丹参酮A对NB4所诱导的人ECV304细胞株促凝活性的影响

目的研究丹参酮A(TAN A)对急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞株NB4诱导的人ECV304细胞株促凝活性的影响。方法1分别用0.5ΜG/ML TAN A、0.3ΜG/ML ATRA、0.1G/L DMSO、RPMI1640处理培养NB4细胞制成条件培养基TAN A-NB4-CM,ATRA-NB4-CM、DMSO-NB4-CM以及RPMI1640-NB4-CM,再分别与ECV304细胞在37℃共同孵育0、4、8、12H,利用复钙时间测定及改良发色底物法,分别测定ECV304细胞裂解液的肿瘤促凝活性(PCA)和组织因子活力(TF:ACT)。2ECV304细胞分别与0.5ΜG/ML TAN A及TAN A-NB4-CM在37℃共同孵育4、12、24、72、120H,用上述同样方法测定ECV304细胞裂解液的PCA和TF:ACT。结果10.5ΜG/ML TAN A处理NB4细胞24、72、120H的条件培养基能使ECV304细胞PCA增强,ATRA具有相似作用(P>0.05)。20.5ΜG/ML的TAN A对0.5ΜG/ML TAN A作用NB4120H的条件培养基(TAN A-120H-NB4-CM)促ECV304细胞PCA有抑制作用,其作用强度呈时间依赖性,120H达到高峰,再增加TAN A浓度,作用强度不增加;与0.3ΜG/ML ATRA作用相似。3TAN A-120H-NB4-CM能够增加ECV304细胞TF:ACT,并随作用时间增加而增强,TAN A与ATRA作用相似(P>0.05)。40.5ΜG/ML TAN A能够抑制TAN A-120H-NB4-CM对ECV304细胞的TF:ACT,并随作用时间增加而增强,ATRA具有相似作用(P>0.05)。结论TAN A在诱导NB4细胞分化凋亡的同时,可能通过某种因子增强NB4细胞对ECV304细胞促凝活性和组织因子活力;TAN A能够有效阻止NB4细胞增强ECV304细胞的促凝活性和组织因子活力,起到保护细胞的作用。     

丹参酮ⅡA对NB4细胞促凝活性的影响

目的　研究丹参酮 A(Tan A)对急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞株 NB4细胞促凝活性(PCA)的影响。方法　使用 Tan A处理 NB4细胞 ,复钙时间检测 NB4细胞的 PCA,并用发色底物法测量反应体系中因子 Xa(FXa)水平 ,ATRA处理的 NB4细胞作为阳性对照组。结果　 Tan A可下调 NB4细胞 PCA水平 ,与空白对照组之间有统计学差异 (P<0 .0 1) ;Tan A和 ATRA下调 NB4细胞的 PCA水平相似 ,无统计学差异(P>0 .0 5 ) ;经 Tan A作用的 NB4细胞 ,FXa水平降低。结论　 Tan A与 ATRA相似 ,均可降低 NB4细胞的PCA水平 ,其降低 PCA作用是通过下调 NB4细胞 TF的表达实现的     

丹参酮ⅡA对NB4细胞促凝活性的影响

目的：研究丹参酮ⅡA（Tan ⅡA)对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞促凝活性（PCA）的影响。方法：使用Tan ⅡA处理NB4细胞，复钙时间检测NB4细胞的PCA，并用发色底物法测量反应体系中因子Xa(FXa)水平，ATRA处理的NB4细胞作为阳性对照组。结果：Tan ⅡA可下调NB4细胞PCA水平，与空白对照之间有统计学差异（P＜0．01）；Tan ⅡA和ATRA下调NB4细胞的PCA水平相似，无统计学差异（P＞0．05）；经Tan ⅡA作用的NBA4细胞，FXa水平降低。结论：Tan ⅡA与ATRA相似，均可降低NB4细胞的PCA水平，其降低PCA作用是通过下调NB4细胞TF的表达实现的。     

