miR-940抑制Cbl-b的表达促进胃癌细胞的增殖

目的:研究miR-940对胃癌细胞增殖的影响,探讨miR-940和Cbl-b信号转导通路在此过程中的作用。方法:采用Real-time PCR法检测胃癌细胞中miR-940的表达,MTT法检测胃癌细胞的增殖能力,双荧光素酶报告基因检测系统检测miR-940与Cbl-b的结合,Western blotting实验观察蛋白的表达。结果:MTT法显示miR-940可促进胃癌细胞MGC803的增殖,BLAST对比分析结果显示Cbl-b与miR-940存在结合位点。双荧光素酶报告基因检测系统证实Cbl-b是miR-940的靶基因。Western blotting结果显示过表达miR-940后,Cbl-b的表达明显下调。Cbl-b抑制胃癌细胞MGC803的增殖。miR-940通过负向调节Cbl-b的表达促进胃癌细胞的增殖。结论:miR-940通过抑制Cbl-b的表达,促进胃癌细胞MGC803的增殖。     

miR-106a靶向调控TIMP2对人胃癌细胞增殖、转移及EMT的影响

目的 探讨微小RNA-106a(miR-106a)在人胃癌组织中的表达及其与癌细胞增殖、转移的关系。方法 收集人胃癌和配对癌旁福尔马林固定-石蜡包埋样本共50对,Real-time PCR法检测miR-106a在人胃癌组织中的表达;培养人低分化胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-45和永生化人胃黏膜上皮细胞GES-1,Real-time PCR法检测miR-106a在人胃癌细胞中的表达;MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,生物信息学和双荧光素酶法鉴定miR-106a靶基因,Western blot检测靶蛋白TIMP2、MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin表达。结果 Real-time PCR检测显示,与癌旁组织比较,miR-106a在人胃癌组织中高表达,差异有统计学意义(P＜0.001);与GES-1细胞比较,miR-106a在人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-45中普遍高表达,差异有统计学意义(P＜0.001)。MTT检测显示抑制miR-106a后胃癌细胞SGC-7901、BGC-823增殖能力下降(P＜0.01)。Transwell显示胃癌细胞BGC-823迁移、侵袭能力下降(P＜0.001)。双荧光素酶法显示TIMP2野生型报告基因与miR-106a mimic共转后,其荧光素酶活性较miR-106a NC组明显下降(P＜0.001),但TIMP2突变型报告基因无明显变化。Western blot显示抑制miR-106a后TIMP2表达升高,MMP2、MMP9表达下降,E-cadherin表达升高,N-cadherin表达下降。结论 miR-106a在人胃癌中的高表达可能通过靶向TIMP2而影响癌细胞的增殖、转移和上皮-间质转化。     

miR-27a促进胃癌细胞AGS增殖与侵袭及其机制探讨

目的:探究miR-27a对胃癌细胞AGS增殖与侵袭能力的影响,并进一步探讨能否靶向调控盐诱导激酶1(salt induce kinase 1,SIK1)和F框/WD_40域蛋白7(F-box and WD_40 repeat domain protein 7,FBXW7)。方法:利用TCGA数据库分析胃癌组织与邻近正常胃组织之间miR-27a表达水平的差异;利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-27a mimics和miR-27a NC转入AGS细胞中,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-27a的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活力,细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。生物信息学预测miR-27a的靶基因,通过蛋白印迹实验验证miR-27a对SIK1的调控作用;通过双荧光酶素报告基因、Real-time PCR和蛋白印迹实验验证miR-27a对FBXW7的调控作用。利用TCGA数据库分析胃癌组织与邻近正常胃组织之间FBXW7 mRNA表达水平的差异,分析FBXW7 mRNA表达水平与胃癌患者5年生存率的关系。结果:TCGA数据库分析表明miR-27a在胃癌组织中的表达高于邻近正常胃组织。Real-time PCR表明miR-27a在模拟物组中的表达较对照组高,细胞功能实验表明过表达miR-27a能促进胃癌细胞的增殖与侵袭能力;TargetScan预测SIK1为miR-27a的潜在靶基因,蛋白印迹实验表明SIK1不能被 miR-27a靶向负性调控。TargetScan预测FBXW7为miR-27a的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因结果表明miR-27a可抑制FBXW7 3' UTR双荧光素酶活性,突变其结合位点后抑制作用消失。Real-time PCR和蛋白印迹实验表明过表达miR-27a后FBXW7的蛋白与mRNA表达均明显下调。TCGA数据库分析表明胃癌组织中FBXW7 mRNA的表达较邻近正常胃组织明显下降,FBXW7 mRNA表达低的组胃癌患者5年生存率更低。结论:过表达miR-27a能增强胃癌细胞AGS的增殖与侵袭能力,可能是通过负性调控FBXW7发挥的促瘤作用。在胃癌细胞AGS中,SIK1不能被miR-27a负性调控,可能被FBXW7靶向介导泛素化降解。     

