VEGF基因转染血管内皮祖细胞的实验研究

目的:探讨血管内皮生长因子（VEGF）基因转染血管内皮祖细胞（EPCs）的方法及效果。方法:取生长活跃的EPCs,分别转染不同浓度的携带VEGF-165基因的腺病毒质粒（Adv-GFP-VEGF165）（转染组）及空质粒（Adv-GFP）（空质粒组）,并设空白对照组。荧光显微镜下观察转染效果,MTT法检测不同病毒滴度时细胞增殖情况;ABC-ELISA法检测上清液中VEGF蛋白表达情况。结果:转染组镜下观察到大部分细胞呈现绿色荧光。病毒滴度为1∶100的转染会导致细胞生长停滞,并造成细胞损害; 1∶50的转染后对细胞增殖无明显影响。ELISA检测证实转染组上清液中VEGF蛋白浓度明显高于空质粒组及空白对照组（P<0.01）。结论:以腺病毒为载体的VEGF基因转染EPCs是可行的,1∶0是合适的转染比率,转染后上清液中VEGF蛋白表达明显增加。     

小口径猪血纤维蛋白血管支架内皮化的研究

明体外培养7 d内皮细胞在血管支架内表面就已形成较完整的内皮细胞单层,内皮细胞覆盖率达(99.2±0.5)%(n=4).结论 犬静脉内皮细胞在小口径血管支架内表面能较好地生长增殖.     

VEGF165基因转染骨髓源性血管内皮祖细胞的体外实验研究

目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）转染骨髓源性血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）后，EPC分泌VEGF及活性以及EPC特性的影响。方法体外获取大鼠骨髓，分离单个核细胞，经培养，鉴定为EPC。用脂质体介导pcDNA3．0-hVEGF165转染，转染后EMSA法测培养上清VEGF蛋白水平，培养上清液对ECV304细胞生长的影响，以评价VEGF蛋白活性，MTY法评价转染对细胞活性的影响，免疫细胞化学检测EPC表达VEGF、vWF（血友病因子）、VEGF—R2（血管内皮生长因子受体2）的变化。结果转染后的第7天表达的VEGF蛋白浓度达1280pg／ml，转染对EPC的增殖无影响，表达VEGF、vWF、VEGF—R2的比率随时间而逐渐升高，至第7天时分别为88．52％、82．65％和95．97％。结论VEGF转染的EPC能表达一定浓度有功能的VEGF蛋白，能帮助EPC保持内皮细胞特性，向成熟内皮细胞分化。     

血管内皮生长因子基因转染血管内皮祖细胞治疗肢体缺血的实验研究

目的利用血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF-165）基因转染体外诱导的血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,并移植到下肢缺血的新西兰兔体内,观测其促进血管新生,改善肢体缺血的效果。方法（1）梯度离心法分离兔骨髓单个核细胞,然后用含有VEGF、bFGF、IGF-1的M199培养液诱导培养EPCs。并以免疫荧光、透射电镜等方法进行鉴定。（2）用携带VEGF165基因的腺病毒质粒（Adv-GFP-VEGF165）转染所培养的细胞,ELISA法检测上清液中VEGF蛋白的表达。（3）制作兔下肢缺血模型,并将其随机分为A、B、C 3组,分别移植EPCs、VEGF165基因转染后的EPCs、M199培养基,多种方法检测移植效果及局部整合情况。结果（1）自兔骨髓诱导出梭形贴壁细胞,免疫荧光及电镜检测证实为EPCs。（2）Adv-GFP-VEGF165成功转染EPCs,ELISA法检测转染VEGF165后的EPCs其上清液中VEGF蛋白浓度明显升高。（3）Brdu示踪显示移植细胞整合到缺血局部,CTA及免疫组化检查显示VEGF-165基因转染后的EPCs移植后其改善肢体缺血效果优于其他两组。结论VEGF基因转染EPCs后能改进EPCs质量,移植后促血管新生能力增强,其效果优于未转染组。     