丹参酮ⅡA对NB4诱导的人脐静脉内皮细胞促凝活性的影响

目的 探寻丹参酮ⅡA(TanⅡA)对于急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)促凝活性(PCA)的影响.方法 将TanⅡA作用24、72、120 h的NB4细胞条件培养基(NB4-CM)或不同浓度TanⅡA与其对应的120 h NB4-CM共同作用HUVEC,并以ATRA、DMSO和RMPll640作为阳性、阴性和空白对照,收集HUVEC裂解液采用一期凝血法测定其PCA,采用改良发色底物法测定组织因子活性(TF:act).结果 ①TanⅡA作用72、120 h的NB4-CM有一定的升高内皮细胞PCA的作用,以120 hNB4-CM作用最强,作用6 h最明显,1.0 μg/mL的TanII A与0.3 μg/mL ATRA作用相当.②5.0 pg/mL的Tan ⅡA能明显降低其NB4-CM诱导的内皮细胞PCA,与0.3/μg/mL ATRA的差异无统计学意义.<5.0 μg/mL浓度的TanII A无此作用.③TanⅡA-120 h-NB4-CM和ATRA 120 hoNB4-CM均能升高HUVEC的TF:act,6h达峰值,且两者间无差异.TanⅡA 120 h-NB4-CM所诱导的HUVEC的TF:act 12h轻微降低,24 h回复到基础水平,而ATRA 120 h-NB4-CM所诱导的TF:act在6h达峰后,12h即明显下降,24 h亦降至基础水平.④加入1.0μg/mL TanⅡA后.内皮细胞TF活性在各时间点与未加药组无明显差异,而0.3/μg/mL ATRA在6 h可显著抑制其NB4-CM所诱导的内皮细胞TF活性升高,之后各个时间点无明显差异.结论 TanⅡ A在诱导NB4细胞分化过程中的条件培养基能升高人脐静脉内皮细胞PCA和TF活性,加入适当浓度的TanⅡA可降低这种作用;这些作用与ATRA作用相当.     

丹参酮ⅡA对APL细胞促凝及纤溶活性的影响

目的:研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞及APL原代细胞促凝及纤溶活性的影响。方法:Tan ⅡA与NB4细胞共同培养,用复钙时间检测NB4细胞的促凝活性(PCA),检测TanⅡA处理的APL原代细胞的PCA,用缺FⅦ血浆及缺FⅧ血浆探讨TanⅡA对NB4细胞的PCA作用的途径。并用发色底物法测量反应体系中FX a,发色底物法检测其Plasmin(Plm)活性。结果:不同浓度Tan ⅡA均可下调NB4细胞PCA水平,它们与对照组之间有统计学差异(P<0.01)。Tan ⅡA和ATRA下调NB4细胞的PCA水平相似,无统计学差异(P>0.05)。Tan ⅡA可下调APL原代细胞的PCA水平;缺FⅦ血浆组的NB4细胞未显示PCA作用。经Tan ⅡA作用的NB4细胞,FX a水平降低。Tan ⅡA能降低NB4及APL细胞的Plm活性(P<0.01)。结论:Tan ⅡA可降低NB4细胞及APL原代细胞的PCA水平,其作用强度与ATRA相似。其降低PCA作用的途径是外源性凝血途径。TanⅡA降低其Plm活性不是通过PAI途径而实现的。     

丹参酮ⅡA诱导NB4细胞凋亡时Caspase3活性变化

目的：研究Caspase3在丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导NB4细胞凋亡过程中的变化及与凋亡的关系。方法：通过细胞形态学、DNA含量分析及DNA片段比率，证实TanⅡA是否可诱导NB4细胞凋亡，用荧光分光光度仪检测Caspase3活性及N-乙酰-天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酸-7氨基-4甲基-香豆素(AC-DEVD-AMC)行Caspase3抑制试验探讨细胞凋亡与Caspase3间的关系。结果：TanⅡA可诱导NB4细胞凋亡，并伴有Caspase3活性增高。AC-DEVD-乙醛(AC-DEVD-CHO)可抑制TanⅡA诱导NB4细胞凋亡。结论。TanⅡA诱导NB4细胞凋亡可通过激活Caspase3而实现。     

