胃癌及癌旁组织多个肿瘤相关基因超甲基化

目的 检测胃癌及癌旁组织肿瘤相关基因超甲基化状态,探讨多个肿瘤相关基因启动子超甲基化与胃癌发生的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应,检测23例手术切除的胃癌组织、癌旁组织和10例胃镜活检正常的胃黏膜组织的hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p16和p15基因启动子区域的超甲基化状态.结果 正常胃黏膜组织未检测到所选基因的超甲基化,22例(95.7%)胃癌组织和7例(30.4%)癌旁组织中检测到超甲基化.在17例(73.9%)胃癌组织和5例(21.7%)癌旁组织可以检测到2个以上基因的超甲基化;E-cadherin、p15和 p16 三个基因的甲基化率分别为78.3%、82.6%、60.8%,明显高于hMLH1和GSTP1的34.8%和17.4%.结论 胃癌组织和邻近的癌旁组织中可以同时检测到多个肿瘤相关基因的甲基化,启动子区域超甲基化导致的基因功能失活可能发生在胃癌肿瘤形成的早期.     

胃癌及癌旁组织中Runx3基因甲基化研究及临床意义

目的:探讨Runx3基因启动子区域甲基化及表达在胃癌发生和发展过程中的意义。方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术对35例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3 mRNA的表达情况。结果:Runx3基因在35例胃癌及其癌旁组织中甲基化率分别为40.0%(14/35)和8.5%(3/35);胃癌组织标本中Runx3基因表达(0.593 8±0.100 7)较癌旁正常组织表达(0.831 1±0.287 2)明显下调,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Runx3 mRNA在胃癌标本的表达与其病理临床特征密切相关,在伴有淋巴结转移和低分化的胃癌组织标本中Runx3 mRNA的表达显著下调(P﹤0.05)。结论:Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关,可作为胃癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

胃癌组织中相关肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态

目的分析胃癌组织中肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态及其与临床分期、分型的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应方法,检测106例胃癌及其邻近胃小凹上皮、16例慢性胃炎小凹上皮石蜡标本中E钙黏素（E—CD）、错配修复酶hMLH1、APC和6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态,并对其中46例胃癌采用免疫组化方法检测E—CD蛋白表达情况。结果在胃癌、胃癌邻近小凹上皮及慢性胃炎小凹上皮中,基因甲基化频率分别为72．6％（77／106）、44．3％（47／106）和12．5％（2／16）,三者问差异有统计学意义（P〈0．01）。Laurén弥漫型胃癌甲基化（80．6％,50／62）明显高于肠型胃癌甲基化（61．4％,27／44）,两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。甲基化与患者的年龄、性别、Ming分型及区域淋巴结转移无关（均P〉0．05）,甲基化与胃癌的浸润深度、pTNM分期和分化程度有关（均P〈0．05）。行E—CD蛋白检测的46例胃癌中,22例有E—CD基因甲基化,其中20例（90．9％）E—CD蛋白呈异质性减弱或基本消失表达;24例无E—CD基因甲基化,其中9例（37．5％）E—CD蛋白呈异质性减弱或基本消失表达,两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论上述肿瘤抑制基因启动了区甲基化可能是胃癌发生的早期事件。胃癌E—CD基因甲基化与E—CD蛋白异质性减弱或消失表达密切相关。     

肿瘤抑制基因异常甲基化与胃癌的研究进展

表遗传学是研究在DNA序列没有改变的情况下,所发生的可遗传性基因表达的改变,其中DNA甲基化是研究最多、最深入的一种表遗传学表达机制。CpG岛是人类基因组中富含CpG二核苷酸的DNA序列,主要位于基因启动子区,大小约为100～1 000 bp,与约60%的编码基因相关。DNA中CpG岛甲基化可导致抑癌基因的表观遗传学转录失活,直接参与肿瘤的发生机制。我们简要综述了DNA甲基化在胃癌中的研究进展。     

胃癌及癌前病变相关基因甲基化的研究进展

随着医疗科学技术的发展,胃癌的发病率逐渐下降,但仍然占全人类恶性肿瘤的第二位,同时在肿瘤性死亡的病因中居第二位。胃癌的发病是多基因异常表达的结果,目前已发现许多肿瘤相关基因启动子区CpG岛的甲基化异常与胃癌的发生密切相关。表基因的改变可能是胃癌发生过程中非常重要的机制。本文就胃癌及癌前病变相关基因甲基化的研究进展作一综述。     

