MDM2对人乳腺癌细胞上皮间质转化的影响及其机制研究

目的 探讨鼠双微粒体2（MDM2）在上皮间质转化（EMT）过程中的作用及其分子机制。方法 采用Western blotting检测人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞株中MDM2及EMT相关标记分子（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）水平;分别于MCF-7细胞中瞬时转染MDM2空质粒pcmv、MDM2过表达质粒pcmv-MDM2,MDA-MB 231细胞中瞬时转染针对MDM2三个不同靶点的干扰质粒36h后观察细胞形态,并采用Western blotting和免疫荧光检测EMT相关标记分子及MDM2的表达情况;采用Western blotting及实时定量PCR检测在MCF-7、MDA-MB-231细胞过表达MDM2后对促EMT转录因子Snail1、Twist 蛋白和mRNA水平的影响。结果 MCF-7细胞过表达MDM2后形态由鹅卵石形变为纺锤形,E-cadherin蛋白随MDM2表达水平的上调表达降低;MDA-MB-231细胞敲低MDM2后形态由长梭形变为卵圆形,Vimentin、N-cadherin蛋白随MDM2表达水平的下调表达依次降低;MCF-7及MDA-MB-231细胞过表达MDM2后Snail1、Twist的蛋白及mRNA水平均升高。结论 在乳腺癌细胞株中MDM2可促进EMT发生,其可能通过上调转录因子Snail1和Twist表达来实现。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

CTEN在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用与机制研究

目的:探讨CTEN在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用及其分子机制。方法:采用定量PCR及Western blotting检测人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中CTEN的表达水平;然后用Lipofectamine 2000将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染至乳腺癌MCF-7细胞,为高表达组,将对照质粒pcmv转染至MCF-7细胞,为对照组,用定量PCR检测两组细胞中CTEN、Snail和EMT标记分子mRNA水平的变化,用Western blotting检测CTEN、Snail和EMT标记分子蛋白水平的变化;应用Lipofectamine 2000将CTEN干扰质粒siCTEN转染至MDA-MB-231细胞,为干扰组,将对照质粒siNC转染至MDA-MB-231细胞,为对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测两组细胞中CTEN、Snail和EMT标记分子mRNA及蛋白水平的变化;应用Lipofectamine 2000将Snail干扰质粒siSnail转染至MCF-7细胞,为干扰组,将对照质粒siNC转染至MCF-7细胞,为对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测两组细胞中Snail mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染入两组细胞,定量PCR检测CTEN和EMT标记分子mRNA水平的变化,Western blotting检测CTEN和EMT标记分子蛋白水平的变化。结果:CTEN在MDA-MB-231中的表达量高于MCF-7细胞;与对照组相比,高表达CTEN组的MCF-7细胞形态呈纺锥形,Snail表达升高,上皮标记分子E-cadherin表达下降,间质标记分子N-cadherin及Vimentin表达升高,促进EMT的发生;与对照组相比,敲低CTEN组的MDA-MB-231细胞形态呈鹅卵石形,Snail表达下降,上皮标记分子E-cadherin表达上升,间质标记分子N-cadherin及Vimentin表达下降,促进MET的发生;在MCF-7细胞中干扰Snail后再过表达CTEN,其促进EMT的作用明显减弱。结论:CTEN能够诱导乳腺癌细胞发生上皮间质转化,且其可能通过转录因子Snail发挥作用。     

乳腺癌MCF-7细胞通过TGF-β诱导的上皮-间质转化获得耐药北大核心CSCD

目的:通过研究高侵袭转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和低侵袭转移性细胞株MCF-7中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和耐药的相关性,以探讨乳腺癌耐药的机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和纤黏蛋白(bronectin)以及转录因子Snail、Slug和锌指E-box同源结合框1(Zincnger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的表达水平;划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的迁移和侵袭能力;CCK-8法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇的敏感性,并采用实时荧光定量PCR法检测耐药基因多重耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MDR1)和MDR相关蛋白1(MDR-associated protein,MRP1)mRNA的表达水平。用转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导MCF-7细胞发生EMT,或用靶向E-cadherin基因的E-cadherin-siRNA沉默EMT相关标志物E-cadherin的表达,再用CCK-8法检测MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的变化。结果:MDA-MB-231细胞中vimentin、fibronectin、Slug和ZEB1 mRNA的表达水平均高于MCF-7细胞(P值均<0.000 1),E-cadherin mRNA的表达水平明显低于MCF-7细胞(P=0.000 2),Snail mRNA的表达水平无明显差异。与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显更强(P值均<0.000 1);5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇对MDAMB-231细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值明显高于MCF-7细胞(P值均<0.05);MDA-MB-231细胞中耐药相关基因MDR1和MRP1 mRNA表达水平明显更高(P值均<0.000 1)。TGF-β诱导MCF-7细胞发生EMT后,5-氟尿嘧啶对MCF-7细胞的IC50值明显上升(P<0.05);沉默E-cadherin表达后,MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性明显增强(P<0.05)。结论:乳腺癌中EMT和耐药存在相关性,诱导EMT发生可导致细胞耐药。     

