阿魏酸钠对大鼠肝贮脂细胞株HSC—T6的体外调控作用

目的：研究阿魏酸钠对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导大鼠贮脂细胞株HSC－T6增殖及合成ECM的影响。方法：采用肝贮脂细胞株HSC－T6，以细胞增殖抑制率为指标，用噻唑蓝（MTT）法测定药物对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导HSC－T6增殖的影响；通过^3H-脯氨酸掺入法测定药物对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导HSC－T6合成胶原的影响；放射免疫分析法测定药物对腹腔巨噬细胞条件培养基HSC－T6合成透明质酸（HA）的影响。结果：阿魏酸钠对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导大鼠贮脂细胞株HSC－T6增殖及ECM合成的抑制率随药物浓度增加而升高，呈药物浓度依赖关系。结论：阿魏酸钠在体外对腹腔巨噬细胞条件培养基诱导大鼠贮脂细胞株HSC－T6增殖及ECM合成具有较明显的抑制作用，提示阿魏酸钠可通过间接途径调控HSC－T6。     

类胰蛋白酶对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察类胰蛋白酶对肝星状细胞（HSC）增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响，探讨类胰蛋白酶在肝纤维化中的作用。方法用Percoll密度梯度离心法分离、培养大鼠HSC，经系列浓度类胰蛋白酶作用后，分组进行如下实验：用噻唑兰比色法（MTT）检测HSC的增殖；用RT—PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果肥大细胞（MC）类胰蛋白酶（1-100ng／m1）能够促进HSC增殖及Ⅰ型胶原mRNA的表达，此作用呈剂量依赖性（各实验组与对照组比较，P〈0．05）。结论肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于HSC，参与肝纤维化过程。     

基于血浆药理学的鳖甲超微粉抗肝纤维化作用研究

目的用血浆药理学方法,体外观察鳖甲超微粉含药血浆抗肝纤维化作用。方法采用体外肝纤维化细胞模型,以大鼠含药血浆对HSC-T6细胞增殖的影响为指标,采用效应动力学方法,确定大鼠给药方案和采血时间,并优选体系中血浆添加量。制备鳖甲超微粉和普通粉含药血浆,MTT法检测含药血浆对HSC-T6细胞增殖的影响,ELISA法测定含药血浆对HSC-T6细胞胶原分泌的影响。结果鳖甲超微粉和普通粉含药血浆对HSC-T6细胞增殖和Ⅰ型胶原合成均有显著抑制作用（P〈0.01）,超微粉组的抑制作用强于普通粉组,且有显著性差异（P〈0.01）。结论鳖甲超微粉碎后可提高其抗肝纤维化疗效。     

PDGF与HSC中信号传导关系的研究进展

肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化的必由之路。慢性肝损伤后,以胶原为主的细胞外基质(ECM)成分合成增多,降解相对不足,过多胶原沉积在肝内引起肝纤维化。同时肝纤维化的形成和发展是一个涉及多细胞的过程。现已证明肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化发生的核心环节,因为激活的HSC是合成ECM的主要细胞。慢性肝损害后,HSC被激活成一种新表型,表现为增殖、活动、收缩及ECM成分合成增多,从而为组织修复过程中ECM网络的重建提供重要支持。很多因素对HSC激活起促进作用,包括ECM组成及结构的广泛改变,数种生长因子、细胞因子、趋化因子、氧化反应产     

RGDS四肽对肝星状细胞增殖、胶原合成及FAK mRNA表达的影响

目的 研究精-甘-天冬-丝氨酸（RGDS）四肽对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和胶原合成的抑制作用以及对黏着斑激酶（FAK）的影响。方法 以不同剂量的RGDS干预纤维黏连蛋白（FN）刺激的HSC,通过甲苯胺蓝染色测定细胞黏附率,^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）、^3H-脯氨酸（^3H-Pro）掺入法测定HSC增殖及胶原合成能力,RT-PCR检测FAKmRNA的变化。结果 与单纯FN组相比较,不同剂量（25mg/L、50mg／L和100mg／L）的RGDS作用于HSC48h及100mg／L的RGDS作用于HSC不同时间（12h、24h和48h）后,HSC的增殖明显受抑,胶原合成能力降低,同时FAK mRNA表达水平也下降。结论 RGDS能够抑制FN与HSC黏附,并抑制HSC增殖及胶原合成。FAK的下调可能是RGDS抑制HSC增殖及胶原合成的分子机制之一。     

