苦参碱对肺纤维化鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的 探讨苦参碱对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织肝细胞生长因子表达的影响.方法 选取SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型对照组、苦参碱处理组,每组各24只.各组动物于7、14、28d随机处死8只,取肺组织采用苏木精-伊红染色,Masson胶原染色及测定羟脯氨酸(HYP)浓度采评价治疗效果,用原位杂交的方法检测肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量.结果 苦参碱组肺泡炎和肺纤维化程度及羟脯氨酸浓度低于同时期模型对照组,有统计学意义;模型组肺组织HGFm RNA表达及蛋白含量在第7d达高峰,之后下降,第14d,第28d低于正常对照组(P<0.01),苦参碱组HGFm RNA表达及蛋白含量变化趋势与模型组同,但其表达均高于同时间段模型组(P<0.05).结论 在博来霉素诱导肺纤维化形成阶段应用苦参碱干预能减轻肺纤维化的程度,其可能机制为通过促进HGF的表达而实现.     

苦参碱减轻百草枯诱导的模型小鼠肺纤维化

目的 探讨苦参碱对百草枯(PQ)诱导的小鼠肺纤维化的影响及其可能的作用机制。方法 将小鼠随机分为对照组、百草枯(PQ)组、苦参碱组。百草枯(18 mg/kg)单次腹腔注射以建立肺纤维化模型。苦参碱组建模24 h后,予以苦参碱(100 mg/kg)灌胃干预。28 d后取小鼠肺组织,用HE染色观察肺组织炎性反应情况;用Masson染色观察肺组织纤维化情况并进行Ashcroft评分,用碱水法检测各组小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量;用Western blot检测胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)的表达;用免疫荧光法检测上皮细胞间充质转化(EMT)相关蛋白[α-平滑肌蛋白(α-SMA)、上皮性钙黏附蛋白(E-cardherin)、波形蛋白(vimentin)]的表达。结果 百草枯组模型小鼠肺组织结构破坏明显,可见胶原纤维沉积,肺纤维化评分较对照组升高(P<0.001),且百草枯能够显著上调EMT相关蛋白的表达水平;而经苦参碱干预后可减轻肺纤维化病理改变,降低肺组织中羟脯氨酸、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ含量(P<0.001),抑制α-SMA、vimen...     

苦参碱通过调节单核吞噬细胞表型偏移改善博莱霉素诱导的肺纤维化

目的:研究苦参碱(matrine,MA)对博菜霉素(bleomycin,BLM)诱导的循环单核细胞和肺泡巨噬细胞表型偏移的调节作用。方法:160只C57BL/6雄性小鼠随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、苦参碱干预组(BLM+MA组)及溶剂对照组(BLM+NS组)经口咽吸入法给予BLM(2.5 mg/kg)建立实验性肺纤维化模型,对照组给予等体积NS,BLM+MA组和BLM+NS组分别在术后每天灌胃给予MA(15 mg·kg~(-1)·d~(-1))或等量NS。术后第3、7、14和21天处死小鼠,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用碱水解法测定肺组织羟脯氨酸的含量,用流式细胞术分别检测循环单核细胞亚群和支气管肺泡灌洗液细胞表型的变化。结果:与对照组相比,MA干预可以明显减轻BLM诱导的小鼠肺组织炎症反应及纤维化程度(P0.05);与NS组相比,BLM组的Ly6C~(hi)单核细胞比例升高,肺泡巨噬细胞表型由M1型向M2型偏移且与炎症反应和纤维化程度呈现一定的相关性;MA干预后可以部分逆转BLM诱导的循环单核细胞和肺泡巨噬细胞的表型偏移。结论:苦参碱可以减轻BLM诱导的急性肺泡炎症和肺纤维化程度,可能是部分通过逆转循环单核细胞和肺泡巨噬细胞表型的偏移而实现的。     

结缔组织生长因子与肺纤维化

最近,结缔组织生长因子(CTGF)以其在促纤维化中的决定性作用而受到广泛关注。它由TGF-β介诱导产生,是其下游效应介质,主要介导TGF-β的促细胞增生和细胞外基质合成,生物学效应较单一。肺纤维化是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局,随着研究的深入,人们对CTGF促肺纤维化作用机制的认识越来越深刻,近年来,针对拮抗CTGF以治疗肺纤维化已做了大量研究,CTGF可能成为治疗纤维化疾病的新的分子靶点。     