沉默LncRNA WT1-AS对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和迁移的影响

目的探讨LncRNA WT1-AS对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和迁移的影响。方法qRT-PCR检测WT1-AS在三阴性乳腺癌细胞中的表达及基因沉默的效率;Transwell实验检测WT1-AS对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测WT1-AS对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响;Western blot检测WT1-AS对MDA-MB-231细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail表达的影响。结果与正常乳腺上皮细胞相比,WT1-AS在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468中的表达量明显上调;沉默WT1-AS后,MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力明显降低,且E-cadherin表达明显上调,N-cadherin、Vimentin和Snail表达量显著下调。结论WT1-AS可以通过调控EMT促进三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭与迁移能力。     

miR-100抑制乳腺癌细胞迁移的作用和机制

目的:探究miR-100对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移能力的调节与机制.方法:Real time-PCR检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-100的基础表达水平.应用脂质体法将 miR-100 mimic及阴性对照分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过real time-PCR检测转染后miR-100的表达水平,细胞划痕实验检测过表达miR-100对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响,Western blot方法检测slug、snail和E-cadherin等EMT蛋白表达水平的变化.结果:miR-100在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达明显低于人正常乳腺上皮细胞MCF-10A.转染miR-100 mimic的乳腺癌细胞株MDA-MB-231的miR-100表达水平明显增高,细胞划痕实验显示过表达miR-100的MDA-MB-231细胞划痕愈合速度明显减慢.过表达miR-100的MDA-MB-231细胞E-cadherin蛋白表达水平明显增加,而slug和snail蛋白表达水平明显降低.结论:miR-100抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移能力与其上调E-cadherin,下调slug、snail蛋白表达,抑制EMT有关.     

乳腺癌上皮-间质转化后引发BCRP介导的多药耐药的研究

背景与目的:研究发现肿瘤的侵袭浸润和转移增强是上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)所致,而EMT的发生也与肿瘤细胞多药耐药现象的发生密切相关.本研究通过分析乳腺癌组织和细胞中EMT与乳腺癌耐药蛋白表达的相关性,探讨EMT对乳腺癌中乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein, BCRP)介导多药耐药的影响.方法:免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达:构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,转染至MCF-7细胞,采用免疫荧光、Western blot、Real-time PCR检测转录抑制因子snail、上皮标志物E-钙粘素、间质标志物vimentin以及多药耐药蛋白BCRP的表达;MTT法检测细胞对米托蒽醌的耐药指数.结果:免疫组化结果显示乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达呈显著相关:免疫荧光、Western blot、Real-time PCR显示与亲本MCF-7细胞相比,转染Snail后的MCF-7细胞中E-cadherin表达水平明显降低,而snail、vimentin和BCRP的表达水平明显增加;MTT结果显示细胞对米托蒽醌的耐药指数增加至9.93.结论:转染snail真核表达载体pCDNA3.1-snail可使乳腺癌MCF-7细胞发生EMT, 并导致细胞中BCRP表达增加,引发BCRP介导的多药耐药.     

Gab2通过调节EMT促进胃癌的侵袭转移

目的 探讨Gab2在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭转移能力的影响与机制。方法 采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中Gab2、E-cadherin、N-cadherin及MMP-9的表达并分析其与淋巴结转移的关系。应用小RNA干扰技术,转染SGC7901细胞株,RT-PCR法检测瞬时转染后Gab2基因表达情况,体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化,Western blot法检测各蛋白的表达。结果 胃癌组织中Gab2的表达水平与淋巴结转移显著相关（P=0.002）,与E-cadherin的表达负相关（r=-0.693, P=0.000）,而与N-cadherin和MMP-9的表达水平正相关（r=0.407, P=0.021; r=0.335, P=0.017）。小RNA干扰技术降低Gab2蛋白的表达后SGC7901细胞侵袭转移能力降低,同时E-cadherin表达增多,N-cadherin和MMP-9蛋白表达降低。结论 Gab2可能通过调节EMT在胃癌侵袭转移中发挥重要作用。     

