褪黑素对Alzheimer病模型大鼠认知功能和海马tau蛋白过度磷酸化的影响

目的 研究褪黑素(MT)对Alzheimer病(AD)模型大鼠认知功能和海马tau蛋白过度磷酸化的影响.方法 给大鼠海马内注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35制作AD模型;MT组大鼠从制模前7 d至制模后19 d每日腹腔注射MT,AD组大鼠制模后腹腔注射生理盐水;用Morris水迷宫试验检测大鼠的认知功能,银染法观察海马神经元形态,免疫组化法观察过度磷酸化tau蛋白的表达,并与正常对照组比较.结果 MT组大鼠Morris水迷宫试验结果明显好于AD组(均P＜0.001);海马CA1区磷酸化tau蛋白阳性细胞数(60.0±2.3)明显少于AD组(98.4±3.0)(P＜0.001),与正常对照组比较差异无统计学意义;海马CA1区神经元纤维形态较AD组规则.结论 MT可明显改善AD大鼠的认知功能,并且抑制海马tau蛋白的过度磷酸化.     

Tau蛋白过度磷酸化对脑淀粉样蛋白生成的影响

目的研究tau蛋白过度磷酸化对脑淀粉样蛋白生成的影响。方法用蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸（OA）在大鼠侧脑室内注射,每天1次连续8周。用Morris水迷宫和免疫组化方法观察OA组大鼠行为学改变、神经原纤维缠结及淀粉样蛋白的表达;并与对照组比较。结果与对照组相比,OA组大鼠Morris水迷宫平均潜伏期显著延长,学习获取能力较差,空间记忆能力衰退。OA组大鼠的海马CA1区、CA3区、CA4区、齿状回、大脑皮质出现tau蛋白磷酸化,神经原纤维缠结;大脑皮质及海马CA1区、CA3区、齿状回等部位出现β淀粉样蛋白沉积。结论Tau蛋白过度磷酸化可以增加脑部淀粉样蛋白的沉积。     

雌激素对去卵巢大鼠学习记忆功能及海马神经元的保护作用

目的 研究雌激素对去卵巢(OVX)大鼠学习记忆功能及海马神经元的保护作用.方法 切除雌性SD大鼠双侧卵巢制作OVX大鼠模型,给予雌二醇(E2)200 μg/kg(OVX+E2组)皮下注射,每周2次,共5周.用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆功能,HE染色及Bielschowski染色法观察海马神经元形态,免疫组化法观察海马tau蛋白磷酸化变化;并与OVX组和正常对照组比较.结果 与OVX组大鼠相比,OVX+E2组大鼠Morris水迷宫测试成绩明显改善(均P<0.05);海马CA1区神经元及纤维形态较规则,tau蛋白磷酸化阳性细胞数明显减少(均P<0.05).结论 OVX雌性大鼠应用雌激素可改善学习记忆功能障碍、保护海马神经元及降低tau蛋白磷酸化水平.     

海马注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病大鼠模型的实验研究

目的：海马注射β-淀粉样蛋白（Aβ）建立阿尔茨海默病（AD）大鼠模型，并进行初步评价。方法：应用凝聚态Aβ1-40进行大鼠右侧海马齿状回（DG）背侧细胞带微量注射，2周后从学州记忆、海马组织病理和异常磷酸化tau蛋白表达的变化3个方面评价大鼠模型。结果：Aβ1-40注射后大鼠Morris水迷宫学习记忆能力明显受损（P〈0．01）；注射区内DG背侧细胞带神经元丢失（P〈0．01）；注射侧海乌内Aβ沉积；海马神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达显著增加（P〈0．01）。结论：凝聚态Aβ1-40海马注射具有明确的在体神经毒性作用，可导致大鼠认知功能下降以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和神经元内异常磷酸化tau蛋白的表达，可成功建立AD大鼠模型。     

