茶黄素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对膝骨关节炎大鼠的治疗作用

目的:探讨茶黄素调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠的治疗作用。方法:向63只SD大鼠右膝关节注射50μL的碘乙酸钠(MIA)0.01mg/μL制备KOA大鼠模型,另取13只大鼠仅膝关节注射生理盐水作为空白组,两周后随机从造模和空白组挑选3只大鼠,进行HE染色、 Mankin和lequesne MG评分,以鉴定KOA模型是否制备成功。剩余造模成功大鼠随机分为模型组、茶黄素低剂量组(20mg/kg茶黄素)、茶黄素中剂量组(40mg/kg茶黄素)、茶黄素高剂量组(80mg/kg茶黄素)、塞来昔布组(18mg/kg阳性药塞来昔布)、抑制剂组(80mg/kg茶黄素+0.2mg/kg AMPK抑制剂Compound C)。茶黄素低、中、高剂量组以及塞来昔布组灌胃相应剂量药物,空白组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,抑制剂组除灌胃相应剂量茶黄素外还需尾静脉注射相应剂量Compound C,每天1次,连续给药4周。在第15天(造模后1天),第29天(给药第14天)和第43天(给药第28天)检测大鼠机械疼痛阈值和大...     

盘龙七片对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用及对Wnt通路的调控机制

目的 探讨盘龙七片对膝骨关节炎（KOA）大鼠关节软骨的保护作用及对Wnt通路的调控机制。方法 选用96只SPF级8周龄雄性SD大鼠构建膝骨关节炎大鼠模型,观察大鼠活动状态,并经CT验证。实验分为假手术组、模型组、塞来昔布组和低、中、高剂量盘龙七片组6组,每组16只。按照实验分组给药,观察各组大鼠软骨形态并进行大体评分,行HE染色,酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠滑膜中TNF α、IL 1β及MMP-13水平,蛋白印迹（WB）法测定软骨中Wnt-4、β-catenin水平。结果 手术后,大鼠出现膝骨关节炎症状并经CT验证。与假手术组相比,模型组大鼠膝骨关节可见裂纹,表面呈毛刺状、暗黄色,软骨可见增生、赘生物;HE染色可见软骨细胞数减少,骨赘、血管增生,结构混乱不清,表面凹陷,深层结缔组织可见明显裂隙,潮线消失;大体评分、TNF α、IL-1β、MMP-13、Wnt-4及β-catenin水平显著升高（均P＜0.05）。与模型组相比,经低、中、高剂量盘龙七片治疗后,大鼠膝骨关节软骨表面趋向光滑,色泽逐渐明亮,增生、赘生物减少;HE染色可见软骨细胞数逐渐增多,结构趋向分明,裂隙减少,伴有少量炎症细胞浸润;大体评分、TNF α、IL-1β、MMP-13、Wnt-4及β-catenin水平明显降低（均P＜0.05）。结论 盘龙七片可缓解KOA大鼠症状,具有一定的临床应用价值,这提示盘龙七片可能成为治疗KOA的候选药物。     

地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠SIRT1/NF-κB信号通路的影响

目的 探究地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法 选取40只SPF级SD大鼠随机分为4组：Sham组(不做任何处理);ISO组(持续4 h吸入1.4%异氟醚);5 Dex Iso组(吸入异氟醚前30 min腹腔注射5 mg/kg地塞米松);10 Dex Iso组(吸入异氟醚前30 min腹腔注射10 mg/kg地塞米松)。采用Morris水迷宫实验和物体位置识别实验评估大鼠认知功能,HE染色观察大鼠海马区形态学变化,TUNEL染色观察大鼠海马区神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,Western blot法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、caspase-9、SIRT1、NF-κB、磷酸化(p)-NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκBα)。结果 与Sham组比较,ISO组第3至5天逃避潜伏期和物体记忆时间延长,原平台位置穿越次数减少,海马区神经元凋亡率、caspase-3、caspase-9相对表达量、IL-6、IL-1β、TNF-α及p-NF-κB/NF...     

