感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(sARS)患者感染的Vero细胞,为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料.方法标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞,对培养液负染色标本和Vero细胞超薄切片标本进行TEM观察.结果在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒,病毒颗粒为圆形或椭圆形,外周有冠状排列的纤突,病毒颗粒直径约80～160 nm,纤突长度约20～40 nm.感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中,主要在内质网和空泡内,可见群集的大小较一致的病毒颗粒.结论本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARS冠状病毒(SARS-CoV)相符.     

SARS冠状病毒灭活疫苗研究初报

目的研制出安全、有效、质量可控的SARS冠状病毒灭活疫苗;同时,制备能用于SARS被动免疫和治疗用的异源高效价特异性抗体,用于SARS的免疫防治.方法采用细胞培养法,从非典型肺炎患者标本中分离获得病毒株,通过电镜、血清学以及RT-PCR技术进行病毒鉴定.运用细胞规模化培养技术大量制备SARS冠状病毒.用温度灭活法和甲醛灭活法对SARS冠状病毒进行灭活处理,筛选灭活条件.将不同类型和不同剂量的佐剂与灭活病毒加以配伍,优化SARS灭活疫苗;同时,以小鼠、兔、猴等为实验对象,进行灭活疫苗的免疫原性评价.用灭活疫苗免疫马,获取异源(马)高免血清,并进行应用效果评价.结果从分离得到的SARS冠状病毒中,优选出适合疫苗制作的SARS病毒株2株-F69和Y3,初步建立了大规模培养SARS病毒的技术体系,病毒TCID50达到106以上.确定了SARS病毒的灭活方法,优选出灭活疫苗的佐剂,并已生产出一定量的SARS灭活疫苗.将灭活疫苗初步用于小鼠、兔等的免疫接种,对其体液免疫和细胞免疫效果进行了初步检测.结论试验研制的SARS灭活疫苗具有较强的免疫原性,设计的灭活疫苗生产技术路线是可行的,进一步的研究工作结束后,可望进行规模化开发生产.     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的 用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染的Vero细胞，为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞．对培养液负染色标本和vero细胞超薄切片标本进行TEM观察。结果 在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒．病毒颗粒为圆形或椭圆形，外周有冠状排列的纤突，病毒颗粒直径约80～160nm，纤突长度约20～40nm、感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中，主要在内质网和空泡内，可见群集的大小较一致的病毒颗粒。结论 本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARs冠状病毒(SARS—CoV)相符。     

SARS病毒研究取得重大进展

日前,新的研究报告显示,SARS病毒是一种崭新的冠状病毒,而非某种已知冠状病毒的近期变种。SARS病毒基因组研究表明在不同国家发生的SARS病毒没有显著的变异。SARS病毒在病人的粪便和尿中可存活数天。SARS病毒并非已知冠状病毒的变异株。由美国和加拿大研究人员组成的两个研究组5月1日在Science(www.sciencexpress.org)上发表论文,对SARS病毒基因组测序第一次揭示了该病毒的分子学特征,并明确证实该病毒有冠状病毒的典型特征,同时该病毒还有别于以往经过测序的所有冠状病毒。SARS病毒较为稳定。目前SARS虽然暴发流行,但遗传学…     

SARS病情的动态变化

此前曾认为,导致此次SARS全球流行的元凶——SARS冠状病毒(SARS— CoV)是一种已知的人的冠状病毒的突变,从而获得了新的致病力;或是一种动物 冠状病毒的突变具有了感染人的能力;或是两种人类冠状病毒或人与动物冠状病 毒的重组。 然而,2003年5月15日新英格兰医学杂志(N ENGL J MED)于网上发表 了Katnryn V.Holmes撰写的题目为“SARS相关的冠状病”的研究文章,对SARS 患者血中病毒抗体进行了检测及研究。研究结果显示,这个抗体与已知的任何一种抗体均不同,提示SARS—CoV对人类是一个全新的病毒。 SARS—CoV的核苷酸序列已被科学家们测定出来,人们发现它的基因组成与已知的冠状病毒的序列完全不同。SARS—CoV的基因组序列不包括编码HE的基因,也没有从其他病毒或宿主细胞获得的大的基因片段。因此,人们推测SARS—CoV既不是已知病毒的突变,也不是已知病毒的基因重组。它是一个全新的冠状病毒,有可能寄生于其他动物,在某种条件下获得了感染人的能力。只有在SARS疫情最初暴发的区域检测野生及家养动物的血清才能鉴别它的最初宿主。比较来自SARS患者和自然宿主的病毒间的差异,有可能揭示病毒如何变迁转而感染人类。当病毒以人类为宿主后,是否还具有感染其初宿主的能力?若病毒丧失了这个能力,人类彻底清除这个病     

