犬副流感弱毒株的分离与鉴定

目的 分离并鉴定犬副流感弱毒株,供疫苗制备。方法 根据犬副流感的血球吸附特性、细胞２特性以及异种病毒抗血清阻断法分离病毒（简称为ＣＰＩＶ－ＸＮ４病毒）,并对其进行形态学,生物学特性等系统鉴定。结果 病毒分离后其毒力可达１０＾０６ＣＩＤ５０,在电镜下可见较典型的犬副注感病毒形态结构特征,免疫电镜下见到及附在病毒颗粒表征,免疫电镜下见到抗体分子已被吸在病毒表面,在几种细胞上盲传结果ＭＤＣＫ和Ｖｅｒｏ细     

犬腺病毒1型流行毒株的分离与鉴定

目的 分离、鉴定犬腺病毒１流行毒株,方法 将处理过的 肝细胞悬液,感染原代犬胎肾细胞。用血凝试验、中和试验、回归试验以及电镜观察等方法,分离、鉴定。结果 分离出一株犬腺病毒１型流行毒株,命名为ＣＡＶ１ＸＮ３株。结论 该毒株与标准毒标的生物学特性一致。     

犬腺病毒Ⅰ型流行毒株的分离与鉴定

目的分离、鉴定犬腺病毒Ⅰ型流行毒株. 方法将处理过的病犬肝组织悬液,感染原代犬胎肾细胞. 用血凝试验、中和试验、回归试验以及电镜观察等方法,分离、鉴定. 结果分离出一株犬腺病毒Ⅰ型流行毒株,命名为CAV1-XN3株. 结论该毒株与标准毒株的生物学特性一致.     

犬细小病毒弱毒株的分离及疫苗应用

目的 从犬四联弱毒样品中分离获得一株细小病毒（ＣＰＶ）弱毒株,用于投疫苗制备。方法 根据犬副流感的血球吸附特性,细胞培养特性以及异种病, 清阻断法分离病毒,该病毒简称为ＣＰＶ－ＸＮ１株,并对犬细小病毒疫苗的免疫性和动物安全性进行了研究。结果病毒分离后共血疚效坐（ＨＶ）值为１：１０２４～、：４０９６或１０＾７．６ＴＣＩＤ６０;在电镜下可见较典型的犬细小病毒形态结构特征,免疫电镜下见到抗体分子已被吸     

犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定

目的从犬粪便病料中分离和鉴定犬细小病毒（canine parvovirus，CPV）抗原变异株CPV-2a和CPV-2b。方法将疑似犬细小病毒感染的病犬粪便接种猫肾细胞，进行病毒分离、常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定。结果常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定表明，分离得到5株犬细小病毒抗原变异株，其中2株为CPV-2a，3株为CPV-2b。结论本研究分离的5株犬细小病毒为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断试剂奠定基础。     

犬骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定

[目的]探讨分离、培养、纯化和鉴定犬骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）方法,观察MSCs体外生长特征。[方法]自犬髂后上棘抽取骨髓约10ml,1．073g／ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过及时、反复传代对MSCs进行纯化和扩增培养,测定生长曲线,并进行形态学观察。流式细胞仪检测扩增后MSCs细胞周期及表面抗原特性。[结果]MSCs在含10％小牛血清的IMEM中生长性状相对稳定,1、3、5代细胞生长曲线基本一致,增殖速度快。流式细胞仪检测表明MSCs强表达干细胞标记CD44,而不表达造血干细胞特异抗原CD34、CD11a、CD14和HLA-DR。第2代（P2）末MSCs周期显示有82．4％的细胞处于G0／G1期。[结论]密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离、纯化和培养犬骨髓MSCs。     

一起引发食物中毒病原菌的分离鉴定

目的对引起食物中毒的副溶血弧菌进行分离鉴定。方法按照国标GB4789和有关规范对引起食物中毒的海鲜食品和临床病人进行检测。结果从22份临床病人肛拭子标本均分离出血清型为O3：K6的副溶血弧菌,而从其食用的海鲜食品中末分离到副溶血弧菌。结论副溶血弧菌引起食物中毒具有较强的致病性,从病人体内分离出副溶血弧菌,但在所食用剩余食品中未能检出,也许副溶血弧菌在冷冻的海鲜食品中进入了“活的非可培养”状态而难以分离检测出来。     

