Effect of phenytoin sodium on macrophages in rat wounds

本实验旨在研究苯妥英钠（ＰＳ）对伤口巨噬细胞（Ｍ）的影响．从置入大鼠背部伤口的聚乙烯醇海绵中收集巨噬细胞，分别测定其吞噬功能，肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和白介素１（ＩＬ－１）的释放以及对成纤维细胞增殖调节作用，通过牵拉伤口组织致其断裂时溢出的水的重量而测定伤口牵张强度．结果表明，伤口Ｍ的功能在伤后ｄ５达到高峰，ＰＳ１，１０，５０ｇ·Ｌ－１浓度依赖性地增加伤后ｄ５的伤口Ｍ的数量，吞噬功能，ＴＮＦα和ＩＬ－１的释放，增强Ｍ对成纤维细胞增殖的刺激作用，增强伤口牵张强度．结果说明ＰＳ加速伤口愈合，与其增强Ｍ的功能有关．     

大鼠盆总神经节腺苷三磷酸释放的调节

用荧光素-荧光素酶方法测定大鼠盆总神经节腺苷三磷酸(ATP)释放. 钠通道阻断剂河豚毒素(1 μmol·L^-1)抑制电刺激诱发的盆总神经节ATP的释放. 灌流液中去除Ca^2＋并加入EGTA(1 mmol·L^-1)后消除ATP的释放. 腺苷(100 μmol·L^-1)，A₁腺苷受体激动剂环戊腺苷 (0.1 μmol·L^-1)，毒蕈碱性受体激动剂氧化震颤素(1 μmol·L^-1)和5-羟色胺(100 μmol·L^-1)减少ATP的释放. A₁腺苷受体拮抗剂8-环戊基-1，3-二丙基黄嘌呤(10 nmol·L^-1)，α₂肾上腺素受体拮抗剂育亨宾(3 μmol·L^-1)，D₂多巴胺受体拮抗剂舒必利(20 μmol·L^-1)和组胺(100 μmol·L^-1)增加ATP的释放.　结果提示， 在大鼠盆总神经节存在着作为神经递质参与突触传递的ATP释放. A₁腺苷受体，毒蕈碱性受体，α₂肾上腺素受体，D₂多巴胺受体，5-羟色胺受体及H₁组胺受体激动剂或拮抗剂可以通过节前机制影响ATP的释放.     

白芍总甙对大鼠腹腔巨噬细胞Ca2+跨膜转运的影响

通过检测大鼠腹腔巨噬细胞(M_ф     

胍丁胺对异丙肾上腺素诱发人心房纤维迟后除极的影响

用标准微电极技术研究胍丁胺对异丙肾上腺素 (Iso) 诱发人心房纤维迟后除极的影响. 结果如下：(1) 胍丁胺 (1-10 mmol·L^-1)以浓度依赖地方式明显抑制Iso (20 nmol·L^-1) 诱发人心房纤维的迟后除极;(2) 预先应用咪唑啉受体和α₂肾上腺素受体拮抗剂咪唑克生(0.1 mmol·L^-1) 可阻断胍丁胺 (10 mmol·L^-1) 对Iso(20 nmol·L^-1)诱发迟后除极的抑制作用;(3) 预先应用一氧化氮合酶抑制剂硝基-L-精氨酸甲酯(0.5 mmol·L^-1),不影响胍丁胺 (10 mmol·L^-1) 对Iso(20 nmol·L^-1)诱发迟后除极的抑制作用. 结果表明,胍丁胺对Iso诱发人心房纤维迟后除极的抑制作用可能是由于咪唑啉受体和α₂肾上腺素受体介导钙内流减少所致.     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

