转录因子Foxp3与肿瘤免疫及其调控

Foxp3高表达于CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr),与其分化、发育和免疫调节功能关系密切.较为普遍的观点认为Foxp3是Tr的一个特征性分子标志.而新近的研究提出,Foxp3不仅仅表达于Tr细胞,并有人提出表面分子标志CD127才是调节性T细胞的特异性标志,争论的结果有待进一步证实.近年,Foxp3对Tr的发生、发育及免疫功能的影响已逐渐成为免疫学研究热点,Foxp3与肿瘤免疫调节的关系越来越被广泛关注,机体对Foxp3的不同的调控机制成为学者讨论的焦点,但Foxp3的确切调节机制还有待进一步深入研究.     

转录因子Foxp3在免疫调节中的作用

Foxp3是新近发现的一个转录因子,属于foxhead家族成员,组成性表达于机体的CD4+CD25+T调节细胞(CD4+CD25+Treg),介导CD4+CD25+Treg细胞在胸腺的发育、外周表达及功能维持。Foxp3基因突变或敲除的小鼠,其体内CD4+CD25+Treg细胞数量下降,调节功能缺陷,可诱发严重的自身免疫反应。Foxp3对机体免疫自稳起着决定性作用。     

转录因子Foxp3在子宫内膜异位症局部组织中的表达及意义

目的： 检测Foxp3在子宫内膜异位症组织中的表达,探讨内异症的发病机制。方法: 通过免疫组化染色,观察21 例子宫内膜异位症卵巢巧克力囊肿及同一患者盆腔腹膜中Foxp3的表达,并与10 例正常子宫内膜和10例正常腹膜进行比较。结果: 子宫内膜异位症患者卵巢巧克力囊肿及其盆腔腹膜中均可见到Foxp3阳性细胞表达,且二者Foxp3阳性细胞计数比较差异无显著;正常子宫内膜和正常腹膜中无Foxp3阳性细胞表达。结论: Foxp3启动了调节性T细胞的免疫抑制功能,使盆腔内免疫环境呈免疫耐受状态,当有活性的子宫内膜细胞进入盆腔后没有被免疫系统识别和清除,而是在盆腔内异位处发生侵袭、种植及进一步生长, 这可能是子宫内膜异位症发生的机制之一。     

上调miR-125b靶向Foxp3调控免疫因子表达增强宫颈癌细胞的放射敏感性

目的:探讨miR-125b对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及其可能的下游机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测宫颈癌组织和细胞中miR-125b和Foxp3的表达量。HeLa细胞进行梯度剂量X射线(0、2、4、6 Gy)照射后,RT-qPCR检测...     

Treg细胞中关键转录因子Foxp3相互作用蛋白的鉴定与分析

目的鉴定Treg细胞中Foxp3相互作用蛋白。方法构建包含SBP和Protein G结合肽的Tags的Foxp3 knock-in转基因小鼠,分选Treg细胞,用亲和磁珠法纯化Foxp3相互作用蛋白复合体,质谱测序鉴定复合体蛋白组分并进行蛋白质组学分析和蛋白相互作用的验证。结果流式细胞分选的Treg纯度超过90%;经过亲和磁珠法纯化和质谱分析显示Foxp3有100个以上候选相互作用蛋白伙伴;免疫共沉淀方法初步鉴定部分伙伴蛋白间可相互结合。结论本研究在小鼠体内Treg细胞中初步获得Foxp3候选相互作用蛋白并证实部分蛋白间可相互作用,为这些蛋白对Treg细胞的功能鉴定提供基础。     

转录因子Foxp3和IL-10、TGF-β在小鼠衰老过程中的变化规律

目的:研究衰老进程中各年龄段小鼠外周单个核细胞Foxp3 mRNA表达差异及其与血清白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)的相关性。方法:选取SPF级健康雄性BALB/c小鼠24只,随机等分为2月龄组(青年)、6月龄组(中年)和15月龄组(老年),每组8只。采用流式细胞术检测分析小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+细胞水平,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法检测外周PBMC中Foxp3 mRNA的表达,同时利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中IL-10和TGF-β水平,并分析三者之间及其与免疫衰老之间的相关性。结果:流式细胞术检测提示15月龄组脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+细胞比例较2月龄组明显增高(P0.01),15月龄组外周PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平显著高于2月龄组(P0.01),15月龄组血清中IL-10和TGF-β的含量显著高于2月龄组(P0.01);15月龄组血清中IL-10和TGF-β含量与外周PBMC中Foxp3 mRNA的表达水平无相关性。结论:小鼠衰老过程中,可能存在有CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化增强的可能。在机体衰老进程中Foxp3 mRNA表达上调,抑制性细胞因子IL-10和TGF-β的生成增多,提示Foxp3、IL-10和TGF-β的表达提高可能参与了免疫衰老的发生机制。应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测Foxp3 mRNA表达水平简便、经济、可行。     