miRNA-1靶向DDX5抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨微小RNA(miR)-1对食管癌细胞株EC-109生长、侵袭及迁移的影响和其相关作用调控机制。方法:采用脂质体瞬时转染技术,对体外培养的EC-109细胞转染miR-1 mimics,分别采用CCK-8法和Transwell实验检测miRNA-1对食管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响;生物信息学预测miR-1可能的靶基因,并用双荧光素酶报告基因和Western blot法验证其靶基因。结果:过表达miRNA-1后,CCK-8和Transwell实验结果显示食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力显著降低(P<0.05);生物信息学分析显示DDX5可能是miR-1的靶基因;双荧光素酶报告基因结果显示miR-1与DDX5 mRNA 3' UTR相结合;Western blot结果显示高表达miR-1后,DDX5表达下降。结论:miRNA-1可能通过靶向负调控DDX5的表达抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-325-3p靶向CLDN1基因调控胃癌上皮间质转化和侵袭转移

目的 探讨miR-325-3p靶向CLDN1基因对胃癌上皮间质转化和侵袭转移的影响。方法 选取人胃黏膜上皮细胞株GES-1以及人胃癌细胞株HGC27、SGC-7901、MKN-45和MGC-803,并检测细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-325-3p和CLDN1的靶向关系,干预胃癌细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达,qRT-PCR和Western blot检测细胞中N-cadherin、Vimentin和MMP2的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,Transwell和流式细胞仪分别检测细胞侵袭和凋亡能力。结果 相对于GES-1细胞,MGC-803细胞中miR-325-3p表达降低而CLDN1表达增高（均P<0.05）,双荧光素酶报告实验证实CLDN1为miR-325-3p的靶基因。过表达miR-325-3p能够抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,促进胃癌细胞凋亡,抑制miR-325-3p则能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,抑制胃癌细胞凋亡（均P<0.05）。而过表达CLDN1则能够逆转miR-325-3p过表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论 miR-325-3p能够靶向抑制CLDN1进而抑制胃癌细胞的侵袭转移和上皮间质转化,促进胃癌细胞凋亡,miR-325-3p有望成为治疗胃癌的新靶点。     

miR-320a抑制结肠癌细胞增殖及肺转移作用的研究

摘 要：［目的］ 探讨调节结肠癌细胞中miR-320a的表达水平后,其对结肠癌细胞生物学行为的影响及可能作用机制。［方法］ 检测调节miR-320a结肠癌细胞的表达水平后,用MTT法检测细胞增殖能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力变化,通过给裸鼠尾静脉注射miR-320a不同表达水平的结肠癌细胞后,观察裸鼠肺转移的情况;通过生物信息学软件预测miR-320a的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因系统进行鉴定,Western Blot法检测β-catenin、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达情况。［结果］ 通过慢病毒感染miR-320a质粒上调结肠癌细胞中miR-320a水平后,可以抑制结肠癌细胞增殖、抑制结肠癌细胞侵袭及肺转移,β-catenin是miR-320a的靶基因,miR-320a下调β-catenin、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin表达,上调E-cadherin表达。［结论］ miR-320a可以抑制结肠癌细胞的增殖及侵袭转移。     

miR-218-5p靶向下调LPAR3抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-218-5p通过调控LPAR3表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常宫颈细胞H8和4种宫颈癌细胞（SiHa、HeLa、MS751和HT-3）中miR-218-5p和LPAR3的表达。以HeLa细胞为后续研究对象,分别构建过表达miR-218-5p和敲减LPAR3的HeLa细胞株,CCK-8法检测细胞存活情况,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白CyclinD1、迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218-5p和LPAR3的靶向调控关系。结果:与人正常宫颈细胞H8相比,4种宫颈癌细胞miR-218-5p的表达显著下调,LPAR3的表达显著上调。过表达miR-218-5p或敲减LPAR3均可抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达。LPAR3是miR-218-5p的靶基因,miR-218-5p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可逆转miR-218-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:miR-218-5p通过靶向下调LPAR3表达抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-218-5p/LPAR3分子轴有望成为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