M受体阻断剂对粉防己碱心肌负性肌力作用的调节及其离子机理

研究M受体阻断剂对粉防己碱(Tet)负性肌力作用的影响并探讨其机理. 记录Tet对豚鼠离体左心房收缩力,兔心房肌细胞动作电位及豚鼠单个心室肌细胞Ca²⁺,K^＋通道电流的作用及M受体阻断剂的影响.M受体阻断剂阿托品(0.03 μmol·L^-1)及M₂受体亚型阻断剂AF-DX 116(1.0 μmol·L^-1)能使Tet负性肌力作用的量效曲线平行右移, EC₅₀(μmol·L^-1)由28.9±0.9分别增至125±21和127±13;Tet(1-100 μmol·L^-1)浓度依赖性缩短兔心房肌细胞动作电位时程APD₂₀,APD₅₀, 此作用被阿托品(0.03 μmol·L^-1)部分拮抗,而Tet延长APD₉₀的作用不受阿托品的影响.阿托品(1 μmol·L^-1)部分拮抗Tet(30 μmol·L^-1)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的阻滞作用,而不影响其抑制内向整流钾电流(I_K1)的作用. 1 μmol·L^-1乙酰胆碱则能逆转Tet对I_K1的抑制. M受体阻断剂对Tet阻滞钙通道作用的影响可能是其拮抗Tet负性肌力作用的主要离子机理.     

Gn类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α的影响

目的　研究异单叶大黄素(isorhapotigenin, Gn-1), 白藜芦醇(resveratrol, Gn-2)和二苯乙烯低聚体(stilbene oligopolymer, Gn-3)等3种Gn类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF_α)的影响。 方法　用L929作为靶细胞的结晶紫染色法测定Gn类化合物对巨噬细胞经LPS或重组人白细胞介素-8(rhIL-8)产生TNF_α的影响。结果　Gn-1,Gn-2和Gn-3均能剂量依赖性地抑制巨噬细胞经LPS刺激产生的TNF_α,Gn-1和Gn-3均可剂量依赖性地抑制巨噬细胞经rhIL-8刺激产生TNF_α。结论　3种Gn类化合物可抑制小鼠腹腔巨噬细胞生成TNF_α,可能是它们抗炎作用的机制之一。     

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞白介素1α和肿瘤坏死因子α mRNA表达的影响

采用RT-PCR和凝胶图像吸光度分析系统检测灵芝多糖（GLB₇）对小鼠腹腔巨噬细胞白介素1α(IL-1α),肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA表达的影响. 加入不同浓度的GLB₇（5,10,20,40 mg·L^-1）, 培养3及3.5 h后观察GLB₇浓度与IL-1α和TNF-α mRNA表达之间的量效关系. 发现GLB₇能浓度依赖性诱发IL-1α和TNF-α mRNA的表达,而对照组未见有IL-1α和TNF- α mRNA的表达;3及3.5 h培养上清中IL-1α和TNF-α活性与对照组比较亦有明显升高,并具有一定的浓度依赖关系. 说明GLB7免疫增强和抗肿瘤作用的基础与其在转录水平诱发IL-1α和TNF-α mRNA的表达有关.     

1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐对内皮素促血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用内皮素-1(ET-1 0.1 μmol·L^-1)建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用［³H］胸腺嘧啶核苷(［³H］TdR)参入法, 流式细胞术, 免疫细胞化学及Northern blot方法, 观察了1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐(DDPH 0.1 μmol·L^-1)对血管平滑肌细胞增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响. 结果发现: DDPH能逆转ET-1所致［³H］TdR参入量增多, 阻止血管平滑肌细胞由静止期 (G₀/G₁期)进入DNA合成期(S期)和有丝分裂期(G₂/M期), 并能逆转ET-1引起的c-fos, c-myc, c-sis原癌基因相关抗原及 mRNA表达增强, P53抑癌基因相关抗原及mRNA表达减弱. 提示DDPH能抑制血管平滑肌细胞增殖, 与癌基因调控的分子生物学机理有关.     