84例子宫内膜癌中Foxp3的表达及临床意义

目的：探讨调节性T细胞的表面标志物Foxp3 mRNA及蛋白在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法及实时荧光定量PCR法检测84例子宫内膜癌组织和40例正常子宫内膜组织中Foxp3 mR-NA及蛋白的表达,分析Foxp3在子宫内膜癌组织中的表达与肿瘤组织分化程度和FIGO分期的关系。结果子宫内膜癌组织Foxp3表达明显高于正常子宫内膜组织;Foxp3表达与子宫内膜癌FIGO分期有关,Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌患者Foxp3表达高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0．05)。 Foxp3表达与分化程度的关系在上述两种检测方法中得出不同结论,免疫组化检测提示Foxp3蛋白表达与组织分化等级间存在相关性(rs =0．72,P<0．01),中+低分化组Foxp3+细胞数明显高于高分化组(P<0．01)。而实时荧光定量PCR法检测提示Foxp3 mRNA表达与肿瘤组织学分级无相关性(rs =0．01,P=0．35)。结论 Foxp3在子宫内膜癌患者癌灶中高表达,免疫组化检测的蛋白表达与实时荧光定量PCR检测结果不完全一致,Foxp3可能参与了子宫内膜癌的发生、发展。     

Foxp3在子痫前期患者胎盘的表达变化

目的本文检测Foxp3在子痫前期患者胎盘中的表达,探讨其在子痫前期免疫耐受失衡中的作用。方法选择子痫前期患者30例,正常晚期妊娠患者30例。采用免疫组织化学法检测胎盘调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3的表达。结果胎盘中Foxp3在子痫前期组的表达阳性率为(26.67%)明显低于正常对照组(63.33%)(P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘组织中的Foxp3低于正常孕妇,提示其数量的减少使其免疫抑制功能减弱,母胎免疫耐受失衡,导致子痫前期的发生。     

Foxp3的结构、表达调控及在免疫抑制中的功能研究

Foxp3是Forkhead/winged helix家族的新成员,定位于X染色体上,通过叉头结构域与DNA特定位点结合,调节目的基因的活化与表达.Foxp3特异性表达于胸腺、脾脏和淋巴结等淋巴器官和组织中的CD4+CD25+Treg表面,在诱导CD4+CD25+Treg发育、分化与功能发挥中起重要的作用,它通过调控T...     

小鼠Foxp3基因慢病毒载体构建及其在DC2.4细胞的表达

目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC-FU-Foxp3与pHelper1.0质粒和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,制备携带Foxp3基因的慢病毒Lentivirus-Foxp3。Lentivirus-Foxp3感染体外培养的DC细胞,流式细胞术(FCM)检测感染后的DC细胞Foxp3表达。结果:构建的慢病毒载体pGC-FU-Foxp3经PCR鉴定和测序正确,包装慢病毒Lentivirus-Foxp3滴度为2×108TU/mL。慢病毒Lentivirus-Foxp3感染DC2.4细胞后Foxp3表达明显增加。结论:成功构建了小鼠Foxp3基因的慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-Foxp3能有效感染DC细胞。     