基于HMGB1/NF-κB通路探讨温经通络汤对IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞炎症的影响

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制。方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2和TNF-α的表达水平。结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1的表达水平显著上升(P<0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P<0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1的表达水平(P<0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量(P<0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平...     

盘龙七片缓解关节炎软骨细胞损伤和炎症反应

目的 探讨盘龙七片对关节炎软骨细胞增殖、凋亡、基质降解和炎症反应的影响及其机制.方法 采用膝关节穿刺注射木瓜蛋白酶法制备膝骨关节炎大鼠模型,并分离培养骨关节炎软骨细胞.骨关节炎软骨细胞分为:对照组(正常培养),30,60,90,120μg/ml组(盘龙七片处理24 h),盘龙七片+PCAT-1组(转染pcDNA3.1-...     

AGEs调节NF-κB通路对软骨细胞炎症因子IL-1β的影响

目的观察AGEs调节NF-κB通路对软骨细胞炎症因子IL-1β表达的影响。方法将软骨细胞传代培养,取对数生长的软骨细胞接种于96孔板,分为对照组、低剂量AGEs(20μg/L)组、高剂量AGEs(40μg/L)组、NF-κB通路抑制剂PDTC(5μg/L)组和AGEs(40μg/L)+PDTC(5μg/L)组,共培养24 h后ELISA检测各组上清液中IL-1β的含量,Real-time PCR检测各组IL-1β和P65基因表达,Western-blot检测IL-1β和P65蛋白表达。结果对照组软骨细胞上清液中IL-1β的浓度明显高于低剂量AGEs组和高剂量AGEs组,差异有统计学意义(P<0.05);PDTC组和AGEs+PDTC组软骨细胞上清液中IL-1β含量与对照组比较明显下降(P<0.05)。对照组软骨细胞中IL-1β和P65 mRNA相对表达量高于低剂量组和高剂量组(P<0.05),低于PDTC组(P<0.05)。PDTC组IL-1β和P65 mRNA相对表达量低于AGEs+PDTC组(P<0.05)。对照组软骨细胞中IL-1β和P65蛋白相对表达量低于低剂量组和高剂量组(P<0.05),但高于PDTC组(P<0.05)。PDTC组软骨细胞中IL-1β和P65蛋白相对表达量较AGEs+PDTC组减少(P<0.05)。结论 AGEs上调软骨细胞IL-1β的表达,NF-κB通路可能是参与骨关节炎发生发展的重要通路之一。     

丙泊酚调控HIF-1α表达靶向SIRT1信号通路对胰腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨丙泊酚对胰腺癌细胞增殖凋亡的影响,进一步分析丙泊酚对胰腺癌细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和沉默信号调节因子1(SIRT1)信号通路的影响.方法 分别采用5μg/ml和10μg/ml的丙泊酚处理胰腺癌Panc-1细胞48 h,设置control组、低剂量组和高剂量组.采用CCK8检测各组细胞的增殖能力...     

柴胡疏肝散对抑郁症模型大鼠前额叶皮层SIRT1/NF-κB信号通路的作用研究

目的 观察柴胡疏肝散对抑郁症模型大鼠SIRT1/NF-κB信号通路的作用,探讨柴胡疏肝散抗抑郁可能机制.方法 将大鼠随机分为空白组、模型组、西酞普兰组和柴胡疏肝散组,除空白组外,其他各组制备抑郁症模型.西酞普兰组给予草酸艾司西酞普兰片制成的药液,柴胡疏肝散组给予柴胡疏肝散药液,空白组和模型组给予等体积的纯水.采用旷场实...     