无花果多糖对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1α、脾细胞体外增殖、脾细胞产生IL-2及其受体的影响

目的　探讨无花果多糖对小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1α、脾细胞体外增殖、脾细胞产生和分泌白细胞介素2(IL-2)和血清可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R) 水平的影响。方法　以环磷酰胺致免疫低下小鼠为研究对象,分为大、小剂量(剂量分别为400,200 mg·kg^-1)的无花果多糖水溶液组,香菇多糖组(100 mg·kg^-1)及同体积生理盐水组,另设空白对照组,每组6只。造模同时给药,连续7 d,测定小鼠腹腔巨噬细胞IL-1α、脾细胞体外增殖、脾细胞IL-2及血清SIL-2R水平。结果　无花果多糖可促进免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生和分泌IL-1α,脾细胞产生和分泌IL-2,促进ConA和LPS刺激的脾细胞增殖,降低血清SIL-2R水平。结论　无花果多糖有较好的免疫增强作用。     

雷公藤多甙抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮

雷公藤多甙（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｓｉｄｅｏｆＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉＨｏｏｋ．ｆ．,ＴＷＰ）临床广泛用于治疗类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病,既可抑制细胞免疫又可抑制体液免疫［１］．但其在免疫抑制过程中对一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的影响却...     

蟾酥不同溶剂萃取物对小鼠免疫细胞功能的影响

目的对蟾酥不同溶剂萃取物进行初步免疫活性筛选。方法用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞(M)能量代谢水平,中性红吞噬法测定腹腔M的吞噬功能,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和S期细胞的百分率。结果蟾酥各萃取层中的水层(VB2)、乙酸乙酯层(VB4)及总水提蛋白层(VB6)分别在1.25～30、10～20和10～40mg.L-1浓度范围内增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;其他3组(VB1,VB3和VB5)蟾酥提取物单独作用或与ConA联合作用对小鼠脾淋巴细胞增殖反应无明显影响;VB2,VB4和VB6在1.25～40mg.L-1浓度范围内可增强ConA诱导的小鼠腹腔M能量代谢水平和吞噬中性红的能力。在10mg.L-1时,VB2,VB4和VB6可协同ConA增加脾淋巴细胞中S期细胞百分率,并降低CD4+CD8-和CD4-CD8+、增加CD4+CD8+T淋巴细胞亚群百分率。结论蟾酥不同溶剂萃取物VB2,VB4和VB6体外可协同ConA促进脾淋巴细胞和腹腔M的免疫功能,其机制可能与协同ConA促进DNA合成并活化CD4+CD8-T细胞表达CD8a抗原、增加兼具辅助和细胞毒作用的CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的数量有关。     

川芎嗪对血管内皮细胞损伤的保护作用

用 H2 O2 (75μmol· L-1,4h)诱导人胎儿脐静脉内皮细胞 (HUVECs)损伤 ,研究川芎嗪对血管内皮细胞损伤的保护作用 .噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,放射免疫法测定细胞培养液中的内皮素样免疫反应物 (ir- ET)水平及前列环素代谢物6-酮前列腺素 1α(6- keto- PGF1α)含量 ,硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ,生化自动分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性 .结果显示川芎嗪 0 .3- 1 .2 mmol·L-1对正常 HUVECs具有促进增殖作用 ,并浓度依赖性拮抗 H2 O2 抑制增殖作用 .川芎嗪 0 .3和 0 .6mmol· L-1使细胞培养液中 6- keto- PGF1α含量升高 ,ir- ET含量降低 ,说明增加前列环素释放 ,减少内皮素基础释放量 ,并部分拮抗 H2 O2 损伤HUVECs所致 LDH,内皮素释放增加 ,前列环素释放减少和 MDA生成增加的作用 .提示川芎嗪具有保护 H2 O2 致血管内皮细胞损伤的作用 ,其机理可能与其抗脂质过氧化作用有关     

阿克他利对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1和T淋巴细胞亚群的影响

Effects of actarit on production of interleukin-1（IL-1）by peritoneal macrophages from adjuvant arthritis(AA) rats ex vivo and the ratio of subpopulation of T lymphocytes in AA rats ex vivo and the production of hydrogen peroxide （H₂O₂）by peritoneal macrophages of mice in vitro were studied. The results showed that IL-1 synthesis from the adherent peritoneal macrophages induced with lipopolysaccharide (8 mg·L^-1) in AA rats in vivo were inhibited by actarit; the ratio of L₃T₄⁺/Lyt-2⁺ was lowered after administrating actarit; and H₂O₂ release of the peritoneal macrophages of mice was reduced in dose-dependent manner. The data suggest that the therapeutic effects of actarit on AA rats be related to inhibition of production of IL-1 and reduction of H₂O₂ release and lowered rat io of L₃T₄⁺/Lyt-2⁺ T-lymophocyte.     

