肿瘤坏死因子-β+252基因多态性与维吾尔族子宫颈癌HPV感染不相关

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)-β+252基因多态性分布及人乳头瘤病毒(HPV)感染与我国子宫颈癌高发区新疆喀什维吾尔族子宫颈癌易感性的关系。方法以导流杂交基因芯片技术检测111例子宫颈癌和100例正常子宫颈组织HPV感染及型别分布;用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对83例HPV16阳性子宫颈癌及91例HPV阴性正常子宫颈组织检测肿瘤坏死因子-β+252位点的基因型,分析肿瘤坏死因子-β+252基因多态性及HPV感染与维吾尔族子宫颈癌遗传易感性的关系。结果 111例子宫颈癌患者中,HPV总感染率81.1%(90/111),其中HPV16感染占HPV阳性子宫颈癌的92.2%(83/90),100例正常子宫颈组织中HPV阳性者9例,阳性率为9.0%(9/100),其中HPV16感染2例,两组之间差异有统计学意义(χ2=115.8,P<0.01)。TNF-β+252位点基因多态性与HPV16阳性子宫颈癌组及HPV阴性对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论新疆南部维吾尔族妇女子宫颈癌患者中以HPV16感染为主,本研究未能显示肿瘤坏死因子-β(+252)位点多态性与维吾尔族子宫颈癌易感性有关。     

子宫颈病变HPV感染与端粒酶活性相关性研究

目的探讨人乳头状瘤病毒(human papillomavirus type,HPV)感染与端粒酶活化在各种子宫颈病变中的关系.方法对146例子宫颈病变应用TRAP-PCR银染定性及TRAP-PCR-ELISIA定量法检测端粒酶活性,PCR法检测HPV分型;其中子宫颈癌43例,子宫颈上皮内瘤变(CIN)47例(CIN Ⅰ～Ⅱ级39例,其中子宫颈湿疣28例;CIN Ⅲ级8例),子宫颈炎56例(轻度子宫颈炎11例,中重度子宫颈炎45例),另取正常子宫颈标本10例做对照.结果 146例子宫颈病变标本中检测结果为:(1)端粒酶阳性率和HPV16/18型阳性率:子宫颈癌>子宫颈CIN Ⅲ级>CIN Ⅰ～Ⅱ级>子宫颈炎>正常子宫颈(P<0.05);HPV6/11型阳性率:CIN Ⅰ～Ⅱ级>CIN Ⅲ级(P<0.001).(2)子宫颈癌中端粒酶阳性率:Ⅰ期<Ⅱ期(P<0.05),高分化组<中分化组(P<0.01);HPV16/18阳性率:Ⅰ期<Ⅱ期(P<0.025),高分化组<中分化组(P<0.05);子宫颈腺癌与鳞癌端粒酶及HPV差异无显著性(P＞0.05).(3)端粒酶阳性值及HPV6/11、HPV16/18拷贝数:子宫颈癌>子宫颈CIN(CIN Ⅲ级>CIN Ⅰ～Ⅱ级)>子宫颈炎(P<0.001).(4)4例端粒酶及HPV均阳性子宫颈CIN Ⅰ～Ⅱ级病例经治疗后,端粒酶阳性率差异无显著性(P>0.05),端粒酶活性及HPV拷贝数下降差异有显著性(P<0.05,HPV6/11:P<0.01).结论 HPV感染尤以16/18型和端粒酶的激活与子宫颈病变恶变关系密切,其可能通过激活端粒酶诱发癌变.     