MAPK反义寡核苷酸对乙醛活化HSC增殖和JNK信号通路的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)反义寡核苷酸(ASO)对乙醛活化肝星状细胞(HSC)增殖和MAPK中的c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法:用脂质体转染法将MAPKASO导入乙醛活化HSC中,通过MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测MAPK-JNK表达。结果:MAPK ASO可明显抑制细胞增殖及抑制JNK信号通路的表达,其抑制率分别为40.81%、60.6%。与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:MAPKASO能够抑制HSC的增殖,阻断JNK信号通路,这可能成为治疗肝纤维化的一个有效途径。     

复方鳖甲软肝方对肝星状细胞细胞周期的影响

目的：探讨复方鳖甲软肝方(FFBJRGF)药物血清对离体肝星状细胞(HSC)细胞周期及凋亡的干预作用。方法：运用流式细胞仪技术检测外源性TGF--β1对HSC细胞周期及凋亡率的影响,进而观察FFBJRGF高、中、低剂量药物血清对HSC细胞周期及凋亡的干预作用,并以IFN-γ药物血清及正常对照大鼠血清组作对照。结果：FFBJRGF各剂量药物血清组、TGF--β1及IFN-γ血清均不同程度增加G0、G1期HSC细胞数量,其中FFBJRGF各剂量药物血清组作用尤为明显;与正常对照组比较,FFBJRGF各剂量药物血清组对HSCG2、M、S期有一定的干预作用;TGF-β1组能显著上调HSC凋亡率,但FFBJRGF各剂量药物血清组及IFN-γ血清组作用不明显。结论：FFBJRGF药物血清具有显著抑制HSC细胞增殖周期作用,可能为其抗肝纤维化的机制之一,但对体外HSC细胞凋亡影响作用不明显。     

重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化血清透明质酸浓度的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR)对大鼠实验性肝纤维化形成过程中血清透明质酸浓度的影响，建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型，在造模的同时给予不同剂量hALR治疗，并在不同的时间点留取大量血清标本，测定透明质酸浓度。结果表明，在两种模型中hALR两组大鼠血清透明质酸浓度在造模过程中的不同阶段均明显低于模型组，高剂量hALR组大鼠血清透明质酸浓度均明显低于低剂量组，上述结果提示，重组人肝再生增强因子可降低实验性肝纤维化大鼠血清透明质酸含量。     

bcl-2、c-myc和caspase-3蛋白在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞中的表达

目的：探讨乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）中bcl-2、c-myc和caspase-3蛋白表达，进一步了解酒精导致肝纤维化的发病机制。方法：用不同浓度乙醛对大鼠HSC-T6株进行处理，MTT比色法检测细胞增殖，SABC法检测bcl-2、c-myc和caspase-3蛋白表达。结果：乙醛刺激HSC-T6细胞增殖（P〈0．01），bcl-2和c-myc蛋白表达阳性率增加（P均〈0．01），而caspase-3蛋白表达阳性率降低（P〈0．05）。结论：乙醛刺激HSC细胞增殖可能与bcl-2、c-myc蛋白表达增加和caspase-3蛋白表达降低有关。     

