干扰素α-2b对瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨干扰素α-2b对瘢痕成纤维细胞(fibroblasts cell FB)凋亡的影响。方法:利用免疫组织化学和原位杂交方法检测瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮肤体外培养FB的Bax和Bcl-2蛋白以及DNA的变化。结果:瘢痕疙瘩FB的Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),瘢痕疙瘩FB的Bax、增生性瘢痕及正常皮肤FB Bax和Bcl-2蛋白表达无显著性变化(P>0.05)。三者FB Bax/Bcl-2b比值无明显差异(P>0.05),DNA检测三者FB未见典型的细胞凋亡的梯形条带。结论:干扰素α-2b不能诱导瘢痕疙瘩和增生性瘢痛FB细胞凋亡。     

成纤维细胞与肾间质纤维化

现有的研究表明，成纤维细胞在肾间质纤维化中发挥着重要作用，本文着重概述了肾间质中成纤维细胞与细胞外基质的相互关系及其在肾间质纤维化中的作用。     

瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞生长实验研究

瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞生长实验研究徐少骏王志刚鲍卫汉瘢痕疙瘩在外观上可分为三个部位，即处于边缘向外浸润正常皮肤的发红部位、处于中央静止状态或有老化趋向的部位及处于前两者之间不断增生的部位（即浸润部、老化部和增生部）。这些病理结构存在差异〔１〕的部...     

β1转化生长因子对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白及其受体α5β1整合素表达的影响

目的　研究 β1转化生长因子 (TGF β1)对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白 (FN)及其受体α5β1整合素表达的影响 ,探讨TGF β1、FN及其受体α5β1整合素在增生性瘢痕形成发展中的作用。方法　采用细胞培养、ELISA法、免疫组织化学、图像分析技术 ,观察浓度分别为 0、5、10、2 5、5 0、10 0 μg/L的TGF β1作用下 ,瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素表达的变化。结果　TGF β1浓度在 10～ 5 0μg/L之间时 ,可明显刺激瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素的表达 ,与对照组相比较 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,其作用呈一定的剂量效应关系 ,随着TGF β1浓度增加 ,促合成作用也随之增加 ,浓度在 10 0 μg/L时 ,作用达到饱和。 结论　TGF β1作用下FN及其受体α5β1整合素在成纤维细胞中的过度表达可能与增生性瘢痕形成有关。     

烧伤后增生性瘢痕成纤维细胞中TRAIL受体的表达及意义

目的检测肿瘤坏死斟子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体住烧伤后增生期增生性瘢痕成纤维细胞上的表达，并探讨其意义。方法应用RT-PCR和流式细胞术，检测了30例处于增生期的烧伤后增牛性瘢痕成纤维细胞中TRAIL各受体的表达，并以30例正常皮肤成纤维细胞作为对照。结果RT-PCR和流式细胞术的检测结果均显示：与正常对照组相比，增生期瘢痕的成纤维细胞中步匕亡受体DR5的表达显著降低（P〈0．05），诱导受体DcR1的表达显著升高（P〈0．05），其余受体的表达住两组间差异无统计学意义。结论烧伤后增生性瘢痕的形成可能与TRAIL介导的瘢痕内成纤维细胞凋亡受阻有关。     

整合素β1在增生性瘢痕中表达的定量研究

近年来 ,有文献[1 ,2 ] 报道 :通过免疫组织化学染色技术定性分析发现整合素水平异常与瘢痕形成有密切联系 ,但存在研究方法精确度不够的问题。我们应用荧光定量PCR方法对 10例增生性瘢痕组织及 10例正常皮肤分别进行了整合素β1 表达水平的定量检测 ,旨在以准确、特异、敏感的实验方法了解整合素在瘢痕增生中的作用。1　材料与方法1 1　材料　 10例增生性瘢痕及 10例正常皮肤标本 ,均来源于我院整形外科。瘢痕增生的患者在取材前无外用防治增生性瘢痕药物史 ,不伴肿瘤及其它严重疾患。主要试剂和仪器有 :RNA提取试剂盒 ,Taq酶、dNTP ,…     

瘢痕成纤维细胞的钙网蛋白表达研究

目的 观察钙网蛋白（ＣＲＴ）在瘢痕及下沉皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法 采用免疫细胞化学染色和原位ＥＩＳＡ技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行ＣＲ贮位及表达水平研究。结果 瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时,胞浆及核内均秀不同程度的ＣＲＴ表达,其中瘢痕成纤维细胞表达ＣＲＴ水平（Ａ：１．９７±０．１５,ＥＬＩＳＡ４９２ｎｍ）明显高于正常皮肤成纤维细胞水平（Ａ：１．４３±０．１２）     

