大鼠脑缺血-再灌注损伤早期DWI参数和AQP4蛋白表达相关性研究

目的脑水肿是脑缺血后主要的病理表现之一,研究表明水通道蛋白4(AQP4)在脑梗死后脑水肿的形成和发展中起着重要作用,目前尚缺乏磁共振弥散加权成像(DWS)与AQP4表达在急性脑缺血-再灌注早期相关性的研究。本文旨在评估大鼠脑缺血—再灌注早期脑损伤区水通道蛋白4表达、DWI信号强度(SI)及表观扩散系数(ADC)之间的相关性以及AQP4表达与缺血性脑水肿之间的关系。方法健康成年SD雄性大鼠(n=40),随机分成4组,分别为脑缺血—再灌注12h、1d、3d组和假手术组,采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血—再灌注(MCAO/R)模型,Zea Longa评分评价神经功能损伤程度,Philips Achieva 3.0T MRI扫描仪对假手术组和缺血—再灌注后不同时间点大鼠脑部行冠状位DWI扫描,在工作站上重建ADC图,测量基底核层面梗死灶DWI-SI和ADC值,计算相对ADC值(rADC)和相对DWI—SI(rDWI—SI)值。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价梗死体积的变化。免疫组化染色测定AQP4蛋白表达,用平均吸光度(MOD)值评价染色程度。结果假手术组动物麻醉苏醒后未见神经功能缺损,脑缺血—再灌注后12h、1d和3d组大鼠出现不同程度神经功能损伤,1d组最重。假手术组TTC染色未见梗死体积,脑缺血—再灌注后12h、1d和3d梗死体积逐渐增加,3d时最大。水肿变化规律同梗死体积相仿。假手术组海马区及皮质区AQP4免疫组化染色较浅淡,MCAO/R后12h缺血侧海马区及皮质均可见AQP4阳性细胞,12h-3d AQP4的MOD值随时间延长逐渐增高,3d时达到高峰。12h、1d和3d组大鼠脑水肿体积与相应时间点缺血侧皮质区和海马区AQP4表达均呈正相关(r=0.642,r=0.605,均P0.05);三组大鼠基底核区梗死灶rADC值与缺血侧皮质区、海马区AQP4表达均呈正相关(r=0.542,P=0.037;r=0.655,P=0.008)。结论大鼠脑缺血—再灌注早期脑水肿体积、rADC值与AQP4的表达水平存在时间上的相关性。因此结合DWI检查对脑缺血后AQP4表达部位、作用及调节机制进行更深入系统的研究,可能为临床早期治疗缺血性脑水肿提供新的思路。     

舒血宁注射液对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带水通道蛋白1和水通道蛋白9表达的影响

目的观察舒血宁注射液对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质缺血半暗带(IP)水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白9(AQP9)表达的影响。方法线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型(MCAO),随机分为假手术组、模型组、舒血宁注射液防治组和川芎嗪药物对照组。脑缺血2h,分别再灌注1d、3d、7d,采用免疫组化SABC法检测AQP1和AQP9蛋白表达的阳性总面积和平均吸收光密度。结果在缺血侧额顶叶皮质IP,再灌注各时间点,模型组AQP1和AQP9蛋白表达的阳性总面积和平均吸收光密度显著高于假手术组(P0.05或P0.01),舒血宁注射液和川芎嗪药物对照组再灌注1d、3d、7d,AQP1和AQP9蛋白表达的阳性总面积和(或)平均吸收光密度显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论舒血宁注射液能通过抑制AQP1、AQP9蛋白表达,减轻脑水肿,抗脑缺血再灌注损伤。     