VEGF抗体靶向血管治疗增生性瘢痕的研究

目的探讨VEGF抗体靶向血管治疗对烧伤后增生性瘢痕的治疗作用。方法将人的增生性瘢痕植入裸鼠肩胛部皮下,建立裸鼠增生性瘢痕移植模型。3周后,用不同剂量血管内皮生长因子单克隆抗体进行瘢痕内注射治疗。治疗3周后解剖取材,通过测量瘢痕的大小观察瘢痕的体积变化,用Masson染色和免疫组化技术观察移植瘢痕胶原和微血管数量的变化。结果与PBS对照组相比,靶向血管治疗3周后,增生性瘢痕的体积明显减小,瘢痕胶原和微血管明显减少。结论VEGF抗体靶向血管治疗具有抑制增生性瘢痕微血管生成、胶原合成及抑制瘢痕生长的作用。     

VEGF抗体靶向血管治疗增生性瘢痕的研究

目的探讨VEGF抗体靶向血管治疗对烧伤后增生性瘢痕的治疗作用.方法将人的增生性瘢痕植入裸鼠肩胛部皮下,建立裸鼠增生性瘢痕移植模型.3周后,用不同剂量血管内皮生长因子单克隆抗体进行瘢痕内注射治疗.治疗3周后解剖取材,通过测量瘢痕的大小观察瘢痕的体积变化,用Masson 染色和免疫组化技术观察移植瘢痕胶原和微血管数量的变化.结果与PBS对照组相比,靶向血管治疗3周后, 增生性瘢痕的体积明显减小, 瘢痕胶原和微血管明显减少.结论 VEGF抗体靶向血管治疗具有抑制增生性瘢痕微血管生成、胶原合成及抑制瘢痕生长的作用.     

血管内皮生长因子单克隆抗体治疗子宫内膜异位症的实验研究

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体（单抗）对子宫内膜异位症（EMs）血管生成的抑制作用,为从抗血管途径治疗EMs提供依据。方法：60只新鲜受精鸡蛋随机分为接种组（20枚）、接种治疗组（20枚）、单纯空白组（10枚）和空白载体组（10枚）。接种组和接种治疗组建立子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型,接种治疗组给予VEGF单抗10μg/d。单纯空白组不接种子宫内膜,空白载体组以无菌明胶海绵为载体,给予PBS20μg/d。通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和VEGF单抗对异位内膜病灶生长行为的影响。结果：接种组CAM血管生成反应明显增强,血管数目显著高于单纯空白组和空白载体组;接种治疗组血管数目显著低于接种组,有明显的间质坏死。结论：子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,VEGF单抗能够显著抑制异位病灶的血管形成,并抑制子宫内膜的生长,证实抗血管途径可以作为治疗EMs的一种有效方法。     

血管内皮生长因子和雌二醇促进血管内皮祖细胞分化生成血管的对比研究

目的：对比研究常规剂量下血管内皮生长因子（VEGF）和雌二醇对血管内皮祖细胞（EPCs）分化生成血管的促进作用。方法：分离培养人外周血EPCs,与基质胶混匀后注射到9只裸鼠双侧下腹部,另设2只注射等体积培养液与基质胶的混合液。将9只注射细胞的裸鼠随机分为3组,每组分别定期局部注射VEGF、雌二醇,生理盐水,定期观察记录血管组织块的生长状况。移植6周后取材,测量计算血管组织块的体积、HE染色观察血管组织块的血管增殖状况,各组之间进行对比。结果：给药组血管组织块体积与注射生理盐水组相比,具有显著性差异,体积明显偏大,而给药组之间体积未见显著性差异。HE染色观察可见各组的血管组织块内血管增殖明显,血管排列紊乱的,管腔大小不一。给药组血管密度明显大于注射生理盐水组,而给药组之间的血管密度差异较小。结论：VEGF和雌二醇组具有促进EPCs分裂增殖形成血管的能力,常规剂量下两者促进EPCs分裂增殖生成血管的能力无显著性差异。     

血管内皮生长因子在子宫内膜的表达及调控

血管内皮生长因子 ( vascular endothelial growth factor,VEGF)为特异性促血管内皮细胞丝裂原并具促血管通透性作用。 VEGF及其受体在子宫内膜中表达 ,受雌孕激素、缺氧、c AMP的调节 ,其与生理性月经后的内膜修复、胚胎植入及子宫内膜癌、内膜异位症、子宫异常出血密切相关     