整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞VEGF的调控作用

目的 探讨整合素连接激酶(intergrin-linked kinase,ILK)在人瘢痕成纤维细胞中的表达及对成纤维细胞VEGF的调控作用.方法 8例人增生性瘢痕标本采用组织块法分离培养瘢痕成纤维细胞,选取第5～6代细胞备用.实验分为3组①对照组:不做任何处理,只用含10%FCS的DMEM培养液同步培养;②空质粒组:用空质粒转染人瘢痕成纤维细胞;③ILK cDNA表达质粒转染组:用ILK cDNA表达质粒转染人瘢痕成纤维细胞.首先通过免疫细胞化学染色法检测ILKcDNA转染前后成纤维细胞ILK、VEGF的表达变化;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot检测成纤维细胞ILK、VEGF的mRNA和蛋白水平变化;最后采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测3组成纤维细胞上清液中的VEGF蛋白含量.结果 免疫细胞化学染色结果显示瘢痕成纤维细胞胞浆中ILK表达阳性,VEGF表达不明显,经ILK cDNA转染细胞后ILK与VEGF表达均增强;RT-PCR显示ILK cDNA转染组VEGF mRNA表达(0.338±0.060)均高于对照组(0.022±0.001)和空质粒组(0.028±0.005,P＜0.05);Western blot结果显示ILK cDNA转染组VEGF蛋白表达(0.819±0.019)显著高于对照组(0.607±0.033)和空质粒组(0.591±0.024,P＜0.05);ELISA法检测ILK cDNA转染组的VEGF蛋白含量高于其他两组(P＜0.05).结论 ILK可以上调VEGF mRNA及蛋白水平,并且促进成纤维细胞分泌VEGF,ILK可能通过提高瘢痕成纤维细胞合成分泌VEGF而促进增生性瘢痕血管生成.

Abstract：

Objective To explore the expression of intergrin-linked kinase (ILK) and its effect on VEGF expression in fibroblasts from human hypertrophic scar. Methods Fibroblasts were isolated from hypertrophic scar of 8 patients and cultured in vitro. Then the cells were divided into three groups: ① Cells were cultured only in DMEM containing 10% FCS in the control group; ② Cells were transfected with empty plasmid in the empty plasmid group; ③ Cells were transfected with plasmid experessing ILKcDNA in the ILK cDNA plasmid transfection group. First, the expression of ILK and VECF was observed by immunocytochemistry before and after ILK cDNA transfection. Second, ILK and VEGF mRNA expression was investigated by real-time PCR ( RT-PCR). Third, the protein expression of ILK and VEGF was detected by Western blot. Finally, the protein level of VEGF in supernatant of fibroblasts was measured by ELISA. Results Before ILK cDNA transfection, the expression of ILK was positive and the VEGF expression was weak in cytoplasm of fibroblasts . After ILK cDNA transfection, both the expression of ILK and VEGF was enhanced. The level of VEGF mRNA was significantly higher in ILK cDNA transfection group (0.338 ±0.060) than that in control group (0.022 ±0.001) and empty plasmid group (0.028 ± 0. 005 , P ±0. 05 ). The level of VEGF protein was significantly higher in ILK cDNA transfection group (0. 819 ±0. 019) than that in control group (0. 607 ±0. 033) and empty plasmid group (0. 591 ±0. 024, P ＜0. 05). Secretion of VEGF increased remarkably in ILK cDNA transfection group comparing with the other two groups (P＜0. 05). Conclusions ILK could up-regulate the VEGF mRNA and protein level in human scar fibroblasts. It may play an important role in the angiogenesis in hypertrophic scar.     

瘢痕成纤维细胞凋亡及p5 3基因的表达

目的探讨瘢痕成纤维细胞凋亡及p53基因表达及其意义.方法取正常皮肤和增生性瘢痕各8例、瘢痕疙瘩9例行成纤维细胞培养,应用流式细胞仪检测成纤维细胞凋亡,用p53cDNA探针对抽提的DNA点迹印迹杂交观察p53基因表达情况.结果 3组成纤维细胞凋亡细胞分别为(10.8±1.2)%,(10.6±1.8)%,(5.5±0.8)%,瘢痕疙瘩较正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞凋亡少,差异具有显著性意义(P＜0.05),且p53基因有明显的表达.结论瘢痕疙瘩成纤维细胞是具有肿瘤性质的一类细胞.     