胃癌组织中p16基因甲基化分析

目的：探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系。方法：对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用于甲基敏感酶（HpaⅡ）和甲基非敏感酶（MspⅠ）酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5‘-CCGG-3‘位点甲基化进行检测。结果：20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例（25％）和9例（45％）,正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例,有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌（Ⅲa,Ⅳ期各1例）中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者（P＜0．05）。结论：p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去了对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件。     

候选抑癌基因Syk启动子甲基化与胃癌转移相关

目的：探讨Syk（spleen tyrosine kinase）基因启动子甲基化在胃癌发生、转移过程中的作用及其临床意义。方法：采用RT-PCR检测61例胃癌组织、癌旁组织中SykmRNA的表达．并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果：61例癌旁组织均检测到Syk基因的表达,胃癌组织有14例检测到Syk基因的表达,Syk基因在胃癌组织中表达率显著降低（P〈0．05）。61例胃癌旁组织未发现有Syk基因启动于的甲基化。而61例癌组织中有21例检测到Syk基因启动子的甲基化。癌组织Syk基因启动于甲基化率显著高于癌旁组织（P〈0．05）。有淋巴结转移的31例胃癌组织中,有17例Syk基因启动子甲基化,有淋巴结转移的Syk基因启动于甲基化姓著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论：Syk基因启动于甲基化是导致Syk基因失活的原因之一。Syk基因启动子的甲基化可能与胃癌的发生、转移有关。     

癌超甲基化基因1与卵巢癌基因1在卵巢癌组织中的表达及意义

目的探究癌超甲基化基因1(HIC1)与卵巢癌基因1(OVCA1)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法选择2012年‐2015年该院收治的35例手术切除且未经放、化疗的卵巢癌患者(恶性组),选择交界性卵巢肿瘤(交界性组)、良性卵巢肿瘤(良性组)及正常卵巢组织者(正常组)各20例作为对照组。分析以上4组卵巢组织中HIC1及OVCA1蛋白的表达,以及卵巢癌各临床病理特征组织中HIC1及OVCA1蛋白的表达。结果在HIC1蛋白表达量方面,组间比较具有统计学差异(P0.05);在OVCA1蛋白表达量方面,组间比较具有统计学差异(P0.05);HIC1蛋白表达量在不同卵巢癌病理类型、病理分级、病理分期中表达差异均无统计学意义(P0.05);在OVCA1蛋白表达量方面,Ⅲ、Ⅳ期显著低于Ι、Ⅱ期;不同卵巢癌病理分级和病理类型OVCA1蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。结论在卵巢癌、卵巢良性肿瘤和交界性肿瘤中,HIC1蛋白、OVCA1蛋白表达存在差异,这些蛋白表达水平下调均可能参与卵巢癌发生和发展过程。     

癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义研究

目的 研究卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达情况及其与卵巢癌病理特点的关系,探讨其在卵巢癌中的意义.方法 选择2014-2015年在该院妇产科手术切除卵巢癌组织标本63例和正常卵巢组织标本63例作为研究对象.采用Western blot法测定卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因l蛋白的表达情况,并分析其与卵巢癌病理特点的关系.结果 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达量明显低于正常卵巢组织(P＜0.05).癌超甲基化基因1蛋白在不同卵巢癌分期、不同分化程度和不同病理类型中的表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).在卵巢癌Ⅰ期中卵巢癌基因1蛋白的表达高于卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05),Ⅱ期的表达量高于Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05);高分化的表达量高于中分化和低分化(P＜0.05),中分化和低分化的表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌不同病理类型中的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 癌超甲基化基因1蛋白失活可能只参与卵巢癌的发生,卵巢癌基因1蛋白和卵巢癌的发展有一定关系.     

胃癌p16基因启动子CpG岛甲基化研究

目的：探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌中的表达及意义．方法：采用特异性甲基化PCR（MSP）法检测p16基因启动子CpG岛甲基化水平．结果：对照组未检测到CpG岛甲基化,胃癌细胞株均检测到CpG岛甲基化,23例（74％）胃癌组织检测到CpG岛甲基化．此外,17例（74％）癌旁组织检测到CpG岛甲基化．胃癌组织p16基因CpG岛甲基化与分化程度及淋巴结转移之间无相关关系（P〉0．05）．结论：胃癌广泛存在p16基因启动子CpG岛甲基化,并且可能是胃癌发生的早期分子事件．     

