肝苏对CCl4肝纤维化大鼠氧化应激和胶原表达的影响术

前期体外实验发现肝苏具有肝细胞保护、抗氧化、抗肝纤维化作用。目的：探讨肝苏对实验性大鼠肝纤维化的防治作用。方法：以四氯化碳（CCI。）诱导大鼠肝纤维化模型。63只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为正常对照组（7只）、肝纤维化模型组（14只）、低剂量肝苏干预组（1g／kg,14只）、中剂量肝苏干预组（2g／kg,14只）、高剂量肝苏干预组（4g/kg,14只）。检测各组大鼠血清肝生化指标和透明质酸（HA）水平以及肝组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性．HE和Masson染色观察肝组织纤维化程度,免疫组化染色检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标记d．平滑肌肌动蛋白（0I-SMA）以及I型、Ⅲ型胶原含量。结果：大鼠肝纤维化模型建立成功。各剂量肝苏干预组血清AIJT、AST、ALP、HA水平较模型组不同程度地下降;肝组织MDA含量较模型组下降,高、中剂量组差异显著,但SOD活性无明显变化：肝组织纤维化程度较模型组改善．尤以高剂量组为著;肝组织a-SMA、I型、Ⅲ型胶原含量较模型组减少,前两者减少更为明显。结论：肝苏能减轻实验性大鼠肝纤维化的肝细胞损伤,降低肝组织MDA含量,抑制HSC活化和肝内胶原合成,具有抗氧化和抗纤维化作用。     

氧化应激在肝纤维化发生发展中的作用

肝纤维化是一种创伤愈合反应,它是由各种致病因素所致的慢性肝损伤后的纤维结缔组织沉积,若不及时治疗,会进展为肝硬化甚至肝癌,危害生命。肝星状细胞激活后转化为肌成纤维细胞进而分泌大量的细胞外基质是肝纤维化最重要的病理特征。越来越多的证据表明,氧化应激在肝纤维化的发生发展过程中发挥着重要作用,在各种疾病所致的肝纤维化过程中均有不同程度的氧化应激参与。多数情况下,氧化应激是与其他因素相互影响共同参与肝纤维化这一病理生理过程。因此,就氧化应激对肝纤维化的影响及其与其他因素如炎症、凋亡、自噬等相互作用共同影响肝纤维化的最新进展进行阐述。     

热休克蛋白B1对大鼠心肌细胞氧化应激性损伤的作用

目的探讨线粒体在热休克蛋白 B1(HSPB1)抗氧化应激诱导的大鼠心肌细胞株 H9c2损伤中的作用。方法以培养的稳定高表达 HSPB1 H9c2(HSPB1细胞)和空载体转染的 H9c2(对照细胞)为模型,0～1000/μmol/L H_2O_2刺激2h,观察细胞形态学、线粒体内膜跨膜电位、内源性活性氧自由基(ROS)水平。结果 (1)HSPB1高表达显著减轻 H_2O_2诱导的细胞形态学的损伤变化;(2)HSPB1高表达显著减轻 H_2O_2诱导的线粒体跨膜电位丧失:0、75、150、300、500、1000μmol/LH_2O_2刺激后,HSPB1和对照细胞的跨膜电位分别为10.0±0.11和7.01±0.26,9.11±0.17和6.05±0.19,7.69±0.28和5.14±0.28,6.95±0.13和4.66±0.11,6.61±0.20和1.85±0.35,6.60±0.05和1.19±0.01,各组差异均有统计学意义(P<0.01);(3)HSPB1和对照细胞在0、75、150、300、500、1000μmol/L H_2O_2诱导后,内源性 ROS 水平分别为5527±248和5964±387、6719±336和8528±411、6469+160和7795±136、7042±12和7591±203、6148±208和6911±136、5468±546和6822±371,除0 μmol/L 外,其他各组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HSPB1高表达显著保护了大鼠心肌细胞因氧化应激诱导的形态学变化,这可能与稳定线粒体膜电位和抑制线粒体产生的 ROS 有关。     

