GN)和泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)的应用情况综述如下。     

PCR结合导流杂交技术在育龄妇女α和β地中海贫血诊断中的应用

目的探讨PCR结合导流杂交技术诊断试剂盒在育龄妇女α和β地中海贫血诊断中的应用。方法以平均红细胞体积(MCV)<80fl筛查出141表型阳性病例,凯普α和β地中海贫血诊断试剂盒检测地贫。结果检测出80例存在α-地中海贫血,包括9种类型,常见类型为--^(SEA)/αα、-α(SEA)/αα、-α^(3.7)/αα、-α(3.7)/αα、-α^(4.2)/αα,其中4例存在两种缺失;53例存在β-地中海贫血,包括11种类型,常见β地贫基因型β41-42、β654、β17、β28,其中2例存在两种突变;5例同时存在α-地贫和β-地贫;13例未检测到缺失或突变;同时还检测出5例MCV>80fl的α-地中海贫血病例,其中1例合并β-地贫。结论本试剂盒优势为同一基因芯片上进行α和β地贫的测定,缩短了检测时间,降低检测成本,减少复合地贫漏诊,适合基层实验室用于常见地贫的诊断。但仅能检测常见类型α和β地贫,具有一定局限性,在出现该试剂无法检测到的地贫基因缺失或突变,而MCV<80fl时,建议进行缺铁性贫血的筛查和地贫基因序列的检测。     

核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用

从建立PCR标准化实验室,制定标准操作规程;强化人员培训;正确选择设备设施,做好校准、维护与保养;选择合格的实验耗材;制定严格的防污措施,做好环境质控;做好检测环节质控;确保记录完整等方面,总结了核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用实践.     

比较常规PCR与多重PCR在食物中毒致病菌检测中的应用

目的通过对常规聚合酶链反应(PCR)与多重PCR在检测6种食物中毒致病菌中的比较研究,建立一个快速、准确、灵敏、有效的针对该6种致病菌进行PCR检测的平台。方法利用6种导致患者腹泻的食物中毒致病菌的特异性序列为靶序列,设计了6对特异性引物进行PCR反应,优化并建立了PCR检测体系。结果通过实验确定常规PCR适宜的退火温度为58℃,而多重PCR适宜的退火温度为62℃;常规PCR的基因组DNA检测灵敏度可达到2×10-7ng/μl,而多重PCR的基因组DNA检测灵敏度只有2×10-6ng/μl;常规PCR比多重PCR更容易从食物中毒样品中检测出致病菌。结论 6种导致患者腹泻的食物中毒微生物完全可以在同批次中完成检测,PCR检测方法操作简单、速度快、灵敏度高、稳定性和重复性好,具有较广阔的应用前景和较大的经济与社会效益。     

数字PCR技术在病原生物学研究中的应用

数字聚合酶链式反应(dPCR)作为一种新的核酸检测技术,在近几年生物医学研究中逐渐得到广泛应用。本文简单介绍dPCR原理及应用概况,重点阐述该技术目前在病原生物学研究领域的应用,让更多专业人员了解dPCR,促进该技术更多地用于病原生物学研究。     

套式-聚合酶链反应在山东省恙虫病检测中的应用

目的 :利用分子生物学手段对山东省部分地区的人和鼠进行调查 ,了解恙虫病在山东省的感染情况。方法 :采用套式 -聚合酶链反应 (nested- PCR)技术 ,对在山东省 6个市 (县、区 )捕获的野鼠或家鼠的肝、脾、肾组织标本 ,以及临床诊断为恙虫病的病人血标本进行检测。结果 :共检测鼠脏器标本 198份 ,阳性 8份 ,阳性率为 4 .2 4 % ;共检测临床诊断恙虫病病人血标本 14份 ,阳性 7份 ,阳性率为 5 0 %。结论 :首次在山东省黄河以北地区捕获的鼠体内检测到恙虫病东方体 ,其中两只鼠为褐家鼠 ,表明山东省广泛存在恙虫病的自然疫源地     

核酸扩增技术在病原体检测中的应用

传统的病原体检测方法在检测敏感性、特异性、应用范围等方面存在许多不足.PCR技术已被用于感染早期的病原体检测,但在应用过程中也面临不少问题.近年来出现的新的核酸扩增技术可弥补普通PCR技术的缺点.此文就其中依赖核酸序列的扩增技术、PCR-胶体金免疫层析技术和多重荧光实时PcR技术进行综述.     