环加氧酶-2 通过调控EMT促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭

[摘要] 目的：探讨环加氧酶-2（COX-2）在乳腺癌转移中的作用及其可能的机制。方法：收集从2015 年10 月至2018 年4 月在云南省肿瘤医院接受乳腺切除术的患者中获得的原发乳腺癌组织和脑转移乳腺癌组织临床病理样本共45 例,其中原发30 例、脑转移15 例。采用qPCR检测COX-2 在原位乳腺癌和脑转移乳腺癌组织中的表达。将COX-2 过表达重组病毒（LV6-COX2）或敲减COX-2 重组病毒（LV3-COX2 shRNA1、LV3-COX2 shRNA2）感染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞并获得稳转细胞株后,CCK-8法检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell 法检测对MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭的影响。qPCR和WB实验分析各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白的表达水平,qPCR检测COX-2 表达对MDA-MB-231 细胞内EMT相关基因表达的影响。结果：COX-2 表达水平在脑转移乳腺癌患者组织中显著高于原位乳腺癌组织（P<0.01）;并且与乳腺癌患者肿瘤TMN分期有关。成功构建稳定过表达/敲减COX-2 的MDA-MB-231 细胞株。过表达COX-2 促进MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭（均P<0.01）,同时显著提高MMP2、MMP1、N-cadherin 和vimentin 的表达（均P<0.01）,但对细胞增殖无明显影响;而沉默COX-2 则有相反的作用,且可促进细胞增殖（P<0.05）。结论：COX-2 在脑转移乳腺癌组织中高表达,其可能通过调控EMT过程促进乳腺癌MDA-MB-231 细胞的迁移和侵袭。     

Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的：检测4次穿膜蛋白29（tetraspanins-29,Tspan29）在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法：收 集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞系 MCF-7、MDA-MB-231 和人乳腺上皮细胞 MDA-kb2,用 qPCR 和 Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29 的表达水平。通过 siTspan29 对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中 Tspan29 进行干扰,用 qPCR 法检测转染细胞中 Tspan29mRNA 和蛋白的表达水平,PCR 芯片法检测 MCF-7 细胞中 EMT 相关基因的表达,用 CCK-8 法、Transwell 实验检测 MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织（均 P<0.01）,MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞（均P<0.01）。siTspan29干扰后,MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降（均P<0.05）;MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调, 有7个基因显著下调;MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.05）。结论：Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调,敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。     

小RNA干扰降低COX-2表达对乳腺癌细胞趋化和侵袭能力的影响

目的探讨利用小RNA干扰技术降低COX-2表达对高度恶性乳腺癌MDA-MB-231细胞趋化和侵袭能力的影响。方法应用合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞株,采用反转录－聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA的表达。通过趋化运动实验检测细胞的运动能力;体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果限制性内切酶的酶切结果和DNA测序结果显示成功构建了干扰质粒pSUPER-siCOX-2,转染后的细胞株分别命名为MDA-MB-231/pSUPER-basic（对照组）和MDA-MB-231/pSUPER-siCOX-2（实验组）。转染后48 h,与MDA-MB-231/pSUPER-basic细胞相比,MDA-MB-231/pSUPER-siCOX-2细胞的COX-2 mRNA表达水平下降(P<0.01);COX-2减低的乳腺癌细胞的趋化运动能力比对照组细胞降低(P<0.01);COX-2减低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组细胞少(P<0.01)。结论利用siRNA干扰技术降低COX-2表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的趋化和侵袭能力具有明显的抑制作用。     

纤维连接蛋白FNDC10通过增强STAT3活化促进乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的：研究纤维连接蛋白Ⅲ型域包含蛋白10(FNDC10)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭等能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法：采用TCGA数据库分析FNDC10在乳腺癌组织中表达情况。通过qPCR检测FNDC10在正常永生化乳腺细胞（MCF-10A）和乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468、HCC1806和HCC1937）中的表达水平。选取MCF-7和MDA-MB-231细胞转染FNDC10 siRNA或对照siRNA后进行功能实验：CCK-8实验检测FNDC10对乳腺癌细胞增殖的影响,集落形成实验检测对乳腺癌细胞集落形成能力的影响,Transwell实验检测其对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,WB法检测转移相关分子和细胞信号通路在蛋白水平的变化。结果：FNDC10在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常组织（P<0.01）,FNDC10在乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231内表达水平高于正常乳腺细胞（P<0.01或P<0.05）。敲低FNDC10表达抑制了乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.01或P<0.05）...     