VEGF促进预构皮瓣血管新生的实验研究

目的探讨VEGF重组蛋白促进大鼠预构皮瓣血管新生、提高皮瓣存活面积的可行性。方法建立大鼠腹部预构皮瓣模型;30只Wistar大鼠随机分为两组;局部应用VEGF165（组Ⅰ）、PBS（组Ⅱ）;4周后形成以植入血管为蒂的岛状皮瓣,原位缝合;术后7d对皮瓣存活、血管新生情况进行检测。结果组Ⅰ、组Ⅱ的皮瓣存活率分别为66．13％±9．9％,55．59％±13．06％（P〈0．05）;组Ⅰ与组Ⅱ比较,微血管显影血管网更丰富,范围更广,分支更粗,内含墨汁的血管在皮瓣的表皮真皮、皮下层均有分布;微血管计数组Ⅰ、组Ⅱ分别为25．83±6．33条／mm^2,26．5±5．61条／mm^2（p〉0．05）。结论VEGF可以促进预构皮瓣的血管新生,提高存活率。     

糖尿病足腔内治疗后动脉再闭塞的处理

目的 总结糖尿病足患者腔内治疗后动脉再闭塞的原因及治疗方法.方法 回顾性分析天津市第一中心医院2009年1月1日至2013年10月1日收治的371例糖尿病足腔内治疗后动脉再闭塞患者的病因、治疗方法等临床资料.结果 首次腔内治疗时按照泛大西洋协作组织(Trans-Alantic Inter-Society Consensus,TASC)Ⅱ分级:A级37例、B级85例、C级143例、D级106例.再次闭塞时间为1d至36个月,平均(21±8)个月.再闭塞的原因:内膜增生263例(70.9％)、血栓形成65例(17.5％)、夹层形成19例(5.1％)、支架断裂17例(4.6％)、血管破裂7例(1.9％).再闭塞后给予再次腔内治疗327例(88.1％),动脉旁路手术23例(6.2％),保守治疗13例(3.5％),直接截肢(截趾)4例(1.1％),围手术期死亡4例(1.1％).共随访275例患者,随访时间1～ 36个月,平均(13±8)个月.6、12、24个月的血管通畅率分别为82.9％、71.3％、63.0％,截肢率分别为1.1％、1.8％、2.5％.结论 内膜增生是造成糖尿病足腔内治疗后动脉再闭塞的主要原因.多数患者可再次腔内治疗,近期通畅率较高.     

VEGF165和Ang-1协同改善急性心梗大鼠心功能

目的探讨血管内皮细胞生长因子和促血管生成素联合使用治疗大鼠急性心肌梗死及其机制.方法扩增携带人VEGF165或Ang-1的复制缺陷型病毒;制作大鼠急性心肌梗死模型,结扎后立即于缺血的心肌区域注射Ad-VEGF165或/和Ad-Ang-1,术后注射Brdu;免疫组织化学双染色观察新生内皮细胞和心肌细胞数;用超声心动图仪检测左心功能.结果 VEGF165和Ang-1联合使用可显著改善左心功能.梗死区发现新生心肌细胞,并且新生的内皮细胞和心肌细胞数显著多于其他组,梗死区细胞表达C-kit阳性.结论 VEGF165和Ang-1可显著改善急性心肌梗死大鼠心功能,其机制与骨髓造血干细胞的动员密切联系.     

Short-term vasculoprotective effects of imatinib mesylate on intimal hyperplasia of arterial anastomosis: An experimental study using a rabbit model

BACKGROUND:

Since the beginning of the ‘microvascular era’, the success rates of microvascular procedures have increased to more than 90% in most series. The main reason for failure, however, is the healing of microarterial anastomosis, which is dependent on the status of endothelial cells and affects the rate of arterial thrombosis. In 80% of arterial thrombosis cases, complications are primarily observed during the first 72 h after surgery. Healing of arterial anastomosis results in intimal hyperplasia in which myofibroblasts comprise the predominant cell type. Intimal hyperplasia has been described previously as an adaptive process that occurs in response to hemodynamic stress or injuries to the vascular bed. During wound healing, fibroblasts proliferate, migrate and differentiate into myofibroblasts – a process that takes one to three days. Imatinib mesylate (ST1571-Gleevec, Novartis, Germany) is a specific platelet-derived growth factor receptor blocker that has found use as an adjunct to sirolimus in cardiovascular surgery for restenosis. However, its potential utility in preventing arterial thrombosis in microvascular surgery has not been evaluated in routine plastic surgery practice.