丹参酮ⅡA与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的研究丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, TanⅡA)联合全反式维甲酸(ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞(NB4)诱导分化及凋亡的协同效应.方法0.5 μg/ml TanⅡA分别联合0.5 μg/ml、0.25 μg/ml和0.125 μg/ml ATRA作用NB4细胞5 d,观察NB4细胞形态学变化,检测硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达,并进行细胞周期和细胞凋亡分析.结果TanⅡA联合ATRA可协同诱导NB4细胞分化和凋亡.联合作用组第5 d细胞生长抑制率均超过80%;90%左右的NB4细胞分化,其中杆状和分叶核细胞比例超过65%;NBT还原能力显著升高.流式细胞术分析显示CD11b表达升高,CD33表达降低;G0/G1期细胞增加,有明显的细胞凋亡,与TanⅡA或ATRA单独作用组相比均有显著性差异(P<0.01).TanⅡA与ATRA(0.125 μg/ml～0.5 μg/ml)联合对NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向.结论TanⅡA联合ATRA对NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用;在ATRA一定浓度范围内,这种协同作用无ATRA剂量依赖性.     

丹参酮ⅡA联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡的影响

目的 观察丹参酮ⅡA（Tanshinone,TanⅡA）联合三氧化二砷（ATO）对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）凋亡的作用;并通过观察两药联合诱导NB4细胞凋亡时p53、Bcl-2表达的变化,探讨其可能的机制.方法 通过Annexin V FITC/PI荧光染色观察1.0μg·mL-TanⅡA分别联合0.25、0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO作用于NB4细胞的形态学变化;流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测定各组细胞凋亡率;流式细胞仪检测各组细胞p53、Bcl-2的表达.结果 （1） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA分别与0.5、1.0μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞24、48和72h的凋亡率均较相应单独用药组凋亡率明显增高（P＜0.05）;染色荧光显微镜观察1.0μg·mL^-1TanⅡA联合1.0μmol·L^-1ATO实验组较1.0μmol·L^-1ATO对照组72h时更易见到中晚期凋亡细胞和死亡细胞;（2） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA与0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞48h、72h表达p53蛋白的细胞较1.0μmol· L^-1ATO单药组明显增多（P＜0.05）,作用高峰时间为72h; 1.0μg·mL^-1TanⅡA分别与0.25、0.5、1.0 μmol·L-的ATO联合作用NB4细胞24h时,表达Bcl-2蛋白的细胞数较1.0μmol· L^-1 ATO单药组显著下降（P＜0.05）,且与ATO的浓度呈负相关（r=-0.858,P=0.000）.结论 联合1.0μg·mL^-1 TanⅡA可增强0.5、1.0μmol·L^-1ATO诱导NB4细胞凋亡;TanⅡA联合ATO诱导NB4细胞p53表达增强和Bcl-2表达减少可能是其促凋亡机制之一.     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导NB4细胞株分化的体外研究

目的评估丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对急性早幼粒细胞白血病（NB4）细胞增殖、分化的效应。方法以不同浓度的As2O3、Tan ⅡA单独及联合作用于NB。细胞,观察细胞的生长状况、形态学改变,用流式细胞术（FCM）检测细胞膜表面CD11b,分析NB4细胞的增殖、分化情况。结果TanⅡA、As2O3单独均能抑制NB4细胞生长,以1．0μmol·L^-1 As2O3作用更显著,两药联合应用可增强对NB。细胞增殖的抑制作用;经Tan ⅡA处理的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征;NB4细胞表面CD11b检测显示Tan ⅡA的诱导分化能力更强,以0．5μg·mL^-1组为著,联合应用As2O3可拮抗其诱导分化能力,相反TanⅡA则可促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。结论两药对NB4细胞均有增殖抑制作用,且具有协同效应;两药对NB4细胞诱导分化作用表现为：As2O3可以拮抗Tan ⅡA对NB4细胞的诱导分化能力,而Tan ⅡA则促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。     

丹参酮ⅡA对EVC304细胞血管舒缩因子的影响

[目的]探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞分泌的血管舒缩因子的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。[方法]通过建立肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞株(EVC-304)细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为西药对照,采用放射免疫方法及硝酸还原酶法检测丹参酮ⅡA对EVC-304细胞培养液中血管舒缩因子的含量。[结果]丹参酮ⅡA能升高EVC304细胞培养液中舒血管因子一氧化氮(NO)的含量(P<0.05),降低缩血管因子内皮素(ET-1)和血栓素A2(TXA2)的含量(P<0.05或P<0.01);而对舒血管因子中前列环素(PGI2)的含量无明显影响(P>0.05)。[结论]丹参酮ⅡA可通过降低缩血管因子ET-1、TXA2的含量,增加舒血管因子NO的含量发挥其抗动脉粥样硬化作用。     