胃癌原发灶与癌旁正常组织及淋巴结转移灶中Her-2表达的研究

目的 探讨表皮生长因子受体2(Her-2)在胃癌原发灶、癌旁正常组织及淋巴结转移灶中的阳性表达及其与胃癌原发灶间的关系.方法 应用免疫组织化学(PV-9000)方法 检测56例胃癌患者的原发灶、淋巴结转移灶及癌旁正常组织中Her-2蛋白的表达.结果 胃癌癌旁正常组织、原发灶、淋巴结转移灶的Her-2蛋白的表达阳性率分别为3.4%、14.3%、12.5%.在56例病例中,癌旁正常组织、淋巴结转移灶的Her-2表达状态与原发灶的一致率分别为89.3%和94.6%,而在Her-2表达阳性的标本中,癌旁正常组织、淋巴结转移灶的阳性表达结果 与原发灶的一致率分别为100.0%、85.7%.胃癌不同组织中Her-2蛋白表达在不同性别、民族、年龄、分化程度的患者间差异无统计学意义(P＞0.05);结论 胃癌癌旁正常组织和淋巴结转移灶不宜作为临床检测Her-2表达的标本,但在无法获得原发灶标本时,淋巴结转移灶的检测结果 有一定的参考价值.     

胃癌多药耐药基因的表达及其意义

目的：探讨5种多药耐药（MDR）基因在胃癌组织中的表达，建立MDR的基因诊断标准。方法：用逆转录－聚合酶链反应法（RT－PCR）及流式细胞术检测胃癌组织中5种MDR基因的mRNA和蛋白质的表达，用四氯唑蓝快速比色法（MTT）检测抗癌药物对胃癌原代细胞的IC50值。结果：胃癌组织mdr1,MRP，LRP和GSTp1mRNA表过增加，TopoⅡαmRNA表达最减少，5种MDR基因mRNA表达量之间无相关性；胃癌耐药涉及mdr1,MRP,LRP,GSTp1和TopoⅡα基因，mdr1mRNA≥0.4,MRP mRNA≥0.5,LRP mRNA≥0.9,GSTp1 mRNA≥0．8和TopoⅡmRNA≤0．3为耐药联合诊断标准，符合率为98．6％，结论：胃癌组织中存在5种MDR基因，分别介导不同的多药耐药现象，多重MDR是胃癌耐药的主要形成，用RT－PCR方法联合检测5种MDR基因mRNA表灰在胃癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

胃癌与癌旁组织中RACK1、Src和Bcl-2蛋白的表达及相关性研究

目的：探讨胃癌及癌旁组织中活化的蛋白激酶C受体‐1（RACK1）、类固醇受体辅助活化因子（Src）和 B淋巴细胞瘤‐2（Bcl‐2）基因表达的变化。方法收集华北理工大学附属医院2011年8月1日至2014年2月1日手术切除胃癌及癌旁组织标本各80份,采用免疫组织化学法及蛋白质印迹法（Western blotting ）检测RACK1、Src及Bcl‐2蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况,分析其相关性并结合临床病理学资料进行统计学分析。结果免疫组织化学法与Western blotting检测显示,胃癌组织中RACK1表达阳性率及表达水平均低于癌旁组织,Src与Bcl‐2表达阳性率及表达水平均高于癌旁组织,差异均有统计学意义（P＜0．05）。在胃癌组织中,RACK1表达分别与Src、Bcl‐2表达呈负相关（相关系数 r值分别为－0．632、－0．754,P＜0．01）,Src与Bcl‐2蛋白表达无相关性（r＝0．217,P＞0．05）。结论胃癌组织中RACK1表达明显降低,而Src与Bcl‐2表达升高。     

子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛甲基化状况的研究

目的 :检测子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况 ,分析其与临床病理特征之间的关系 ,探讨FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法 :采用甲基化特异的PCR方法对亚硫酸氢盐修饰过的 35例子宫内膜癌组织、癌旁组织及患者自身外周血白细胞DNA和 2 0例非癌患者子宫内膜组织DNA的FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况进行分析。结果 :癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化率为 2 5 .71 % ,癌旁组织和外周血中也存在相似的甲基化率。非癌患者的子宫内膜组织中FHIT基因的CpG岛无甲基化。癌组织与非癌患者子宫内膜组织的甲基化率之间的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。DNA甲基化与临床病理特征之间无相关性。FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。结论 :子宫内膜癌组织中存在FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化 ,CpG岛的甲基化与临床病理特征之间无相关性。DNA甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。癌旁组织和外周血可用于癌相关基因启动子区域CpG岛甲基化的检测     