葛根素对Alzheimer病大鼠海马tau蛋白过度磷酸化及胆碱乙酰转移酶活性的影响

目的探讨葛根素(Pue)对Alzheimer病(AD)大鼠海马色氨酸404位点tau蛋白过度磷酸化(Pser404tau)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、AD组和Pue组;右侧杏仁核注射β淀粉样肽(Aβ2535)制备AD大鼠模型,假手术组同样部位注射三氟乙酸;用Y型迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;应用免疫组化方法检测各组大鼠海马Pser404tau阳性细胞及ChAT阳性细胞的表达。结果(1)与假手术组相比,AD组大鼠迷宫试验成绩下降,海马Pser404tau阳性细胞数明显增加,ChAT阳性细胞数明显减少(均P<0.01);(2)与AD组相比,Pue组学习记忆成绩明显提高(P<0.05),Pser404tau阳性细胞数明显降低,ChAT阳性细胞数明显增加(均P<0.01)。结论Pue明显改善AD大鼠学习记忆能力,可能与其抑制tau蛋白过磷酸化反应、减轻胆碱能神经元损伤、增加ChAT活性和功能、催化Ach合成有关。     

CuSO_4对阿尔茨海默病模型行为学和病理学的影响

目的研究CuSO4对阿尔茨海默病模型大鼠行为学和病理学的影响。方法 SD大鼠经水迷宫淘汰后随机分为6组,正常组、PBS组、AD模型组、低剂量CuSO4组(1 mg/kg)、中剂量CuSO4组(3 mg/kg)、高剂量CuSO4组(5 mg/kg)。处理:PBS组海马CA1区注射无菌PBS溶液;AD模型组为右侧海马注射凝聚态Aβ1⁴2;低中高剂量CuSO4组分别在AD造模成功后取右侧侧脑室注射无菌CuSO4溶液。用Morris水迷宫检测大鼠的行为学变化,冰冻切片HE染色和尼氏染色观察神经元形态学变化情况。Western blot检测总tau蛋白和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的表达变化。结果与正常组和PBS组相比较,AD模型组大鼠的学习记忆能力下降,神经元凋亡严重,GSK-3β和tau蛋白的表达增加;3组CuSO4处理组与AD组比较,大鼠认知功能下降明显,神经元凋亡严重,GSK-3β和tau表达增加。随着CuSO4注射剂量的增加,大鼠认知功能下降越严重,细胞凋亡越明显,GSK-3β和tau的表达增加。结论 CuSO4侧脑室注射能够损害AD模型大鼠的学习记忆功能,能够促进海马神经元凋亡,能够增加糖原合成酶激酶3β和tau蛋白的表达。     

姜黄素对Aβ诱导的AD大鼠海马CRMP-2表达的影响

目的探讨姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠认知功能和海马CRMP-2的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、AD对照组和姜黄素给药组。Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马制作AD大鼠模型。Morris水迷宫试验测定大鼠学习记忆能力。RT-PCR检测海马内CRMP-2mRNA的表达,Western blotting方法检测海马内CRMP-2和p-CRMP-2蛋白表达,免疫组织化学方法检测海马内轴突蛋白表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05)。与空白对照组相比,AD对照组大鼠海马区CRMP-2表达显著降低(P<0.05),轴突蛋白NFP-200阳性纤维排列紊乱,不规则,纤维数目显著减少(P<0.05);而在姜黄素组大鼠海马区可见CRMP-2表达升高,p-CRMP-2表达降低,而轴突蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论姜黄素能够改善Aβ1-40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与姜黄素提高CRMP-2的表达并抑制CRMP-2的磷酸化从而促进轴突再生有关。     

去卵巢及穹窿海马伞切断复合模型大鼠不同脑区雌激素α受体mRNA的表达及倍美力的干预作用

目的观察倍美力对去卵巢及穹窿海马伞切断后大鼠脑皮质、基底前脑及海马CA_1区雌激素α受体(estrogen receptor alpha,ERa)mRNA表达的干预作用,探讨其脑保护作用的机制。方法健康雌性Wister大鼠30只,随机分成对照组、模型组、倍美力组;制备去卵巢及穹窿海马伞切断复合模型大鼠,采用Morris水迷宫观察其学习、记忆能力,利用RT-PCR及Western blotting法观察每组大鼠不问脑区雌激素α受体mRNA及蛋白的表达。结果模型组大鼠脑皮质、基底前脑、海马CA_1区雌激素α受体mRNA及蛋白的表达明显降低,学习、记忆能力下降,与对照组、倍美力组比较有显著差异(P<0.01);对照组与倍美力组比较无明显差异(P>0.05)。结论倍美力可上调大鼠脑皮质、基底前脑及海马CA_1区雌激素α受体mRNA及蛋白的表达,可能参与了学习、记忆能力的改善。     