硒和维生素E对大鼠的抗氧化作用

目的研究硒和维生素E(VE)在抗氧化损伤过程中的单独及联合作用。方法80只健康雄性Wistar大鼠,按体质量随机分为4组(每组20只):低硒低VE组、低硒补VE组、补硒低VE组、补硒补VE组。饲养3个月后,乙醚麻醉活杀,采腹主动脉血,离心制备血浆,测定各组大鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平。结果①与低硒组比较(不考虑VE),补硒组SOD、GSH-Px、T-AOC活性高于低硒组,而补硒组MDA、ROS水平低于低硒组,差异均有统计学意义(P<0.01);与低VE组比较(不考虑硒),补VE组SOD、T-AOC活性高于低VE组,而GSH-Px、MDA水平低于低VE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。②在对SOD、GSH-Px、T-AOC活性及MDA、ROS水平影响方面,硒和VE的主效应分别为:23.05、6.75 kU/L;350.21、-20.73μmol/L;1.99、1.67 kU/L;-0.89、-0.78μmol/L;-199.71、-17.43 kU/L。③硒与VE的协同作用在提高SOD、GSH-Px活性方面比较明显(P<0.05)。结论补充硒和VE能够增强机体抗氧化能力,防止脂质过氧化损伤。但二者的作用强度不同,在补硒0.25 mg/L和补VE 0.2/kg条件下,硒的抗氧化作用明显高于VE,并且硒和VE在提高抗氧化能力方面有明显协同作用。     

尿毒清颗粒在糖尿病肾病中抗氧化应激作用的观察

目的观察尿毒清颗粒在治疗糖尿病肾病中的抗氧化应激作用。方法将50例糖尿病肾病患者随机分成对照组和尿毒清组,对照组给予降糖、降压等治疗,尿毒清组在对照组治疗基础上加用尿毒清颗粒。观察两组患者治疗前后血糖、血脂、肾功能、24 h尿蛋白以及血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）水平。结果 12周后两组血糖、血脂、肾功能、24 h尿蛋白均较治疗前好转（P〈0.05）;与治疗前相比,尿毒清组患者血清T-SOD活性升高,MDA含量下降（P〈0.05）。结论尿毒清颗粒可改善糖尿病肾病患者的氧化应激状态。     

肝宁方对肝硬化大鼠氧化损伤的保护作用

[目的]探讨肝宁方对肝硬化大鼠氧化损伤的保护作用。[方法]采用复合因素法制作肝硬化动物模型,60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、肝宁方治疗组,每组20只。检测治疗前后大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),肝功能,肝组织病理观察。[结果]治疗组与模型组相比,MDA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)显著降低(P<0.01或<0.05);GSH、SOD、CAT、GSH-Px、清蛋白(Alb)显著升高(P<0.01或<0.05);肝组织结构有所改善。[结论]肝宁方可以减轻肝硬化大鼠氧化损伤的程度,增强机体抗氧化损伤能力。     

维药小茴香抗肝纤维化作用及对TGF-β/smad信号转导通路的影响

目的探讨小茴香提取物抗肝纤维化的作用及其对TGF-β/smad信号转导通路和肝星状细胞活化的影响。方法选择44只SD大鼠给予40%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液4 ml/(kg·体重)皮下注射5周制备肝纤维化模型,成模后随机分成治疗组和模型对照组,同时取6只正常大鼠做空白对照。治疗组给予小茴香提取物灌胃,模型对照组给予生理盐水灌胃,4周末处死大鼠检测血清ALT、AST、HA、LN,肝石蜡切片行Masson染色和抗α平滑肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β受体Ⅰ型(TGF-βRⅠ)、TGF-β1免疫组织化学染色,反转录实时荧光定量PCR分析肝组织TGF-β1、smad2 mRNA相对内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的表达量。结果小茴香提取物治疗组血清ALT、AST、HA水平,肝组织内胶原纤维含量、α-SMA、TGF-βRⅠ、TGF-β1表达以及TGF-β1、smad2 mRNA相对表达量均明显低于模型对照组。结论小茴香提取物可通过抑制TGF-β/smad信号转导通路抑制肝星状细胞活化,从而减轻大鼠肝纤维化。     

