WT1基因在白血病中的表达及意义

ＷＴ１基因在白血病中的表达及意义吴晓雄综述汪月增裴雪涛审校Ｗｉｌｍｓ肿瘤基因（Ｗｉｌｍｓ＇ｔｕｍｏｒｇｅｎｅ，ＷＴ１）是最早发现的与Ｗｉｌｍｓ肿瘤的发生、发展有关的基因，其等位基因的功能缺失可导致Ｗｉｌｍｓ肿瘤。ＷＴ１可以抑制胰岛素样生长因子Ⅱ、集落...     

WT1基因表达与白血病

ＷＴ１基因是从Ｗｉｌｍｓ瘤（Ｗｉｌｍｓ ｔｕｍｏｒ）细胞中分离出来的一种能编码含锌指状多肽的抑癌基因。本文就ＷＴ１基因的结构、功能和近年来ＷＴ１基因在白血病中的表达及其与预后关系等方面的研究进行了综述。     

WT1基因与白血病研究现状

WT1是Wilms’瘤抑癌基因,在人类白血病细胞中表达水平很高,对其生长分化有重要作用。本文综述了WT1基因的结构、功能以及与白血病的关系。     

WT1基因与白血病研究现状

ＷＴ１是Ｗｉｌｍｓ’瘤抑癌基因,在人类白血病细胞中表达水平很高,对其生长分化有重要作用。本文综述了ＷＴ１基因的结构,功能以及与白血病的关系。     

急性白血病患者WT1基因的表达及其与预后的关系

WT1基因是对遗传性肾胚胎肿瘤( Wilm s tumor)的分子遗传学进行研究时而发现的 ,研究表明 11p13的基因缺失与 Wilms肿瘤相关。1990年 Call等克隆了此相关基因的 c DNA并命名为Wilms瘤基因 1( WT1)〔1〕。WT1基因已被认为在肿瘤的发生中起一定的作用。近年的研究集中于 WT1基因在白血病发病中的意义 ,但其在急性白血病 ( AL)预后方面的作用研究尚不多见。我们就此进行探讨 ,报告如下。1　对象和方法1.1　研究对象 :患者组选择 1999年9月— 2 0 0 2年 7月收治的住院及门诊AL 者 ,79例中男 34例 ,女 45例 ;年龄4～ 6 9岁 ,平均 37.78岁…     

白血病患者WT1基因表达的研究

目的：探讨WT1基因与白血病发病的关系和临床意义。方法：采用逆转录－巢式聚合酶链反应（RT－巢式PCR）方法检测了K562和HL－60两个白血病细胞系、49例急性白血病（AL）患者、33例慢性髓系白血病（CML）患者和25例正常对照的WT1基因表达。结果：K562和HL－60两个白血病细胞系、29例初治或复发AL患者中有21例、20例完全缓解（CR）期AL中有1例、18例CML急变期中有15例、5例CML加速期中有1例、10例CML慢性期患者中有1例表达WT1基因。WT1基因表达见于所有AL亚型，其相对水平与急性白血病的CR率有相关性。≥1．0的患者CR率低及生存期短。在CML中WT1基因表达表现出明显的阶段性，与慢性粒细胞白血病临床阶段及病情进展有关。结论：WT1基因表达与白血病发生有关，WT1基因高表达的患者CR率低、无病生存期短，可作为判断急性白血病预后和监测微量残留病的一项指标，也可作为CML急变的一项诊断指标。     

WT1基因与白血病靶向治疗

WT1基因编码一种双向转录因子,对人类泌尿生殖系统的发育和wilms’瘤的发生发展有重要意义。WT1基因也参与人类的造血调控,参与造血细胞增殖、分化、凋亡等各个过程及白血病的形成,在多种白血病中均有异常高表达,故被认为是一种新的白血病抗原,用于制备白血病疫苗、表达WT1白血病细胞的体外净化及体内抗原特异性治疗,近年来利用反义RNA技术进行反义基因治疗也有较快发展。WT1成为白血病基因治疗和特异性免疫治疗的新靶点。     