实时PCR在大肠杆菌O157:H7检测中的应用

大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)是正常寄生于人和动物肠道的革兰氏阴性菌,多数不致病.然而一群产志贺毒素大肠杆菌(Shiga Toxin-producing E. coli,STEC)是重要的食源性病原菌,在人类可引起严重的胃肠道和循环系统疾病,如出血性结肠炎(HC)、溶血尿毒综合征(HUS)等甚至死亡.肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7是STEC中最主要的血清型,自1982年美国首次分离该菌以来,世界各地不断有O157所致疾病散发和爆发的报告,已构成严重的公共卫生问题.因此,快速、敏感、特异的检测方法对于临床诊断和保障食品安全是必不可少的.     

快速检测试剂条、镜检和PCR在疟疾诊断中的应用研究

目的采用快速检测试剂条（rapiddiagnostictest,RDT）、镜检及聚合酶链反应（polymerasechainreac-tion,PCR）,3种检测方法进行疟原虫检测,比较3种方法在疟疾诊断中的敏感性、特异性,为科学分析检测结果和探究RDT能否在基层替代疟原虫镜检提供依据。方法收集安徽省2012年1月～2013年3月确诊以及疑似病例抗凝血148份,血片148张,采用RDT进行检测,并与镜检法和PCR的结果对比分析其敏感性与特异性。结果148份血样采用RDT、镜检和PCR3种方法检测结果阳性率分别为43．24％、36．49％、37．84％,经配对x2检验RDT阳性率高于镜检和PCR;镜检和PCR均检出2例卵形疟,而RDT结果为阴性;以镜检为标准,对间日疟和恶性疟进行分析得出,RDT的敏感度为100％,特异度87％,阳性预测值81％,阴性预测值100％;以PCR为标准,对间日疟和恶性疟进行分析得出,RDT的灵敏度为100％,特异度89％,阳性预测值84％,阴性预测值100％。3种方法均检出间日疟16例,而对恶性疟分别为RDT检出48例,镜检检出36例,PCR检出38例。结论RDT对间日疟和恶性疟敏感性较高,可以覆盖全部阳性病例,在今后疟疾低流行时期RDT有望取代基层镜检对疟疾进行诊断。     

多重聚合酶链反应在缺失型ɑ-地中海贫血诊断中的应用

目的：探讨多重聚合酶链式反应（PCR）在缺失型α-地中海贫血患者基因类型快速诊断中的应用价值。方法：对应用多重PCR进行α-地中海贫血检测后确诊为正常的30份样本及缺失型α-地贫的78份样本进行基因类型及血液实验学参数的回顾性比较与统计分析。结果：在78例缺失型α地中海贫血中，8例为左缺失静止型α-地贫（-α^37／α α）、3例为右缺失静止型α-地贫（-α^42／α α）、60例为东南亚型缺失α-地贫（--^sea／α α）、5例为左缺失血红蛋白（HbH）病（--^sea／-α^37）、2例为右缺失血红蛋白（HbH）病（--^sea／-α4．2），分别占缺失型α-地贫的10．3％、3．8％、76．9％、6．4％、2．6％。静止型α-地贫血液学参数MCV为（84．0±3．76）fl，红细胞脆性为（68．0±12．7）％；东南亚（标准）型α-地贫MCV为（71．7±5．1）fl，红细胞脆性为（42．3±15．2）％；HBH病MCV为（61．9±5．0）fl，红细胞脆性为（25．0±6．5）％。结论：与传统的血液学参数筛查比较，多重PCR可以准确、简便、快速地检殒，1常见的-α^37、-α^42、--^sea3种缺失型α-地贫，对静止型α-地贫的检出是一种较为理想的方法。     

多重组等温聚合酶快速扩增技术在新冠病毒检测中的应用

目的 探讨多重组等温聚合酶快速扩增技术（MIRPA）在新冠病毒检测中的应用价值。方法 从GenBank数据库下载新冠病毒基因核苷酸序列,选取保守区域ORF1ab基因作为扩增对象,设计MIRPA检测的特异性引物。通过引物筛选、反应体系优化,建立检测新冠病毒的MIRPA方法,用建立的MIRPA方法检测人类冠状病毒OC43(HCoVOC43)、HCoV-229E、流感病毒B型（FluB）阳性咽拭子样本,评估其特异性;和实时荧光定量PCR检测结果比较,评估其准确度。结果 针对新冠病毒ORF1ab基因序列设计合成引物和探针,建立MIRPA检测体系。用优化的MIRPA体系检测新冠病毒阳性参考品均为阳性,HCoV-OC43、HCoV-229E、FluB均为阴性;MIRPA方法的灵敏度为100拷贝/ml;和实时荧光定量方法的检测结果符合率达100.00%。结论 建立的MIRPA方法检测新冠病毒的特异性强、灵敏度高,结果准确可靠,具有重要的经济和社会价值。