异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞增殖和氧应激的影响

目的探讨异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和氧应激的影响。方法通过绘制细胞生长曲线和四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的异甘草酸镁对原代HSC和HSC株增殖的影响,并同时观察其形态变化。通过检测次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)作用于以不同浓度异甘草酸镁培养的HSC:24 h后上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,观察异甘草酸镁对HSC氧应激的影响。结果同对照组比较,一定浓度范围的异甘草酸镁对HSC的增殖具有显著的抑制作用。在Fe-NTA诱导的氧应激中,一定浓度范围的异甘草酸镁可有效提高HSC的 SOD活性和降低MDA含量。结论异甘草酸镁对HSC的增殖具有明显的抑制作用,并且对Fe-NTA诱导的氧应激具有保护作用。     

氧应激对大鼠肝星状细胞增殖的影响及还原型谷胱甘肽的抗氧化作用

目的:探讨氧应激对肝星状细胞增殖的影响及还原型谷胱甘肽的抗氧化作用.方法:分别用不同浓度的次氮基三乙酸铁(Fe-NTa)培养大鼠肝星状细胞,在6,12,24和48h用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测氧应激对肝星状细胞增殖的影响,检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;并用不同浓度的还原型谷胱甘肽与Fe-NTa共同培养细胞,再检测SOD活性.结果:Fe-NTa作用12h与同一时间点的空白对照组比较,500和1000μmol/L组细胞增殖明显增多(A:0.369±0.124,0.485±0.101vs0.285±0.044,P<0.01),作用24和48h各浓度组与同一时间点的空白对照组比较差异显著(P<0.01).无Fe-NTa干预的空白对照组12,24和48h与同样处理的6h组比较,细胞增殖明显增多(A:0.285±0.044,0.253±0.033,0.278±0.037vs0.111±0.005,P<0.01),随着Fe-NTa剂量的增加,作用12,24和48h与同样处理的6h组比较,细胞增殖亦明显增多(P<0.01).200和500μmol/LFe-NTa组与对照组比较,SOD活力明显降低(156.95±21.17,100.92±10.02μkat/Lvs197.74±17.59μkat/L,P<0.01);MDA含量明显升高(1123±217,1549±182mmol/Lvs580±332mmol/L,P<0.01).预先加入GSH的各组与模型组(200μmol/LFe-NTa)比较,SOD活力明显升高(5.42±0.58,6.67±0.18,8.75±0.58μkat/Lvs2.25±0.35μkat/L,P<0.01).结论:氧应激促进HSC增殖有剂量和时间依赖性;且可导致脂质过氧化损伤,还原型谷胱甘肽有抗氧化作用,可对抗脂质过氧化损伤.     