WT1基因表达与白血病

WTl基因是从Wilms瘤(Wilms tumor)细胞中分离出来的一种能编码含锌指状多肽的抑癌基因。本文就WT1基因的结构、功能和近年来WT1基因在白血病中的表达及其与预后关系等方面的研究进行了综述。     

急性白血病患者WT1基因异构体的研究

ＷＴ1基因是Ｗｉｌｍｓ瘤的候选基因。近年来研究发现它在白血病中有异常的高表达 ,提示ＷＴ1与造血系统恶性疾病有密切的关系。为了研究在白血病中ＷＴ1四种异构体相对比例的改变对造血系统疾病发生和预后的意义 ,我们使用ＲＴ ＰＣＲ方法联合核酸扫描定量技术 ,对 4 6例ＷＴ1表达阳性白血病患者骨髓细胞进行了分析研究。对象和方法1　研究对象　 4 6例ＷＴ1基因表达阳性的初治白血病患者的骨髓标本 ,其中急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 8例 ,急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ) 38例 (Ｍ15例、Ｍ2 10例、Ｍ3 13例、Ｍ42例、Ｍ58例 )。临床治疗方案 :…     

白血病细胞WT1基因启动子区DNA甲基化研究

目的：研究白血病细胞WT1启动子区DNA甲基化与其表达的关系。方法：采用RT-PCR技术、硫化PCR结合限制性内切酶技术检测白血病细胞系及正常人外周血单个核细胞WT1基因的表达及其启动子区DNA甲基化水平。结果：正常人外周血单个核细胞及U937细胞不表达WT1基因，而HL-60、K562和KG1细胞高表达WT1基因，HL-60细胞WT1基因无甲基化。结论：WT1基因启动子区DNA甲基化不能抑制其表达，尚存在其他调节WT1基因表达的因素。     

WT1介导的转录调控通路与白血病

WT1基因编码的锌指转录因子能调控下游基因的转录，其中很多靶基因涉及调节细胞周期和增殖分化，而WT1本身也接受其上游基因的调控，如NF-кB和GATA-1等，这样便构成WT1介导的转录调控通路，参与造血系统发育的调控，如果转录因子的表达脱调控以及随之而来的正常基因表达态势受干扰，常会引起造血细胞的增殖，分化及凋亡动态平衡的紊乱，最终导致白血病，本就WT1介导的转录调控通路与白血病的关系作一综述。     

p73基因与白血病

p73基因与经典的抑瘤基因p53高度同源。p73基因的过表达可诱导肿瘤细胞的生长阻滞并诱导其调亡。约1/3的急性淋巴细胞白血病和Burkitt淋巴瘤病人的p73基因由于高甲基化而表达缺失,但急性髓系白血病病人的p73表达水平高于正常白细胞。p73基因在白血病中的作用需要进一步的阐明。     

WT1基因在骨髓增生异常综合征及急性白血病患者中的表达

为了研究WT1基因在骨髓增生异常综合征 (MDS)和急性白血病 (AL)患者中的表达及其与临床预后的关系 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 2 2例MDS和 6 9例AL的WT1mRNA的表达。结果表明 ,WT1mRNA在MDS RA及MDS RAS中低表达 ,阳性率为 10 % (1/10 ) ;在MDS RAEB和MDS RAEB t中高表达 ,阳性率为 91.7% (11/12 ) ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。WT1mRNA在各型急性白血病中均有表达 ,初发和复发急性白血病中WT1mRNA的阳性率 (6 9% )高于缓解患者 (12 .5 % ) (P <0 .0 1)。初发与复发AL的WT1mRNA的相对表达量无差异 ,而MDS RAEB和RAEB t的表达量低于初发AL患者。WT1mRNA阳性的AML患者的化疗缓解率 (4 1% )低于阴性患者 (78% ) ;WT1基因相对表达量≥ 1的AML患者的CR率 (18% )低于 <1的患者 (5 5 % )。结论 :WT1基因在MDS RAEB和MDS RAEB t中的表达明显高于MDS RA和MDS RAS ,动态监测WT1基因的表达可能有助于监测MDS的病情变化。WT1基因表达与否及表达高低与初发AL的预后有关 ;WT1基因是急性髓细胞白血病的一个独立的预后因素。     