SARS病毒表面蛋白抗原决定簇的免疫信息学分析

SARS病毒是一种新近发现的冠状病毒,其表面蛋白可与细胞上的相应受体结合,导致人类发生严重急性呼吸道综合征(SARS)等疾病.通过免疫信息学的方法,我们对该病毒的表面蛋白进行了分析.结果显示,SARS病毒与常见的人类冠状病毒相比,其编码的表面蛋白中可以被人类免疫系统识别的抗原决定簇明显改变和减少.由此表明,SARS病毒引起人类发生严重疾病的原因可能与该病毒逃避机体免疫识别有关.因此,利用免疫信息学分析SARS病毒特有的或免疫应答比较强的决定簇,从中找到抗原肽疫苗的候选位点,可以为研制针对SARS病毒的有效疫苗提供重要的理论依据.     

传染性非典型肺炎的病原学和病理学研究现状

传染性非典型肺炎是一种累及 36个国家和地区的急性呼吸道传染病 ,世界卫生组织命名为严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)。我国在SARS病原学研究和临床防治中积累了宝贵经验 ,但对于这种新疾病尚缺乏深入认识。本文综合目前国内外有限的资料 ,对SARS的病原学和病理学研究现状作一简要介绍。1　致病微生物的确定目前世界范围内大量研究锁定SARS的致病微生物为一种过去未曾报告的新型冠状病毒 (Coron avirus)。电镜下该病毒颗粒位于感染细胞的胞浆中 ,呈圆形 ,有囊膜。经电镜负染可见病毒颗粒 ,多呈球形 ,外…     

临床诊断的SARS患者鼻咽拭子采集、SARS冠状病毒分离及鉴定

目的 从临床诊断的严重急性呼吸综合征(severe aeute respiratory syndrome,SARS)患者鼻咽拭子标本分离并鉴定SARS冠状病毒。方法 SARS患者鼻咽拭子标本接种于含Veto及MRC-5单层细胞的24孔培养板中。分离物使用血清学方法、电镜及基因测序进行鉴定。结果 2003年4月-5月北京协和医院共采集79例临床诊断SARS患者的158份鼻咽拭子标本。3例接种Veto细胞孔的鼻拭子标本发现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)。用分离物感染细胞做为抗原,免疫荧光血清学发现SARS患者急性期和恢复期血清标本存在SARS冠状病毒抗体(IgG和IgM)阳转和／或4倍及以上升高。分离物上清液负染电镜观察到冠状病毒。基因测序证实3株分离物是SARS冠状病毒。结论3株自79例SARS患者鼻咽拭子标本的病毒分离物是SARS冠状病毒。     

传染性非典型肺炎病人外周血白细胞损伤的病理学研究

目的　研究传染性非典型肺炎严重急性呼吸综合征 (SARS)病人外周血中白细胞的病理变化 ,及与SARS冠状病毒感染的关系 ,为探讨免疫细胞损伤在SARS发病机制中的作用提供形态学的依据。方法　采用 2 2例初步诊断的SARS病人外周血标本 ,及 4例正常成人外周血标本 ,分离收集所有的白细胞 ,进行透射电镜、免疫电镜和RT PCR检查。结果　白细胞的数量及亚型比例改变 :每个病例观察 10 0个细胞 ,分别计数粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的数目。与正常组对照 ,粒细胞数目增多 (P <0 .0 5 ) ,淋巴细胞明显减少 (P <0 .0 5 ) ,T淋巴细胞 (CD4 5RO阳性 )仅占残存白细胞总数的 6 %～ 7%。在外周血白细胞胞浆内发现冠状病毒样颗粒者 6例 ,与RT PCR阳性者重合比例为5∶6。分别计数在各类白细胞中可观察到冠状病毒样颗粒的阳性细胞数 ,发现淋巴细胞中可观察到病毒的阳性细胞数最高。SARS病人血白细胞中的冠状病毒样颗粒为圆形 ,或略呈卵圆形 ,80～ 12 0nm左右 ,致密的双层质膜包绕 ,核心较疏松 ,膜外有放射状排列的纤细突起。散在分布于胞浆或粗面内质网、高尔基器及膜包绕的空泡中。淋巴细胞有变性和活化增殖的现象。结论　在SARS病人的血白细胞 ,内观察到冠状病毒样颗粒。提示 ,血细胞特别是淋巴细胞 ,也可能是冠状病毒攻     