茶多酚对饮茶型氟中毒大鼠关节软骨氧化损伤的保护作用

目的 探讨茶多酚对饮茶型氟中毒大鼠关节软骨的氧化应激损伤的保护作用.方法 120只雄性Wistar大鼠按体质量随机分为6组:对照组、加氟组、氟+茶多酚组、氟+铝组、氟+铝+茶多酚组和砖茶组.加氟组每日饮用含氟(F-)100.00 mg/L的氟化钠(NaF)水溶液;氟+茶多酚组每日饮用含F-100 mg/L、茶多酚10.0 g/L的水溶液;氟+铝组每日饮用含F-100.00 mg/L、铝(Al3+)200.00 mg/L的水溶液;氟+铝+茶多酚组同时饮用含有上述3种物质的水溶液:砖茶组饮用砖茶沏制而成的砖茶水(F- 100.00 mg/L、Al3+215.00mg/L、9.2 g/L);对照组饮用自来水(F- 0.33 mg/L).连续饲养3个月,处死动物,检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、戊二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)的水平;RT-PCR和免疫组化法检测关节软骨中诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA及蛋白表达.结果 氟 +铝+茶多酚组SOD水平[(664.009±29.589)kU/L]与加氟组、氟+销组[(625.328±27.199)、(652.282±13.926)kU/L]比较有升高趋势,但是差异无统计学意义(P均>0.05);氟+茶多酚组、氟+铝+茶多酚组、砖茶组T-AOC水平[(10.874±0.721)、(11.871±0.941)、(10.380±2.747)kU/L]与加氟组、氟+铝组[(8.849±1.887)(8.210±1.740)kU/L]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);氟+铝+茶多酚组血清中MDA水平[(3.235±0.446)μmol/L]与加氟组、氟+铝组[(3.889±0.387)、(4.580±0.474)μmol/L]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);氟+茶多酚组、氟+铝+茶多酚组、砖茶组血清中NO水平[(23.278±2.386),(20.643±2.623)、(24.367±6.072)μmol/L]与加氟组、氟+铝组[(32μ962±8.268)、(34.909±6.288)μmol/L]比较,差异有统计学意义(P均<0.05):加氟组、氟+销组、氟+茶多酚组、氟+铝+茶多酚组、砖茶组血清IL-1β水平分别为(4.728±0.297)、(4.412±0.229)、(4.432±0.285)、(4.516±0.351)、(4.614±0.2270)ng/L,组间比较,差异无统计学意义(F=2.314,P>0.05);氟+铝+茶多酚组、砖茶组IL-6水平[(7.231±0.596)、(7.325±0.290)ng/L]与氟+铝组[(8.256±0.635)ng/L]比较,差异有统计学意义(P均<0.05).氟+茶多酚组、氟+铝+茶多酚组、砖茶组iNOS mRNA相对表达量(0.482±0.021、0.447±0.021、0.491±0.022)与加氟组、氟+铝组(0.562±0.025、0.591±0.020)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);对照组iNOS蛋白表达阳性细胞主要分布在关节表层,各实验组iNOS阳性细胞在关节面表层、中层均有分布.结论 茶多酚能通过清除氧自由基、提高机体总抗氧化能力、减少脂质过氧化产物等抗氧化作用减轻饮茶型氟中毒引起的大鼠氧化应激损伤,对饮茶型氟中毒有一定的保护作用.     

复方汉防己冲剂抗肝纤维化的实验研究

我们应用复方汉防己冲剂对Wistar大鼠CCl4造成肝纤维化动物模型进行疗效研究，现将研究结果报道如下。[第一段]     

原肌球蛋白1在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞中的动态表达及其意义

目的 观察原肌球蛋白1 (TPMl)在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞(HSC)中的动态表达.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(6只)和模型组(24只).二甲基亚硝胺腹腔注射建立大鼠肝纤维化模型,于第2、4、6、8周(每组各6只)门静脉采血及取肝组织标本; HSC-T6细胞设对照组及刺激组,刺激组以5 ng/ml转化生长因子β 1(TGF β 1)作用48h.苏木素-伊红和Masson染色观察肝组织病理变化,RT-PCR、免疫组织化学和Western blot检测组织与细胞中TPMl,TGF β1及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白的表达,以及TPMl在肝组织中的定位.两样本均数比较采用独立样本t检验;相关性采用Pearson直线相关分析.结果 成功建立肝纤维化模型,TPMl在正常肝组织中低表达于汇管区血管内皮上,在模型组TPMl强表达于增生的肝纤维间隔,TPMl及α-SMA的mRNA及蛋白的表达在肝纤维化过程中均逐渐升高,6周时高于其他各组,8周时下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);TGF β 1先升高,4周时高于其他各组,6周时下降(P＜0.05);相关性分析表明TPMl与o-SMA和TGF β 1的表达均呈正相关(rs=0.688和rs=0.692,P＜0.01); HSC-T6细胞中,TGF β 1刺激组TPM1及α- SMA的mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TPMl参与了肝纤维化的发生和发展过程,有望成为肝纤维化诊断与治疗的新靶点.     