IL-37 抑制IL-18 在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义的探讨

目的:初步研究博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中IL-37、IL-18 的表达水平,探讨其在PF 发生、发展中的表达及意义。方法:将45 只清洁级Wistar 大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N 组)、博来霉素组(B 组)、地塞米松治疗组(D组),每组大鼠各15 只,B 组及D 组大鼠给予气管内注射博来霉素4 mg/ kg 制作肺纤维化模型,N 组给予相同体积生理盐水作为对照,D 组大鼠于肺纤维化造模基础上第2 天每日腹腔注射地塞米3 mg/ kg,N、B 组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠分别于造模后第7、14、28 天处死,HE 染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、IL-37 含量,RT-PCR 法测定肺组织中IL-18mRNA 表达量。结果: HE 染色显示B、D 组大鼠肺组织病理学改变由肺泡炎症逐渐发展为纤维化,B、D 组HYP 含量随时间推移逐渐升高,以第28 天为著(P<0.05);于B、D 组IL-37、IL-18mRNA 表达于第7 天升高至最高点,后逐渐降低,至第28 天均高于N 组,差异有统计学意义(P<0.05); D 组IL-37、IL-18mRNA 表达在同一时间均低于B 组(P<0.05)。结论:IL-37、IL-18 在大鼠肺纤维化发病早期起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展。     

生长因子与肺纤维化

多种细胞生长因子与肺纤维化的发生发展关系密切。这些因子能促进肺成纤维细胞分裂增殖，对成纤维细胞具有趋化作用，能促进胶原蛋白的合成并抑制其降解。     

结缔组织生长因子在大鼠肺纤维化模型中的蛋白表达

目的 :了解结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CT GF)在大鼠肺纤维化模型中的表达状况及其与肺纤维化之间的关系。方法 :42只Wistar大鼠随机分为二组。模型组 (M组 ) :气管内灌注博莱霉素 ,对照组 (C组 ) :气管内灌注生理盐水。于灌注后第 7、14、2 8天每组分别处死大鼠 7只。制备大鼠肺组织切片。用免疫组化SABC法分别检测二组大鼠肺组织中CTGF及转化生长因子 β1 (TGF β1 )、纤维连接蛋白 (FN )在肺内的表达水平。结果 :M组CTGF及TGF β1 、FN在肺内的表达水平在各时间点均显著高于C组 (P <0 .0 5 )。结论 :CTGF作为TGFβ1 的下游因子 ,可能通过促进细胞外基质(ECM)如FN和胶原蛋白等合成而在博莱霉素诱导的肺纤维化形成过程中起重要作用     

甘草甜素抑制肺纤维化大鼠肺组织单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的: 观察甘草甜素对博来霉素(BLM)诱导的大鼠肺纤维化的干预作用及可能机制。方法: 随机将大鼠分为对照组、肺纤维化模型组、甘草甜素干预组。气管内注入博莱霉素造成动物模型后,于当天开始每天给药,分别于7 、28 d处死,取肺组织,行嗜伊红染色、Masson染色；检测肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP) 的变化; RT-PCR法测肺组织单核细胞趋化因子-1 mRNA的表达,免疫组化测肺组织单核细胞趋化因子-1蛋白的表达。结果: 干预组肺纤维化程度轻于模型组; 肺组织匀浆羟脯氨酸(HYP)含量显著低于模型组( P<0.01) ;在模型组 MCP-1第7 d表达就明显升高，第28 d下降，但仍高于对照组，干预组与模型组有同一规律，但均减弱，第7、28 d与模型组(M组)比较，P<0.05。结论: 甘草甜素能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化，这种作用可能部分是通过抑制MCP-1的表达而实现。     