APC基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的观察结肠腺瘤性息肉病（APC）基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的作用及临床意义。方法59例上皮性卵巢癌组织原发灶，32例相应的盆、腹腔转移灶，12例癌旁卵巢组织及30例正常卵巢组织，采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）法检测APC基因启动予区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆、腹腔转移灶中存在APC基因启动子区异常甲基化，发生率分别为32．2％、40．6％，显著高于正常卵巢组织（P〈0．01）。12例癌旁卵巢组织中1例检测到APC基因启动子区甲基化，30例正常卵巢组织未检测到。APC基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期（P〈0．05），在高分化癌中低于低分化癌（P〈0．05）。结论APC基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关，并可能与上皮性卵巢癌临床分期及分化程度有关。     

胃癌组织中SP与p53基因的表达及形态定量分析

目的探讨胃肠激素SP和突变型p53基因在胃癌组织中表达的临床意义及其演变关系.并为胃癌预防和早期诊断及胃癌细胞是否存在内分泌功能提供形态学依据.方法采用S-P免疫组织化学方法检测了33例胃癌组织、17例癌旁病变组织和13例正常胃粘膜组织中SP、p53 基因的蛋白表达,并同时应用图像分析技术对SP、p53阳性细胞进行了形状因子、等效直径和异形指数等指标的测定.结果免疫组织化学法检测显示 胃癌组织中SP阳性表达明显高于癌旁组织和正常胃粘膜组织(P<0.001).癌旁组织较正常胃粘膜组织阳性率增加但差异无统计学意义(P>0.05).伴淋巴结转移者阳性率明显高于无淋巴结转移者(P<0.01).胃癌组织中P53基因蛋白阳性表达率和阳性细胞密度均高于癌旁组织(P<0.05).正常胃粘膜组织未见表达.胃癌组织SP、p53两基因共同表达率为36.4%(12/33).图像分析结果显示胃癌组织SP阳性细胞面积上大于正常胃粘膜组织(P<0.02),而形状因子、异型指数在各组间差异均无统计学意义(P>0.05).胃癌和癌旁组织中p53细胞核在等效直径、形状因子和异型指数各参数差异有统计学意义(P<0.01～0.001).结论SP与p53基因高表达参与了胃癌的发生和发展.SP免疫阳性细胞并非全是胃组织中残留的内分泌细胞,部分属于癌细胞.对P53蛋白进行阳性定量可作为胃癌预防和早期诊断的参考指标.     

Notch1 在胃癌组织中的表达及意义

目的比较不同病理特征的胃癌组织及癌旁正常黏膜组织中Notch1蛋白表达的差异,探讨Notch1蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法用免疫组织化学方法检测54例胃癌组织标本和相应的54例正常胃黏膜组织中Notch1蛋白的表达。结果 Notch1蛋白在癌旁正常胃黏膜组织中表达较多,在早期胃癌组织和进展期胃癌组织中表达较少。Notch1蛋白在癌旁正常胃黏膜组织、早期胃癌组织和进展期胃癌组织中的阳性表达率分别为75.9%、57.9%和25.7%;进展期胃癌患者胃癌组织中Notch1蛋白阳性表达率低于早期胃癌和癌旁正常组织(P<0.05)。Notch1蛋白在胃癌组织中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无明显相关性(P>0.05),但与肿瘤分化程度、病理分期及淋巴结转移有显著相关性(P<0.05)。结论 Notch1蛋白表达降低可能与胃癌的发生发展及浸润和转移有关。     

PTEN 、FHIT基因在胃腺癌中的表达及其意义

目的:探讨PTEN和FHIT基因在胃腺癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学(Envi-sion二步法)检测56例胃腺癌组织及10例正常胃黏膜组织中PTEN和FHIT基因蛋白的表达。结果:56例胃腺癌组织中PTEN和FHIT蛋白阳性表达率分别为41.1%和46.4%,正常胃黏膜组织均为100%,差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN蛋白的表达与胃腺癌的分化程度、浆膜浸润、淋巴结转移均有关(P<0.05)。FHIT蛋白的表达与胃腺癌淋巴结转移、浆膜浸润无关(P>0.05),与胃腺癌的分化程度有关(P<0.05)。结论:PTEN和FHIT基因蛋白缺失在胃腺癌发生、发展中起重要作用,二者可作为判断胃腺癌生物学行为和临床预后的参考指标。