益肠内营养联合益生菌对非酒精性肝病肝纤维化的治疗效果及临床应用价值

目的 探讨肠内营养联合益生菌对非酒精性肝病肝纤维化的治疗效果及临床应用价值.方法 回顾性选取2018年1月至2020年1月西南医科大学附属医院收治的非酒精性肝病肝纤维化患者80例,分为对照组和干预组各40例,其中对照组给予常规治疗,干预组在常规治疗的基础上予以肠内营养联合肠道益生菌治疗,观察并记录治疗前、治疗后4周两组...     

重视非编码RNA调控肝纤维化的机制研究

非编码RNA是在人类基因组转录产物中不编码蛋白质的RNA分子,包括微小RNA和长链非编码RNA等。近年来,诸多非编码RNA在肝纤维化发生发展中的作用逐渐被揭示。重视非编码RNA调控肝纤维化的机制研究,尤其是筛选在肝纤维化进程中发挥重要作用的非编码RNA,探讨其对肝星状细胞增殖与活化相关通路的调控作用,并研究不同非编码RNA之间的＂crosstalk＂网络联系,将为肝纤维化发病机制研究提供新的思路。     

血清肝纤维化指标与临床及病理的关系

目的 了解血清肝纤维化指标与临床及病理的关系。方法 对１９０例各种肝炎患者血清进行透明质酸酶,板层素,ＩＮ型胶原（ＩＶ－Ｃ）,Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）测定,部分病例进行肝活检。结果 血清ＨＡ,ＬＮ,ＩＶ－Ｃ,ＰＣⅢ水平随着肝炎疾病程度的加重而升高。ＨＡ,ＬＮ,ＩＶ－Ｃ,ＰＣⅢ在病理不同阶段变化不同。结论 肝纤维化指标可用于慢性肝炎病情严重程度的判断,且ＨＡ,ＬＮ较早反映炎症活动度,而ＰＣⅢ则较反映纤维     

实时组织弹性成像定量评价大鼠肝纤维化

目的 分析应用实时组织弹性成像技术定量评价大鼠肝纤维化的可行性.方法 应用二甲基亚硝胺对70只Wistar大鼠以50mg/kg的剂量一次性腹膜腔注射,复制大鼠肝纤维化模型作为实验组,10只大鼠腹膜腔一次性注射同等量等渗盐水作为对照组.造模后于第5、7、10、14、21、28天分别随机从实验组中取9～10只、对照组中取1～2只大鼠进行超声弹性检查,记录蓝色区域百分比(％AREA)和肝纤维化指数(LF index).随后处死大鼠,取其肝脏行病理纤维化分期及炎症坏死程度分级.分析弹性特征参数与病理纤维化分期及炎症坏死程度的关系.计量资料(偏态)用中位数(四分位间距)表示;采用Spearman相关分析检验LF index、％AREA与肝纤维化病理分级间的相关性,采用多组间秩和检验检测不同肝纤维化组间的LF index、％AREA的差别并用最小显著差异法进一步行两两比较,对LF index和％AREA的诊断效率行受试者工作特征(ROC)曲线分析.结果 58只大鼠造模成功,其中肝纤维化分级为S1、S2、S3、S4的各有9、13、14、12只,伴或不伴有轻度炎症坏死,其余10只大鼠肝脏发生严重炎症坏死而无纤维化.LF index值和％AREA值均随着肝纤维化程度的增加而增大,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05);Lfindex值、％AREA值与肝纤维化病理分期均具有一定相关性(r=0.643,P=0.000和r=0.662,P=0.000).应用LF index和％AREA诊断肝纤维化S1或更高分级纤维化,其ROC曲线下面积分别为0.943和0.948;用于诊断S2或更高分级纤维化,ROC曲线下面积分别为0.890和0.883;用于诊断S3或更高分级纤维化,ROC曲线下面积分别为0.743和0.772;用于诊断S4,ROC曲线下面积分别为0.821和0.842.10只S0伴严重炎症坏死的大鼠与S0无炎症坏死大鼠的Lfindex及％AREA差异均有统计学意义(p=0.005和P=0.017).结论 实时组织弹性成像技术可定量诊断大鼠肝纤维化,但严重的炎症坏死会影响其准确性.     