内皮素的表达与鼠肺纤维化的关系

目的：动态观察肺纤维化大鼠的内皮素合成和分布,了解ET与肺纤维化发生发展的关系。方法：采用放射免疫法和SP免疫组织化学方法,观察博莱霉素（BW）组（n＝25）和对照组（n＝25）在用药后1、3、7、14、28d时血浆EF浓度及肺组织财的合成和分布情况。结果.BLM组大鼠血浆ET含量明显高于正常对照组（P＜0．01）,ET在支气管上皮细胞和炎性细胞表达增强P＜0．01。结论：ET可能与肺纤维化的发生发展有密切关系,参与了肺纤维化的渗出和增生过程。     

肝细胞生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的影响

目的:观察HGF基因对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的影响。方法:从已有质粒pRc/CMV-HGF中扩增出HGF基因,将其克隆到含增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-HGF,酶切及测序鉴定正确后,用脂质体将重组质粒pEGFP-HGF转染到人脐静脉细胞株ECV304中,G418筛选获得稳定表达细胞克隆,采用荧光显微镜观察、RT-PCR、免疫细胞化学方法检测鉴定重组质粒的表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测稳定表达细胞中HGF的含量;再以MTT法检测转染重组质粒后细胞增殖的改变,Transwell Migration实验检测细胞迁移能力的改变。结果:所构建重组质粒经酶切图谱分析和序列测定证实构建成功;荧光显微镜下观察到有绿色荧光;RT-PCR证实HGFmRNA在转染阳性细胞高表达;免疫细胞化学证实转染pEGFP-HGF质粒的细胞有HGF蛋白的表达;ELISA检测细胞培养基中HGF含量可达112.3 ng/ml,MTT法、TranswellMigration测定转染pEGFP-HGF阳性细胞的增殖、迁移能力明显高于对照组(P<0.01)。结论:重组质粒pEGFP-HGF能够在内皮细胞株ECV304转录、表达;表达的活性蛋白HGF刺激ECV304的增殖、迁移,为进一步应用于基因治疗奠定实验基础。     

扶正软坚方对肺纤维化大鼠转化生长因子β表达的影响

<正>目的:研究扶正软坚方对肺纤维化的干预作用及对转化生长因子β(TGF-β)表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为空白对照组,模型组(采用博莱霉毒诱发肺纤维化)、扶正软坚方煎剂灌胃组     

肝细胞生长因子/c-Met系统在鼻咽癌中的表达及意义

目的　探讨肝细胞生长因子(HGF)及其受体c- Met蛋白在鼻咽癌组织中的表达水平,研究HGF/c- Met系统对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。方法　收集1999—2003年期间45例确诊的鼻咽原发癌活检组织标本,采用免疫组织化学(LSAB)法检测鼻咽癌组织中HGF α亚单位和c- Met的表达,并与患者的病理及临床资料相联系。采用流式细胞术检测鼻咽癌细胞株CNE- 2在HGF刺激前后c- Met阳性癌细胞百分率的改变;蛋白印迹法和逆转录PCR法分别用于检测癌细胞株c -Met蛋白表达和mRNA表达的变化。结果　在45例鼻咽原发癌组织中,癌细胞c- Met的阳性表达率为91. 1% (41 /45),但仅有1例鼻咽癌细胞表达HGF( 2 .2%, 1 /45 )。HGF主要在鼻咽癌间质中的淋巴细胞表达。癌细胞c Met的表达水平与淋巴结转移有关(P=0 .024 ),且与淋巴细胞表达HGF呈正相关(rs=0 .450,P=0 .002)。癌细胞c Met表达量在间质淋巴细胞高表达HGF的病例中明显高于淋巴细胞低表达HGF的癌组织(P=0 .009)。但癌细胞c Met的表达与患者性别、年龄、病理组织学分型以及临床分期均未显示相关性。鼻咽癌细胞株CNE 2在HGF诱导24h后,c Met阳性的癌细胞比例即有明显增加,由(46 .6±9 .02)%增加至(85. 8±6. 05)% (P=0 .003 ),癌细胞c Met蛋白表达相对强度和mRNA表达水平均有显著提高,     