TET1-CD对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖和迁移的影响及其作用机制

[摘要] 目的：探讨TET1 催化结构域（TET1-CD）基因高表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖、迁移的影响及其可能的作用机制。方法：慢病毒感染建立高表达TET1-CD的MDA-MB-231 细胞系,用qPCR检测细胞中TET1-CD mRNA的表达,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,MTT 法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,WB实验检测MDA-MB-231 细胞上皮间质转化（EMT）途径相关蛋白E-cadherin、Vimentin、MMP2 以及Wnt、Hedgehog(HH)通路相关蛋白的表达水平。结果：过表达TET1-CD提高乳腺癌MDA-MB-231 细胞TET1-CD的表达水平（P<0.01）,明显抑制MDA-MB-231 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.01）。过表达TET1-CD 可使乳腺癌MDA-MB-231 细胞E-cadherin 表达上升,Vimentin、MMP2 表达下调（均P<0.05）;可使β-catenin、C-myc、CyclinD1、Gli1 蛋白表达水平降低（均P<0.05）。结论：过表达TET1-CD可能通过Wnt、HH信号通路抑制EMT途径进而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖和迁移。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

维生素E琥珀酸酯诱导HER-2过表达乳腺癌细胞凋亡机制的研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对HER-2过表达乳腺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法测定VES对乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞增殖的抑制作用，应用Western blot法筛选HER-2过表达乳腺癌细胞系，同时检测VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中的表达水平，划痕实验与侵袭实验观察VES对乳腺癌细胞体外迁移能力的影响，流式细胞术检测VES对乳腺癌细胞凋亡的作用。结果:VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-453细胞中的表达明显高于在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达，VES作用于HER-2低表达乳腺癌细胞使其迁移及侵袭能力明显增强，却能够抑制HER-2高表达乳腺癌细胞的迁移及侵袭。VES以直接杀伤方式作用MDA-MB-231细胞，而对MDA-MB-453则以诱导细胞凋亡方式杀伤，VES使HER-2高表达乳腺癌MDA-MB-453细胞发生G1/G0期阻滞。结论:VES促进乳腺癌细胞凋亡是通过影响多条信号传导途径完成的，VES作用于不同HER-2表达乳腺癌细胞其迁移及侵袭能力明显不同，其机制与细胞表面蛋白表达有关。     

B7-H3沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学功能的影响

目的:探讨B7-H3沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学行为的影响。方法:通过脂质体Lipofectamine TM 2000转染B7-H3 siRNA干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3到乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选后获得B7-H3沉默细胞株MDA-MB-231-ShB7-H3,利用qRT-PCR及Western blot分别检测对照组(WT)、无关干涉组(ShNC)和B7-H3干涉组(ShB7-H3)细胞中B7-H3、EMT标志分子mRNA及蛋白表达水平;利用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;利用MTT细胞增殖实验评价各组细胞增殖情况。结果:通过qRT-PCR和Western blot证实B7-H3沉默表达的MDA-MB-231细胞株构建成功;与对照组细胞相比,B7-H3沉默表达抑制MDA-MB-231细胞EMT进程,上皮细胞标志分子E-cadherin和ZO-1表达上调,而间质细胞标志分子vimentin和αSMA表达下调;Transwell实验及MTT细胞增殖实验结果表明B7-H3沉默抑制MDA-MB-231细胞迁移、侵袭及增殖能力。结论:我们的研究结果强调了B7-H3在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的重要作用,并提示B7-H3与乳腺癌细胞EMT、转移密切相关,并为以B7-H3为靶点的乳腺癌转移治疗提供初步的实验及理论基础。     

siRNA 抑制Sema4C 基因表达对人乳腺癌细胞恶性行为的影响*

目的:研究小干扰RNA（small interf ering RNA,siRNA ）抑制轴突导向蛋白分子（Semaphorin 4C,Sema4C）基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 体外迁移、侵袭及增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:根据Sema4C 基因设计序列特异性的siRNA（Sema4C-siRNA ）,在脂质体介导下转染MDA-MB-231 细胞,Western blot方法检测基因封闭效应,利用细胞划痕实验、Tran ?swell小室侵袭实验及CFSE流式细胞仪方法检测细胞转染前后迁移、侵袭及增殖能力的变化,Western blot检测磷酸化AKT（p-AKT ）在转染前后细胞中表达的变化。结果:转染Sema4C-siRNA 72小时后,乳腺癌MDA-MB-231 细胞株（MDA-MB-231/Si）Sema4C 蛋白表达明显下降,与未转染细胞MDA-MB-231 相比,MDA-MB-231/Si细胞体外迁移能力减弱,侵袭及增殖能力明显下降;p-AKT 表达水平在MDA-MB-231/Si细胞中明显降低。结论:Sema4C-SiRNA 转染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞可下调细胞中Sema4C 蛋白表达水平,Sema4C-SiRNA 对MDA-MB-231 细胞的体外迁移、侵袭和增殖有抑制作用,这可能与p-AKT 的下调有关。      