钙通道阻滞剂对体外培养增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的 探讨钙通道阻滞剂对增生性瘢痕的治疗机制提供形态学依据。方法 采用扫描电镜、透射电镜观察钙通道阻滞剂维拉帕米对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响，对照组为不加药的增生性瘢痕成纤维细胞。结果 扫描电镜显示维拉帕米可使增生性瘢痕成纤维细胞的细胞变细、变短；透射电镜下维拉帕米可以使增生性瘢痕成纤维细胞的细胞核、核仁缩小，内质网萎缩，微丝排列改变。结论 维拉帕米可以影响与增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原及增殖相关的细胞超微结构。     

高三尖杉酯碱对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响

观察高三尖杉酯碱（ＨＨ）对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。利用ＭＴＴ比色分析法及流式细胞术检测不同浓度ＨＨ（μｇ／ｍｌ）作用不同时间对体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。当ＨＨ浓度为０．１２μｇ／ｍｌ时即可抑制体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞的生长,０．６６μｇ／ｍｌ时即可产生５０％的抑制效应,１０μｇ／ｍｌ时可完全抑制成纤维细胞的生长,且抑制率随时间的延长而增强,而对正常皮肤组织的成纤维细胞无作用。ＨＨ可抑制体外瘢痕组织成纤维细胞的增殖且抑制作用呈剂量时间依赖性。     

建立一种兔耳增生性瘢痕的动物模型

目的　建立由动物自身产生的与人增生性瘢痕类似的增生性动物模型。方法　选用2 4只新西兰大耳白兔 ,分别在兔耳腹侧、背侧面作直径 1.5cm的全层皮肤缺损各 14 4个、72个 ,对创面愈合后形成的增生块进行组织病理学、层黏连蛋白 (LN)mRNA及整合素 β1mRNA检测等检查。结果　兔耳腹侧创面可产生类似人增生性瘢痕样的过度增生 ,其发生率为 71% ,以兔耳腹侧面中部为著 ,增生块最长持续时间超过伤口愈合后 15 0d ,而兔耳背侧面的创面增生块发生率不到3 0 % ,且增生块持续时间短 ,为 76d。切片镜下显示 ,增生块的真皮层存在大量成纤维细胞 ,与人增生性瘢痕结构类似。结论　兔耳腹侧面尤其腹侧面的中部可产生类似人增生性瘢痕样病理改变 ,可望成为研究瘢痕的动物模型。     

人重组干扰素-α及白细胞介素-2对病理性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的　观察人重组干扰素- α(rhIFN-α)及白细胞介素-2 (rhIL-2 )对病理性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响 ,探讨细胞因子对病理性瘢痕的作用机制。方法　对 5例临床病理性瘢痕标本进行成纤维细胞体外培养 ,采用流式细胞术方法进行观察、分析 ,以研究细胞因子rhIFN-α及rhIL-2 (浓度分别为 2 5 0 ,5 0 0 ,75 0U/ml ,每组数n =6)对病理性瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期、Fas、Bcl-2表达量的影响。结果　加入rhIFN-α 72h后检测 ,S-G2-M期细胞百分数降低 (P <0 .0 5 ) ,Fas、Bcl-2蛋白表达量 ,分别显示升高 (P <0 .0 5 )和降低 (P <0 .0 5 ) ;加入rhIL-2后S-G2-M期细胞百分数明显升高 (P <0 .0 1) ,Fas、Bcl-2蛋白表达量 ,两者均有升高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论　rhIFN-α是成纤维细胞负性调节因子 ,对成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用。rhIL-2作为成纤维细胞正性调节因子 ,促进成纤维细胞的生长增殖。     

TNFR1及Bcl-2在病理性瘢痕组织细胞凋亡中的表达及意义

目的　研究TNFR1和Bcl- 2在病理性瘢痕组织细胞中的表达及其对成纤维细胞凋亡与增殖的影响。方法　取手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩患者各 15例标本 ,正常皮肤 12例标本 ,应用免疫组织化学方法进行检测 ,分析TNFR1和Bcl- 2的表达及分布规律。结果　TNFR1在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表达阳性率分别为 10 .70 %、3.2 3%和 7.72 % ,TNFR1在正常皮肤组中的阳性表达率明显高于增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组 ,而瘢痕疙瘩组阳性表达率却又明显高于增生性瘢痕组 ,三组间阳性表达率相互比较差异均有显著意义 (P <0 .0 1) ;Bcl- 2在增生性瘢痕组 (19.35 % )和瘢痕疙瘩组 (48.33% )的阳性表达率明显高于正常皮肤组 (4.0 7% ) ,三组间阳性表达率相互比较差异亦均有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　Bcl- 2的持续过表达可能是瘢痕疙瘩呈瘤样增生的原因之一。介导的死亡受体凋亡通路受阻及TNFR1介导核转录因子NF -kB的激活 ,表明TNFR1对成纤维细胞的增殖与凋亡具有双重的调节作用。     