普罗布考对血管性痴呆大鼠认知功能及海马区JNK、p-JNK表达的影响

目的观察普罗布考对血管性痴呆(VD)大鼠的认知功能及海马区JNK、p-JNK表达的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、普罗布考组,采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法制作VD大鼠模型,灌胃给予普罗布考8w后通过Morris水迷宫观察大鼠的学习记忆能力,采用流式细胞术评估大鼠海马神经元凋亡率,免疫组织化学法和蛋白印迹(Western blot)法检测大鼠海马c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠学习记忆能力明显减弱,大鼠海马细胞凋亡率显著增高,海马区p-JNK蛋白的表达水平增高。应用普罗布考后大鼠学习记忆能力明显提高,海马细胞凋亡率显著降低,海马区p-JNK蛋白的表达水平降低。结论普罗布考可以改善VD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与其抑制JNK信号通路的异常激活有关。     

二甲双胍对阿尔茨海默病大鼠的疗效及机制研究

目的观察二甲双胍对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆能力的影响,并进一步探讨其可能机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和治疗组。模型组和治疗组大鼠双侧海马各注射5μl Aβ25-35(2 g/L)建立AD模型,假手术组注射等量生理盐水。次日,对治疗组大鼠予以二甲双胍灌胃治疗,100 mg/(kg·d),连续给药2 w。干预结束后,检测各组大鼠学习记忆能力、海马区细胞基本情况及PI3K、AKT、P-AKT、GSK3β、P-GSK3β、tau[p S202]、tau5的相对表达量。结果二甲双胍能显著改善AD模型大鼠的认知能力(P 0.05);各组大鼠海马区细胞基本形态结构无明显差异;与正常组相比,假手术组上述蛋白相对表达量无明显改变,但模型组大鼠海马组织中PI3K、P-AKT/AKT、P-GSK3β/GSK3β的表达情况明显下调(P 0.05),干预后有所改善(P 0.05);模型组中tau[p S202]/tau5明显高于正常组和假手术组,干预后tau蛋白磷酸化程度降低(P 0.05)。结论二甲双胍能够有效改善AD模型大鼠学习记忆能力,其机制可能与"PI3K-AKTGSK3β-tau磷酸化"信号通路密切相关。     

厄贝沙坦对Alzheimer病大鼠海马Tau蛋白磷酸化的影响

目的研究厄贝沙坦对Alzheimer病(AD)大鼠海马Tau蛋白磷酸化的影响。方法侧脑室注射寡聚体形式的β淀粉样蛋白(Aβ)1-42制作AD大鼠模型;自术前1周至术后2周(手术当天暂停给药1次),厄贝沙坦干预组给予厄贝沙坦30mg/(kg.d)灌胃,AD模型组给予等量生理盐水灌胃。用Morris水迷宫试验检测学习记忆能力,Westernblot法检测海马Tau蛋白及其丝氨酸199/202位点、396位点磷酸化水平;分析软件测定Westernblot图像条带光密度(OD)值。并与正常对照组和假手术组比较。结果AD模型组Morris水迷宫试验逃避潜伏期比正常对照组和假手术组长(均P<0.05),厄贝沙坦干预组与正常对照组和假手术组差异无统计学意义。4组间海马Tau蛋白总量差异无统计学意义;与AD模型组比较,厄贝沙坦干预组丝氨酸199/202和396位点磷酸化Tau蛋白水平明显降低(均P<0.05);而与正常对照组和假手术组差异无统计学意义。结论厄贝沙坦能减轻AD大鼠海马Tau蛋白磷酸化水平。     

GM1对Aβ诱导的AD大鼠海马CA1区神经元损伤的保护作用研究

目的观察GM1对Aβ诱导的AD大鼠学习记忆及海马神经元损伤的保护作用。方法实验分为3组:假模型组、盐水对照组、GM1治疗组。用立体定向技术向大鼠双侧海马CA1区局部注射Aβ25～35 10μl(1μg/μl)建立大鼠AD模型,用GM1腹腔局部注射给予干预。采用Morris水迷宫实验评价大鼠空间分辨及学习记忆能力,用TUNEL染色法观察AD大鼠海马CA1区神经元凋亡,用Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白含量。结果Aβ25～35诱导的AD大鼠海马CA1区神经元凋亡明显,并可见Bax表达明显增强,Bcl-2少许表达。GM1治疗组海马结构比较完整,可见少量神经元凋亡,而Bcl-2蛋白表达增强、Bax蛋白表达下降,与盐水对照组相比,上述变化在两组间均有显著性差异(P<0.01)。Morris水迷宫实验也提示GM1对AD大鼠模型的学习、空间记忆能力有明显的改善(P<0.01)。结论 (1)GM1能抑制大鼠海马神经元凋亡,起到脑保护作用,从而改善大鼠空间分辨及学习记忆能力。(2)GM1可促使Bcl-2高表达、Bax表达下降,这可能是其减少海马神经细胞凋亡,产生脑保护作用的机制之一。     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型;用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力;应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响;应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍;AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高,而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