川芎嗪对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响

川芎为活血化瘀代表性中药，临床应用甚广。川芎嗪(Tranethylpyrazine，TMP)为川芎主要有效成分之一。前期研究表明，川芎嗪注射液能抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生长和肺转移，可降低肿瘤组织微血管密度和抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达。本试验旨在进一步探讨川     

丹参酮ⅡA对K562细胞株的诱导分化

目的了解丹参酮ⅡA ( TanⅡA)对 K562细胞株的生长影响及红系诱导分化作用,探讨其可能的作用机制.方法细胞培养、形态观察和流式细胞术检测等. 结果 TanⅡA对K562细胞有生长抑制作用,而适当浓度的TanⅡA可诱导K562细胞向红系分化.用0.5μg/ml 的TanⅡA 处理后,K562细胞的凋亡细胞增加,G0/G1期细胞堆积,c-myc 、bcl-XL和H-ra s的表达下降,p53和Rb的表达增加.结论 TanⅡA对K562细胞有生长抑制及诱导红系分化的作用,同时伴有细胞的凋亡.     

丹参酮A与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的　研究丹参酮 A(Tanshinone A,Tan A)联合全反式维甲酸 (ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞 (NB4 )诱导分化及凋亡的协同效应。方法　 0 .5 μg/ m l Tan A分别联合 0 .5 μg/ ml、0 .2 5 μg/ ml和 0 .12 5 μg/ml ATRA作用 NB4细胞 5 d,观察 NB4细胞形态学变化 ,检测硝基蓝四氮唑 (NBT)还原能力 ;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达 ,并进行细胞周期和细胞凋亡分析。结果　 Tan A联合 ATRA可协同诱导 NB4细胞分化和凋亡。联合作用组第 5 d细胞生长抑制率均超过 80 % ;90 %左右的 NB4细胞分化 ,其中杆状和分叶核细胞比例超过6 5 % ;NBT还原能力显著升高。流式细胞术分析显示 CD11b表达升高 ,CD33表达降低 ;G0 / G1 期细胞增加 ,有明显的细胞凋亡 ,与 Tan A或 ATRA单独作用组相比均有显著性差异 (P<0 .0 1)。Tan A与 ATRA(0 .12 5 μg/ m l～0 .5 μg/ m l)联合对 NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向。结论　 Tan A联合 ATRA对 NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用 ;在 ATRA一定浓度范围内 ,这种协同作用无 ATRA剂量依赖性。     

丹参酮ⅡA对K562细胞株的诱导分化

目的：了解丹参酮ⅡA（TanⅡA)对K562细胞株的生长影响及红系诱导分化作用，探讨其可能的作用机制，方法：细胞培养，形态观察和流式细胞术检测等。结果：TanⅡA对K562细胞有生长抑制作用，而适当浓度的TanⅡA可诱导K562细胞向红系分化。用0．5ug/ml的TanⅡA处理后，K562细胞的凋亡细胞增加，G0/G1，期细胞 堆积，c-myc,bcl-XL和H－ras的表达下降，p53和Rb的表达增加。结论：TanIIA对K562细胞有生长抑制及诱导红系分化的作用，同时伴有细胞的凋亡。     