乙醛对大鼠HSC增殖以及胶原基因表达影响的实验研究

目的：研究乙醛对新分离的肝星状细胞（hepatic stelalate,cell,HSC）增殖、表达α1（Ⅰ）型胶原mRNA、IkB和NF-kB的影响，以探讨酒清性肝纤维化发病机理。方法：用链霉蛋白酶、胶原酶以及密度梯度分离培养大鼠肝星状细胞。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、原位杂交法、免疫细胞化学法、凝胶电泳迁移率法（EMSA）分别检测肝星状细胞的增殖、胶原合成、IkBα以及NF－kB的表达。结果：（1）成功分离出大鼠肝星状细胞。（2）乙模型刺激新分离培养的肝星状细胞后细胞明显增殖；乙醛刺激传一代肝星关细胞后，α1（Ⅰ）型胶原mRNA表达显著增加；IkBα表达明显下降；乙醛作用肝星状细胞后30min，NF－kB的表达即有增加，到120min时达最高值。结论：乙醛可以使静止的肝星状细胞活化，表现为增殖、α1（Ⅰ）型胶原mRNA合成、IkBα表达下降、NF-kB活性增加。     

银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞增殖的影响及机制研究

目的：研究肝纤维化过程中银杏叶提取物（GbE）抑制肝星状细胞（HSC）增殖的机制。方法用不同浓度 GbE （0、50、100、200、300 mg/ L）处理 HSC 24 h 后,MTT 法检测 GbE 对 HSC-T6增殖的影响,Western blotting 和 RT-PCR 法测定 GbE对 P21/ P27蛋白和 mRNA 表达的影响。结果 MTT 检测结果显示,GbE 在100 mg/ L 时,抑制 HSC-T6的增殖（P ﹤0.05）,浓度为200和300 mg/ L 时,抑制增殖作用明显增强（P ﹤0.01）;Western blotting 检测结果显示,GbE 明显增加 P21/ P27蛋白的表达,且促进 P27蛋白表达的作强于 P21;进一步用 RT-PCR 检测发现,GbE 也能增加 P21/ P27 mRNA 的表达。结论 GbE 能够抑制 HSC-T6的增殖,这种增殖抑制作用主要是通过增加 P21/ P27蛋白和 mRNA 的表达实现的。     

阿魏酸钠对肝星状细胞中I型前胶原和CTGF mRNA表达的影响

目的　考察阿魏酸钠对氧化应激条件下 ,肝星状细胞中I型胶原及其相关调控因子CTGFmRNA表达的干预作用。方法　以 5 0 μmol·L-1H2 O2 处理的HSC -T6细胞为氧化应激模型组 ,采用RT -PCR方法检测并分析 12 5 μmol·L-1和 5 0 0 μmol·L-1SF对细胞中I型前胶原及其相关调控因子CTGF表达的影响。结果　肝星状细胞在氧化应激条件下I型前胶原mRNA和CT GFmRNA表达水平都明显上调 ,而阿魏酸钠可以下调二者的表达水平。结论　阿魏酸钠从转录水平调控胶原表达可能对肝纤维化有重要防治作用     

苦参碱抗肝纤维化治疗的临床研究

目的：研究苦参碱治疗慢性肝病的临床疗效、对肝纤维化的影响及抗肝纤维化的作用机理。方法：苦参碱(斯巴特康)注射液200mg加入10％葡萄糖注射液250ml静脉滴注，1／d，8周为一疗程。以甘利欣，丹参注射液作对照组。结果：苦参碱组显效率与对照组比较有显著差异(P＜0．01)；在胆红素及转氨酸复常方面，苦参碱组亦优于对照组，有显著差异(P＜0．05)。两组治疗前后肝纤维化指标检测结果，治疗组与对照组治疗后比较有显著差异(P＜0．05)。结论：该药使用安全，对HA，LN，PCⅢ，Ⅳ-C的合成有抑制作用，可发挥抗肝纤维化的作用。     

sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的：探讨c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminal kinase，JNK）信号传导通路特异阻断剂sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）凋亡以及Fas蛋白表达的影响。方法：不同浓度sp600125对乙醛刺激的大鼠HSC-T6进行处理后，用Hoechst 33258染色后，观察凋亡细胞的形态变化，FCM法检测细胞凋亡率，SAN2法检测Fas蛋白表达。结果：不同浓度的sp600125能诱导乙醛刺激的HSC-T6凋亡，表现为细胞核浓缩、碎裂，形成凋亡小体；随着sp600125浓度增加，HSC-T6凋亡率逐渐增高（F=42．57，P〈O．01），HSC-T6细胞内Fas蛋白阳性表达率也逐渐增高（F-72．58，P〈0．01）。结论：不同浓度sp600125能诱导乙醛刺激的HSC-T6凋亡，这可能与上调Fas蛋白表达有关。     

苦参碱对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型肺组织病理变化的影响

目的：探讨苦参碱对博来霉素（BLM）诱导的大鼠肺纤维化模型肺组织病理变化的影响。方法：120只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组（A组）、模型对照组（B组）、泼尼松组（C组）、苦参碱50 mg组（D组）、苦参碱200 mg组（E组）,使用博来霉素（5 mg/kg）气管注射法复制肺纤维化大鼠模型,苦参碱50 mg组和苦参碱200 mg组分别经胃管注入苦参碱50、200 mg/kg,1次/d;泼尼松组经胃管注入醋酸泼尼松0.56 mg/Kg,1次/d。分别于7、14、28 d每组各随机选取大鼠8只,处死,称取肺重及体重后取右肺组织行苏木精-依红（HE）、Masson胶原染色,并计算肺泡炎及肺纤维化积分。结果：模型组肺泡炎和肺纤维化积分显著高于正常对照组（P〈0.01）;苦参碱50 mg组、苦参碱200 mg组及泼尼松组肺泡炎和纤维化积分显著低于模型对照组（P〈0.01）;而苦参碱200 mg组积分低于苦参碱50 mg组及泼尼松组（P〈0.01）。结论：苦参碱能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的肺泡炎和肺纤维化程度,并具有剂量依赖性。     

肝纤维化与血浆肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和白细胞介素-10水平的关系

 目的 探讨肝纤维化患者血浆中促炎细胞因子与抗炎细胞因子水平的变化及其与肝纤维化指标的关系.方法 检测137例肝纤维化患者血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6) 、白细胞介素-10(IL-10)及透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原-C(Ⅳ-C)水平,并进行Child-Pugh分级和分析.结果 肝纤维化患者血浆TNF-α、IL-6、HA、LN、PⅢNP、Ⅳ-C水平较对照组均明显升高(P<0.05或P<0.01),IL-10水平较对照组均明显降低(P<0.05),并随Child-Pugh评分增加而递增或递减(P<0.05或P<0.01).TNF-α、IL-6与HA、LN、PⅢNP、Ⅳ-C水平间均呈显著正相关(P<0.05或P<0.01),IL-10与HA、LN、PⅢNP、Ⅳ-C水平间均呈显著负相关(P<0.05).结论 TNF-α、IL-6、IL-10与肝纤维化密切相关,在肝纤维化的早期诊断中具有一定的临床价值;抑制TNF-α、IL-6的活性,加强IL-10的作用,可能是治疗肝纤维化的有效途径和手段.     

二咖啡酰奎宁酸抗肝纤维化及脂质过氧化作用的实验研究

目的 :观察二咖啡酰奎宁酸抗复合因素致大鼠肝纤维化及脂质过氧化作用。方法 :采用复合因素复制大鼠肝纤维化模型 ,以血清层连蛋白 (LN)、透明质酸 (HA)、丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)含量、肝组织光镜、电镜下形态学改变为观察内容 ,探讨二咖啡酰奎宁酸的治疗作用。结果 :二咖啡酰奎宁酸能够显著降低血清LN ,HA ,MDA ,NO含量 ,明显改善肝组织炎症及纤维化状态。结论 :二咖啡酰奎宁酸具有一定的抗肝纤维化及脂质过氧化作用