白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用

目的比较白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用。方法白藜芦醇和紫檀芪5～50μmol·L-1分别与小鼠黑色素瘤细胞B16F1和内皮细胞ECV304作用48 h,再分别用磺基罗丹明B染色法测定细胞增殖率。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1与细胞作用48 h,用划痕实验评价B16F1和ECV304细胞体外迁移能力,用明胶酶电泳和ELISA测定B16F1细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)的活性和含量。用重建基底膜法观察白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用24 h对ECV304细胞拟管腔形成的抑制作用。结果白藜芦醇和紫檀芪作用48 h均能显著抑制B16F1和ECV304细胞增殖,抑制B16F1细胞增殖的IC50分别为119.7μmol·L-1和37.3μmol·L-1,抑制ECV304细胞增殖的IC50分别为72.2μmol·L-1和37.2μmol·L-1。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用48 h,B16F1细胞愈合率分别为58.0%和36.8%,ECV304细胞愈合率分别为61.8%和28.9%,明显低于正常对照组的67.7%和88.4%(P<0.01),而且紫檀芪组明显低于白藜芦醇组(P<0.01)。与正常对照组相比,白藜芦醇和紫檀芪10μmo·L-1作用48 h使B16F1细胞MMP-2蛋白表达分别降低7.4%和13.9%(P<0.01),MMP-2活性分别降低19.3%和78.9%(P<0.01)。白藜芦醇和紫檀芪作用24 h均可使ECV304细胞管腔样结构破坏,且紫檀芪的作用较白藜芦醇更加明显。结论白藜芦醇和紫檀芪均具有抑制B16F1和ECV304细胞增殖和转移的作用,并能抑制ECV304细胞拟管腔形成;浓度为10μmol·L-1时紫檀芪的抑制作用强于白藜芦醇。     

前列腺素F_(2α)增强膜去极化和升高胞内钙促进NIT-1β细胞胰岛素分泌

目的探讨前列腺素F2α(PGF2α)促进NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的作用机制。方法放射免疫法检测NIT-1β细胞胰岛素分泌量;激光共聚焦显微镜检测细胞[Ca2+]i。结果葡萄糖浓度为16.5mmol·L-1时,PGF2α5μmo·lL-1或钾通道阻断剂四乙胺(TEA)20mmol·L-1均使NIT-1β细胞胰岛素分泌明显增加,而先给予TEA后再加PGF2α或先给PGF2α再加TEA均不能使胰岛素分泌进一步增加。葡萄糖浓度为5.5mmol·L-1时,PGF2α不能使胰岛素分泌增加,预先给予20mmol·L-1TEA再应用PGF2α,胰岛素分泌显著增加。60mmol·L-1KCl和250μmol·L-1二氮嗪使细胞膜处于最大去极化状态时,PGF2α不能促进胰岛素分泌。16.5mmol·L-1葡萄糖浓度下,预先给予氯通道阻断剂4,4′-二异硫氰酸水合茋-2,2′-二磺酸(DIDS),PGF2α不能促进胰岛素分泌。另外,16.5mmol·L-1葡萄糖下,5μmol·L-1PGF2α引起NIT-1β细胞[Ca2+]i升高,而预先给予60mmol·L-1KCl和250μmo·lL-1二氮嗪后再给予PGF2α不能引起细胞[Ca2+]i升高;在DIDS作用下,NIT-1β细胞[Ca2+]i显著降低,恢复静息期后给予PGF2α,细胞[Ca2+]i再次降低。结论促进细胞膜去极化在PGF2α增强胰岛素分泌中起着重要作用。PGF2α可能通过激活氯通道,增强NIT-1β细胞膜去极化,升高细胞[Ca2+]i,促进高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌。     