KAI1蛋白与人乳头状瘤病毒E6、E7蛋白在子宫颈癌组织中的表达及其意义

目的 探讨高危型人乳头状瘤病毒（HPV）感染和肿瘤转移抑制蛋白KAIl在子宫颈癌形成及进展中的意义.方法 对117例石蜡包埋子宫颈组织[正常对照20例、子宫颈上皮内瘤样病变（CIN）58例、子宫颈癌39例]采用免疫组织化学SP法检测KAI1蛋白、HPV16/18E6、HPV16E7蛋白的表达情况.结果 在正常子宫颈组织、CIN和子宫颈癌组织中,KAII阳性表达率分别为90.0％（18/20）、72.4％（42/58）、25.6％（10/39）,呈下降趋势,差异有统计学意义（P＜0.01）. HPVI6/18E6阳性表达率分别为0（0/20）、31.0％（18/58）、41.0％（16/39）,差异有统计学意义（P＜ 0.01）;HPV16E7阳性表达率分别为0（0/20）、34.5％（20/58）、64.1％（25/39）,差异有统计学意义（P＜0.01）.但KAI1与HPV16/18E6、HPV16E7阳性表达间无相关性（P=0.429）.KAI1蛋白在子宫颈癌中的阳性表达率与细胞分化程度、临床分期、淋巴结转移有关（均P＜ 0.05）,与发病年龄无关（P＞0.05）;HPV感染与子宫颈癌发病年龄、临床分期、细胞分化程度、淋巴结转移均无关（均P＞ 0.05）.结论 KAI1蛋白在子宫颈癌中的表达下调,HPV16/18E6、HPV16E7感染与KAI1蛋白表达无关.     

人宫颈癌组织CDH1和PAX1基因甲基化研究

目的:检测上皮型钙黏附素(E-cadherin,CDH1)基因和配对盒基因家族PAX1基因在宫颈癌组织及人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)Ⅰ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中的甲基化情况,评估是否可将其作为临床诊断的分子标志物.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation specific PCR, MSP)对HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、CINⅠ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织以及宫颈癌组织中的CDH1和PAX1基因进行甲基化检测.结果:HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织和CINⅠ组织中未检出CDH1基因甲基化;CINⅡ～Ⅲ组织中检出CDH1基因甲基化2例(13.3%),宫颈癌组织中检出CDH1基因甲基化9例(22.5%),与HPV感染的正常宫颈组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).HPV感染的正常宫颈组织和宫颈炎组织中未检出PAX1基因甲基化,CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组织的PAX1基因甲基化阳性率分别为13.3%、46.7%和87.5%,CINⅡ～Ⅲ组织与CINⅠ和宫颈癌组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织的CDH1和PAX1基因甲基化总阳性率分别为13.3%、60.0%和97.5%.结论:CDH1和PAX1基因甲基化,尤其是PAX1基因甲基化对于宫颈癌临床诊断具有潜在价值.     

人膀胱移行细胞癌HPV16／18感染与MAGE- A1基因启动子去甲基化状态的研究

目的 研究人膀胱移行细胞癌(BTCC)中HPV16/18感染与黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)启动子去甲基化状态的关系.方法 取40例HPV16/18阳性BTCC尿脱落细胞及HPV16/18阴性BTCC尿脱落细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)技术,检测BTCC中MAGE-A1基因启动子去甲基化状态,采用RT-PCR和Western blot法,分别检测其mRNA和蛋白表达水平.结果 AGE-1 mRNA和蛋白表达在HPV16/18阳性BTCC和HPV16/18阴性BTCC分别为68%(17/25)、20%(3/15),2组间表达差异有统计学意义(P<0.01),不同病理分级、临床分期间其表达差异有统计学意义(P<0.05).MAGE-A1基因在HPV16/18阴性BTCC中只有2例发生去甲基化,而在HPV16/18阳性BTCC中去甲基化发生率为52%(13/25),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其去甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPV16/18感染与MAGE-A1基因启动子区去甲基化有关,能导致该基因转录表达,HPV16/18的感染可能是导致膀胱癌发生、发展的原因之一.     