小鼠Lewis肺癌细胞Foxp3的表达对T淋巴细胞增殖的影响及机制

目的:检测小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞中Foxp3基因的表达,研究小鼠LLC细胞中Foxp3过表达对T淋巴细胞的增殖和TGF-β1和IL-10表达的影响,探讨LLC细胞中Foxp3的表达在肿瘤免疫逃逸中的作用及可能机制。方法:分别采用RT-PCR和免疫组化染色法检测LLC细胞中Foxp3的mRNA和蛋白表达。构建pcDNA3.1-Foxp3重组质粒,采用FuGENEHD瞬时转染LLC细胞,实验分3组:LLC组,pcDNA3.1-LLC组及pcDNA3.1-Foxp3-LLC组。RT-PCR和免疫组化方法分别检测转染48小时后Foxp3基因的表达,通过淋巴细胞转化试验检测Foxp3过表达对T淋巴细胞增殖的影响,RT-PCR和ELISA方法分别检测Foxp3过表达对TGF-β1和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌的影响。结果:在LLC细胞中检测到Foxp3mRNA及蛋白的表达;瞬时转染48小时后pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞中Foxp3表达增高,与LLC组和pcDNA3.1-LLC组相比差异显著(P0.01);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞及培养上清对T淋巴细胞增殖的抑制率均明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P0.05);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组TGF-β1、IL-10mRNA和蛋白的表达水平明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P0.05)。结论:LLC细胞表达Foxp3,Foxp3可能通过上调TGF-β1和IL-10的表达来抑制T淋巴细胞的增殖,进而参与肿瘤的免疫逃逸。     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞及Foxp3基因在不同淋巴结转移状态的非小细胞肺癌患者中的表达差异

目的:比较CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3基因在不同淋巴结转移状态的非小细胞肺癌患者外周血及肿瘤微环境中的表达差异。方法:46例初诊、初治的非小细胞肺癌患者根据有无淋巴结转移分为两组,采用流式细胞仪检测两组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例,Real-time PCR检测Foxp3基因的表达,免疫组化法检测肿瘤微环境中Foxp3的表达情况,ELISA法检测外周血及肿瘤组织匀浆中的TGF-β和IFN-γ水平。结果:Foxp3基因在转移淋巴结中的表达明显强于无转移的淋巴结,有淋巴结转移的非小细胞肺癌患者肿瘤微环境中的Foxp3表达明显强于无淋巴结转移的非小细胞肺癌患者,前者肿瘤组织匀浆中的TGF-β水平也明显高于后者,差异均具有显著性。两组患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例、Foxp3基因的表达及TGF-β、IFN-γ水平比较无显著性差异。结论:有淋巴结转移的非小细胞肺癌患者肿瘤微环境中存在Foxp3基因表达增强及TGF-β水平增高的现象,提示该类患者存在较为严重的局部肿瘤免疫抑制状态。     

Lewis肺癌细胞TLR4对Foxp3表达的调控

目的:探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞中TLR4对Foxp3表达的调控作用。方法:选择LPS为配体活化TLR4,采用RT-PCR方法检测LPS在不同浓度(0,1,10μg/ml)和不同时间点(12,24,36,48小时)Foxp3 mRNA的表达量的变化,流式细胞术检测有效浓度LPS 10μg/ml和最佳作用时间点24小时Foxp3蛋白和TLR4蛋白表达量的变化,RT-PCR和流式细胞术检测anti-TLR4/MD2抗体阻断TLR4后再用LPS刺激LLC细胞Foxp3表达量的变化。结果:LPS在10μg/ml浓度作用LLC细胞后可显著上调Foxp3 mRNA的表达量,与未刺激组相比差异显著(P<0.05);LPS最佳作用时间为24小时;LPS在10μg/ml浓度作用LLC细胞24小时后可显著上调Foxp3蛋白和TLR4蛋白的表达量,与对照组相比差异显著(P<0.05);阻断TLR4后再用LPS刺激LLC细胞,Foxp3的表达量较未阻断组明显降低(P<0.05)。结论:LLC细胞TLR4蛋白参与对Foxp3的表达调控,TLR4可能是Foxp3的上游信号分子。     

非小细胞肺癌患者外周血Foxp3+调节性T细胞和Th17的检测与临床意义

目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Foxp3+调节性T细胞(TrFoxp3+)、Th17细胞、TrFoxp3+/Th17及相关细胞因子水平,探讨TrFoxp3+、Th17细胞在肺癌发生发展中的相互作用以及是否存在TrFoxp3+/Th17失衡.方法 采用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测18例健康人、26例NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞占CD4+T细胞的比例,以及转化生长因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表达水平.结果 NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞比例、TrFoxp3+/Th17高于健康对照组(P＜0.05).NSCLC患者外周血TrFoxp3+与Th17细胞成正向直线相关的关系(r=0.81,P＜0.05).不同TNM分期肺癌患者外周血TrFoxp3+/Th17:Ⅳ期肺癌患者高于Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期肺癌患者(P＜0.05).NSCLC患者血清中TGF-β、IL-17、IL-23水平高于健康对照组,TGF-β在晚期组/健康对照组的比值高于早中期组/健康对照组的比值(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞比例及TrFoxp3+/Th17较健康人升高,且晚期患者TrFoxp3+/Th17明显升高,提示NSCLC患者可能存在TrFoxp3+/Th17比例失衡,导致肿瘤患者免疫抑制,促进肿瘤发生、发展,可能与二者的细胞因子调节有关.     

