二氯化钴诱导唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞自噬的实验研究

目的 ：研究二氯化钴(CoCl2)对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖和自噬的影响。方法 ：应用MTT法对ACC-M细胞进行细胞活力测验,以检测CoCl2对细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察自噬体形成;双免疫荧光标记、实时定量PCR（RT-PCR）及Western 蛋白免疫印迹检测自噬相关基因HIF-1α/BNIP3通路相关基因、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3）及Beclin 1的表达。采用SPSS15.0软件包对数据进行双尾 t检验。结果 ：CoCl2可降低ACC-M细胞的活性,同时诱导自噬体的形成;透射电镜下,实验组细胞内可见自噬体样的双层膜结构;RT-PCR及Western 蛋白免疫印迹检测显示,CoCl2可使HIF-1α/BNIP3信号通路和自噬相关蛋白的表达显著提高。结论 ：CoCl2可模拟低氧环境,从而诱导ACC-M细胞产生自噬,HIF-1α/BNIP3信号通路在这一过程中扮演着重要角色。     

莱菔硫烷对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的影响

目的：研究莱菔硫烷（SFN）对涎腺腺样囊性ACC-M癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：分别用终浓度为5、10、20、30、40、60、80、100μmol／L的SFN处理ACC-M细胞24、48、72 h。用MTT比色试验和台盼蓝拒染实验检测细胞的增殖和存活情况;倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin-V-FITC和PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：SFN对ACC-M有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达89．2％,作用24、48、72 h时的IC50（μmol／L）分别是75．6、21．3、16．5,增殖抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性。SFN可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升（P＜0．01）。结论：SFN具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。     

Survivin在腺样囊性癌细胞ACC-2以及ACC-M中的表达

目的：探讨Survivin在腺样囊性癌（ACC）细胞系中的表达情况及其表达与ACC远处转移的相关性。方法：培养人涎腺腺样囊性癌（ACC-2）和肺转移腺样囊性癌（ACC-M）细胞,观察其形态学特征,采用MTr法检测细胞的生长活性,并采用SP法检测细胞中Survivin的表达。结果：ACC-2和ACC-M细胞均表现有明显的上皮样和腺样细胞的特征。ACC-M细胞的生长活性高于ACC-2细胞,且Survivin在ACC-M细胞中的表达也强于ACC-2细胞。结论：Survivin与涎腺ACC肺部转移的发生具有高度相关性。     

吴茱萸碱抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖的实验研究

目的:研究吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响。方法:用终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/ml的吴茱萸碱处理ACC-M 24、48、72 h后,应用MTT比色试验、倒置显微镜、Giemsa染色、Annexin-V-FITC和流式细胞仪检测和观察ACC-M的生长抑制率和凋亡情况。结果:吴茱萸碱(1μg/ml以上)对ACC-M细胞具有时间-浓度依赖性生长抑制作用,最大生长抑制率可达89%。吴茱萸碱可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异。吴茱萸碱同时可引起ACC-M细胞坏死。结论:吴茱萸碱可以诱导细胞凋亡和/或坏死,从而抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖。     

MicroRNA-320a调控唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨microRNA-320a（miR-320a）对唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移能力的调控作用。方法：以唾液腺腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M为实验样品,通过脂质体介导,将miR-320a的拟似物（miR-320a mimics）转染至ACC-M细胞,升高miR-320a的表达水平。采用荧光实时定量RT-PCR检测转染前、后ACC-M中miR-320a的表达变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变,并通过细胞计数试剂盒-8检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测miR-320a对细胞凋亡的影响,Western印迹检测miR-320a的靶基因整合素β3（integrinβ3,ITGB3）的表达变化。应用SPSS13.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。结果：转染miR-320amimics后的ACC-M中miR-320a的表达明显上调（P〈0.001）。ACC-M细胞的侵袭迁移能力显著降低（P〈0.001）,而细胞的增殖和凋亡无显著变化。Western印迹检测结果显示,Integrinβ3在低转移细胞株ACC-2表达阴性,在ACC-M中高表达;升高miR-320a在ACC-M中的表达,Integrinβ3表达明显降低。结论：低表达miR-320a有助于维持ACC的侵袭转移特性,调高其表达水平能有效抑制ACC-M的侵袭迁移能力。miR-320a可能通过调控其靶基因Integrinβ3的表达而发挥作用。     

ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响

目的：探讨ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响。方法：采用免疫组化检测15例腺样囊性癌原发灶和相应淋巴结转移组织中ADAM9、ADAM10蛋白的表达情况;采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M、SACC-LM中ADAM9、ADAM10基因的表达,检测该基因沉默后对肿瘤细胞周期及体外增殖、转移能力的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析及Fisher确切概率检验。结果：ADAM9、ADAM10蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移组织中的表达比在原发灶组织中显著增高（P〈0.05）;ADAM9、ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降（P〈0.05）,肿瘤细胞出现S期阻滞;并且ADAM9、ADAM10基因沉默后,肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降（P〈0.01）。结论：ADAM9和ADAM10基因表达与腺样囊性癌的转移有关。ADAM9、ADAM10基因沉默可改变腺样囊性癌细胞体外增殖能力、侵袭能力等生物学特性。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对腺样囊性癌细胞 RECK 基因表达及细胞侵袭力的影响

目的：探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′deoxycytidine,5-aza-dC）对腺样囊性癌细胞中 RECK基因表达及肿瘤侵袭力的影响。方法：采用甲基化特异性 PCR、实时定量 PCR、Western 印记检测腺样囊性癌细胞中 RECK 基因的甲基化状态及 RECK 基因 mRNA 和蛋白的表达,transwell 体外侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果：RECK 基因甲基化条带仅在 ACC-M细胞中发现,经5-aza-dC 处理后 ACC-M细胞中 RECK 基因甲基化得到逆转,RECK 基因 mRNA 及蛋白的表达显著提升。ACC-M细胞的侵袭力明显降低。结论：5-aza-dC 可逆转腺样囊性癌 ACC-M细胞中 RECK 基因的高甲基化状态并恢复 RECK 基因 mRNA 及蛋白的表达,抑制 ACC-M细胞侵袭力。     

槲皮素对人腺样囊性癌ACC-M细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 观察槲皮素对人腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的作用,探讨槲皮素影响ACC-M细胞凋亡的可能机制。方法 采用CCK-8 法检测不同浓度的槲皮素对ACC-M细胞增殖的抑制作用并计算抑制率,计算IC₅₀;流式细胞术检测 ACC-M细胞凋亡率和细胞周期分布;实时荧光定量RT-PCR检测 ACC-M细胞中Survivin mRNA的表达。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果 槲皮素抑制 ACC-M细胞增殖的作用明显,且呈浓度依赖性,IC₅₀为151.12 μmol/L（P<0.05）;Annexin V/PI 双染法检测显示,槲皮素能够诱导ACC-M细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关（P<0.05）;PI染色法检测显示,槲皮素主要作用于 G2/M 节点,能将细胞特异性地阻滞于 G2/M 期;RT-PCR检测显示,随着药物浓度增加,ACC-M细胞中Survivin mRNA的表达水平均呈不同程度的降低,200 μmol/L 槲皮素可显著抑制Survivin mRNA的表达。结论 槲皮素能够抑制ACC-M细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间-剂量依赖性。槲皮素可能通过下调Survivin的表达水平而发挥抗腺样囊性癌的作用。     

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目的观察Rho激酶抑制剂Y-27632对涎腺腺样囊性癌细胞肺高转移细胞株(ACC-M)生长增殖的影响,探讨Y-27632对涎腺腺样囊性癌可能疗效,以期为治疗涎腺腺样囊性癌提供新思路。方法 2007年10月至2008年2月在浙江大学医学实验室,形态学观察Rho激酶抑制剂Y-27632作用下ACC-M细胞的生长变化,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同药物浓度下ACC-M的增殖情况。结果抑制剂Y-27632作用下ACC-M细胞变成梭形,细胞长轴增加,细胞间连接消失,细胞膜不规则,皱缩不整齐,边界有丝状突起,有倾向凋亡的趋势;MTT比色法检测结果发现,不同浓度Y-27632作用下检测到的ACC-M细胞光密度值均比对照组小,且当药物浓度为10μmol/L时抑制作用有统计学意义(P<0.01)。结论 Rho激酶抑制剂Y-27632在体外实验中对涎腺腺样囊性癌细胞的生长增殖起一定的抑制作用。     