子宫肿瘤HPV16/18DNA感染与TNF表达的相关性研究

目的 :探讨子宫肿瘤人乳头瘤 (HPV) 16/ 18DNA病毒感染与TNF表达是否存在相关性。方法 :分别应用非同位素原位杂交技术及免疫组化方法选择性对 3个传代的细胞系及 96例宫颈标本和75例子宫内膜标本进行了HPV16/ 18DNA感染及TNF表达的研究。结果 :SiHa、W 12细胞系HPV16/18DNA感染为阳性 ,NCx细胞系为阴性 ;正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅢ、宫颈鳞癌阳性表达分别为 2例、5例、9例、2 7例 ,四组差异有极显著性 (P <0 .0 1) ;正常子宫内膜组织均为阴性 ,子宫内膜癌阳性表达 10例。正常宫颈组织、正常内膜组织TNF蛋白、TNFmRNA均未有阳性表达。宫颈癌 2 5例 ,子宫内膜癌 13例TNF蛋白为阳性 ,宫颈癌 2 2例 ,子宫内膜癌 16例TNFmRNA为阳性。宫颈癌HPV16/ 18感染与TNF蛋白表达两者均为阳性的为 2 2例 ;HPV16/ 18阴性、TNF蛋白阳性的 3例 ;子宫内膜癌两者均阳性的为 8例 ;HPV16/ 18阴性、TNF蛋白阳性的 5例。结论 :HPV16/ 18阳性者TNF蛋白表达明显高于阴性者 ,以宫颈鳞癌最为显著 (P <0 .0 1)。     

应用组织芯片研究HPV6/11、HPV16/18与子宫颈病变的关系

目的 通过检测低危型HPV6/11及高危型HPV16/18在慢性子宫颈炎、子宫颈尖锐湿疣不伴非典型增生、子宫颈鳞状上皮CIN Ⅰ级、子宫颈鳞状上皮CIN Ⅲ级、子宫颈浸润性鳞状细胞癌五种子宫颈病变中的表达情况,探讨HPV与子宫颈病变的相关性、作用机制及其临床意义.方法 应用组织芯片技术,将150例子宫颈病变患者的标本制成组织芯片,用原位杂交法对其进行6/11型及16/18型HPV的测定,应用SPSS 10.0统计软件进行数据分析.结果 低危型HPV6/11在慢性子宫颈炎、子宫颈尖锐湿疣、子宫颈鳞状上皮CIN Ⅰ级、子宫颈鳞状上皮CIN Ⅲ级、子宫颈浸润性鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为:13.33%、90%、33.33%、0、0,其中尖锐湿疣组HPV6/11的阳性表达率显著高于其他各组(均P＜0.001);CIN Ⅰ组与CIN Ⅲ及癌比较差异有统计学意义(P=0.001,＜0.05);运用Spearman相关分析表明,HPV6/11在上述五种病变中的阳性表达率与恶性度呈负相关(rs=-0.370,P＜0.001).高危型HPV16/18在慢性子宫颈炎、尖锐湿疣、CIN Ⅰ级、CIN Ⅲ级、鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为0、6.67%、10%、56.67%、76.67%,CIN Ⅲ及鳞癌与其他各组间比较均有统计学意义(P＜0.001),但CIN Ⅲ与鳞癌之间无统计学意义(P=0.10);运用Spearman相关分析表明,HPV16/18在上述五种病变中的阳性表达率与恶性度呈正相关(rs=0.628,P＜0.001).结论 低危型HPV6/11主要引起子宫颈尖锐湿疣及CIN Ⅰ;高危型HPV16/18与CIN Ⅲ及子宫颈浸润性鳞癌关系密切,是引起子宫颈CIN Ⅲ及浸润性癌的主要因素.对HPV在子宫颈病变中检测及分型有助于对子宫颈病变的诊断和监测,尤其是对子宫颈癌的预防、早期诊断及早期治疗具有重要意义.     

HPV、CT感染与HSP60在子宫颈癌及癌前病变组织中表达的关系

目的 研究CIN及子宫颈癌患者子宫颈组织中热休克蛋白(HSP)60的表达状态,同时检测人乳头瘤病毒(HPV)、生殖道沙眼衣原体(CT)的感染情况,探讨HSP60在CIN及子宫颈癌组织中表达的差异及其和HPV、CT感染的关系.方法 应用免疫组化方法研究浸润性子宫颈癌46例,CIN 132例,慢性子宫颈炎46例子宫颈组织中HSP60的表达,同时运用第二代杂交捕获法检测HPV,抗原检测卡测定CT抗原.结果 HSP60蛋白定位于子宫颈细胞的胞质中,HSP60在慢性子宫颈炎、CIN组织中表达增强,并持续到子宫颈浸润癌阶段.HSP60在慢性子宫颈炎、CIN Ⅰ至CIN Ⅲ及子宫颈癌中的阳性表达率分别为6.5%、97.9%、97.8%、100.0%和100.0%,过表达率分别为0%、46.8%、88.9%、92.5%和93.5%.HR-HPV和HSP60在重度子宫颈病变(≥CIN Ⅲ)的诊断上有较高的灵敏度和较低的误诊率,而CT检测灵敏度偏低,误诊率偏高.结论 HSP60表达的上调与子宫颈鳞状上皮的异常增殖相关,HSP60在病变子宫颈组织中表达的上调与HR-HPV及CT感染有关.     