Galectin-3的抗凋亡机制及其在肺癌中的研究

半乳凝素-3(Galectin-3,Gal-3)是糖结合蛋白家族中的一员,能与β-半乳糖苷特异性结合,参与许多生理和病理过程,在调解细胞生长与分化、机体免疫、细胞黏附、炎症反应、细胞凋亡、血管侵袭等诸多方面起着重要的作用,且与肿瘤的侵袭、转移及预后有关.目前,在许多恶性肿瘤中都发现了Galectin-3的表达,如胃癌、结肠癌、乳腺癌、膀胱癌、甲状腺癌.但在不同的肿瘤中,Galectin-3的表达水平不同.在一些肿瘤中,Galectin-3表达增高,而在某些肿瘤中其表达降低,且其亚细胞定位与肿瘤的发生、发展密切相关.     

上调Foxp3抑制卵巢癌细胞Skov3侵袭和迁移及其机制的研究

目的:探讨Foxp3基因对卵巢癌细胞Skov3侵袭与迁移的影响及作用机制。方法:构建Foxp3基因过表达质粒,采用脂质体转染导入Skov3细胞;以空载体转染细胞株为对照,通过细胞增殖、侵袭、RT-PCR和Western blot实验,观察Skov3细胞Foxp3基因的表达情况,以及过表达Foxp3后细胞的侵袭与转移能力变化,检测MMP-2以及MMP-9基因表达变化。结果:导入过表达Foxp3质粒后,Skov3细胞的Foxp3表达显著升高;与空载体相比,过表达Foxp3基因显著抑制Skov3细胞的侵袭和迁移能力,并显著降低MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结论:上调Fox P3基因表达能通过下调MMP-2和MMP-9基因表达抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移行为,为深入研究Foxp3基因在体内的抑瘤作用和卵巢癌的基因治疗提供实验依据。     

肺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞的格局变化及意义

目的：研究肺癌患者外周血（PBMC）及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的比例改变，探讨其在抗肿瘤免疫中的调节作用。方法：分离肺癌患者PBMC及TIL，FACS分析CD4^＋／CD8^＋T细胞的比值及CD4^＋ CD25^highT细胞占CD4^＋T细胞的比例。Real-time PCR检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在PBMC及TIL中的表达。结果：肺癌患者PBMC及TIL中CD4^＋／CD8^＋比值降低；而CD4^＋ CD25^high T细胞在CD4^＋T细胞中所占比例升高；Foxp3基因仅在TIL中高表达，而在PBMC中低或不表达，表明肿瘤局部的CD4^＋ CD25^high T细胞主要是CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋ Treg。结合临床资料分析显示Treg在肺腺癌比例较高。结论：CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋ Treg在肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中明显升高，可能与其通过细胞与细胞间接触抑制CD8^＋T细胞的杀伤效应，最终发挥免疫抑制效应相关。     

表达Foxp3的调节性T细胞在类风湿关节炎发病中的意义

目的：研究表达Foxp3的调节性T细胞在类风湿关节炎（RA）发病中的意义及其与类风湿关节炎临床特征的相关性。方法：提取外周血总RNA，并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法对RA治疗组（n=25）、RA未治疗组（n=25）及健康对照组（n=30）外周血Foxp3 mRNA含量进行检测，并研究其与RA患者病情活动程度、抗环瓜氨酸（CCP）抗体、C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）及类风湿因子（RF）的关系。结果：RA患者的Foxp3 mRNA含量明显低于正常对照组（P〈0．01）；RA未治疗组Foxp3表达水平明显低于RA治疗组（P〈0．01）。RA患者Foxp3表达水平与DAS28评分、抗CCP抗体及ESR水平呈明显负相关（P〈0．05），而与CRP及RF无明显相关性。结论：RA患者存在表达Foxp3的调节性T细胞数量减少和／或功能降低，这种调节性T细胞亚群的异常可能参与了RA的发病和病变进展。