miR-200a抑制YAP1基因表达对肺癌细胞增殖的影响

  目的   研究微小RNA-200a（miR-200a）对肺癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。   方法   采用Real-time PCR检测15例非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织、人肺癌细胞株（A549、NCI-H520、SK-MES-1）及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平。用CCK-8法检测miR-200a对A549肺癌细胞增殖活性的影响。通过生物信息学方法预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-200a对靶基因YAP1的调控作用。CCK-8法检测下调靶基因YAP1对A549肺癌细胞株增殖活性的影响。   结果   miR-200a在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中表达明显降低（P < 0.01）。上调miR-200a表达后明显抑制A549肺癌细胞的增殖活力（P < 0.01）。双荧光素酶报告基因显示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3'-UTR区域抑制荧光素酶活性（P < 0.01）,Real-time PCR和Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞YAP1 mRNA和蛋白的表达水平（P < 0.01）。CCK-8法显示下调YAP1的表达能够明显抑制A549肺癌细胞的增殖活性（P < 0.01）。   结论   miR-200a通过靶向作用于YAP1基因来抑制肺癌细胞的增殖,从而在肺癌中发挥抑癌基因的功能。      

miR-520c-3p靶向Rab22a抑制肺腺癌细胞迁移和侵袭的研究

  目的  探讨miR-520c-3p对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。  方法  选取2010年2月至2015年1月天津医科大学肿瘤医院肿瘤生物样本库118例肺腺癌患者标本。RT-qPCR检测miR-520c-3p及靶基因Rab22a mRNA的表达。Transwell检测肺腺癌细胞侵袭能力的变化。通过生物信息预测miR-520c-3p的靶基因。采用双荧光素酶报告基因检测,并结合Western blot及挽救实验验证miR-520c-3p和Rab22a的调控关系。  结果  肺腺癌组织中miR-520c-3p的表达量低于癌旁组织,且高表达提示预后更好。miR-520c-3p可抑制肺腺癌细胞的迁移及侵袭的能力。通过生物信息分析、双荧光素酶报告基因检测及挽救实验表明,miR-520c-3p靶向负调控Rab22a的表达。  结论  miR-520c-3p在肺腺癌中低表达,并通过靶向负调控Rab22a抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力。      

miR-216a-5p通过下调MMP16表达抑制肺癌细胞的侵袭

背景与目的：微小RNA(microRNA,miRNA)是一类存在于真核生物体内只有19~39 bp大小的内源性非编码RNA,它能在转录和翻译水平调控基因的表达,在细胞的增殖分化、新陈代谢、免疫调控和凋亡等方面起着重要的作用。本研究检测miR-216a-5p在肺癌组织和肺癌细胞系的表达并探讨其对肺癌细胞侵袭能力的影响及其调控机制。方法：使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测55例肺癌患者的肺癌组织和7种肺癌细胞系中miR-216a-5p的表达情况;miR-216a-5p瞬时转染A549、95D和H460 3种肺癌细胞系,使用Transwell侵袭实验检测miR-216a-5p对肺癌细胞系侵袭能力的影响;预测并构建miR-216a-5p的候选靶基因基质金属蛋白酶16(matrix metalloproteinase 16,MMP16)基因的双荧光素酶报告基因表达质粒,使用qRT-PCR和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测miR-216a-5p对靶基因MMP16的mRNA和蛋白表达的影响;小干扰RNA(siRNA)干扰MMP16与上调miR-216a-5p对比检测其对肺癌细胞侵袭能力的影响。结果：90.91%(50/55)的肺癌患者肿瘤组织中miR-216a-5p表达明显低于对应的癌旁组织(P<0.05)。7种肺癌细胞系中miR-216a-5p的表达量仅为对照组的7.00%~32.00%(P<0.05)。上调miR-216a-5p的表达能够抑制肺癌细胞的侵袭;siRNA干扰MMP16与转染上调miR-216a-5p都能够抑制肺癌细胞中MMP16的表达,并抑制肺癌细胞侵袭。结论：miR-216a-5p可以作为临床肺癌诊断的候选标志物之一,并且其能够通过下调MMP16的表达从而抑制肺癌细胞的侵袭。     