尿酸对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响及其机制

目的 观察尿酸对阿尔茨海默病(Alzheimer disense,AD)大鼠学习记忆能力的影响,并探讨作机制.方法 Morris水迷宫实验筛选出90只大鼠,随机分为空白对照组,模型对照组.尿酸处理组(1～4组),每组15只.Aβ1-42海马注射制作AD模型,用Morris水迷宫实验观察干预前后大鼠空间学习记忆能力的变化,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒测定海马区MDA的含量;免疫组化染色测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组大鼠空间学习记忆能力下降(P<0.01),海马区MDA含量和caspase-3明显增高(P<0.01);与模型对照组比较,2种剂量尿酸处理组大鼠的学习记忆能力明显改善(P<0.01).海马区MDA和caspase-3的表达减少(P<0.01).结论 尿酸具有改善AD大鼠空间学习记忆作用,可能与抗氧化应激作用及抑制海马中easpase-3表达有关.     

戊四氮致痫大鼠学习记忆改变及海马CA_1和CA_3区神经颗粒素的表达变化

目的 探讨戊四氮慢性点燃癫痫对大鼠学习记忆能力的影响及海马CA_1、CA_3区神经颗粒素(neu-rogranin,Ng)的表达变化.方法 采用戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)腹腔注射慢性点燃癫痫(chronic epileptic,CEP)模型,用Morris水迷宫和Y迷宫对大鼠进行学习记忆能力检测,运用免疫组织化学方法测定大鼠海马CA_1、CA_3区Ng的表达变化.结果 与对照组比较,慢性癫痫发作组大鼠在水迷宫中的逃避潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.01),在Y迷宫中的错误反应次数增多(P<0.05).在海马CA_1区Ng的免疫反应强度减弱(P<0.05),CA_3区两组比较差异无统计学意义.结论 戊四氮慢性点燃癫痫大鼠学习记忆能力受损,海马CA_1区Ng表达减少可能参与了这一过程.

Abstract：

Objective To explore the effect of Pentylenetetrazole (PTZ)-kindled epilepsy on rats' learning and memory and the expression of neurogranin(Ng) in hippocampal CA_1 and CA_3. Methods Use chronic model of epilepsy induced by PTZ intraperitoneal injection. The ability of learning and memory were assessed by the Morris water maze and Y maze. The expression of Ng in hippocampal CA_1 and CA_3 was determined by immunocytochemical method respectively. Resuits The learning and memory ability of the epilepsy rats was impaired. Meanwhile,The immunological reaction of Ng for CEP group at CA_1 was weaker than NC group, but it made no difference at CA_3. Conclusion The impairment of learning and memory ability of the epilepsy rats might be related with the changes of Ng in hippocampal CA_1.     

重复经颅磁刺激对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF、NMDAR1、SYN表达及超微结构的影响

目的研究重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对血管性痴呆大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位NR1(N-meth-yl-D-aspartate receptor,NMDAR1)和突触素(synaptophysin,SYN)表达及超微结构的影响,进一步探讨rTMS治疗血管性痴呆的分子机制。方法将36只雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组10只、痴呆模型组10只、低频刺激组8只和高频刺激组8只。采用两血管阻断法制备血管性痴呆模型。低频刺激组大鼠接受频率0.5Hz重复经颅磁刺激,高频刺激组大鼠接受频率5Hz重复经颅磁刺激。采用Morris水迷宫测试方法测试各组大鼠空间学习记忆力。应用免疫组织化学方法检测海马CA1区BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表达情况,应用透射电镜观察海马CA1区超微结构变化。结果 Morris水迷宫测试结果及透射电镜观察均显示磁刺激组大鼠较痴呆模型组大鼠均有好转。痴呆模型组大鼠BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表达量比正常对照组大鼠减低(P0.05),低频刺激组和高频刺激组BDNF、NMDAR1、SYN蛋白表达量均比痴呆模型组增高(P0.05),低频刺激组与高频刺激组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论重复经颅磁刺激对血管性痴呆有恢复治疗作用,其机理可能与rTMS能增加大鼠海马CA1区BDNF、NMDAR1和SYN的表达。     