氧化苦参碱对淋巴细胞第二信使的影响

本文研究了氧化苦参碱对淋巴细胞胞浆游离钙、钙摄取功能、ｃＡＭＰ及ｃＧＭＰ水平的影响。结果表明：氧化苦参碱可使淋巴细胞浆游离钙水平上升，其钙离子来源于细胞内储存钙的释放。另外，氧化苦参碱可使ＰＨＡ活化的人扁桃体淋巴细胞的ｃＡＭＰ水平降低。我们推测它可能通过某种方式和细胞膜发生作用，从而影响细胞内钙和ｃＡＭＰ的水平，进而影响细胞功能。     

转化生长因子β1与肺纤维化的研究进展

目的了解转化生长因子β1（TGF—β1）与肺纤维化的相关性及肺纤维化的治疗现状。方法应用现代信息技术，通过互联网等查阅近年来国内外相关资料并进行分析、整理、总结，对转化生长因子β1（TGF-β1）的生物学特征、TGF—β1与肺纤维化发病机制的相关性以及目前治疗肺纤维化的现状进行综述。结果转化生长因子β1（TGF—β1）在肺纤维化的发病机制中起到复杂的生物调节作用。结论深入研究转化生长因子β1（TGF—β1）与肺纤维化的发病之间的关系可以为临床上治疗肺纤维化提供新的思路。     

盐皮质激素受体在博来霉素诱导的实验性肺纤维化中的作用*

 目的：研究盐皮质激素受体（MR）在博来霉素诱导的实验性肺纤维化进展过程中的作用及机制。方法：将126只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、博来霉素组和MR阻断剂螺内酯干预组,气管内一次性滴注博来霉素(2.5 mg/kg)溶液建立实验性小鼠肺纤维化模型,螺内酯干预组每天按螺内酯20 mg/kg经灌胃给药。于术后12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d和28 d处死小鼠,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用real-time PCR检测各组肺组织中胶原1(Col1)、Col3、转化生长因子β(TGF-β)、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）及MR mRNA的表达水平。结果：（1）与对照组小鼠相比,博来霉素组及螺内酯干预组小鼠在滴注博来霉素后经历了典型的急性炎症期（12 h～3 d）、纤维化进展期（14 d）和纤维化晚期（28 d）。阻断MR下调早期炎症反应并减轻了纤维化程度。（2）螺内酯干预可以有效降低MR mRNA表达水平;阻断MR在急性炎症期显著下调MCP-1 mRNA的表达,在14 d显著下调TGF-β、Col1和Col3 mRNA表达水平。结论：(1）阻断MR可以明显减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度;(2）阻断MR可能通过在急性炎症期调节MCP-1和TGF-β的表达,减轻炎症反应,并在纤维化进展期,下调TGF-β的表达,从而抑制肺纤维化的进展。     

苦参碱对病毒性心肌炎小鼠蛋白激酶B表达的影响

目的 评价苦参碱对柯萨奇B3型病毒（CVB3）感染的病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌组织蛋白激酶B（Akt）表达的影响,以探讨苦参碱保护心肌的作用机制.方法 实验采用雄性Balb/c小鼠连续3 d腹腔注射0.2ml 100TCID50的CVB3的方法制备VMC的动物模型.分为6组：苦参碱每日80 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg治疗组,利巴韦林组、病毒组及正常对照组.药物于末次注射病毒的60 min后开始,连续腹腔注射10 d,正常组给予同体积的生理盐水.分别于给药后第5天和第10天处死小鼠,应用Tunel标记法检测各组心肌细胞凋亡情况;于给药后第10天应用免疫组化及Western Blot法检测心肌组织磷酸化AktSer-473蛋白的表达.结果 与正常组比较,病毒组心肌组织凋亡明显增加（P＜0.05）;与病毒组比较,苦参碱各剂量组心肌组织凋亡明显减少（P＜0.05）.于给药后第10天,苦参碱每日40 mg/kg组磷酸化AktSer-473蛋白的表达明显上调（P＜0.05）.结论 苦参碱可能通过促进磷酸化AktSer-473蛋白的表达,抑制CVB3感染的VMC小鼠心肌组织凋亡.     

