运用短期外周血超抗原反应T细胞系研究超抗原诱导的T细胞凋亡

目的：建立短暂外周血抗原金黄色葡萄球菌Ａ肠毒素（ＳＥＡ）反应Ｔ细胞系,研究ＳＥＡ诱导的Ｔ细胞凋亡。方法：采用超抗原ＳＥＡ剌激ＰＢＭＣ增殖,ｒＩＬ－２维持细胞生长,高速度Ｆｉｃｏｌｌ离心去除死细胞建立细胞系。ＦＣＭ及琼脂糖凝胶电泳检测ＳＥＡ诱导短期外周血ＳＥＡ反应Ｔ细胞系凋亡。结果：ＳＥＡ０．５～５μｇ／ｍｌ,ｒＩＬ－２Ｕ／ｍｌ能有效建立ＳＥＡ反应Ｔ细胞系,此细胞系能在体外维持生长４０ｄ,对ＳＥＡ的     

Fas抗原在超抗原诱导T细胞凋亡中的作用

目的：研究Ｆａｓ抗原介导的死亡效应在超抗原诱导Ｔ细胞凋亡中的作用。方法：ＳＥＡ诱导从人外周血建立的短期ＳＥＡ反应Ｔ细胞系凋亡,１．８％琼脂凝胶ＤＮＡ电泳观察凋亡的特征条带;ＦＣＭ检测Ｆａｓ,ＦａｓＬ的表达量变化,Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光批示剂检测胞浆「Ｃａ＾２＋」ｉ的变化。     

不同T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异

目的　在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4 和CD8 T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法　分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 两个T细胞亚群 ,检测其对SEA再次刺激的增殖反应及产生IL 2活性。结果　Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 T细胞亚群对SEA再次刺激所诱导的增殖反应以及产生IL 2活性的能力有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　SEA单次刺激时Vβ3 CD4 和Vβ3 CD8 T细胞亚群反应性相似 ,再次刺激时Vβ3 CD8 呈显著低反应性。     

超抗原葡萄球菌肠毒素A对体内T细胞无能的诱导规律

目的:通过不同的间隔天数,连续多次给予小鼠腹腔注射超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA),观察注射后T细胞的表型变化,并找寻SEA在小鼠体内对T细胞无能的诱导规律. 方法:将80只小鼠随机分为4组:间隔3d组、间隔28d组、阳性对照组和阴性对照组,每组20只小鼠.每组于末次注射后的不同天数,用流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞上CD3、CD4、CD8、CD69、CD25的表达,并将细胞体外继续培养72h,用单四唑(MTT)法测定细胞的增殖能力. 结果:间隔3d组和间隔28d组中,连续3次注射SEA后,小鼠脾淋巴细胞中CD3的表达均显著下降(P＜0.01),2组中CD8的表达水平基本相似;但间隔3d组中,CD4的表达在末次注射后3d内明显降低(P＜0.05);末次注射后3d内,CD25的表达明显高于末次注射后第7d(P＜0.05).间隔28d组中CD4的表达较稳定,无显著升降;CD25的表达水平较低.SEA连续3次注射后,间隔3d组的细胞从第21d开始出现较弱的增殖反应,至第28d增殖反应明显提高.间隔28d组的细胞在第28d始出现较弱的应答反应. 结论:小鼠体内反复注射超抗原SEA可诱导T细胞无能,注射间隔时间的长短可能与无能的触发无关,但影响了CD4亚群的克隆清除,即间隔时间越短,被清除的CD4 T细胞越多;间隔时间越长,CD4 T细胞清除的程度越小.尽管CD25与T细胞无能的诱导密切相关,但CD25可能不参与无能状态的维持.T细胞的免疫无反应性并不是绝对的和持久的,在一定条件下,它可再次对超抗原的刺激出现反应.     

超抗原诱导人外周血T淋巴细胞的增殖

本文以人外周血淋巴细胞为材料，用超抗原葡萄球菌肠毒素Ｂ刺激后，检查了淋巴细胞的应签反应及特征。结果显示出微量的ＳＥＢ具有比ＰＨＡ，ＳＥＡ更为敏感的诱导Ｔ细胞应签反应的能力。Ｔ细胞应答反应中粘附性巨噬细胞起了抗原提呈作用；去除了粘附细胞，Ｔ细胞表现出完全不反应。Ｔ细胞活化途中伴随白介素的释放。     