苦参碱对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及相关调控蛋白表达的影响

目的　研究苦参碱 (matrine,Mat)对增生性瘢痕成纤维细胞 (fibroblast,FB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法　于 2 4只新西兰白兔耳部腹侧面制作增生性瘢痕模型。所有动物随机分为Mat组和对照组 (每组 12只 ) ,分别采用Mat(5 0 g/L)和等渗盐水于各组兔耳瘢痕处行局部封闭注射 ,1次 / 4d。用药 2、4、6、8、12周后 ,采用DNA切口末端标记技术 (TUNEL)检测各组增生性瘢痕FB的凋亡细胞数量 ,利用免疫组织化学方法检测凋亡相关调控蛋白 p5 3、bcl 2、bax的表达。 结果与对照组比较 ,用药 2、4、6、8、12周后 ,Mat组FB凋亡数量均明显增加 (P <0 .0 5 ) ,bax表达明显增强 ,p5 3、bcl 2表达明显减弱 ,瘢痕逐渐趋于平复。　结论　Mat可促进兔耳增生性瘢痕FB的凋亡 ,使凋亡相关调控蛋白bax表达上调 ,p5 3、bcl 2表达下调     

增生性瘢痕成纤维细胞中分泌型凋亡相关蛋白1相互作用蛋白的研究

目的 寻找与分泌型凋亡相关蛋白1 （secreted apoptosis-related protein1,SARP1）存在相互作用的蛋白质分子,分析其分子机制.方法 成功构建的重组SARP1腺病毒载体Ad-SARP1,转染进入原代培养的增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）.免疫共沉淀法沉淀出蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后,用考马斯亮蓝染色,对SDS-PAGE胶上切取的电泳蛋白条带进行酶解与质谱分析,根据质谱分析获得的肽序列谱图自动进行数据库搜索.结果 在阳细胞对照组和导入Ad-SARP1感染的细胞当中,均共沉淀出7条蛋白带,相对分子质量分别约为93×103、43×103、40×103、37×103、31×103、26×103和12×103;在未加SARP1抗体组则没有沉淀出蛋白条带.分析蛋白条带得到6个可能与SARP1有相互作用的蛋白,分别为骨膜蛋白前体（periostin precursor或OSF-2）、牙周韧带相关蛋白1（asporin precursor或PLAP1）、磷酸甘油激酶1（phosphoglycerate kinase 1）、未知蛋白rCG50690、载脂蛋白（apolipoprotein A-I,Apo-AI）、硫氧还蛋白1（thioredoxin 1,TRX1）.结论 通过免疫共沉淀法结合液相色谱/质谱联用离子阱检测技术,可以获得SARP1的相互作用蛋白,为研究SARP1调控HSFb凋亡信号通路的作用机制提供了新的线索.     

血小板衍生生长因子对成纤维细胞合成胶原的影响

目的 探讨血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ－ＡＢ）促进伤口愈合的作用机理及其在瘢痕增生中的作用。方法 取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞,用原位杂交法观察ＰＤＧＦ对两种细胞表达Ｐｒｏα１（Ⅲ）ｍＲＮＡ的影响。结果;ＰＤＧＦ－ＡＢ对两种成纤维细胞表达Ｐｒｏ α１（Ⅲ）ｍＲＮＡ均有明显促进作用,且均呈剂量依赖性关系,但作用有差异。     

不同程度缺氧对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨不同程度缺氧对瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法取体外培养的皮肤瘢痕成纤维细胞,分别在20%、10%、5%和1.5%四种氧浓度条件下培养24h后,进行细胞计数、PCNA免疫组织化学检测。结果随着氧浓度的降低,皮肤瘢痕成纤维细胞数目逐渐增加,PCNA的表达强度逐渐增强。结论缺氧可促进皮肤瘢痕成纤维细胞增殖,减轻缺氧可能有助于预防瘢痕增生。