博来霉素气管灌注构建肺纤维化模型大鼠肺组织低氧诱导因子1α的动态表达

背景：低氧诱导因子1α是介导低氧反应的核转录因子,其对肺纤维化的作用尚不明确。 目的：观察低氧诱导因子1α在肺纤维化发病中的作用。 方法：采用博来霉素(5 mg/kg)一次性气管内灌注建立SD大鼠肺纤维化模型。造模后7,14,28 d观察大鼠肺组织的病理学改变及肺组织中低氧诱导因子1α蛋白及mRNA的动态表达。 结果与结论：博来霉素灌注后,大鼠肺组织炎症反应明显,并逐渐出现纤维化及胶原纤维沉积。免疫组织化学及RT-PCR结果显示,在大鼠肺纤维化发病过程中,低氧诱导因子1α蛋白及mRNA的表达趋势相同,即随造模时间的延长表达逐渐增多,并于造模后第14天达高峰。提示低氧诱导因子1α在大鼠肺纤维化发病过程中起重要作用,其过度表达可能参与了肺纤维化的发生与发展。     

细颗粒物PM2.5暴露加重博来霉素致大鼠肺纤维化

目的 探讨细颗粒物(PM2.5)暴露对博来霉素致大鼠肺纤维化的影响.方法 将大鼠分为4组:1)对照组(N组);2)PM2.5组(PM组);3)博来霉素组(BLM)(B组);4)PM2.5+博来霉素组(PM +B组);每组再分为4个亚组,均为6只.分别予以气管内滴注0.9％氯化钠注射液(1.5 mL/kg),PM2.5悬液(3.75 mg/kg),BLM悬液(3.5 mg/kg),BLM和PM2.5混悬液,于3、7、14和21 d处死大鼠,行肺组织HE染色和Masson染色,进行肺泡炎及肺纤维化评分,计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及分类,ELISA法测BALF中IL-6、TNF-α和TGF-β1含量;Western blot测定Toll样受体(TLR)2和TLR4蛋白表达;测定肺组织匀浆中羟脯氨酸含量.结果 B组和PM +B组体质量较N组明显下降,PM +B组较B组体质量明显下降(P＜0.05).B组和PM +B组肺泡炎及肺纤维化评分显著高于N组和PM组.B组和PM +B组白细胞总数及中性粒细胞比例、BALF中IL-6、TNF-α和TGF-β1含量及肺组织羟脯氨酸含量均显著高于N组和PM组(P＜0.05),且PM +B组高于B组.PM组、B组、PM +B组肺组织TLR2、TLR4蛋白表达显著高于N组(P＜0.05),PM +B组显著高于B组和PM组.结论 PM2.5暴露加重博来霉素致大鼠肺纤维化,其机制可能通过上调肺组织TLR2及TLR4表达和增加IL-6、TNF-α及TGF-β1分泌.     

氧化苦参碱对胆碱酯酶影响的临床研究

目的　研究氧化苦参碱 (OM)治疗病毒性肝炎过程中 ,胆碱酯酶 (ChE)的动态变化及与同期白蛋白 (ALB)、凝血酶原活动度 (PTA)及其他肝功能的关系。方法　 98例病毒性肝炎患者分成 4组 ;A组 31例 (静脉注射OM) ,B组 30例 (口服OM) ,C组 7例 (肌内注射OM) ,D组 30例 (一般护肝药物 ,不用OM)。定期检测血清ChE、ALB、PTA、肝功能、肾功能、血常规、血清补体 1型受体 (sCR1)、红细胞黏附功能 (EIIAF)指标。结果　A、B、C 3组在治疗中ChE明显下降 ,治疗前中后比较 ,差异有显著意义 (P值分别为 <0 0 0 1、<0 0 0 1、0 0 2 3) ;同时在ChE数值及异常率与对照组比较 ,差异有显著意义(P <0 0 0 1)。A、B、C 3组在治疗前中后 ,ALB、PTA随病情而变化 (P值均 >0 0 5 )。4组治疗后病情均有明显好转 ,ChE的下降并不伴随肝功能的恶化。结论　OM制剂在治疗病毒性肝炎中ChE明显下降 ,但反映肝脏实质功能的ALB、PTA等指标无改变 ,ALT、AST、TBiL好转。在OM治疗结束后 ,ChE迅速恢复正常。所以 ,ChE的下降并不表明病情的恶化 ,其机理尚待探讨。