碘化钠对人甲状腺细胞IL-6、IFN-γ和TNF-α基因表达的影响

本研究以 10 4 M碘化钠 (NaI)刺激单层培养的人Graves病 (GD )甲状腺滤泡上皮细胞 (TEC ) ,采用定性及半定量PCR技术检测刺激前后白介素 6 (IL 6 )、γ 干扰素 (IFN γ )和肿瘤坏死因子 α(TNF α )在细胞中的表达水平。结果表明 :(1) 3例GD组织均含有IL 6及IFN γmRNA ,2例检测到TNF α基因表达 ;(2 )基础状态下 ,3例TEC均表达IL 6基因 ,2例表达TNF α ,而所有样本均无IFN γmRNA ;(3)NaI不能诱导TEC产生IFN γmRNA ,对IL 6mRNA的表达亦无明显影响 ;(4 ) 1例TNF α阴性的TEC样本 ,经NaI刺激后 ,可表达mRNA ,2例原含有TNF α的TEC经刺激后 ,其mRNA的表达水平显著增加。提示碘可通过诱导或增强TEC表达TNF α ,导致自身免疫性甲状腺疾病的发生与发展。     

TNF-α通过死亡受体途径促进IFN-γ诱导NIT-1细胞凋亡

目的：探讨TNF-α和IFN-γ对小鼠胰岛β细胞株NIT-1细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法：用MTT法检测TNF-α和IFN-γ单独或联合作用对NIT-1细胞活力的影响,倒置显微镜观察NIT-1细胞形态变化,Hoechst 33258荧光染色后激光共聚焦显微镜观察细胞核形态的变化,Western blot技术检测凋亡相关蛋白Caspase-8,-3和PARP的活化。结果：TNF-α联合IFN-γ处理明显抑制了NIT-1细胞的活力,诱导了细胞的凋亡,促进了凋亡蛋白Caspase-8,-3和PARP的活性。结论：TNF-α通过细胞凋亡的死亡受体途径信号传递促进了IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡。     

Graves′病患者IL-6、TNF-α、IFN-γ水平治疗前后的变化及其临床意义

对Graves′病患者, 用放射免疫分析法(RIA)测定了IL-6和TNF-α, 用双抗体夹心ELISA法测定了IFN-γ.Graves′病患者的IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均高于对照者.治疗后, IL-6水平降至正常, 而TNF-α、IFN-γ水平仍高于对照者.提示: IL-6水平与病情变化相平行, 而TNF-α、IFN-γ水平仍较高.     

Graves′病患者IL-6、TNF-α、IFN-γ水平治疗前后的变化及其临床意义

对Graves′病患者, 用放射免疫分析法(RIA)测定了IL-6和TNF-α, 用双抗体夹心ELISA法测定了IFN-γ.Graves′病患者的IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均高于对照者.治疗后, IL-6水平降至正常, 而TNF-α、IFN-γ水平仍高于对照者.提示: IL-6水平与病情变化相平行, 而TNF-α、IFN-γ水平仍较高.     

IFN-α磷酸化STAT1和STAT4诱导人NK细胞产生IFN-γ并增强其杀伤活性

目的研究IFN-α对CD56+NK细胞的细胞因子分泌、杀伤功能和细胞内信号传导的作用。方法分离健康人PBMC分别与培养液、IFN-α和IL-12培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析IFN-α诱导IFN-γ产生的细胞亚群以及该细胞亚群对肿瘤细胞的杀伤作用和信号传导机制。结果经IFN-α刺激后,PBMC能产生低剂量的IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,IFN-α诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。IFN-α促进NK细胞的杀伤功能。促进STAT1和STAT4磷酸化。结论 IFN-α通过磷酸化STAT1和STAT4,增加NK细胞IFN-γ分泌和增强杀伤功能。     

棕榈酸诱导胰岛素瘤细胞MIN6细胞凋亡

目的探讨蛋白激酶B及其磷酸化在棕榈酸诱导的胰岛素瘤细胞MIN6凋亡中的作用。方法胰岛素瘤细胞MIN6分别在含有不同棕榈酸浓度(0～0.5 mmol/L)的DMEM高糖培养基中孵育,培养基中加或不加PI3K/PKB的阻断剂LY294002;TUNEL法观察凋亡并计数凋亡率;透射电镜观察MIN6细胞超微结构;Western blot检测蛋白激酶B(PKB)及其磷酸化蛋白p-PKB(Ser473)的表达;RT-PCR法检测BAX、BCL-2mRNA的表达。结果MIN6细胞凋亡随着培养基中棕榈酸浓度的增加而增加,LY294002可增强其凋亡程度;棕榈酸抑制MIN6细胞的PKB在473位丝氨酸位点的磷酸化,抑制BCL-2mRNA的表达并促进BAXmRNA的表达。结论棕榈酸可能通过抑制PKB磷酸化的激活而诱导糖尿病时胰岛β细胞的凋亡。     

IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究

目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制。方法:IFN-α、IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后,采用MTT比色法检测细胞的增殖,用光镜观察、NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化,用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia,PML)蛋白的表达。结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖;IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著;但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用,二者之间均无统计学意义(P>0.05)。两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化;二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著,但IFN-γ ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α ATRA组(P<0.05)。两种IFN都能诱导PML蛋白的表达。结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合,可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关。     

TNF-α和IFN-γ刺激的人脐静脉内皮细胞上IgG受体的表达

目的:检测IgG受体(FcγR)在炎症细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上的表达。方法:采用ELISA、免疫组化染色法、免疫荧光法和RT-PCR等方法,检测FcγRII及其表达。结果:未经细胞因子刺激的正常HU-VEC可表达低水平的FcγRIIa;经2×105U/L TNF-α和1×105U/L IFN-γ联合刺激3d后,FcγRIIa的表达提高16倍(P<0.01)。免疫荧光法检测显示,TNF-α和IFN-γ诱导的FcγRIIa表达于HUVEC表面。RT-PCR结果显示,FcγRIIamRNA表达量在TNF-α和IFN-γ刺激24h后有明显提高。结论:TNF-α和IFN-γ可通过调节FcγRIIa的转录和翻译,增强其在HUVEC上的表达。FcγRIIa的表达可能与血管炎条件下,免疫复合物在血管上的特异性定位有关。     

脑囊虫病患者外周血单个核细胞体外诱生IL-2、IFN-γ及TNF-α活性的研究

本文采用生物活性测定法检测了３１例脑囊虫病患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）体外诱生ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ－α活性，以３０例正常人作对照，探讨了脑囊虫病人细胞因子的变化及在免疫调节中的作用。结果显示：脑囊虫病患者ＰＢＭＣ体外诱生的ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ水平明显降低，与正常人相比差异显著（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），而患者ＰＢＭＣ体外诱生的ＴＮＦ－α水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）；提示脑囊虫病患者的ＣＤ＋４Ｔｈ１细胞呈低应答状态，脑囊虫病患者过量产生的ＴＮＦ－α可能是造成脑囊虫病的免疫病理损害原因之一。     

干扰素-γ对Graves病甲状腺细胞凋亡的影响

目的 探讨干扰素一γ(interferon-γ,IFN-γ)对Graves病(GD)患者甲状腺细胞凋亡的影响.方法 取5例GD患者甲状腺组织,采用原代细胞培养技术、细胞增殖实验和流式细胞术检测IFN-γ对甲状腺细胞增殖活力、细胞凋亡率以及对Fas蛋白表达率的影响.应用ELISA检测IFN-γ刺激甲状腺细胞后培养上清液中sFas含量的变化.结果 与未加IFN-γ处理的对照组相比,经IFN-γ处理的甲状腺细胞增殖活力明显降低(P＜0.05),但甲状腺细胞的凋亡率、Fas蛋白表达率以及培养上清液中sFas含量明显增加(P＜0.05);IFN-γ诱导的凋亡率与F&s蛋白表达率的相关性有统计学意义(P＜0.05).结论 IFN-γ可以通过调节Fas的表达影响甲状腺细胞凋亡的发生,提示IFN-γ可能通过调节凋亡参与GD的病理生理过程.     

碘化钠对人甲状腺细胞IL-6、IFN-γ和TNF-Q基因表达的影响

本研究以l0-4M碘化钠(NaI)刺激单层培养的人Graves病(GD)甲状腺滤泡上皮细胞(TEC),采用定性及半定量PCR技术检测刺激前后白介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)在细胞中的表达水平。结果表明：(1)3例GD组织均含有IL-6及IFN-γ mRNA,2例检测到TNF-a基因表达;(2)基础状态下,3例TEC均表达IL-6基因,2例表达TNF-a,而所有样本均无IFN-γ mRNA;(3)Nal不能诱导TEC产生IFN-γ mRNA,对IL-6 mRNA的表达亦无明显影响;(4)1例TNF-a阴性的TEC样本,经NaI刺激后,可表达mRNA,2例原含有TNF-a的TEC经刺激后,其mRNA的表达水平显著增加。提示碘可通过诱导或增强TEC表达TNF-a,导致自身免疫性甲状腺疾病的发生与发展。     