超抗原单次和多次诱导T细胞膜表型及细胞因子释放的变化特征

目的:观察超抗原SEA体外单次和多次诱导T细胞的细胞膜表型及细胞因子释放的变化特征。方法:SEA体外单次和多次诱导小鼠脾淋巴细胞,用流式细胞术检测CD4、CD8、CD69、CD25、CD28及细胞膜上和细胞内CTLA-4(CD152)的表达,并测定细胞培养上清中IL-2、INFγ-、TNFα-、IL-4和IL-10的水平。结果:1次SEA诱导组(1×SEA组)中,CD4、CD8、CD69、CD25和CD28的表达均显著增加,CTLA-4的表达低,IL-2、INFγ-、TNF-α的水平显著增加。2×SEA组中,CD4、CD8、CD25和CD28的表达也有较明显的增高,CD69的表达未继续上升,CTLA-4的表达显著增加;IL-4和IL-10的水平明显增高。3×SEA组中,CD4和CD8的表达无明显增减,CD69、CD28和CTLA-4的表达显著降低,CD25的表达与2×SEA组相似;IL-10的水平仍继续上升。结论:SEA初次诱导小鼠脾淋巴细胞时,能显著促进T细胞的活化和增殖;经SEA多次刺激(3次)可诱导T细胞的无反应性。     

葡萄球菌性超抗原与角朊细胞HLA—DR抗原表达的研究

目的进一步探讨银屑病（PS）发病与超抗原（SA）的关系。方法采用流式细胞（FACS）定量分析葡萄球菌肠毒素B（SEB）活化的PS和正常人外周血淋巴细胞（PBLC）24h培养上清液对角朊细胞（KC）表达HLA－DR抗原的影响。结果其上清液可明显诱导KC表达HLA－DR抗原，且PS组诱导表达作用强于正常人组（P＜0．05）。结论诱导KC表达HLA－DR抗原可能是SA活化的淋巴细胞作用于KC，诱发PS的途径。     

超抗原的最新研究进展

超抗原是瑞典科学家怀特于1989年在国际上首次提出的免疫学概念.超抗原通过MHCⅡ阳性细胞介导能与特定的T细胞vβ领域架桥结合而不需要提示细胞参与呈递就能使T细胞活化与增殖.本文就其分类、性质和结构,以及相关疾病和临床进展作一综述.     

口腔扁平苔藓角朊细胞表达IcAm—1抗原的研究

细胞间粘附分子，又称ＣＤ５４抗原，是分子量为９００００的膜表面蛋白，近年研究显示ＩｃＡｍ－１在免疫和炎症反应中有重要的作用［１］，在许多疾病皮损处角朊细胞有异常表达［２］，为此，我们采用ＳＰ免疫组化方法对１４例口腔扁平苔藓患者的皮损ＩｃＡｍ－１抗原表达进行了研究，现将结果报告如下。１　资料与方法１．１　临床资料检测对象，取自１９９４年１月～１９９８年６月，我科及太原市中心医院皮肤科被诊断为口腔扁平苔藓患者的蜡块组织，共１４例，并再次被资深病理医师进一步确诊，正常对照组８例，为口腔整形及外伤时切除…     

超抗原SE抗肿瘤研究进展

超抗原 (ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＳＡｇ)是一组具有强大刺激能力的细菌外毒素或逆转录病毒 ,其无需抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＡＰＣ)内处理加工 ,能直接与ＡＰＣ膜上的ＭＨＣ ＩＩ类分子抗原结合槽外侧非限制性结合 ,以完整的蛋白质分子形式被提呈给Ｔ细胞 ,只需极低浓度 (1～ 10ｎｇ/ｍｌ)即可诱发最大的应答效应 ,导致带有特异性Ｔ细胞受体 β链可变区 (Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｂｅｔａｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓ ,ＴＣＲ Ｖβ)序列的Ｔ细胞大量活化增殖 ,并释放出大量多种细…     

人类白细胞抗原-DRβ1特异性低T细胞反应性肽对T细胞激活的抑制作用

目的　研究人类白细胞抗原 (HLA) DRβ1特异性Ⅱ型胶原 (CII)多肽的T细胞受体(TCR)结合表位改变对T细胞激活的影响。探讨通过抑制T细胞对抗原肽的识别治疗类风湿关节炎的新途径。方法　利用AutoDock3 0系统设计非T细胞结合肽 ;以激光共焦显微镜及流式细胞仪观察荧光标记的CⅡ 2 6 3 2 72修饰肽的细胞内转运及其在细胞膜上的表达 ;应用HLA DR1转基因抗原呈递细胞和特异性T细胞的激活体系 ,研究替换TCR识别氨基酸的CII修饰肽在T细胞激活中的作用。结果　计算机模拟显示CII第 2 6 3位苯丙氨酸 (F)、2 6 6位谷氨酸 (E)是与HLA DR1结合的关键位点 ,而 2 6 7位谷氨酰胺 (Q)、2 6 9位脯氨酸 (P)和 2 70位赖氨酸 (K)是T细胞识别的主要功能氨基酸。用甘氨酸 (G)、和 /或丙氨酸 (A)替换上述位点可去除功能性侧链。CⅡ修饰肽可被HLA DR1转基因抗原呈递细胞摄取并与膜表面的HLA DR1分子结合。CⅡ 2 6 3 2 72原型肽可激活T细胞 ,而用A或G单一替换 2 6 7、2 6 8、2 6 9、2 70位氨基酸或连续替换 2 6 8 2 70位氨基酸的修饰肽对T细胞的激活能力明显降低 (P <0 0 1)。低反应性修饰肽 2 70A、sub2 6 8 2 70对CⅡ诱导的T细胞激活有显著抑制作用。结论　通过替换CII中TCR特异性氨基酸可减弱或消除其对T细胞的结合能力及激     