METHODS:

Twenty-four randomly selected, male, white New Zealand rabbits were divided into six groups (A to F), and the femoral artery model was used for arterial anastomosis. Following anastomosis, groups A, B and C received phosphate-buffered saline orogastrically. In groups D, E and F, imatinib mesylate was administered via an orogastric tube twice per day at a dose of 10 mg/kg starting two days before arterial anastomosis. Following anastomosis, imatinib mesylate was administered for one, three and seven days, and the regression of intimal hyperplasia was recorded.

RESULTS:

In groups administered imatinib mesylate (ie, groups D, E and F), intimal hyperplasia decreased by up to 50%, which represented a statistically significant difference. Histological analysis confirmed smooth muscle cell migration from the tunica intima to media on days 3 and 7 in groups E and F.

CONCLUSION:

The present study revealed that imatinib mesylate, which was initiated as a prophylactic, systemic pretreatment and continued for seven days, gradually decreased intimal hyperplasia at the anastomosis site.     

胃癌术前内镜超声检查与肿瘤血管内皮生长因子表达的检测分析

目的探讨内镜超声检查(EUS)对胃癌术前诊断和分期的应用价值及其影像学改变与肿瘤转移相关基因表达的分子生物学基础。方法联合应用电子胃镜和超声内镜诊断胃癌63例,对比胃镜检查加活检与超声内镜对胃癌诊断的准确率,同时应用超声内镜对胃癌进行术前分期,并与病理分期及血管内皮生长因子(VEGF)表达进行比较。结果63例胃癌中胃镜加病理活检诊断的准确率是94%,超声内镜诊断的准确率是92%,胃镜联合超声内镜诊断的准确率是100%。超声内镜对胃癌侵犯深度判断的准确率为81%,其中T1期为78%、T2期为79%、T3期为82%、T4期为83%,对淋巴结转移的准确率为73%。VEGF蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为56%,其表达与EUS分期、淋巴结转移关系密切(P<0.05)。结论胃镜联合超声内镜诊断胃癌具有较高的准确率;胃癌术前内镜超声分期与术后病理有较高的一致性;VEGF蛋白表达与胃癌术前EUS分期呈正相关;EUS对胃癌的分期与分子生物学改变有关。     

膀胱癌血清中MMP-9与VEGF水平检测及意义

目的　检测基质金属蛋白酶 9(MMP 9)与血管内皮生长因子 (VEGF)在膀胱癌患者血清中的水平 ,探讨其与肿瘤的分级、分期的关系。　方法　采用sandwich ELISA法检测 5 8例膀胱癌患者血清中MMP 9和VEGF水平 ,正常对照组 4 5例。　结果　膀胱癌患者血清中MMP 9和VEGF的水平分别为 737 12 μg/L和 114 8 88ng/L ,均显著高于对照组 4 2 3 5 1μg/L和 84 6 96ng/L(P <0 0 1)。两者的水平与肿瘤的分级、分期有关 ,其中局部浸润性癌显著高于浅表性癌 (P <0 0 1) ;远处转移组显著高于局部浸润组 (P <0 0 1) ;而浅表性癌与对照组无差别 (P >0 0 5 )。G3 级患者MMP 9和VEGF水平均显著高于G1和G2 级 (P <0 0 1)。　结论　膀胱癌患者血清中MMP 9和VEGF水平显著升高 ,并与肿瘤的分级、分期及远处转移有关 ,提示检测两者血清水平有助于对膀胱癌恶性程度的判断。     

Therapeutic approach against intimal hyperplasia of vein grafts through endothelial nitric oxide synthase/nitric oxide (eNOS/NO) and the Rho/Rho-kinase pathway

Late graft failure of autologous vein grafts is associated with intimal hyperplasia resulting from the migration and proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs). Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is an enzyme that synthesizes nitric oxide (NO). An impairment of NO-mediated vasorelaxation and increases in cell proliferation occurs in vein grafts after the surgery and these pathophysiological changes cause intimal thickening. The Rho/Rho-kinase pathway negatively regulates eNOS and is involved in intimal hyperplasia. Several studies have been conducted with the goal of controlling intimal hyperplasia targeting eNOS/NO and the Rho/Rho-kinase pathway. The oral administration of drugs, such as Rho-kinase inhibitor, l-arginine, beta-blocker and statins, significantly suppressed intimal thickening in animal models. This study revealed that statins upregulate eNOS through Rho-kinase inhibition to suppress intimal hyperplasia. The intraluminal gene transfer of eNOS inhibited intimal hyperplasia, thereby reducing the cell proliferation. These approaches are thus considered to be potentially promising therapeutic modalities for graft failure.     