TLR2介导的BV-2细胞TNF-α及IFN-α的表达

目的:观察HCV阳性血清处理后TLR2 mRNA的表达及TLR2蛋白阻断前后TNF-α、IFN-α的表达.方法:细胞分为空白对照组、正常对照组及实验组,每组分为4h、8h、16 h及24h,同时设TLR2阻断组及其对照组,采用RT-qPCR方法检测各组各时间点TLR2mRNA的表达变化,并采用ELISA方法检测各时间点及TLR2阻断后组培养上清液中TNF-α、IFN-α水平.结果:HCV阳性血清处理后各时间点TLR2 mRNA表达均显著增加,空白对照组、正常对照组与实验组之间TLR2mRNA表达有统计学差异(P ＜0.05); TLR2蛋白阻断前后TNF-α、IFN-α的表达有统计学差异(P＜0.05).结论:HCV阳性血清处理可能激活TLR2,TLR2可能通过下游大量炎性因子如TNF-α、IFN-α等参与BV-2抗HCV免疫.     

补肾益气方对TNF-α/IFN-γ诱导的早孕期人滋养层细胞凋亡的影响

目的：探讨补肾益气方对TNF-α/IFN-γ诱导的早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用。方法：TNF-α/IFN-γ和含药血清共培养细胞后,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞亚二倍体峰,原位缺口末端标记法（TUNEL染色）、caspase-3活性检测试剂盒检测凋亡,Western blot检测Bcl-2和XIAP蛋白。结果：TNF-α和IFN-γ联合给药培养后,细胞活力降低,亚二倍体细胞较未处理组明显增多,凋亡细胞数明显高于正常对照组,caspase-3酶活性明显升高,TNF-α/IFN-γ与含药血清共培养后,细胞活力升高,亚二倍体细胞数和凋亡细胞数却明显减少,caspase-3酶活性降低,Bcl-2和XIAP蛋白增加,并呈时间和剂量依赖性。结论：补肾益气方降低TNF-α和IFN-γ诱导的滋养层细胞凋亡的发生率。     

TNF-α和IFN-γ对肾小管上皮细胞趋化因子表达的影响

目的探讨细胞因子TNF-α和IFN-γ对肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达的影响。方法分别以TNF-α以及IFN-γ和TNF-α联合作用肾小管上皮细胞HK-2不同时间后,用Real-time PCR和ELISA分别检测CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA和蛋白水平。用流式细胞术检测淋巴细胞表面CXCR3表达情况,通过趋化实验检测细胞培养上清对淋巴细胞的趋化作用。结果肾小管上皮细胞在TNF-α作用12 h后能够诱导趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11mRNA表达上调,CXCL9 mRNA的表达在48 h达到高峰,而CXCL10和CXCL11 mRNA表达高峰在12 h;CXCL9、CXCL10和CXCL11蛋白的基础分泌水平均较低,在TNF-α作用12 h后,分泌水平也逐渐升高,CXCL9、CXCL10在48 h时分泌达到高峰,CXCL11分泌高峰在72 h。与TNF-α单独作用组和IFN-γ单独作用组相比,TNF-α和IFN-γ联合作用使肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA表达和蛋白分泌明显增强(P<0.05)。与新鲜分离的淋巴细胞相比,活化的淋巴细胞表面的CXCR3表达明显升高(P<0.05)。TNF-α以及IFN-γ和TNF-α联合作用HK-2细胞培养上清对活化的淋巴细胞具有明显的趋化作用(P<0.05)且能被抗CXCR3抗体所阻断(P<0.05)。结论细胞因子TNF-α能诱导肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达,且与IFN-γ联合作用对趋化因子的表达具有协同作用。     

急性骨髓炎患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α动态变化及其临床意义

目的探讨急性骨髓炎(AOL)患者血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)动态变化及其临床意义。方法病例源于2018年1月至2018年6月本院骨科收治的48例AOL患者和同期健康的42例骨折患者,分别记为疾病组、对照组,对比两组血清IFN-γ、IL-6及TNF-α水平,观察不同临床特征AOL患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α水平变化,并分析不同预后患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α动态变化及其临床意义。结果与对照组比较,疾病组血清IFN-γ明显降低、IL-6及TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),AOL患者血清IFN-γ、IL-6及TNF-α水平在性别、年龄、BMI分布上差异无统计学意义(P>0.05);但在感染部位分布上差异有统计学意义(P<0.05);AOL患者第1、3、5d IFN-γ水平依次明显升高、IL-6及TNF-α水平则依次明显降低(P<0.05),且入院后第1、3、5d与预后不良组比较,预后良好组血清IFN-γ水平明显升高、IL-6、TNF-α水平明显降低(P<0.05);AOL患者血清IFN-γ水平与预后呈明显正相关(r=0.421,P<0.01),而IL-6及TNF-α水平与预后呈明显的负相关(r=-0.368、-0.407,P<0.01)。结论AOL患者血清IFN-γ水平呈下降趋势、IL-6、TNF-α水平呈上调趋势,三者动态监测利于AOL患者预后评估及早期治疗方案的制定。     