超抗原诱导活化的细胞是Th1而不是Th2

目的：分析超抗原活化的外周血ＣＤ４＾＋Ｔ细胞Ｔｈ１／Ｔｈ２的平衡状况。方法：在体外检测了细胞因子及细胞因子受体水平。结果：ＳＥＢ能诱导外周血淋巴细胞增殖；增殖反应发生在ＳＥＢ刺激后的ｄ３；６细胞增殖达到高峰，随后下降。而ｍＩＬ－２Ｒ的表达在刺激后的ｄ３表现出明显升高（Ｐ〈０．０１），比ｓＩＬ－２Ｒ的释放提前了３ｄ。ＩＬ－２的释放在刺激后的ｄ３到ｄ４达到高峰；ＩＬ－４的水平为０。结论：早期ｍＩＬ－２     

人血小板T细胞活化抗原PTA1基因探针的制备及初步鉴定

制备地高辛标记的ＰＴＡ１基因探针，以用于ＰＴＡ１表达及功能的研究。方法根据新克隆的人ＰＴＡ１基因序列，设计针对ＰＴＡ１分子不同结构域的引物，通过ＰＣＲ扩增，地高辛标记的方法制备基因探针。结果；细胞原位杂交方法证实这种探针具有较高的敏感性的和特异性。     

超抗原与银屑病研究新进展

<正>超抗原(Superantigen,SA)的概念是由White等于1989年首先提出。近年来,SA与银屑病的关系日益受到医学工作者的关注,临床可见产生SA性毒素的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)、化脓性链球菌的皮肤或咽部感染与银屑病发病及症状加重有关。现就SA特性及其与银屑病的相关性研究最新进展作一综述。     

移植肾急性排斥时Fas配体和T细胞内抗原1的表达

目的:探讨移植肾发生急性排斥反应时肾组织Fas配体(Fas ligand,FasL)和T细胞内抗原1(T-cell intracellular antigen-1,TIA-1)的表达及意义.方法:应用免疫组织化学技术分别检测32例移植肾标本、2例供肾标本及8例肾癌周围肾组织标本FasL和TIA 1的表达,标本按Banff标准分为急性排斥(14例)、慢性排斥(15例)和无排斥改变(13例)3组,分析移植肾组织标本病理形态学改变与FasL和TIA 1表达的相关性.结果:FasL主要在肾小管上皮细胞胞质内表达,急性排斥组表达明显强于慢性排斥组和无排斥组(P＜0.05);TIA-1在肾小管上皮细胞和间质浸润淋巴细胞均有表达,小动脉内皮细胞亦可见阳性着色,急性排斥组阳性强度较高,与慢性排斥组和无排斥组间存在显著差异(P＜0.05);急性排斥标本FasL和TIA-1的表达强度与组织损害的严重程度呈正相关.结论:急性排斥时移植肾组织FasL和TIA-1表达增强是T细胞活化的反映,其检测可能有助于移植肾急性排斥的早期诊断.     

开放性骨折早期外周血T细胞亚群,IL—2活性及Tac抗原表达的变化

目的：研究不同程度开放性骨折早期机体免疫功能变化．方法：按照朱通伯的开放性骨折分类标准，将２１例患者分为两组：轻伤组，为Ⅰ，Ⅱ度开放性骨折（共１０例）；重伤组，为Ⅲ度开放性骨折（共１１例）．用ＡＰＡＡＰ法和生物学测定法分别检测在伤后当日，５ｄ，１０ｄ，１５ｄ患者外周血单个核细胞的Ｔ淋巴细胞亚群变化和经植物血凝素（ＰＨＡ，１０ｍｇ／Ｌ）刺激后ＩＬ－２活性及ＩＬ－２Ｒ（Ｔａｃ抗原）表达变化．结果：伤后当日，５ｄ两组Ｌｅｕ４（总Ｔ细胞）、Ｌｅｕ３ａ（辅助性Ｔ细胞）及Ｔａｃ阳性细胞百分比明显下降（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），Ｌｅｕ２ａ（抑制性Ｔ细胞／杀伤性Ｔ细胞）细胞百分比无显著变化（Ｐ＞０．０５）；ＩＬ－２产生明显减少（Ｐ＜０．０１）．轻伤组下降各值在伤后５ｄ开始回升，伤后１０ｄ，１５ｄ接近正常；重伤组各值下降比轻伤组更为明显，而且回升缓慢．结论：开放性骨折早期Ｔｈ淋巴细胞功能受损，ＩＬ－２活性和ＩＬ－２Ｒ表达受抑，免疫功能下降程度与创伤严重程度相关．