人类子宫颈癌基因、p16及人乳头瘤病毒16／18在子宫颈癌中表达的意义

 目的　研究人类子宫颈癌基因（HCCR）、p16在子宫颈上皮内瘤变（CIN）及子宫颈癌中的表达, 探讨其与人乳头瘤病毒（HPV）16／18感染的相关性及其临床意义。方法　采用免疫组织化学SP法检测28例慢性子宫颈炎,62例CINⅠ~Ⅱ级、49例CINⅢ级及52例子宫颈癌组织中p16、HCCR蛋白的表达,并采用原位杂交法检测其HPV16／18的表达。结果　HCCR在慢性子宫颈炎、CINⅠ~Ⅱ级、CINⅢ级和子宫颈癌组的阳性表达率分别为3.57 %（1／28）、35.48 %（22／62）、61.22 %（30／49）和88.46 %（46／52）,各组间两两比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。p16蛋白的阳性表达率从慢性子宫颈炎、CINⅠ~Ⅱ级、CIN Ⅲ级到子宫颈癌组逐渐增加,分别为7.14 %（2／28）、33.87 %（21／62）、65.30 %（32／49）和92.31 %（48／52）,各组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;HPV16／18在慢性子宫颈炎、CINⅠ~Ⅱ级、CINⅢ级和子宫颈癌组的阳性率分别为10.71 %（3／28）、40.32 %（25／62）、69.39 %（34／49）和84.62 %（44／52）,除子宫颈癌与CINⅢ级比较差异无统计学意义外（P＝0.115）,其余组间两两比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。p16、HCCR的表达与HPV16／18感染呈正相关（P＜0.01）。结论　HPV感染可能通过影响p16及HCCR蛋白的过表达与子宫颈癌及其癌前病变的发生、发展密切相关,三者联合检测对子宫颈癌及癌前病变的筛查和预防具有重要意义。     

子宫颈鳞状细胞癌人类乳头状瘤病毒16／18、p16及Her-2的表达及其临床意义

 目的　研究子宫颈鳞状细胞癌癌变过程中高危型人类乳头状瘤病毒（HPV）、 p16及Her-2的表达及临床意义。方法　利用组织芯片技术结合显色原位杂交、免疫组织化学和荧光原位杂交（FISH）技术检测60例子宫颈鳞状细胞癌、61例子宫颈上皮内瘤变（CIN）以及21例正常子宫颈组织中HPV16／18 、p16及Her-2的表达及Her-2基因扩增的情况。结果　在正常子宫颈组、CINⅠ~Ⅱ组、CINⅢ组、子宫颈鳞状细胞癌组中,HPV16／18和p16的阳性率均逐渐升高,分别为0（0／21）、9.68 %（3／31）、46.67 %（14／30）、71.67 %（43／60）;0（0／21）、19.35 %（6／31）、93.33 %（28／30）、96.67 %（58／60）,HPV16／18除正常组子宫颈组与CINⅠ~Ⅱ组间、p16除CINⅢ组与子宫颈鳞状细胞癌组间的差异无统计学意义（P＞0.05）,其余各组阳性率差异均有统计学意义（P＜0.05）;Her-2表达的阳性率在CIN Ⅲ组与子宫颈鳞状细胞癌组分别为13.33 %（4／30）和31.67 %（19／60）,Her-2基因扩增率分别为3.33 %（1／30）和21.67 %（13／60）,正常子宫颈组与CINⅠ~Ⅱ组Her-2阳性率和Her-2基因扩增率均为0,子宫颈鳞状细胞癌组与CIN组、正常子宫颈组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。Her-2蛋白表达及Her-2基因扩增与子宫颈鳞状细胞癌的分化程度、分期及淋巴结转移呈正相关（P＜0.05）。结论　HPV感染是子宫颈鳞状细胞癌发生的触发因素之一;p16蛋白的表达与Her-2基因的扩增可能参与调控了子宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程,其高表达预示子宫颈鳞状细胞癌的不良预后。     