大鼠脑缺血-再灌注后小脑AQP4蛋白的表达变化

目的观察大鼠大脑中动脉闭塞后远隔部位小脑组织形态学改变以及水通道蛋白—4(AQP4)的表达变化。方法健康雄性SD大鼠40只,体质量260~300g,随机分成4组,分别为脑缺血—再灌注12h、1d、3d组和假手术组,采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型,Longa评分法对大鼠进行神经功能评分,苏木精—伊红染色观察大鼠小脑的组织形态学变化;免疫组化染色测定大鼠小脑AQP4蛋白表达,测量平均吸光度值(mean optical density,MOD)评价染色程度。结果假手术组动物麻醉苏醒后未见神经功能缺损。脑缺血—再灌注12h神经功能评分升高,12h~1d之间无明显差异,3d神经功能评分减低(P0.05)。苏木精—伊红染色显示假手术组小脑结构未见明显异常,脑缺血—再灌注后12h小脑区出现缺血性损害,细胞肿胀,胞核深染,但细胞排列尚好;1~3d时胞核浓染加深,出现核固缩,细胞排列紊乱,间隙增宽。假手术组小脑区AQP4表达极少,脑缺血—再灌注12h、1d和3d大鼠缺血侧小脑区均可见AQP4阳性着色细胞,12h~1d AQP4 MOD值随时间延长逐渐增高,3d时较1d时降低,3组AQP4表达水平均明显高于假手术组(P0.05)。结论大脑中动脉脑梗死后小脑区存在损伤,并且有AQP4表达增加,小脑区AQP4表达同神经功能损伤程度密切相关。     

肢体远端缺血预处理延缓脑卒中DWI上病灶出现的机制研究

目的研究肢体远端缺血预处理(limb remote ischemic preconditioning,LRP)延缓大鼠脑缺血模型DWI图像上病灶出现的机制。方法 54只成年SD大鼠随机分为3组,脑缺血模型组24只、LRP组24只和假手术组6只。用Western blot检测和免疫荧光法分别检测不同时间点(缺血后1 h、3 h、12 h、24 h)AQP4的表达情况。并通过共染对AQP4进行初步定位。结果 Western blot表明AQP4在缺血后表达下降,而LRP组的AQP4表达水平上升。免疫荧光结果与Western blot一致,AQP4阳性表达量均在缺血组降低,而LRP组的AQP4表达量增多。共染结果显示AQP4与GFAP出现共染,证明AQP4在星形胶质细胞上的表达;AQP4与CD31少量共染,提示AQP4在血管内皮细胞上的少量表达。AQP4与MAP-2未显示出共染。推测LRP组增多的AQP4主要表达在邻近血管周围的星形胶质细胞膜上及血管内皮细胞上。结论 LRP对DWI上病灶的面积延缓作用很可能通过上调AQP4实现。     

实验性出血性脑水肿水通道蛋白4表达与MRI变化的相关性研究

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围水通道蛋白4(AQP4)的表达与MRI各项指标变化,探讨AQP4的表达变化规律与出血性脑水肿形成之间的关系. 方法 45只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=15)及出血组(n=30),每组又均分为造模后l、2、3、5、7 d组.采用苍白球注射胶原酶造成大鼠脑出血模型,在造模后1、2、3、5、7d行MRI扫描,测量计算血肿周围水肿体积以及水肿区T1WI、T2WI及FLAIR序列的信号强度比,成像后分别于相应时间点处死大鼠,应用免疫组化染色观察AQP4的表达. 结果 各时间点出血组大鼠血肿周围AQP4的表达水平明显高于假手术组,比较差异有统计学意义(P＜0.05),AQP4表达与血肿周围脑水肿体积呈线型正相关关系(r=0.687,P＜0.05),AQP4的表达与血肿周围水肿区T2WI、FLAIR序列的信号强度比呈线型正相关关系(r=0.640,P＜0.05;r=0.662,P＜0.05). 结论 AQP4表达与出血性脑水肿的形成、发展密切相关,AQP4的过度表达可能促进了出血后脑水肿的形成.     

厄贝沙坦预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织含水量以及IgG和水通道蛋白4表达的影响

目的 探讨厄贝沙坦预处理对脑缺血再灌注(CIR)损伤大鼠脑组织含水量以及IgG和水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 用厄贝沙坦灌胃预处理SD大鼠,连续21d后用改良Longa法建立CIR模型,分别于缺血90 min再灌注2 h和48 h后测定其脑组织含水量,并采用免疫组化法测定相应时间点IgG及AQP4的表达.结果 与假手术组及CIR对照组进行比较.结果 各组中,CIR对照组大鼠脑组织含水量最高,其次是厄贝沙坦低剂量组,然后是厄贝沙坦高剂量组,假手术组最低(P＜0.05～0.01).再灌注2 h时,各组大鼠脑组织IgG表达差异无统计学意义;再灌注48 h时,CIR对照组大鼠脑组织IgG表达最高,其次是厄贝沙坦低剂量组,然后是厄贝沙坦高剂量组,假手术组最低(P＜0.05～0.01).再灌注2 h时,各组中厄贝沙坦高剂量组大鼠脑组织AQP4表达最多,然后是厄贝沙坦低剂最组与CIR对照组,假手术组最少(均P＜0.01);再灌注48 h时,各组中厄贝沙坦高剂量组及低剂量组大鼠脑组织AQP4表达最多,其次是CIR对照组,假手术组最少(均P＜0.01).结论 厄贝沙坦预处理可能通过上调CIR大鼠脑组织AQP4的表达以减少其脑组织含水量和IgG表达,从而起到脑保护作用.     