钙调神经磷酸酶对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马区基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨钙调神经磷酸酶对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法采用Aβ_(1-42)海马注射建立AD模型,以他克莫司(FK506)干预。用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,RT-PCR、免疫组化以及明胶酶谱技术检测海马区MMP-9的表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退(P0.01),MMP-9基因转录、蛋白表达和酶活性均明显增加(P0.05)。FK506干预后,AD大鼠学习记忆能力明显改善,其海马区MMP-9基因转录减少、酶活性降低(P0.05)。结论抑制CaN激活可改善AD症状,可能与影响MMP-9的表达有关。     

Aβ25-35杏仁核注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化和AchE的影响

目的 探讨杏仁核注射Aβ25-35对大鼠脑内异常磷酸化tau蛋白(Pser404-tau)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法 右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(Aβ25-35)制备阿尔茨海默病(AD)大鼠模型；用Y-迷宫检测大鼠学习记忆能力；应用免疫组化方法测定Aβ对大鼠海马Pser404-tau的影响；应用分光光度计测定大鼠海马区AchE活性变化。结果 Aβ25-35杏仁核注射可导致大鼠学习记忆功能障碍；AD模型组的Pser404-tau阳性细胞数较假手术组显著增高，而海马AchE活性较假手术组明显降低。结论杏仁核注射Aβ25-35可导致Ser404位点的tau蛋白过度磷酸化和海马胆碱能系统功能损害。     

胰高血糖素样肽1(GLP-1)改善阿尔茨海默病大鼠模型的认知功能及其机制研究

目的 探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)改善阿尔茨海默病大鼠认知功能的机制。方法 以正常成年雄性SD大鼠为研究对象,将其随机分为正常对照组、AD模型组、AD模型+GLP-1干预组和AD模型+PPARγ抑制剂+GLP-1干预组; 其中AD模型组以侧脑室注射STZ(3 mg/kg,10 μL)制造AD模型,AD模型+GLP-1干预组在AD造模基础上每日腹腔注射利拉鲁肽(200 μg/kg,10 μL),连续给药28 d,AD模型+PPARγ抑制剂+GLP-1干预组在AD造模基础上侧脑室注射PPARγ抑制剂GW9662(2.5 nmol/g,10 μL),随后腹腔注射利拉鲁肽(200 μg/kg,10 μL)并连续给药28 d; 观察4组大鼠在Morris水迷宫中的学习和记忆能力变化; ELISA方法观察各组大鼠海马Aβ42的水平; Western blot观察各组大鼠海马PPARγ蛋白表达水平。结果 与AD模型组比较,GLP-1干预后的AD大鼠在Morris水迷宫中学习和记忆能力明显改善,海马Aβ42的水平显著降低,海马PPARγ蛋白表达水平显著升高(P<0.05); 与AD模型+GLP-1干预组比较,AD模型+PPARγ抑制剂+GLP-1干预组大鼠海马PPARγ蛋白表达水平显著降低,在Morris水迷宫中学习和记忆能力明显下降,海马Aβ42的水平显著增高(P<0.05)。结论 GLP-1可能通过激活PPARγ抑制Aβ 蓄积,从而起到改善阿尔茨海默病的认知功能作用。     

褪黑素对阿茨海默病大鼠海马突触素表达的影响

目的 研究褪黑素(melatonin,MT)对阿茨海默病(Alzheimer's disease , AD)大鼠的海马突触素表达的影响.方法 大鼠随机分为4组,分别为AD组、AD-MT大剂量干预组、AD-MT小剂量干预组和假AD组.应用β-淀粉样蛋白(Aβ)注入大鼠海马CA1区,建立大鼠AD模型,AD-MT干预组随之以MT灌胃,1次/d,直至试验结束.应用电迷宫检测大鼠学习记忆情况,用免疫组化方法检测大鼠海马CA1区突触素的表达情况.结果 MT可以明显改善AD大鼠的学习记忆能力,提高大鼠海马CA1区突触素的阳性表达.结论 MT对AD大鼠有显著脑保护作用.