Human papillomavirus types in 115,789 HPV-positive women: A meta-analysis from cervical infection to cancer

Genotyping may improve risk stratification of high-risk (HR) human papillomavirus (HPV)-positive women in cervical screening programs; however, prospective data comparing the natural history and carcinogenic potential of individual HR types remain limited. A meta-analysis of cross-sectional HR HPV-type distribution in 115,789 HPV-positive women was performed, including 33,154 normal cytology, 6,810 atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS), 13,480 low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL) and 6,616 high-grade SIL (HSIL) diagnosed cytologically, 8,106 cervical intraepithelial neoplasia grade 1 (CIN1), 4,068 CIN2 and 10,753 CIN3 diagnosed histologically and 36,374 invasive cervical cancers (ICCs) from 423 PCR-based studies worldwide. No strong differences in HPV-type distribution were apparent between normal cytology, ASCUS, LSIL or CIN1. However, HPV16 positivity increased steeply from normal/ASCUS/LSIL/CIN1 (20-28%), through CIN2/HSIL (40/47%) to CIN3/ICC (58/63%). HPV16, 18 and 45 accounted for a greater or equal proportion of HPV infections in ICC compared to normal cytology (ICC:normal ratios = 3.07, 1.87 and 1.10, respectively) and to CIN3 (ICC:CIN3 ratios = 1.08, 2.11 and 1.47, respectively). Other HR types accounted for important proportions of HPV-positive CIN2 and CIN3, but their contribution dropped in ICC, with ICC:normal ratios ranging from 0.94 for HPV33 down to 0.16 for HPV51. ICC:normal ratios were particularly high for HPV45 in Africa (1.85) and South/Central America (1.79) and for HPV58 in Eastern Asia (1.36). ASCUS and LSIL appear proxies of HPV infection rather than cancer precursors, and even CIN3 is not entirely representative of the types causing ICC. HPV16 in particular, but also HPV18 and 45, warrant special attention in HPV-based screening programs.     

人乳头状瘤病毒感染及人白细胞抗原-DQB1等位基因多态性与南疆维吾尔族女性宫颈癌的关系

目的 探讨人类乳头状瘤病毒(HPV)感染及人类白细胞抗原(HLA)-DQB1等位基因多态性与南疆维吾尔族女性官颈癌的关系.方法 采用导流杂交基因芯片技术,检测190例南疆维吾尔族女性宫颈癌组织和190例正常维吾尔族女性宫颈组织21种HPV亚型的感染情况.采用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)检测其5个HLA-DQB1等位基因的基因频率.结果 (1)在对照组中,HPV感染17例,感染率为8.9%.190例宫颈癌中,HPV感染133例,感染率为70.0%,高于对照组(P<0.05).其中HPV16的感染率最高,为64.7%,也明显高于对照组(3.7%,P<0.05).其他亚型的感染率均远低于HPV16,依次为HPV18(2.6%)、HPV68(2.1%)、HPV45(1.6%)、HPV58(1.6%)、HPV39(1.6%)、HPV31(1.1%)、HPV56(1.1%)及HPV59(0.5%),中国汉族人常见类型HPV53和低危型HPV6的感染率均为0.5%.(2)宫颈癌组和对照组的HLA-DQBI*03基因分布差异有统计学意义(P=0.014),携带HLA-DQB1*03基因者罹患宫颈癌的风险降低31.7%(OR=0.683),其他等位基因与维吾尔族女性宫颈癌的发生无关.(3)携带HLA-DQB1*06基因的宫颈癌患者HPV和HPV16的感染率高于非HLA-DQB1*06携带者(P值分别为0.046和0.025),携带HLA-DQB1*06等位基因的维吾尔族女性更容易被HPV和HPV16感染(OR分别为1.808和1.879).其他等位基因与HPV及HPV16感染无关.结论 南疆维吾尔族女性宫颈癌患者的HPV感染率高于非宫颈癌女性,均以HPV16感染为主.HLA-DQB1*03可能为南疆维吾尔族女性罹患宫颈癌的保护基因.HLA-DQB1*06为HPV和HPV16感染的易感基因.     