神经节苷脂对大鼠缺血后脑水肿脑组织中AQP4-mRNA表达的影响

目的 探讨神经节苷脂对大鼠缺血后脑水肿脑组织中AQP4-mRNA表达的影响.方法 线栓法复制脑缺血大鼠模型,于缺血后6h、1、3、5、7d观察模型大鼠脑组织含水量及AQP4-mRNA的表达.结果 手术组大鼠脑组织水含量及AQP4-mRNA的表达于6h后升高,3d达高峰,较假手术组和神经节苷脂组显著升高(P<0.05).结论 神经节苷脂能够降低脑梗死大鼠脑组织水含量及AQP4-mRNA的表达,减轻脑水肿.     

脑缺血再灌注后水通道蛋白-4表达的研究

目的 研究大鼠脑缺血再灌注后水通道蛋白-4(Aquaporin-4 .AQP4)的表达变化.方法 采用栓线法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型.用免疫组化检测大鼠脑内AQP4的动态变化.结果 大鼠脑AQP4蛋白表达与缺血时间、再灌注时间均有相关性(P值分别为P＜0.001.P＜0.05).结论 缺血时间与再灌注时间对AQP4在鼠脑中的表达均有影响.且存在交互作用.缺血时间越短进行再灌注.脑内AQP4表达水平越低.而缺血6 h后实施再灌注则会导致AQP4急剧增高.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注TTC染色与MRI弥散加权成像的相关性研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注MRI弥散加权成像(DWI)的变化,探讨其与TIC染色变化的关系. 方法 44只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组和脑缺血2h、脑缺血6h再灌注不同时间组(0 h、0.5h、2h、6h、24 h),每组各4只.脑缺血2h组、脑缺血6h组采用线栓法制作成大脑中动脉栓塞模型.各组大鼠于不同再灌注时间点行MRI DWI扫描,结束后立即处死,取相应部位脑组织行TTC染色,观察分析其与DWI成像的关系. 结果 脑缺血2h组、脑缺血6h组再灌注0h均可见部分右侧大脑半球DWI呈高信号,表观扩散系数(ADC)值降低,TTC染色可见部分右侧大脑半球失染呈白色.缺血2h组再灌注24 h后DWI异常信号区相对面积明显变小,ADC值增大,TTC失染相对面积变小,较再灌注0h差异有统计学意义(P＜0.05),而脑缺血6h组则差异无统计学意义(P＞0.05).脑缺血6h组再灌注不同时间点较脑缺血2h组再灌注相应时间点DWI异常信号区相对面积大,ADC值低,TTC失染相对面积大,差异有统计学意义(P＜0.05).脑缺血2h组、脑缺血6h组再灌注相对应时间点DWI异常信号区面积与TTC染色失染区面积比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 脑缺血再灌注后可用MRI DWI成像评价脑缺血面积.     

大鼠实验性脑梗死后AQP4表达与MRI变化的相关性研究

目的研究大鼠实验性脑梗死后水通道蛋白4（AQP4）的表达与MRI各项指标变化,并探讨AQP4的表达变化规律与缺血性脑水肿形成之间的关系。方法将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=15）及脑梗死组（,2=30）,每组又均分为6h、1、3、5、7d组;采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,制作局灶性脑梗死模型,在造模后6h、1、3、5、7d行MRI扫描,测量计算脑梗死体积、梗死区T1wI、T2WI、FLAIR、DWI序列的信号强度tE（SIR）;成像后分别于相应时间点处死大鼠,应用免疫组织化学染色观察AQP4的表达水平。结果各时间点梗死组大鼠病灶侧大脑皮层AQP4的表达水平均明显高于假手术组（P均〈0．01）,AQP4表达水平与脑梗死体积呈正相关（r=0．575,P〈0．01）,AQP4的表达水平与梗死区rrl、Ⅳ1的SIR呈负相关（r=-0．610,P〈0．（）1）,与R、Ⅳ1、FLAIR、DWI序列的SIR呈正相关（r=0．586,0．668,0．795;P均〈0．01）。结论AQP4表达水平与缺血性脑水肿的形成、发展密切相关,AQP4的过度表达可能促进了脑梗死后脑水肿的形成。     