锯缘青蟹副溶血性弧菌的分离与鉴定

锯缘青蟹(scylla serrata)为是我国重要的食用蟹.近年来,我国的东南沿海海域发生严重病害,造成锯缘青蟹的大量死亡,使我国的水产养殖业蒙受巨大的经济损失.在危害锯缘青蟹的微生物病原中,细菌性病害是最常见的,这也是造成经济损失最严重的病原之一;而在细菌性病原中,副溶血性弧菌(vibvia parahaemolyticus,VP)是主要致病菌之一,该菌已成为首要病原.为了有效地预防和控制VP对锯缘青蟹的危害,首先必须建立与其相关的检查方法,以确定病蟹体内是否存在该病原菌.本文报道相关实验结果.     

小鼠视网膜干细胞的分离与鉴定

目的小鼠视网膜干细胞的分离与鉴定。方法①对胎龄17d昆明小鼠眼睫状体部(CMZ)细胞进行分离与体外培养；②通过免疫荧光方法研究视网膜干细胞的增殖及分化特性。结果①在bFGF作用下，所培养细胞可形成悬浮生长的细胞团，经多次传代，细胞增殖能力未见衰减。BrdU标记结果显示悬浮细胞团主要是由分裂增殖的细胞组成。而且培养细胞可表达神经干细胞的特异性抗原Nestin及胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10。②培养细胞经5％胎牛血清诱导可向成熟细胞分化，分别表达神经元与神经胶质细胞的特异性抗原NSE、GFAP。免疫荧光检测显示分化细胞可分别表达感光细胞、双极细胞以及节细胞的特异性抗原Opsin、PKC及β-tubulin。结论小鼠睫状体部存在视网膜干细胞。     

犬瘟热病毒流行株的驯化与鉴定

目的 驯化并鉴定犬温热病毒苗修选毒株。方法 犬瘟热流行毒株经鸡胚绒毛尿贵膜→ＭＡ１０４→Ｖｅｒｏ→ＭＤＣＫ→ＭＡ１０４上依次连续传１１２代,传代过程中进行蚀斑克隆、扩增以及每代ＴＣＩＤ５０效价测定,驯化获得１株弱毒株（简称ＣＤＶ－ＸＮ１１２）,然后进行电镜观察及抗生、遗传稳定性、神经毒力特试验。结果 分离到地犬瘟热流行毒株,经到９０代时失对犬的致病性,ＴＯＩＤ５０效价达１０＾５．５．ｍｌ＾－１,电     

2005年江苏省麻疹野病毒分离及基因分型

目的:监测2005年在江苏省流行的麻疹病毒野毒株及其基因型.方法:2005年分别在医院门诊疑似麻疹患者和疑似麻疹爆发点的患者中采集咽拭子,接种EB病毒转化的绒猴淋巴母细胞(B95a细胞),获得58株麻疹野病毒.结果:该58株病毒经逆转录-聚合酶链反应和其产物的基因序列分析显示,这58株病毒属于麻疹野病毒第8基因组H1基因型.结论:江苏省流行的麻疹野病毒基因型与国内流行优势基因型相同.     

人副流感病毒广州分离株ZYMgz01全基因组序列测定及分析

目的探讨广州地区副流感病毒的基因组结构和基因型。方法参照GenBank副流感病毒(U51116)全基因组序列设计11对引物,覆盖副流感病毒基因组的全长。以副流感病毒cDNA为模板分段扩增病毒基因组的全长,各片段克隆到T载体上,并进行序列测定和分析。结果人副流感病毒ZYMgz01株全基因组核酸序列为15462bp,提交到GenBank的序列号为EU326526,与3型副流感病毒保守基因同源性为94.0%,具有3型副流感病毒的结构特征。基因组序列同源性比较结果显示,ZHYMgz01株病毒与兰州的LZ22(FJ455842)病毒株的同源性最高,为99.1%;与美国突变病毒株(U51116)同源性为95.1%;与美国病毒株(Z11575)同源性为95.2%;与日本(ABO12132)病毒株的同源性为94.8%,而与加拿大(EU424062)病毒株的同源性为94.8%。系统进化树显示ZHYMgz01病毒株与兰州的LZ22病毒株同属一个进化分支。结论广州地区儿童呼吸道感染的副流感病毒ZHYMgz01全基因组为15462bp,与3型副流感病毒的同源性最高,确定ZHYMgz01是3型副流感病毒。3型副流感病毒系统进化可能与地域差异有一定的关系。     

犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

目的: 制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法: 以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21 后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG) 诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果: 成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1:400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。 结论: 本研究利用原核表达的MVC GST-NP1 融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。     

仙台病毒Tianjin株及其HN／F基因真核表达质粒对人副流感病毒I型的血清中和实验研究

目的：探讨仙台病毒Tianjin株（SeV）及其核酸制备预防人副流感病毒I型（hPIV—1）疫苗的可行性。方法：（1）用sev免疫小鼠3次后取血清,间接ELISA法检测免疫血清抗体效价。（2）将倍比稀释的免疫血清与100TCID~0．1ml的hPIV一1进行中和实验,观察细胞病变（CPE）并计算50％血清中和终点。（3）构建SeV真核表达质粒pVAX1-F、DVAX1-HN,分别单独或联合免疫小鼠,取免疫血清检测对hPIV一1的中和终点。结果：SeV免疫血清抗体的50％中和终点分别为39．8、12．6、16．0、44．7、25．1;质粒免疫血清抗体的中和作用按pVAX1-HN＋pVAX1-F组〉pVAX1-HN组〉DVAX1-F组依次递减。结论：仙台病毒Tianjin株及其HN基因、F基因真核表达质粒能诱导机体产生抗hPIV-1抗体,有可能成为制备预防hPIV-1疫苗的有效毒株。     

苯甲酸阿格列汀中未知杂质的分离与鉴定

通过硅胶柱色谱法、溶剂提取法及制备液相色谱法等分离分析方法,从苯甲酸阿格列汀的大生产制备过程中分离得到4个新的有关物质,并根据其理化性质采用核磁共振光谱法、高分辨质谱法、傅里叶变换红外光谱法等多种波谱鉴定方法对其进行分析确证。确定了从苯甲酸阿格列汀的合成过程各步骤中所产生的4个有关物质的化学结构,将它们命名为杂质L、M、T、V,这4个杂质均为首次发现的新杂质。本研究对于苯甲酸阿格列汀生产过程中的质量控制和生产工艺的优化具有重要意义。     

宁夏2005年部分地区麻疹野病毒分离及基因型分析

目的了解2005年宁夏麻疹流行株基因型特征,为进一步的麻疹防治策略提供科学依据。方法采集宁夏2005年麻疹暴发病例的咽拭子或尿液标本19份,用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a)分离麻疹病毒。使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出分离的麻疹病毒株核蛋白(N)基因C末端676个核苷酸。再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片断构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸同源性分析。结果从19份标本中分离到13株麻疹病毒,均为H1基因型H1a亚型。结论引起2005年宁夏部分地区麻疹暴发流行的野毒株为H1基因型,并以H1a为绝对优势亚型。不同暴发之间存在相同毒株引起的传播链,同一暴发中存在不同毒株的传播。     

1株肠道病毒71型毒株的分离与鉴定

目的 探讨手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的分离与鉴定方法。方法 采集手足口病疑似病例的咽拭子标本1份接种于人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma cell, RD细胞),通过观察病毒的细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)来分析EV71的分离效果。分别利用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹分析(Western Blotting)方法来鉴定EV71病毒特异性核酸和蛋白。扩增EV71VP1区全长基因,对其序列进行同源性比较及遗传进化分析。结果 手足口病疑似病例咽拭子标本接种RD细胞传代至第2代后出现CPE。RT-PCR和Western Blotting检测结果均显示,感染组RD细胞中有EV71病毒特异性条带,暂命名为EV71分离株2016SHYP001。序列分析结果显示,2016SHYP001株病毒的VP1区核苷酸与C型代表株的同源性较高,为93.1%~98.3%;其中与C4a亚型代表株的同源性最高,为98.3%。进化树分析发现本地流行株与深圳地区流行株的亲缘较近。结论 成功分离出一株新的EV71病毒株2016SHYP001,其株型为C4a亚型。