不同宫颈组织中PIK3CA、PTEN和p16蛋白表达及其与HPV16/18感染的关系

 目的 探讨PIK3CA、PTEN和p16蛋白在人正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN） 和宫颈鳞癌组织中的表达,以及PIK3CA、PTEN和p16蛋白表达与人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染 之间的关系。方法采用免疫组织化学二步法在22例健康者宫颈组织、72例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）和30例宫颈鳞癌组织中检测PIK3CA、PTEN和p16蛋白的表达,显色原位杂交方 法检测高危型HPV16/18的感染。结果PIK3CA和p16蛋白表达阳性率和HPV16/18的感染率均随着宫颈上皮逐渐恶变而 上升,PTEN蛋白表达却 呈现相反的结果。PIK3CA、PTEN、p16蛋白和 HPV16/18的感染率在宫颈鳞癌和CIN Ⅱ～Ⅲ组中的表达分别与对照组和CIN Ⅰ组相比,差异均有统计学意义（P＜ 0.05）。在宫颈上皮内瘤变组织中,39例（76.47%）CIN Ⅱ～Ⅲ 中显示PIK3CA阳性,仅有9例 （42.86%）CIN Ⅰ中显示 PIK3CA阳性,两组间差异有统计学意义（P=0.006）,而PTEN和p16蛋白在宫颈上皮内瘤 变不同组别中相比差异均无统计学意义。在81例CIN Ⅱ～Ⅲ和鳞癌组织中,PIK3CA和p16蛋白呈显著正相关关系 （P=0.000,r=0.544）。PIK3CA、p16蛋白与PTEN蛋白表达之间,两者均呈显著负相关（P＜0.05）。 HPV16/18阳性的47例标本中,PIK3CA和p16蛋白几乎均呈阳性表达,呈显著正相关（P<0.01）,但PTEN蛋白却有37例呈阴性表达,无显著相关（P=0.116）。结论PIK3CA、PTEN、p16蛋白表达以及高危型HPV感染与宫颈癌的发生发展均密切相关。PIK3CA、PTEN、p16蛋白和高危型HPV感染联合检测,可作为宫颈癌早期癌变的分子标志物。高危型HPV感染可能有助于PIK3CA和p16蛋白的高表达。     

宫颈癌组织中CDC6、TFF2的表达及其与HPV16/18感染的相关性研究

背景与目的： 研究细胞分裂周期蛋白6(CDC6)、三叶因子2(TFF2)在宫颈癌组织中的表达及其与人乳头状瘤病毒(HPV)16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制。 材料与方法： 选择50例宫颈癌石蜡标本、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ20例、CIN Ⅱ-Ⅲ20例、正常宫颈组织20例,采用免疫组织化学方法检测CDC6、TFF2的表达,同时采用PCR技术检测HPV16/18 DNA,并对 HPV16/18感染情况与CDC6和TFF2表达的相关性进行分析。 结果： 在宫颈癌组织中CDC6的阳性率高于CIN和正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P<0.05),且CDC6阳性表达率与病理分级、淋巴结转移相关,差异具有统计学意义(P均<0.05)。在宫颈癌组织中TFF2的阳性率低于CIN和正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P<0.05),TFF2阳性表达率与年龄分组相关,差异具有统计学意义(P<0.05),其阳性表达率均与临床分期、病理分级、淋巴转移无相关关系(P均>0.05);以正常宫颈组织、CIN和宫颈癌为序 HPV16/18 DNA的阳性检出率逐渐升高,各组间的差异具有统计学意义(P<0.05),但与年龄、临床分期、病理分级、淋巴转移无相关关系(P均>0.05)。在宫颈癌组织中,CDC6与HPV16/18感染呈正相关(rs=0.386, P<0.05),TFF2与CDC6、HPV16/18感染呈负相关(rs=-0.356,P<0.05;rs=-0.500,P<0.05)。 结论： 宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中CDC6、TFF2表达的改变可能与 HPV16/18感染有关。CDC6的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关。     