SARS演化的关键是什么？

由于全球范围内有越来越多的国家不断地报告发现SARS可能病例或SARS疑似病例,世界卫生组织(WHO)最近针对此病所了解的情况,尤其是有关其传播方式等问题以及目前尚未搞清楚的问题重新进行了评估和分析。目前对引起SARS的病原体的鉴定已经证实SARS病毒是一种新的冠状病毒,它不同于冠状病毒属中的其他任何一种已知的人类或动物病毒。鉴于人们对有关新冠状病毒行为的许多情况知之甚少,目前尚有待做进一步认真研究,主要包括:SARS病毒传播最高峰时的感染期可分为几个期以及各期的情况如何?SARS病毒在不同体液中存在的各种不同浓度。此外,科学家们还将确定病毒在不同环境下能够存活的时间,例如,在干燥的表面和在悬浮物     

几种中药提取物体外抗SARA冠状病毒作用的初步研究

目的研究药物抗SARS冠状病毒作用，筛选可能用于SARS治疗和预防的药物。方法选用无细胞毒性的不同药物浓度，与SARS冠状病毒同时接种vero E6细胞，病毒使用100 TCID50，逐日观察致细胞病变作用(CPE)。结果试验所用10种药物仅甘草甜素具有抗SARS冠状病毒作用。其作用与病毒的吸附无关，有效浓度为≥20μg／ml。其它药物均无抗SARS冠状病毒作用。结论甘草甜素具有明显的体外抗SARS冠状病毒作用，作用机理在于病毒核酸转录、蛋白翻译或组装的某个环节，具有潜在的开放应用价值。     

SARS的实验室诊断研究现状

研究表明SARS病毒是变异的冠状病毒(SARS CoV) ,其毒力远远强于其他已知的家族成员,病毒学诊断对SARS的确诊具有决定性意义[1] 。SARS CoV基因测序的完成为该病毒的扩增引物的设计提供了条件,也对SARS的诊断及药物研究具有重要意义。来源于患者的标本具有足够的基因信息,对它进行病毒纯培养,可获得大量SARS冠状病毒,用于PCR研究,产生丰富的病毒基因资料[2 ] 。SARS的实验室诊断主要有病毒的分离培养、抗体检测、PCR和基因芯片检测等方法[2 ,3] 。目前实验室诊断方法尚不完善,临床实用仍有距离,本文仅对SARS诊断比较成熟的…     

SARS病毒研究取得重大进展

日前 ,新的研究报告显示 ,SARS病毒是一种崭新的冠状病毒 ,而非某种已知冠状病毒的近期变种。SARS病毒基因组研究表明在不同国家发生的SARS病毒没有显著的变异。美国和加拿大研究人员研究明确证实该病毒有冠状病毒的典型特征 ,同时该病毒还有别于以往经过测序的所有冠状病毒。与其他冠状病毒相比 ,未发现编码rep、S、E、M或N蛋白的基因发生任何明显的主要基因重排或出现任何大范围插入或缺失的情况。与一些其他的冠状病毒一样 ,SARS病毒有多个处于S和E基因之间以及处于M和N基因之间的小型非结构ORFs。SARS病毒是一种在物种进化…     

小分子药物抑制SARS病毒的体外实验研究

目的:为探索SARS的治疗药物，实验观察合成的13种小分子药物抑制SARS冠状病毒的效果。方法:采用微孔塑料板病变法及MTT法，通过观察细胞病变(CPE)及OD值测定结果，判定药效。结果:13种小分子药物中3、4，7和8号药物在接种SARS病毒后20h内对SARS冠状病毒有抑制作用；9号药物在接种病毒后30h内药效显；接种SARS病毒36h后，SARS病毒繁殖迅速，48h后全部发生细胞病变，微孔板病变法与MTT法结果一致。结论:13种药物中有5种药物在24h内对SARS冠状病毒有一定的抑制作用，30h后所有药物细胞孔开始出现病变，48h后细胞全部病变、死亡，表明合成的13种小的药物均不能有效地抑制SARS病毒的繁殖。     

部分SARS冠状病毒感染的医护人员临床症状轻微

目的 明确是否存在症状轻微或无症状SARS冠状病毒感染者。方法 以SARS冠状病毒全病毒裂解液作抗原,利用ELISA技术检测血清中SARS冠状病毒抗体,调查具有明显传染特征和呼吸道症状的SARS患者以及无明显临床症状表现的医务人员血清中SARS冠状病毒抗体的存在情况。结果 共调查SARS患者19例,血清中抗SARS冠状病毒抗体全部阳性;因工作需要与SARS患者或患者的血、尿、粪、痰等排泄物有接触的医务人员共200名,发现血清中抗SARS冠状病毒抗体阳性20例。结论 在部分无症状医务人员血清中存在低水平的抗SARS冠状病毒IgG抗体,SARS冠状病毒感染可仅引起轻微的症状,甚至可无临床表现。     

SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性

①目的 了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法 分别将具有明确致病性的22种冠状病毒(包括6株SARS病毒)S蛋白编码序列和22种冠状病毒全基因序列(包括11株SARS病毒)进行对排并绘制系统发生树，观察具有不同组织嗜性和宿主范围的冠状病毒所处的位置，预测SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。③结果 在依据编码S蛋白序列和全基因序列所绘制的系统发生树中各冠状病毒的分支明确，与其在美国国立医学图书馆(NCBI)中的分类相一致。④结论 SARS病毒县需特病毒的一个新的变种，具有呼吸道上皮嗜性。     

SARS冠状病毒RNA聚合酶编码区分析

SARS冠状病毒(SARS coronavirus ,SARS CoV)和同家族的其他冠状病毒一样,是一类单链的正义RNA病毒 ( single-stranded, (+)sense RNA virus).与其他种类的病毒(如负义RNA 病毒)相比,这类病毒有两个最重要的特征:(1)在其成熟的病毒颗粒中并没有RNA聚合酶(viral RNA polymerase)存在,即病毒复制、转录所需的病毒特有的RNA聚合酶,是在侵入宿主细胞之后才合成的. 而且,只是在病毒的扩增阶段,保留在宿主细胞内行使功能,并不参与病毒颗粒的组装.     

SARS疫苗研究进展

严重急性呼吸综合征(sARS)是由SARS相关冠状病毒(sARS-GoV)引起的一种新的传染病.虽然SARS的流行已经被有效控制,但很可能因实验室样本外泄或动物宿主中南类SARS-CoV演化而来的病毒的分离株导致再次爆发,阻止SARS再次流行最有效的方法就是研制安全有效的疫苗,所以,SARS疫苗的研究仍然是目前SARS相关研究的重点.不同类型SARS疫苗的研究已经迅速展开,并且有些疫苗研究已取得了突破性的进展,进入了临床试验阶段.但在SARS疫苗的研究过程中也遇到了很多问题,如抗体依赖性感染增强(ADE)、SARS-CoV病毒变异快、没有理想的动物模型等.本文对SARS疫苗的研究、疫苗研究中存在的问题等进行了综述.     

SARS病原学研究

中国疾病预防控制中心病毒预防控制所副所长梁国栋报告 :在SARS病毒的组织培养方面 ,他们从SARS病人的咽拭子中可以分离出 4个不同的冠状病毒株。它可在Vero E6细胞和RD细胞中繁殖 ,同时在接种 3～ 4天后产生明显典型而且稳定的CPE(细胞病变效应 )。经过有对照的血清学EIA法的分析 ,认为SARS病人的血清学与冠状病毒是相对应的。在此基础上 ,CDC病毒研究所与北京贝尔生物工程有限公司已联合完成了酶免测定SARS病毒抗体IgM/IgG试剂盒。但是 ,抗体诊断有一定的滞后性 ,特别是IgG ;IgM一般是很好的早期诊断指标 ,但在SARS病人…     

90例SARS患者含漱液内冠状病毒定量与临床转归的相关研究

目的通过对SARS患者含漱液内冠状病毒定量与临床转归的相关性的初步研究,以期能建立起客观的SARS重症救治早期预警指标.方法对2003年4～5月在本院诊断的90例SARS成年患者,77例SARS密切接触者进行含漱液的实时荧光定量(RT-PCR)方法检测SARS病毒定量,将其结果与临床转归进行对比分析.结果77例SARS密切接触者含漱液中病毒检测均为阴性,90例SARS病人病程第5～11天含漱液内病毒检测48例为阳性,且21例病毒定量>1.0×102copies/ml者中的9人出现ARDS,6人死亡,与病毒定量阴性或病毒定量<1.0×102copies/ml者比较仅各1例发展至ARDS,1例死亡,具有显著性差异.结论含漱液用于检测SARS病毒核酸对于早期诊断和未发病者的监测有着重要的意义.含漱液内SARS病毒定量高者有可能成为"超级传播者".SARS患者的含漱液内冠状病毒定量愈高提示疾病愈可能是重型,应加强监护,及早治疗,以期提高治愈率,降低病死率,是客观的SARS重症救治早期预警指标,应引起重视.