多柔比星的耐药机制

多柔比星广泛应用于乳腺癌等肿瘤的化疗中,但因耐药使其应用受到一定限制。多柔比星耐药的产生机制可能涉及转运蛋白、凋亡蛋白、DNA修复功能、酶等因素。逆转多柔比星耐药的研究也在持续进行,为临床上克服多柔比星耐药提供了有效方案。但具体机制仍有待进一步阐释,并期待提出更合理的策略以提高疗效。     

多柔比星心脏毒性机制及防治研究进展

多柔比星(ADM)是一种广谱、高效的蒽环类抗肿瘤药物,长期应用容易导致累积性、不可逆性心脏病变.有关ADM心脏毒性的机制较复杂,主要涉及氧化应激、线粒体病变、心肌细胞凋亡等.近年来一系列减少ADM心脏毒性而不影响其抗肿瘤活性的措施被人们采用.文章就ADM心脏毒性的发病机制及防治措施方面的进展作一综述,期望为改善肿瘤患者的长期生存率提供借鉴.     

阿法替尼增强耐药性卵巢癌细胞对多柔比星化疗敏感性的机制研究

目的 探讨阿法替尼增强耐药性卵巢癌细胞对多柔比星化疗敏感性的机制.方法 选取人卵巢癌耐药细胞株A2780T,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0.63、1.25、2.50、5.00μmol/L)阿法替尼对A2780T细胞增殖的影响.分别将多柔比星、多柔比星+0.63μmol/L阿法替尼、多柔比星+1.25μmol/L...     

脂质体多柔比星治疗淋巴瘤临床观察

目的 研究脂质体多柔比星治疗淋巴瘤患者的临床疗效和毒副反应.方法 40例淋巴瘤患者均行脂质体多柔比星联合化疗,并观察其近期疗效和毒副反应.结果 40例淋巴瘤患者总有效率为80.0％,主要毒副反应为骨髓抑制和心脏毒性.结论 脂质体多柔比星治疗淋巴瘤安全有效.     

多西他赛联合多柔比星治疗一线化疗失败的非小细胞肺癌Ⅱ期临床研究

目的 观察国产多西他赛注射液联合多柔比星治疗经一线化疗失败的非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效及毒副反应,并对安全性进行评估.方法 对88例经含铂类药物化疗后进展的NSCLC患者,使用多柔比星40mg/m2静脉冲人,第1天;国产(试验组)或进口(对照组)多西他赛注射液70 mg/m2静脉滴注,第2天.21d为1个周期,治疗3个周期.试验中不预防使用粒细胞集落刺激因子.用世界卫生组织(WHO)的疗效及抗肿瘤药物急性及亚急性毒性反应分度标准评价疗效及毒性,卡式评分评价身体状况变化.结果 88例人组受试者中,81例可评价疗效.试验组和对照组均未出现CR患者,试验组PR、NC和PD患者分别为7、26和8例,对照组分别为3、26和11例.试验组和对照组有效率分别为17.1%和7.5%,临床获益率分别为80.5%和72.5%.两组近期疗效差异无统计学意义.试验组与对照组的不良反应均主要表现为骨髓抑制、脱发及消化道反应等,未见水纳潴留,两组近期疗效差异无统计学意义.结论 国产多西他赛注射液可用于含铂类药物化疗后进展的NSCLC的治疗,疗效显著,耐受性良好.     