MicroRNA-181a promotes gastric cancer by negatively regulating tumor suppressor KLF6

MicroRNAs have emerged as crucial regulators of tumorigenesis. However, it remains unknown whether miR-181a is involved in the pathogenesis of gastric cancer. In this study, we found that miR-181a is overexpressed in human gastric cancer tissues. Ectopic expression of miR-181a mimic promoted the proliferation, colony formation, migration, and invasion and inhibited the apoptosis of SGC-7901 gastric cancer cells, whereas ectopic expression of miR-181a inhibitor inhibited the malignant phenotypes of SGC-7901 cells. Site-directed mutagenesis and luciferase reporter assay demonstrated that miR-181a repressed KLF6 expression by targeting its 3??-UTR. Western blot analysis further showed that KLF6 protein was significantly decreased or increased when miR-181a mimic or inhibitor was transfected into SGC-7901 cells, respectively. In summary, these data suggest that KLF6 gene is a direct target of miR-181a and miR-181a functions as an oncomir in gastric cancer by repressing the expression of tumor suppressor KLF6.     

MicroRNA-181a Functions as an Oncomir in Gastric Cancer by Targeting the Tumour Suppressor Gene ATM

Based on our previous experiments, this study is to further investigate the functional significance of miR-181a and its target gene in gastric cancer. Expression of miR-181a was detected by qRT-PCR in three normal gastric tissues and three human gastric cancer cell lines (SGC-7901, MGC-803, and BGC-823 cells). After transfection with miR-181a inhibitor, proliferation, apoptosis, migration, and invasion of the SGC-7901 cells were evaluated. Ataxia-telangiectasia mutation (ATM) was predicted as a target gene of miR-181a with bioinformatics analysis, and was verified by lucifersae reporter assay. Expression of ATM protein in HEK293T cells and tissues was measured by Western Blot. Expression of ATM mRNA in HEK293T cells was measured by RT-PCR. Compared with three non-tumour tissues, the expression of miR-181a in three gastric cancer cells was significantly increased by 26.68, 14.83 and 14.96 folds; Compared with Negative Control(NC) and blank groups, transfection of miR-181a inhibitor led to inhibition of SGC7901 cell proliferation, invasion, and migration as well as promotion of apoptosis. A luciferase reporter assay demonstrated that ATM was a direct target of miR-181a, miR-181a mimics transfection down regulated ATM mRNA and protein expression. There was inverse correlation between miR-181a and ATM protein expression in gastric cancer and normal gastric tissues. Our study demonstrates that over-expression of miR-181a might be involved in development of gastric cancer by promoting proliferation and inhibiting apoptosis probably through directly targeting ATM. miR-181a modulation may be a potential strategy for the development of miRNA-based therapy of gastric cancer.     

miR-4465调控EZH2的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨miR-4465通过调控EZH2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法:qRT-PCR检测胃癌组织和细胞系中miR-4465的表达水平;在MKN45细胞中过表达miR-4465或沉默EZH2,采用CCK-8和Transwell检测MKN45细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;Western blotting检...     

miR-135b-5p靶向CMTM3调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力

目的:探究miR-135b-5p通过靶向CMTM3基因调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。方法:采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测胃癌组织和细胞系中CMTM3和miR-135b-5p的表达水平。利用慢性病毒转染技术将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌细胞,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8比色法和Transwell实验检测转染后细胞的增殖、侵袭和迁移能力;Western blotting 检测转染后细胞中CMTM3蛋白表达水平。利用生物信息学网站预测miR-135b-5p潜在靶基因CMTM3,利用荧光素酶实验进行验证。结果:RT-qPCR检测结果表明,miR-135b-5p在胃癌组织和胃癌细胞株中呈现高表达,CMTM3在胃癌组织中呈现低表达（P<0.01）。RT-qPCR检测转染效率,结果显示,转染miR-135b-5p inhibitor敲低了miR-135b-5p的表达水平（P<0.001）;CCK-8和Transwell实验结果表明,敲低miR-135b-5p后抑制了胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力（P<0.01）,Western blotting实验结果表明,敲低miR-135b-5p促进了CMTM3蛋白的表达。生物信息学网站预测CMTM3为miR-135b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验证实了miR-135b-5p直接靶向胃癌细胞中CMTM3基因（P<0.01）。结论:miR-135b-5p作为重要的调节因子,反向调节抑癌靶基因CMTM3,从而促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。