白血病细胞检测WT1mRNA及其蛋白产物的价值与意义

目的研究WT1同白血病预后的关系及其作为白血病微小残留病检测指标的可行性及实用性.方法采用逆转录聚合酶联反应及间接免疫荧光方法检测白血病患者及正常人骨髓或外周血单个核细胞WT1mRNA及其蛋白产物.结果 WT1mRNA及其蛋白产物在急性白血病细胞中高表达,初诊急性白血病患者WT1mRNA阳性表达(39例)较阴性表达(12例)治疗完全缓解率(38.5%,83.3%)低,急性白血病化疗完全缓解后WT1mRNA阳性表达与阴性表达无病存活率(15.4%,50.0%)经Log-rank检验有统计学意义.WT1蛋白在急性白血病中的表达率为51.0%,表达部位为细胞核,在白血病阴性对照组及正常对照组中的表达率为0.结论 WT1表达同急性白血病预后呈负相关,其逆转录聚合酶联反应可作为监测白血病微小残留病一项实用而有价值的方法.     

联合检测WT1基因和COX-2基因表达在急性白血病的临床价值

目的 通过观察急性白血病（AL）患者WT1基因（WT1 mRNA）和COX-2基因（COX 2 mRNA）的表达情况,探讨其相关关系及临床检测价值.方法 125例初诊AL患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR（RQ PCR）动态检测WT1mRNA和COX-2 mRNA的表达水平,并分析其与临床参数的相关性.结果 初诊AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA表达水平（中位数157.7和163.2）均显著高于正常对照组（中位数1.65和0.87） （P＜0.01）,且WT1 mRNA与COX-2mRNA表达水平呈相关性（r=0.509,P＜0.05）.初诊AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA的表达水平显著高于缓解组（中位数3.65和4.37）（P＜0.05）;缓解组AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA的表达水平与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;复发组AL患者WT1 mRNA和COX-2 mRNA的表达水平（中位数167.9和178.5）与初诊组的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）.WT1 mRNA表达水平在AL各亚型之间差异有统计学意义（X2=423.567,P＜0.01）,M5WT1 mRNA表达水平最低,M3表达最高.结论 AL患者WT1基因与COX-2基因表达水平存在相关性,联合检测WT1 mRNA和COX-2 mRNA,可作为AL患者疗效评价、监测微小残留病和预后判断的指标,为临床化疗方案个体化提供更可靠的依据.     

正常人骨髓不同细胞群中WT1基因表达及其异构体比例研究

本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋、CD15^＋CD11b^＋、CD33＋CD14^＋、CD20^＋CD5^-和CD20^-CD5^＋细胞群中总WT1、WT1（＋17AA）及WT1（＋KTS）的表达。结果表明：与K562细胞相比,CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋、CD15^＋CD11b^＋和CD33^＋CD14^＋细胞群中均存在WT1基因的低表达,且依次逐渐降低;在CD20^＋CD5^-和CD20^-CD5^＋细胞群中未检测到WT1基因表达。在分化程度较低的CD34^＋CD38^-和CD34^＋CD38^＋细胞群中以＋17AA,＋KTS及WT1（＋/＋）异构体为主,而较成熟的CD15^＋CD11b^＋和CD33＋CD14^＋细胞群中以-17AA、-KTS及WT1（-/-）异构体为主。结论：在正常人骨髓细胞中WT1基因的表达随着细胞分化程度提高而降低,造血细胞可能通过其4种异构体比例的调整而发挥抑制或促进分化的作用。     