IFN-γ和TNF-α联合对MIN6细胞caspase-3活化的影响

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6中caspase-3活化的影响。方法用IFN-γ、TNF-α单独或联合刺激MIN6细胞后,Western blot分析比较caspase-3活化的情况,并用免疫细胞化学法检测了其活化产物cleaved caspase-3的产生;酶学比色法测定细胞因子IFN-γ和TNF-α联合作用活化caspase-3的时间依赖性以及MTT法比较caspase-3特异性的抑制剂AC-DEVD预处理前后MIN6细胞活性的变化。结果 IFN-γ或TNF-α单独作用不能活化caspase-3,但两者联合作用24 h后可检测到caspase-3活化裂解片段的产生;Caspase-3的活性随着IFN-γ和TNF-α处理时间的增加而升高,呈现明显的时间依赖性;抑制caspase-3的活化可有效改善MIN6细胞的活性,并且呈剂量依赖性。结论 IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞活性的抑制作用与caspase-3的活化密切相关。     

伤寒沙门氏菌诱导不同分化和活化状态的THP-1细胞产生TNF-α和IL-12的研究

为探讨伤寒沙门氏菌诱导宿主细胞产生细胞因子,以及细胞因子在宿主防御伤寒沙门氏菌感染中的调节作用,我们应用人类单核白血病细胞系—THP1细胞,对伤寒沙门氏菌诱导不同分化和活化状态的THP1细胞产生TNFα和IL12进行了研究。结果表明,伤寒沙门氏菌不能诱导THP1细胞产生TNFα,但可诱导PMA分化的THP1细胞产生TNFα和IL12;TNFγ既可增强伤寒沙门氏菌诱导THP1细胞产生IL12,又可增强伤寒沙门氏菌诱导的PMA分化的THP1细胞产生TNFα和IL12。以上结果提示,TNFα的产生可能与单核细胞的分化状态有关;TNFα和IL12的产生可能存在着不同的诱导机制;IFNγ对TNFα和IL12的产生具有调节作用。     

人血单核细胞和U937细胞产生IFN-α的比较

一般认为人体单核-巨噬细胞(Mo-Mφ)系在体外诱生IFN-α较为困难,本文试图找到适合的培养条件,使Mo-M(?)系能在体外诱生IFN-α.结果显示:经M-CSF长期预处理和IFN-γ的短期预处理或单用IFN-γ短期预处理后,NDV刺激均能使人外周血Mo-M(?)产生较高水平的IFN-α;U937细胞只能产生低水平的IFN-α.     

比较两种麻醉剂对胆道手术患者中性粒细胞凋亡、TNF-α、IL-6和IL-8的影响

探讨TNF α、IL 6、IL 8与异丙酚麻醉下胆道手术患者中性粒细胞凋亡的关系。ASAI～II级择期行胆道手术的非肿瘤患者 4 3例 ,随机分为异丙酚麻醉组 (P组 ,n =2 2 )及安氟醚麻醉组 (E组 ,n =2 1)。另选择健康成年人 16例作健康对照组。取手术前 (T1)、手术开始 (T2 )、手术开始后 3h (T3)、 2 4h (T4 )、 72h (T5 )外周静脉血 10ml,检测中性粒细胞凋亡及血浆细胞因子的水平。结果发现胆道手术患者术前中性粒细胞凋亡率明显低于健康对照组 ;同手术前比 ,T3、T4、T5时点中性粒细胞的凋亡率均明显降低 (P <0 0 1) ;而与E组比 ,P组分别在T3、T4时间点中性粒细胞凋亡率明显升高 (P <0 0 1)。胆道手术患者围术期血浆TNF α变化差异不明显 ;IL 6在手术创伤后升高 ,术后 1d达峰值 ,但在组间无明显的差异 ;围术期血浆IL 8的水平变化同IL 6 ,但与E组比 ,P组分别在T3、T4时间IL 8的血浆水平明显降低 (P <0 0 5、P <0 0 1)。本研究认为异丙酚麻醉与安氟醚麻醉相比 ,具有明显地减轻手术创伤后中性粒细胞凋亡的延迟作用 ,可能与异丙酚麻醉组创伤后细胞因子IL 8的释放较低有关