维吾尔族妇女宫颈癌发生与EBV及HPV感染的关系

目的:探讨维吾尔族妇女宫颈癌发生过程中EB病毒(Ebstein-Barr virus,EBV)及人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的作用及其意义。方法:收集维吾尔族妇女宫颈炎、宫颈内上皮瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasja,CIN)Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ和宫颈鳞癌患者福尔马林浸泡与石蜡包埋组织标本共178例,提取DNA并采用PCR方法对EBV和HPV DNA进行检测;用免疫组织化学方法检测宫颈癌EBV蛋白表达。结果:病毒DNA检测结果显示,宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌患者各组HPVDNA检出率依次足2.5%、12.5%、68.0%、96.4%,EBV DNA为0、3.1%、28.0%和69.6%,其中宫颈炎组与CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组问的差异具有统计学意义(P均0.05),但宫颈炎与CINI组间的差异无统计学意义(P0.05)。宫颈病变病理进程不仅伴随着HPV及EBVDNA阳性检出率梯度上升,而且与HPV和EBV双重感染检出率增高呈正相关(r=0.46,X~2=82.50,P0.001)。对宫颈癌组织进行免疫组织化学分析,发现EBV DNA检测阳性标本中EBV蛋白阳性表达检出率为89.7%(34/39),而阴性标本中蛋白表达阳性率为6%(1/17)。结论:维吾尔族妇女宫颈癌的发生与发展可能与HPV和EBV双重感染密切相关。     

宫颈高级别病变与HPV感染型别分析

目的探讨HPV在宫颈高级别病变中的感染率及感染型别。方法采用导流杂交法分别检测CINII～Ⅲ30例和宫颈癌患者160例HPV基因型别,比较HPV感染与宫颈病变的关系。结果CINⅡ～III和宫颈癌患者HPV感染率均为90％,且以单型别感染为主,分别为70．37％（19／27）、81．94％（118／144）;在CIN II～Ⅲ中HPV58型、52型感染居多,宫颈癌则以HPV16型、18型感染最常见;无论宫颈鳞癌还是宫颈腺癌,以HPV16型检出率最高。结论HPV16型、18型是宫颈癌的主要致病型,不同病理类型并无HPV型别上的差异;宫颈上皮高级别内瘤变则以HPV58型、52型感染为主;对HPV58型、52型感染者应重视随访。     

HPV基因型与宫颈病变的关系探讨

  目的  了解HPV基因型与宫颈病变的关系。  方法  选取2010年3月至2011年1月在广州中山大学第三医院妇科就诊并愿意接受HPV检查和问卷调查的妇女为对象。剔除标准:1）已切除子宫;2）已行宫颈锥切;3）不愿意参加本研究。入选360例,年龄为19~66岁,平均为35.6岁,户籍均为广州地区。利用核酸分子杂交技术检测21种HPVDNA。宫颈正常/炎症组为256例,CIN1组为34例,CIN2/3组为61例,宫颈癌组为9例。  结果  HPV感染率宫颈正常/炎症组为18.4%（47/256）,CIN1组为67.6%（23/34）,CIN2/3组为96.7%（59/61）,宫颈癌组为100%（9/9）。CIN1组、CIN2/3组HPV感染率均比正常/炎症组高（P < 0.001）;CIN2/ 3组的HPV感染率比CIN1组高（P < 0.001）。CIN主要感染类型依次为HPV16（44.2%）、HPV58（24.2%）、HPV52（11.6%）、HPV33（8.4%）。宫颈癌主要感染类型为HPV16（88.9%）。  结论  随着宫颈病变程度进展HPV感染率呈升高的趋势,HPV16、58、52、33相关的感染与宫颈癌前病变关系密切,应引起足够重视,其中HPV16感染易致病变进展及癌变发生。      

Human papillomavirus DNA in cervical intraepithelial neoplasia detected by in situ hybridisation