miR-101、EZH2和MYC调控乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的机制

目的:研究miR-101、EZH2和MYC对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探究三者之间的调控机制。方法:以实时荧光定量PCR法检测三阴型乳腺癌组织及相应正常乳腺组织中miR-101、EZH2与MYC的表达,以及乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞中miR-101的表达水平。以LipofectamineTM 2000将miR-101 mimics、EZH2 siRNA和MYC siRNA以及相应的阴性对照转染至MDA-MB-231细胞,Western blot法检测EZH2、MYC蛋白的表达,MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖能力。结果:相对于正常乳腺组织,三阴型乳腺癌组织中miR-101 mRNA的表达降低,而EZH2、MYC mRNA表达则显著升高;三阴型乳腺癌细胞中miR-101 mRNA的表达低于正常乳腺细胞MCF-10A。miR-101 mimics转染使MDA-MB-231细胞中miR-101 mRNA含量显著升高。miR-101过表达抑制EZH2、MYC的表达;EZH2敲减也抑制了MYC蛋白的表达。EZH2或MYC敲减可使miR-101 mRNA的表达显著升高。MTT实验结果示,miR-101过表达或敲减EZH2、MYC均可抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力。结论:miR-101通过EZH2与MYC形成反馈环路调控MDA-MB-231细胞的增殖能力。     

TET1蛋白对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和侵袭能力的影响及其相关机制北大核心CSCD

目的探讨TET1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭等生物学行为的影响,并初步探究其相关分子机制。方法应用慢病毒载体建立TET1过表达稳转细胞株(MDA-MB-231-TET1)及阴性对照组稳转细胞株(MDA-MB-231-NC),Real-time PCR及Western blot法检测TET1的表达情况。CCK-8法、流式细胞术检测细胞的增殖及细胞周期分布,细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot及免疫荧光实验检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin)分子的表达。结果成功构建过表达TET1细胞株(P=0.03)。相较于阴性对照组和空白对照组细胞,MDA-MB-231-TET1组细胞增殖、迁移及侵袭明显受到抑制(P<0.001),G2/M期细胞周期阻滞(P=0.002);同时,伴随E-cadherin表达升高(P<0.001),N-cadherin(P=0.003)、Vimentin(P=0.041)表达降低,β-catenin(P<0.001)表达降低,并且TET1可抑制β-catenin向细胞核内转移,进而抑制EMT的发生。结论 TET1可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并能抑制其迁移及侵袭,其机制可能与通过Wnt/β-catenin通路抑制EMT的发生相关。     

SIRPα对乳腺癌细胞MDA-MB-231黏附、侵袭和凋亡的影响

目的： 研究信号调节蛋白α（signal regulatory protein α, SIRPα）对乳腺癌细胞黏附、侵袭和凋亡的影响及其可能机制。 方法： Western blotting检测侵袭能力强的MDA-MB-231乳腺癌细胞和侵袭能力弱的MDA-MB-435乳腺癌细胞中SIRPα蛋白的表达。脂质体法将pcDNA3.0-SIRPα转染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR检测MDA-MB-231细胞SIRPα mRNA的表达,TUNEL法检测细胞的凋亡,细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力变化,黏附实验观察细胞黏附能力变化,Western blotting检测JNK和p-JNK蛋白的表达。EGF刺激MDA-MB-435细胞,免疫共沉淀检测MDA-MB-435细胞中SIRPα与SHP2的结合。 结果： 侵袭能力强的MDA-MB-231细胞不表达SIRPα,侵袭能力弱的MDA-MB-435细胞表达高水平SIRPα蛋白。pcDNA3.0-SIRPα转染可增强MDA-MB-231细胞的黏附,降低MDA-MB-231细胞的侵袭能力,并促进MDA-MB-231细胞的凋亡。pcDNA3.0-SIRPα转染抑制MDA-MB-231细胞JNK的磷酸化。EGF刺激可进一步上调MDA-MB-435细胞中SIRPα蛋白表达,并促进SIRPα与SHP-2蛋白的结合。 结论： SIRPα与乳腺癌细胞的黏附、侵袭能力相关,并可能通过抑制JNK磷酸化促进乳腺癌细胞凋亡。