盘龙七片治疗膝骨关节炎患者的效果

目的:观察盘龙七片治疗膝骨关节炎患者的效果。方法:选取118例膝骨关节炎患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组各59例,对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组基础上给予盘龙七片治疗。比较两组疗效、治疗前后Lysholm膝关节功能评分、膝关节活动度、血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]水平,以及不良反应发生率。结果:治疗后,两组TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,两组Lysholm评分和膝关节活动度均高于治疗前,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率为93.22%,高于对照组的81.36%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率为8.47%,与对照组的6.78%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在常规西药治疗基础上给予盘龙七片治疗可降低膝骨关节炎患者血清炎性因子水平,提高膝骨关节功能评分、膝关节活动度和治疗总有效率,优于常规西药治疗效果。     

尼古丁通过PI3KAKT信号通路抑制MIA诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡

摘要：目的 探讨尼古丁通过PI3KAKT信号通路抑制碘乙酸钠（MIA）诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡。方法 实验分为正常组,模型组（4 μM MIA）,尼古丁给药组（10-8,10-7,10-6,10-5 M）,MTT法检测各组软骨细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式双染细胞术检测各组软骨细胞凋亡;分光光度法检测各组软骨细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase 3）活性;Western blot分析磷脂酰脂醇3激酶（PI3K）/AKT激活状况及下游靶分子Bax,Bcl-2的表达情况。结果 10-7,10-6 M尼古丁显著促进大鼠软骨细胞活力（P<0.05）,10-5 M尼古丁显著降低大鼠软骨细胞活力（P<0.05）,10-8 M尼古丁对大鼠软骨细胞活力无影响（P>0.05）。10-8,10-7,10-6 M尼古丁能剂量依赖性的提高MIA诱导的大鼠软骨细胞活力,并抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡及Caspase 3活性（P<0.05）;10-7,10-6 M尼古丁能提高PI3K表达及AKT磷酸化水平,并下调促Bax表达,上调Bcl-2表达（P<0.05）。 结论 一定剂量尼古丁可通过PI3K/AKT信号通路抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡。     

积雪草苷对脂多糖诱导的RAW264.7细胞核转录因子κB活化及炎症反应的作用

目的探讨积雪草苷对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞核转录因子κB(NF-κB)活化及炎症因子表达的影响。方法用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测低、中、高浓度积雪草苷(终浓度分别为10-7、10-6及10-5mol/mL)对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察积雪草苷对细胞NF-κB核转运的作用,ELISA法检测细胞上清中细胞因子TNF-α、IL-1及IL-10的变化。结果低、中、高浓度积雪草苷对RAW264.7细胞增殖均无显著影响。积雪草苷明显抑制RAW264.7细胞NF-κB活化,抑制促炎因子TNF-α和IL-1的表达,同时上调抗炎因子IL-10的表达。空白组、模型组及积雪草苷低、中、高浓度干预组NF-κB转入细胞核百分率分别为(3.5±1.5)%、(75.7±9.1)%、(66.8±7.1)%、(58.9±9.0)%、(40.1±8.8)%,细胞上清TNF-α浓度分别为(171.12±35.42、1775.45±193.97、1284.63±162.13、1035.22±187.97、598.90±107.73)pg/mL,IL-1浓度为(5.66±0.98、26.93±3.48、22.41±2.84、17.05±1.70、10.64±1.29)ng/mL,IL-10为(25.23±2.17、71.75±8.31、82.82±6.00、98.70±8.84、119.97±9.13)pg/mL。结论积雪草苷可能通过抑制NF-κB信号通路,维持促炎系统与抗炎系统的平衡而发挥抗炎作用。     