Human papillomavirus (HPV) infection was investigated by in situ hybridisation in histological sections from 38 women with abnormal Papanicolaou smears. 13 patients had condylomatous lesions without atypia, 15 cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I, 4 CIN II, 3 CIN III and 2 carcinoma in situ (CIS). HPV DNA was detected in 29 cases (78%) (1 specimen was technically inadequate). HPV 16 and 18, and 31, 33 and 35 were both present (67%) in CIN III. HPV 6 and 11 were more frequent in CIN I (56%) and in condylomatous lesions (38%). 31% of the condylomatous lesions without atypia contained HPV 31, 33, and 35 and 31% of those with CIN I were infected with HPV 16 and 18. These data confirm the frequent association of HPV infection with cervical cancer and CIN, and indicate that in situ hybridisation can identify patients with specific types of HPV infection at risk for cervical cancer.     

Methylation of viral and host genes and severity of cervical lesions associated with human papillomavirus type 16

Methylation of human papillomavirus (HPV) and host genes may predict cervical cancer risk. We examined the methylation status of selected sites in HPV16 and human genes in DNA extracted from exfoliated cervical cell samples of 244 women harboring HPV16‐positive cancer or cervical intraepithelial neoplasia (CIN) or negative for intraepithelial lesions or malignancy (NILM). We quantified the methylation of CpG sites in the HPV16 L1 gene (CpG 6367 and 6389) and in the human genes EPB41L3 (CpG 438, 427, 425) and LMX1 (CpG 260, 262, 266, 274) following bisulfite treatment and pyrosequencing. Receiver operating characteristic (ROC) curves were used to analyze the diagnostic utility of methylation level for the different sites and for a joint predictor score. Methylation in all sites significantly increased with lesion severity (p < 0.0001). Area under the curve (AUC) was highest among the CIN2/3 vs. cancer ranging from 0.786 to 0.853 among the different sites. Site‐specific methylation levels strongly discriminated CIN2/3 from NILM/CIN1 and cancer from CIN2/3 (range of odds ratios [OR]: 3.69–12.76, range of lower 95% confidence bounds: 1.03–4.01). When methylation levels were mutually adjusted for each other EPB41L3 was the only independent predictor of CIN2/3 vs. NILM/CIN1 contrasts (OR = 9.94, 95%CI: 2.46–40.27). High methylation levels of viral and host genes are common among precancerous and cancer lesions and can serve as independent risk biomarkers. Methylation of host genes LMX1 and EPB41L3 and of the viral HPV16 L1 sites has the potential to distinguish among precancerous lesions and to distinguish the latter from invasive disease.     

A four-gene methylation marker panel as triage test in high-risk human papillomavirus positive patients

Cervical neoplasia‐specific biomarkers, e.g. DNA methylation markers, with high sensitivity and specificity are urgently needed to improve current population‐based screening on (pre)malignant cervical neoplasia. We aimed to identify new cervical neoplasia‐specific DNA methylation markers and to design and validate a methylation marker panel for triage of high‐risk human papillomavirus (hr‐HPV) positive patients. First, high‐throughput quantitative methylation‐specific PCRs (QMSP) on a novel OpenArray? platform, representing 424 primers of 213 cancer specific methylated genes, were performed on frozen tissue samples from 84 cervical cancer patients and 106 normal cervices. Second, the top 20 discriminating methylation markers were validated by LightCycler® MSP on frozen tissue from 27 cervical cancer patients and 20 normal cervices and ROCs and test characteristics were assessed. Three new methylation markers were identified (JAM3, EPB41L3 and TERT), which were subsequently combined with C13ORF18 in our four‐gene methylation panel. In a third step, our methylation panel detected in cervical scrapings 94% (70/74) of cervical cancers, while in a fourth step 82% (32/39) cervical intraepithelial neoplasia grade 3 or higher (CIN3+) and 65% (44/68) CIN2+ were detected, with 21% positive cases for ≤CIN1 (16/75). Finally, hypothetical scenario analysis showed that primary hr‐HPV testing combined with our four‐gene methylation panel as a triage test resulted in a higher identification of CIN3 and cervical cancers and a higher percentage of correct referrals compared to hr‐HPV testing in combination with conventional cytology. In conclusion, our four‐gene methylation panel might provide an alternative triage test after primary hr‐HPV testing.