联合转染血管内皮生长因子165和组织纤溶酶原激活物基因抑制兔血管损伤后内膜增生的研究

目的观察血管局部联合转染血管内皮生长因子165(VEGF165)和组织纤溶酶原激活物(tPA)基因对损伤动脉内膜增生的影响并探讨可能机制。方法采用显微外科手术方法建立兔动脉损伤模型;用微注射装置将基因转染液注入损伤血管壁,按实验终点(术后2d、1周、2周、4周和8周)分为5个亚组(每个亚组8只兔);术后各实验终点取损伤段血管用于病理学检测、电镜观察、RTPCR和免疫组织化学检查。结果术后各时间点基因转染组血管壁的VEGF165基因的mRNA表达量和tPA阳性细胞数明显高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,术后各时间点基因转染组血管内膜面积和狭窄率均显著减小(P<0.01),术后8周时基因转染组管腔狭窄率比对照组降低了59.0%。结论局部联合转染VEGF165和tPA基因可抑制血管新生内膜增生及血管再狭窄。     

女性患者不同效应室靶浓度罗库溴铵肌松效应的比较

目的 比较女性患者不同效应室靶浓度罗库溴铵的肌松效应.方法 选择女性甲状腺或乳腺手术患者120例,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,年龄40～ 55岁,BMI 18～22 kg/m2.采用随机数字表法,将患者随机分为4组(n=30),A组、B组、C组麻醉诱导时罗库溴铵效应室靶浓度(Ce)为3.5 μg/ml,麻醉维持Ce分别为1.0、1.2、1.4 μg/ml;D组麻醉诱导时Ce为3.8μg/ml,麻醉维持Ce为1.2 μg/ml.记录肌松起效时间、恢复时间、恢复指数、罗库溴铵用量;评估气管插管条件和术中肌松程度.结果 与A组比较,B组、C组和D组肌松程度深,肌松满意率高(p＜0.05),B组、C组、D组间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与A组、B组和C组比较,D组起效时间最短(P＜0.05).与C组比较,A组、B组和D组罗库溴铵用量、恢复时间、恢复指数降低(P＜0.05).B组和D组罗库溴铵用量、恢复时间、恢复指数比较差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论 麻醉诱导时罗库溴铵Ce 3.8 μg/ml,麻醉维持Ce1.2 μg/ml,可产生满意的肌松条件,且有利于术后肌松恢复,是一种适用于女性患者的TCI给药方案.     

干扰素γ增加去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶抗膀胱癌作用的实验研究

目的　探讨干扰素γ在膀胱癌T2 4细胞中对血小板衍化内皮细胞生长因子 /胸苷磷酸化酶 (PD ECGF/TP)表达的调节作用及其与去氧氟尿苷和 5 氟尿嘧啶抗癌作用的关系。　方法　分别用RT PCR和Western印迹检测PD ECGF/TPmRNA和蛋白质的表达 ,MTS法确定去氧氟尿苷和 5 氟尿嘧啶对膀胱癌T2 4细胞的细胞毒性作用。　结果　干扰素γ增强膀胱癌T2 4细胞表达PD ECGF/TP ,并使去氧氟尿苷的半数致死量 (IC50 )从 (16 .0± 3.6 )mmol/L降至 (6 .2± 0 .9)mmol/L(P<0 .0 1) ,5 氟尿嘧啶的IC50 从 (82 6 .7± 15 5 .1) μmol/L降至 (346 .7± 38.9) μmol/L(P <0 .0 5 )。 　结论　干扰素γ通过诱导膀胱癌T2 4细胞表达PD ECGF/TP增强去氧氟尿苷和 5 氟尿嘧啶的抗癌作用 ,提示联合应用干扰素γ和去氧氟尿苷或 5 氟尿嘧啶可能提高膀胱癌的化疗效果。