大鼠局灶性脑缺血水通道蛋白4的变化

目的 探讨缺血性脑水肿后水通道蛋白4(AQP4)的变化，研究脑水肿的发病机制。方法 选用Wis—tar雄性大鼠42只，体重250～300g，鼠龄3～4月，按缺血时间随机分为6h、1d、3d、5d、7d、14d及假手术组，参考Lon—ga等方法建立大鼠大脑缺血模型，应用免疫组化染色检测脑组织中AQP4的变化。结果 AQP4在缺血组织表达增强，缺血6h即增强，3d达高峰，7d恢复正常。结论 AQP4是影响缺血性脑水肿的重要因素。     

Persistent hyperfibrinogenemia in acute ischemic stroke / transient ischemic attack (TIA)

Increased fibrinogen concentration is a well known phenomenon following acute ischemic stroke. However, the natural course of this hyperfibrinogenemia is uncertain. We aimed to clarify whether it is of a transient or more persistent nature in patients who harbor an underlying morbid biology of atherothrombo-inflammation. Venous blood for fibrinogen measurements was obtained from the control group participants and from stroke patients within 24 hours of admission, as well as 12 months following the acute event. In order to perform a time course analysis, we divided our cohort into tiles of time from symptoms' onset and compared the fibrinogen concentrations using ANOVA. Elevated fibrinogen concentrations were found in stroke patients on admission compared with matched controls (p < 0.001). Analysis of variance in the different tertiles of time from symptoms' onset identified that fibrinogen concentrations were already relatively high during the initial phase of the event and did not differ significantly between the tiles (p = 0.268). Moreover, when we calculated the absolute differences between the patients' fibrinogen concentrations and that of the matched controls there was clearly a minor increment during the time course from symptoms' onset in the stroke patients group. In conclusion, persistent hyperfibrinogenemia is present in patients with acute ischemic cerebral events and it might be present during the earlier stages of the disease as presently shown. Prompt and long-term, rather than short term, interventions to reduce the concentrations of this protein might therefore be of relevance.     

Listeria monocytogenes brainstem infection (rhombencephalitis) mimicking ischemic stroke

The frequency of Listeria monocytogenes (Lm) infection of the central nervous system is increasing. We report a patient recently treated with chemotherapeutic drugs for pulmonary adenocarcinoma who suddenly developed hemiparesis, was initially diagnosed with stroke, and was then found to be affected by Lm rhombencephalitis accompanied by a brain abscess. Lm meningoencephalitis mimicking ischemic stroke is rare but must be considered, especially in specific patients.     

神经生长因子辅助治疗高血压性脑出血的效果及对水通道蛋白、氧化应激因子水平的影响

目的 分析神经生长因子辅助治疗高血压性脑出血(HICH)的效果及对水通道蛋白、氧化应激因子水平的影响。方法 选取本院2016年2月-2017年12月收治的HICH患者74例,根据治疗方法不同分为对照组和观察组; 对照组患者采用常规治疗,观察组患者采用常规治疗+神经生长因子治疗,分析2组患者治疗后的临床效果。结果 治疗前2组患者血肿量、水肿体积、NIHSS评分和Barthel指数评分比较无明显差异(P>0.05); 治疗后观察组患者血肿量、水肿体积、NIHSS评分低于对照组,Barthel指数评分高于对照组(P<0.05)。治疗前2组患者MMP-9、SOD、GSH-Px、AQP-1、AQP-4水平比较无明显差异(P>0.05); 治疗后观察组患者SOD、GSH-Px水平高于对照组,MMP-9、AQP-1、AQP-4水平低于对照组(P<0.05)。结论 神经生长因子辅助治疗HICH可缩小水肿体积,降低MMP-9、AQP蛋白水平,提高SOD、GSH-Px水平,促进神经功能缺损恢复,提高日常生活质量。     

水孔蛋白质的研究现状及与脑水肿的 关系

水孔蛋白质（aquaporin，AQP）又称水通道蛋白（water channel protein），是一组与水跨膜转 运有关的蛋白质。AQP-4是水孔蛋白质家族成员之一，仅对水分子有通透性，在脑组织中广泛存在 并表达于血-脑屏障（blood brain barrier，BBB）处的星形胶质细胞膜，以及与脑脊液（cerebrospinal fluid， CSF）接触的软脑膜及室管膜表面。大量研究表明AQP-4在脑外伤、感染、肿瘤、卒中等中枢神经系统 疾病引起的脑水肿中起关键作用。本文对AQP的分布、结构、功能及AQP-4与脑水肿的关系进行了综 述。     