Wilms瘤基因WT1表达与急性白血病微小残留病的检测

近年来发现急性髓性白血病（ＡＭＬ）有Ｗｉｌｍｓ瘤抑制基因ＷＴ１的异常表达,且表达水平与预后呈负相关,提示其可作为一种新的白血病标志。为探讨ＷＴ１能否作为急性白血病微小残留病（ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ,ＭＲＤ）的标志,我们采用巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定了ＷＴ１基因的灵敏度,并与肿瘤特异性标志基因进行比较。所有样本ＲＮＡ的质量均用内对照ｃ－ａｂｌ基因证实。以两轮     

WT1基因转染增加白血病细胞凋亡的实验研究

为了探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4凋亡的影响及其分子机制,应用电穿孔的方法将携带WT1基因异构体WTA（-17AA/-KTS）全长cDNA的真核表达载体及其对照质粒pCB6^＋转导白血病细胞株NB4,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株;用MTT、形态学观察、DNA凝胶电泳、An-nexin V结合力测定等方法观察WT1基因异构体表达比例的转变对白血病细胞NB4诱导凋亡的影响;用RT-PCR方法检测细胞中p21、p53、bcl-2、bcl-XL、和c-myc等凋亡相关基因表达的改变.研究结果表明,MTT显示NB4/WTA细胞对As2O3的IC50值较对照组明显降低;经As2O3作用48小时,NB4/WTA细胞Annexin V结合力较对照组细胞升高,出现更为典型的凋亡形态学改变;在DNA凝胶电泳可见更为明显的DNA梯形条带,RT-PCR检测提示NB4/WTA细胞p21、c-myc基因的表达较对照组高,bcl-2表达下降,p53、bcl-XL基因表达无明显改变.结论：增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由＋17AA/＋KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型,能使NB4细胞对As2O3引起的凋亡更为敏感,这些改变可能与p21、c-myc等基因的表达上调和bcl-2基因的表达下调有关.     

WT1基因干扰质粒的构建

目的构建WT1(Wilms’tumor susceptibility gene,WT1)基因siRNA(small interference RNA,siRNA)载体, 为进一步探讨WT1的生物学功能奠定基础。方法根据针对WT1 mRNA的有效的siRNA序列,设计合成两条shRNA(small hair RNA,shRNA)的DNA模板单链,同时模板链两端分别设计不同的两个限制酶切位点。退火形成siRNA载体插入片断。用限制性内切酶将siRNA空载体线性化,T4连接酶将插入片断插入siRNA空质粒中。结果经酶切、PCR及测序鉴定确定构建成功。结论成功构建了WT1的干扰质粒,可对其生物学行为作进一步研究。     

PLK-1在急性白血病细胞中的表达及意义

为了探讨急性白血病细胞中plk-1基因及其蛋白的表达情况和意义，并初步了解PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的分布情况，通过抽取急性白血病患者、骨髓良性增生者及正常人的骨髓或外周血单个核细胞作为研究对象，应用RT-PCR技术及流式细胞术检测plk-1mRNA和PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的表达，用荧光显微镜观察PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的分布。结果表明：急性白血病细胞plk-1在基因水平及蛋白质水平上表达均明显增高；荧光显微镜检查显示细胞分裂间期PLK-1蛋白较高浓度地、均匀地散在分布于急性白血病细胞内，在有丝分裂过程中，姊妹染色单体拉开至细胞两极时PLK-1蛋白主要分布在姊妹染色单体之间。而正常骨髓细胞和良性增生骨髓细胞plk-1在基因水平和蛋白质水平几乎均不表达。结论：PLK-1蛋白对急性白血病细胞的异常增殖可能起重要作用，其表达的高低与恶性程度有关。PLK-1蛋白或其基因有可能作为抗瘤药物新的靶点，并可作为判断急性白血病疗效及预后的有效指标之一。