纳米氧化钛对大鼠神经胶质细胞的毒性作用

目的研究纳米氧化钛(nano-TiO2)对大鼠神经胶质细胞的毒性作用。方法①体外实验:制备3种粒径10,20和200nm的nano-TiO2颗粒悬液,分别以6.25,12.5,25,50和100mg·L-1对大鼠星形胶质细胞进行72h染毒培养,应用磺基罗丹明B法检测nano-TiO2对星形胶质细胞存活率的影响。②体内实验:Wistar大鼠气管内分别注入上述3种粒径的nano-TiO2悬液,每种粒径设0.1,1.0和10.0mg·kg-13个剂量组,每组3只,72h后分别用电感耦合等离子质谱和放射免疫法检测大鼠脑组织中nano-TiO2的含量和白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10水平的变化,并通过光学显微镜和透射电镜观察nano-TiO2对大鼠神经胶质细胞形态的影响。结果①体外实验发现,nano-TiO2对大鼠星形胶质细胞存活率的抑制作用具有明显的浓度-效应关系,3种粒径10,20和200nm的nano-TiO2与胶质细胞培养72h,其半数抑制浓度分别为55.9,66.0和3827.0mg·L-1;细胞形态亦发生明显变化,细胞排列稀疏,间隙增大,胞内颗粒物增多,细胞透明度下降。②体内实验发现,粒径10和20nm的nano-TiO20.1mg·kg-1及粒径200nm的nano-TiO20.1,1.0和10.0mg·kg-1组,大鼠脑组织中的nano-TiO2,IL-1β,TNF-α及IL-10浓度与对照组比较无明显变化;粒径10和20nm的nano-TiO21.0及10.0mg·kg-1组大鼠脑组织中nano-TiO2,IL-1β,TNF-α及IL-10浓度随nano-TiO2剂量的增加而增加;病理学观察结果表明,nano-TiO2破坏大鼠血脑屏障,造成脑组织坏死,并进入神经胶质细胞内,引起炎症反应和细胞水肿。结论Nano-TiO2对大鼠神经胶质细胞具有细胞毒性作用,其作用强度与粒径大小有关,其作用机制可能与诱导炎症反应有关。     

大黄素对家兔实验性皮肤创伤的促愈合作用及其机制

目的探讨大黄素治疗皮肤创伤的可能性及其作用机制。方法采用家兔皮肤切除伤创伤模型,同时滴加绿脓杆菌或金黄色葡萄球菌。大黄素(100~200μg·g-1)敷于创面,每天1次,连续7d或14d。观察创面面积、创面细菌数量和病理组织学改变。生化测定创面组织蛋白和羟脯氨酸(OHP)含量;免疫组化S-P法检测转化生长因子(TGF-β1)含量;逆转录聚合酶链反应测定TGF-β1mRNA表达;Western印迹分析Smad2,3,4和7表达。结果大黄素(100~200μg·g-1)随药物剂量和时间的增加而提高创面愈合百分率和降低感染创面表面细菌数;创面组织蛋白和羟脯氨酸的含量也随着剂量的增加而增加。病理结果显示,大黄素200μg·g-1明显促进创面炎性渗出物吸收、肉芽组织形成和表皮增生。随大黄素浓度的增加,与基质对照组相比,TGF-β1基因和蛋白的表达逐渐增高,均有显著差异;对Smad4蛋白表达无影响,大黄素150和200μg·g-1使Smad7蛋白表达降低;大黄素200μg·g-1使Smad3和Smad2表达增加,其他剂量则无影响。与rhEGF组相比,大黄素100和(或)150μg·g-1组使Smad2和Smad3表达明显下降。结论大黄素促进实验性皮肤创面的修复,其机制可能与TGF-β1和Smads信号转导通路有关。