丹参酮ⅡA与三氧化二砷协同诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 研究丹参酮ⅡA(TanⅡ A)与三氧化二砷(ATO)联合对急性早幼粒白血病细胞(NIM)分化以及凋亡有无协同作用.方法 用TanⅡA联合ATO作用于NB4细胞.观察药物作用不同时间段的活细胞数,计算实验各时段的生长抑制率;Giemsa染色与透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术Annexin V法测定细胞凋亡率,并进行细胞周期和细胞凋亡分析.结果 ①TanⅡ A与ATO联合对NB4细胞生长有协同抑制作用,这种抑制作用随作用时间及联合ATO浓度的增加而增加.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.125、0.25以及0.5 μmol/LATO联合作用5 d对NB4细胞的生长抑制率均强于相应浓度ATO单独作用对NB4细胞的生长抑制率(P＜0.01);②TanⅡA与ATO联合对诱导NB4细胞凋亡有协同作用.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.5 μmol/L和1.0μmol/L ATO联合作用NB4细胞1 d,NB4细胞的凋亡率分别比相应ATO单独用药组的促凋亡效应增强(P＜0.05),TanⅡA与0.5 μmol/L ATO联合的促凋亡协同效应持续3 d;③TanⅡA与ATO联合对NB4细胞增殖有协同抑制作用,使G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少.1.0 μg/mL TanⅡA分别与0.125、0.25和0.5 μmol/L ATO联合作用NB4细胞3 d的增殖指数(PI)均低于相应单药的PI值(P＜0.05).结论 TanⅡA联合ATO对诱导NB4细胞凋亡有明显的协同作用,这种协同作用和联合使用的ATO的浓度密切相关;TanⅡA联合ATO对NB4细胞诱导分化未显示明显的协同作用.     

氧自由基在血管紧张素Ⅱ诱导ECV304细胞增殖中的作用

目的 探讨氧自由基在血管紧张素Ⅱ诱导ECV304细胞增殖中的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),实验分为AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组.采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组的ECV304细胞的增殖率和细胞产生氧自由基(·OH)的量.结果 一定浓度的AngⅡ(0.03125～1μmol/L)作用12 h时ECV304细胞增殖率增加,明显高于正常对照组(P＜0.05);AngⅡ可诱导ECV304细胞产生氧自由基(·OH),氧自由基(·OH)的含量与ECV304细胞增殖率呈显著负相关;10 mmol/L NAC可抑制1μmol/L AngⅡ对ECV304细胞的增殖作用,与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 AngⅡ可诱导ECV304细胞产生氧自由基(·OH),氧自由基(·OH)含量与AngⅡ呈时间和剂量依赖性;NAC可抑制AngⅡ对ECV304细胞的增殖作用,这可能与减少氧自由基(·OH)的含量有关;氧自由基(·OH)可能是AngⅡ诱导ECV304细胞增殖的主要信号转导分子之一.     

丹参酮ⅡA的抑菌活性研究

目的:研究丹参酮ⅡA的抑菌活性及选用溶剂的相关性.方法:将疏水性溶剂(CHCl3)改换为亲水性溶剂(DMF)后,再利用琼脂扩散法以观察其抑菌的效果.结论:采用琼脂扩散法的药敏试验,不全能适用于从中药内分离出的那些脂溶性而具有抑菌的活性成分.本试验的结果是丹参酮ⅡA和丹参酮ⅡB对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是50,25 μg/ml.对金黄色葡萄球菌ATCC-25923的最低抑菌浓度分别是100,50 μg/ml.对绿脓杆菌ATCC-27853的最低抑菌浓度分别是50,25 μg/ml.对溶血性链球菌的最低抑菌浓度分别是12.5,25 μg/ml,文中还引述了丹参酮ⅡA与隐丹参酮从结构差别到物化性质特别是亲水性质的区别.     

无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对ECV304细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞增殖和凋亡的影响.方法 常规培养ECV304细胞,设正常对照组、无蹼壁虎抗肿瘤活性成分高浓度(200mg/L)组、中浓度(20mg/L)组、低浓度(2mg/L)组.采用免疫细胞化学法检测不同实验组细胞PCNA的表达,并计算细胞阳性率为细胞增殖指数(PI);应用AO/EB荧光染色技术检测无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对细胞凋亡的影响.结果 ①无蹼壁虎抗肿瘤活性成分高,中浓度组与正常对照组比较,ECV304细胞PCNA的表达降低,细胞增殖指数降低,差异有显著性(P＜0.01);②与正常对照组比较,无蹼壁虎抗肿瘤活性成分高,中高浓度组均能促进ECV304细胞凋亡.结论 无蹼壁虎抗肿瘤活性成分能够抑制ECV304细胞增殖,引起细胞凋亡.