Pegylated interferon-alpha plus taurine in treatment of rat liver fibrosis

AIM: To investigate the antif ibrotic effects of peginterferon- alpha 2b and taurine on oxidative stress markers and hepatocellular apoptosis. METHODS: Sixty rats with CCl4-induced liver fibrosis were divided into 4 groups (n = 15). Group 1 was left for spontaneous recovery (SR). Groups 2-4 received peginterferon-alpha 2b, taurine, and their combination, respectively, for four weeks. Histological f ibrosis scores, histomorphometric analysis, tissue hydroxyproline, tissue MDA, GPx and SOD activities were determined. Activated stellate cells and hepatocellular apoptosis were also evaluated. RESULTS: The degree of f ibrosis decreased in all treatment groups compared to spontaneous recovery group. Taurine alone and in combination with peginterferon-alpha 2b reduced oxidative stress markers, but peginterferon-alpha 2b alone did not. Apoptotic hepatocytes and activated stellate cells were higher in groups 2-4 than in group 1. Combined taurine and peginterferon-alpha 2b further reduced fibrosis and increased activated stellate cell apoptosis, but could not improve oxidative stress more than taurine alone.CONCLUSION: Peginterferon-alpha 2b exerts anti- f ibrotic effects on rat liver fibrosis. It seems ineffective against oxidative stress in vivo. Peginterferon-alpha 2b in combination with taurine seems to be an antif ibrotic strategy.     

超声定量诊断大鼠肝纤维化的研究

目的 探讨超声定量诊断大鼠肝纤维化的价值.方法 收集正常或肝纤维化大鼠共90只的标准化声像图,观测肝包膜厚度并提取声像图纹理的13个灰度共生矩阵参数(熵、对比、方差、均值和、方差和、和熵、方差差、差熵及相关信息2递增、相关信息1、角二阶矩、相关及逆差矩)与肝纤维化病理学诊断结果比较,进行逐步判别分析建立判别大鼠肝纤维化程度的超声定量模型,用交互检验评价模型的效率.结果 肝包膜厚度及其他13个指标与肝纤维化病理学分期均具有相关性(r值依次为0.817、0.894、0.808、0.844、0.828、0.795、0.864、0.725、0.821、0.848、-0.743、-0.909、-0.438、-0.855,P值均＜0.05),14个指标在病理学分期间的差异均具有统计学意义(F值分别为43.12、60.55、50.70、43.65、45.68、23.63、56.60、21.48、46.19、24.66、39.52、75.74、15.37、63.98,P值均＜0.05).交互检验结果显示建立于超声定量指标基础上的判别模型对大鼠肝纤维化S0、S1、S2、S3和S4分期的准确率分别为83.3％、84.2％、70.0％、50.0％和88.2％,73.3％的大鼠能够被准确分期;对无纤维化组(S0),轻度纤维化组(S1),中重度纤维化组(S2及S3)和早期肝硬化组(S4)分组的准确率分别为91.7%、84.2％、69.0％和88.2％,78.9％的大鼠能够被准确分组.结论 超声检查结合声像图的纹理分析对定量诊断大鼠肝纤维化具有较高的准确性.