核因子kappaB的反义核酸对人内皮细胞间粘附分子-1表达的影响

目的　采用反义核酸技术观察核因子kappaB(NF κB)的合成及其对所调控的粘附分子表达的影响 ,阐明其作用机制并证明其有效性。方法　设立正义、反义核酸组和对照组 (单用肿瘤坏死因子 α刺激 )。观察FITC标记的寡核苷酸在内皮细胞内的摄取情况及采用流式细胞仪检测反义核酸对NF κB表达的影响 ;采用RT PCR、免疫组织化学法和流式细胞仪检测转染后细胞间粘附分子 (ICAM ) 1的表达情况。结果　反义核酸组NF κB的表达较对照组下降 35 .94%,较正义核酸组下降 47.14%(P <0 .0 5 ) ;反义核酸组人血管内皮细胞I CAM 1的mRNA表达及其在细胞表面的表达水平较对照组分别降低 12 .2 3%和 71.37%,较正义核酸组分别降低 18.16 %和 71.82 %(P <0 .0 5 )。结论　NF κB的反义核酸能有效降低NF κB的复制及合成 ,从而显著下调人血管内皮细胞ICAM 1的表达 ,其正义核酸无此效应。     

大鼠肾小球系膜细胞活性氧簇JAK2/STAT5通路与TIMP-1之间的关系及对其凋亡的影响

目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27k...     

基于CD40/NF- κB通路丹皮酚调控miR- 145抑制小鼠动脉粥样硬化泡沫细胞炎症反应

目的 观察丹皮酚基于白细胞分化抗原CD40/核转录因子- κB（clusters of differentitation 40/nuclear factor kappa- B,CD40/NF- κB）通路调控miR- 145抑制小鼠动脉粥样硬化血管巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应的作用机制。方法 高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠20周复制动脉粥样硬化模型,模型复制成功后,给予丹皮酚灌胃,分为正常对照组,模型组,丹皮酚中、高剂量组（200、300 mg/kg）;油红O染色观察主动脉斑块病理形态;ELISA法检测小鼠血清白细胞介素- 1（interleukin- 1,IL- 1）、白细胞介素- 6（interleukin- 6,IL- 6）、肿瘤坏死因子- α（tumor necrosis factor- α,TNF- α）水平;激光共聚焦显微镜检测主动脉蛋白CD40与CD36共定位;实时荧光定量PCR检测主动脉miR- 145表达情况。氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox- LDL）刺激RAW264.7细胞建立巨噬细胞源性泡沫细胞炎症模型,将miR- 145模拟剂、miR- 145抑制剂转染入细胞,分为空白组、模型组、丹皮酚（60 μmol/L,Pae）组、miR- 145模拟剂组、miR- 145模拟剂＋Pae组、miR- 145抑制剂组、miR- 145抑制剂＋Pae组。油红O染色观察细胞荷脂情况,Western blot法检测蛋白CD40和核因子- κB（nuclear factor κB,NF- κB）磷酸化水平,ELISA检测TNF- α、IL- 1、IL- 6水平。结果 丹皮酚能显著缩小小鼠主动脉斑块面积,降低血清IL- 1、IL- 6、TNF- α水平,下调主动脉CD40蛋白的表达水平,上调主动脉miR- 145的表达水平。丹皮酚能上调泡沫细胞miR- 145的表达水平,抑制CD40、p- p65蛋白的表达,降低细胞分泌的IL- 1、IL- 6、TNF- α水平。结论 丹皮酚通过上调小鼠miR- 145的表达水平,抑制CD40/NF- κB通路,从而减轻动脉粥样硬化小鼠血管泡沫细胞的炎症反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤ERK1/2信号通路表达的影响

目的：探讨急性缺血性中风（AIS）瘀毒病机的分子机制及解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧损伤的保护作用。方法（1）用凝血酶合并缺氧损伤PC12细胞,模拟急性缺血性中风的体外细胞模型。（2）将细胞分为空白组,模型组,解毒化瘀方含药血浆组和PD98059组（MEK抑制剂组）,应用荧光定量实时RT-PCR方法检测MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达,应用免疫荧光法检测ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达。结果 PCR结果提示：模型组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达与空白对照组相比显著升高（P<0.01）,解毒化瘀方组和PD98059组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达较模型组显著降低（P<0.01）,免疫荧光结果提示：解毒化瘀方组和PD98059组ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达较模型组显著降低（P<0.01）。结论解毒化瘀方以凝血酶为作用的分子靶点,能够显著降低ERK1/2信号通路在缺血性中风体外细胞模型中的表达。