雷帕霉素诱导自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移

目的探讨自噬诱导对舌鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用雷帕霉素(Rap)诱导上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬活性,Western blot检测诱导后Tca8113细胞自噬标记蛋白Beclin1和LC3的表达变化;MTT法检测自噬诱导对细胞增殖的影响;Wound-healing检测诱导后细胞迁移能力改变;SPSS 19.0统计软件进行数据分析。结果 Rap诱导6h即可上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达,24h时LC3-Ⅱ表达最强,自噬活性最高(P<0.05)。与对照组相比,Rap诱导后细胞生长明显抑制(P<0.05),迁移速率减慢。结论上调舌鳞癌细胞自噬活性可以抑制其增殖和迁移。     

醋酸棉酚对人腺样囊性癌ACC-M细胞E-cadherin基因mRNA表达的影响及意义

目的 研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid,GAA）对体外培养的人腺样囊性癌ACC-M细胞增殖及E-cadherin基因mRNA表达的影响,初步探讨GAA的抗肿瘤作用机制。方法 本研究于2013年4—7月在昆明医科大学附属口腔医院（云南省高校口腔医学重点实验室）完成。（1）应用四唑盐比色（MTT）法观察GAA对ACC-M细胞生长的作用。（2）应用实时荧光定量（RFQ-PCR）法检测ACC-M细胞在GAA作用48、72 h后E-cadherin 基因mRNA的表达变化。结果 （1）MTT法检测显示：GAA作用ACC-M细胞24、48和72 h后,细胞的生长受到抑制。（2）RFQ-PCR法检测显示：分别以19、10 μmol/L的GAA作用ACC-M细胞48 、72 h 后,细胞中E-cadherin mRNA的表达水平高于对照组（P＜0.05）。结论 GAA能抑制ACC-M细胞生长,增强E-cadherin基因mRNA表达。     

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目的 研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid,GAA）对体外培养的人腺样囊性癌ACC-M细胞增殖及E-cadherin基因mRNA表达的影响,初步探讨GAA的抗肿瘤作用机制。方法 本研究于2013年4—7月在昆明医科大学附属口腔医院（云南省高校口腔医学重点实验室）完成。（1）应用四唑盐比色（MTT）法观察GAA对ACC-M细胞生长的作用。（2）应用实时荧光定量（RFQ-PCR）法检测ACC-M细胞在GAA作用48、72 h后E-cadherin 基因mRNA的表达变化。结果 （1）MTT法检测显示：GAA作用ACC-M细胞24、48和72 h后,细胞的生长受到抑制。（2）RFQ-PCR法检测显示：分别以19、10 μmol/L的GAA作用ACC-M细胞48 、72 h 后,细胞中E-cadherin mRNA的表达水平高于对照组（P＜0.05）。结论 GAA能抑制ACC-M细胞生长,增强E-cadherin基因mRNA表达。     

NS398��SACC-83ϸ����������ʵ���о�

目的    研究环氧合酶抑制剂NS398对唾液腺腺样囊性癌（SACC）-83细胞的抑制作用。方法    2008年6—12月于中国医科大学中心实验室,用含0、50、100、150、200 μmol／L NS398的培养液体外培养SACC-83细胞24、48、72、96 h后,应用噻唑蓝（MTT）快速比色法,检测NS398对SACC-83细胞的抑制作用;用上述实验确定的最大抑制浓度培养液培养细胞,采用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态。结果    随着作用时间延长和药物浓度增加,NS398对SACC-83细胞的抑制率逐渐增加。NS398在浓度150 μmol／L作用72h后,抑制作用最明显。倒置相差显微镜观察,随着培养时间的增加,试验组（150 μmol／L NS398）贴壁细胞数量明显减少,胞浆开始脱水产生空泡,并与胞膜融合,出现胞膜空泡化,胞核深染,胞质浓缩;透射电镜观察,试验组（150 μmol／L NS398）细胞出现凋亡现象。结论    NS398可抑制SACC-83细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,NS398可能在唾液腺腺样囊性癌治疗中发挥重要作用。     

XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移中的作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原家族中XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌高转移细胞ACC—M中的高表达是否与其转移相关。方法：采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌低、高转移细胞ACC-2、ACC—M中XAGE—1b基因的表达，检测该基因表达改变对肿瘤细胞体外迁移能力以及裸鼠体内肿瘤细胞肺转移能力的影响。实验结果采用SPSS11．5软件包进行单因素方差分析。结果：XAGE—1b基因干扰质粒转染腺样囊性癌细胞后，RT—PCR验证干扰效率显示．XAGE—1b基因表达量显著下降；Boyden小室检测肿瘤细胞体外迁移能力明显下降；在裸鼠体内检测基因干扰后的肿瘤细胞肺转移能力与ACC—M相比也显著下降（P〈0．01）。结论：RNA干扰作用抑制了XAGE—1b基因的表达，体外实验和体内检测中显著影响了肿瘤细胞的迁移黏附以及肺转移能力，初步证实了XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移方面有重要作用。     

姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响

目的体外研究姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响。方法用终浓度为2.5、5、10、15、20mg/L的姜黄素处理SACC-83。应用MTT比色试验,倒置显微镜,Giemsa染色,Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞后流式细胞仪和透射电镜检测和观察SACC-83的生长抑制率和细胞凋亡情况。结果姜黄素对SACC-83的生长抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性（P〈0.01）。用药组细胞明显凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异（P〈0.01）。结论姜黄素具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。     

Inhibition of autophagy augments chemotherapy in human salivary adenoid cystic carcinoma

Although cisplatin (DDP)‐based adjuvant chemotherapy is widely used in the treatment of salivary adenoid cystic carcinoma (SACC), SACCs have developed resistance to cisplatin, resulting in chemotherapy failure. Autophagy serves as a critical adaptive response, which was increased in tumor cells in chemotherapy. However, the function of autophagy is not clear in SACC. In this study, apoptosis induced by DDP in SACC high metastatic cell line (ACC‐M) was revealed using MTT assay, flow cytometry, and caspase‐3 immunoblotting. The autophagy activation induced by DDP treatment was measured by transmission electron microscopy, green fluorescent protein–light chain 3 plasmid transfection LC3 immunoblotting and p62 immunoblotting. 3‐methyladenine (3‐MA) or small interference RNA targeting beclin 1 (beclin 1 siRNA) inhibited autophagy and significantly enhanced DDP‐induced apoptosis. ACC‐M xenografts in nude mice further verified the synergistic effect of DDP and 3‐MA. In conclusion, autophagy activation was caused to protect cancer cells from DDP‐induced apoptosis and autophagy inhibition could be a promising strategy for adjuvant chemotherapy in SACC.     

Survivin基因在三氧化二砷诱导腺样囊性癌-M细胞凋亡中的作用

目的：体外观察三氧化二砷（As2O3）诱导人类腺样囊性癌高转移株（ACC-M）细胞凋亡过程中的作用,同时检测此过程中ACC-M内凋亡抑制基因Survivin表达水平的变化。方法：MTT法检测不同浓度As2O3作用不同时间对ACC-M细胞的抑制效应;流式细胞术观察As2O3诱导各组ACC-M细胞的凋亡率。RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达变化;Western blot检测判定Survivin蛋白水平的表达差异。结果：As2O3可明显抑制ACC-M细胞的生长,其抑制率呈浓度和时间依赖关系,细胞凋亡率也呈相同的趋势。RT-PCR和Western blot检测显示As2O3作用下,ACC-M内Survivin mRNA和蛋白表达明显受抑制,抑制程度也具有时间和剂量依赖性。结论：As2O3可通过促进细胞凋亡的方式使体外培养的ACC-M细胞生长受抑制,而受抑制的ACC-M内Survivin mRNA和蛋白表达均下降,推测Survivin基因在As2O3诱导的ACC-M细胞凋过程中起着重要作用。