钠通道Na(v)1.6与缺血性脑损伤

目的 通过观察大鼠缺血脑组织中Na(v)1.6表达探讨Na(v)1.6与缺血性脑损伤的关系.方法 线栓法制作大鼠脑缺血模型,168只SD大鼠分为假手术组、脑缺血组和钠通道阻滞剂-riluzole、钙通道阻滞剂-nimodipine治疗组.大鼠脑缺血后6h、1d、2d、3d取材,应用免疫组化检测Na(v)1.6表达,荧光法检测钙离子浓度,氯化三苯四唑染色检测脑梗死体积.结果 Na(v)1.6在脑缺血后6h～1d表达上调,2～3d表达下调；相同时间点nimodipine治疗组与缺血组相比较,Na(v)1.6表达变化不明显；riluzol治疗组Na(v)1.6表达变化明显,差异具有显著性(P＜0.05).riluzol治疗组和nimodipine治疗组钙离子浓度、脑梗死体积均比缺血组降低,riluzol治疗组降低最明显,差异具有显著性(P＜0.05).结论 钠离子内流发生在脑缺血的早期阶段；脑缺血后Na(v)1.6表达上调,抑制Na(v)1.6表达可以减轻脑缺血损伤,Na(v)1.6参与了缺血性脑损伤.     

Antibodies to beta(2)-glycoprotein I in ischemic stroke

Antibodies to beta(2)-glycoprotein (beta(2)-GPI) have been associated with recurrent thrombotic events in patients with systemic lupus erythematosus. The present study investigated the prevalence of antibodies to beta(2)-GPI in an unselected group of patients with ischemic stroke. One hundred and twenty-one sera from patients with ischemic stroke and 174 control sera from patients with nonischemic neurological disorders (n = 43) and healthy subjects (n = 131) were tested for antibodies to beta(2)-GPI by a solid-phase ELISA. Twenty-nine stroke patients (24%) had antibodies to beta(2)-GPI. Of the 43 patients in the neurological control group, 2 were positive. For comparison between the groups, Fisher's exact test was used for categorical variables and ANOVA for antibody titers. Antibody levels and frequencies of positivity were significantly different between the study groups. None of the sera from the healthy control group had abnormal antibody levels. When risk factors and associated diseases were taken into account, a marginal association was found between the presence of antibodies to beta(2)-GPI and hypertension (p = 0.036). This study demonstrates a significant prevalence of antibodies to beta(2)-GPI in an unselected stroke population.     

Mean platelet volume (MPV) increase during acute non-lacunar ischemic strokes

Introduction

Mean platelet volume (MPV) has been associated with the prognosis in stroke patients. However, its spontaneous variability during the acute phase of the disease is unknown. Materials and Methods — One hundred and thirty-seven patients with ischemic stroke, aged 75.4 ± 11.0 (SD) years, were classified according to several criteria: National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS) score, maximum lesion diameter on CT scan, Oxfordshire Community Stroke Projects (OCSP) and Trial of ORG 10172 in Acute Stroke Treatment (TOAST) categories. Platelet parameters were determined 1.2 days after the onset of symptoms, and after 3.0 further days.

Results

The initial MPV was higher in non-lacunar than lacunar strokes (8.30 ± 1.10 vs. 7.95 ± 0.79 fl, P = 0.04), and correlated with the sampling delay with respect to the onset of symptoms, especially in the strokes with lesions > = 4 cm (r = 0.39, P = 0.009), NIHSS > = 11 (r = 0.35, P = 0.02) and of cardioembolic origin (r = 0.35, P = 0.01). Subsequently a late MPV increment was observed in the remaining categories: from 8.20 to 8.38 fl (P = 0.02) in the strokes with lesions < 4 cm, from 8.11 to 8.31 fl (P = 0.01) in the presence of an NIHSS < 11 and from 8.20 to 8.61 fl (P = 0.03) when the occlusion of a large artery was involved.

Conclusions

Platelet volume is not stable during the acute phase in non-lacunar ischemic strokes, as it increases early in the most severe forms, and later in the remaining subtypes. The release of large and more reactive platelets may contribute to the thrombophilic state associated with ischemic events.