腺苷酸活化蛋白激酶增强乳腺癌对多柔比星化疗敏感性的机制

背景与目的：腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)在调控细胞代谢和能量平衡方面起着重要作用,并与细胞增殖、生存和多种信号通路密切相关。近年来发现AMPK参与肿瘤的抑制和耐药。该研究旨在探讨AMPK对多柔比星抑制乳腺癌作用的影响及其机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝(meth-ylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测多柔比星作用后对MCF-7/adr、MCF-7/adr-vector及MCF-7/adr-AMPKα细胞增殖的影响;Hoechst染色法观察各组细胞凋亡形态;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞凋亡率;荧光酶标仪检测3组细胞多柔比星累积量;蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各组细胞中耐药蛋白及凋亡相关蛋白的表达。结果：多柔比星对MCF-7/adr细胞增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用24、48 h的IC50值分别为(36.8±2.1)和(28.8±1.3)μg/mL。过表达AMPKα可增加多柔比星对MCF-7/adr细胞的生长抑制作用,呈剂量和时间依赖性,其作用24、48 h的IC50值分别为(16.0±0.7)和(4.2±0.2)μg/mL。荧光形态分析发现多柔比星联合AMPKα能诱导MCF-7/adr细胞凋亡。1.0μg/mL多柔比星作用48 h后,MCF-7/adr、MCF-7/adr-vector及MCF-7/adr-AMPKα细胞的凋亡率分别为(12.0±1.4)%、(12.7±1.6)%和(32.0±4.2)%,MCF-7/adr细胞中AMPKα过表达明显提高MCF-7/adr细胞对多柔比星的敏感性。荧光酶标仪检测显示,过表达AMPKα能明显提高细胞内多柔比星的累积量,具有浓度依赖性。Western blot实验结果显示,与MCF-7/adr和MCF-7/adr-vector细胞比较,MCF-7/adr-AMPKα细胞中Bax、细胞色素c(Cyto c)的释放、caspase-3和多聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶降解产物(cleaved PARP)蛋白表达明显增加,而细胞外排泵P-糖蛋白(P-gp)和Bcl-2蛋白表达降低。结论：AMPKα可通过抑制耐药细胞外排泵以及调控凋亡相关蛋白的表达,从而增强乳腺癌耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性。     

艾迪与多柔比星联合对骨肉瘤细胞杀伤协同作用的观察

目的:探讨中药制剂艾迪对骨肉瘤化疗的增效作用及其相关机制。方法:将艾迪与多柔比星单独及联合应用于骨肉瘤OS732细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变,免疫细胞化学技术分析凋亡相关蛋白Fas表达。结果:艾迪与多柔比星对骨肉瘤细胞都有剂量依赖性杀伤作用,艾迪浓度达到25μL/mL时,细胞生长受到抑制,再增加艾迪浓度抑制率不再明显改变,但如与1μg/mL多柔比星合用将使细胞生长抑制率进一步提升,P=0.003。细胞超微结构观察及凋亡率测定结果也显示,艾迪与多柔比星联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡,且联用时骨肉瘤Fas表达明显提升,P=0.005。结论:艾迪与小剂量多柔比星合用与单用多柔比星相比可更高效杀伤骨肉瘤细胞,此作用与上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

表柔比星、脂质体多柔比星单药对乳腺癌细胞和树突状细胞生长的抑制作用

背景与目的:表柔比星(epirubicin)是临床上治疗乳腺癌的一线化疗药物,脂质体多柔比星(liposome doxorubicin)是一种新型脂质体类药物,相比传统蒽环类药物可以降低心脏毒性和骨髓抑制.树突状细胞(dentric cell,DC)在肿瘤免疫中起到重要作用.本实验旨在探讨这2种药物对人乳腺癌细胞株Bcap37和MDA-MB-231,以及人树突状细胞生长的抑制作用,以评估2种制剂在乳腺癌治疗中的价值.方法:用不同浓度(0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μg/ml)表柔比星和脂质体多柔比星分别作用于Bcap37、MDA-MB-231和树突状细胞,MTT法检测24、48和72 h时对细胞生长的抑制率.结果:2种药物对肿瘤细胞和正常细胞均有抑制作用.与对Bcap37、MDA-MB-231的作用相比,脂质体多柔比星对树突状细胞的抑制作用较小(F=22.208,P<0.01;F=20.534,P<0.01).脂质体药物对Bcap37的抑制作用强于MDA-MB-231(F=12.873,P<0.01).结论:恶性程度低的乳腺癌细胞对脂质体多柔比星的敏感性高,恶性程度高的细胞则化疗敏感性低.脂质体制剂较普通制剂对于正常树突状细胞的毒性小.     

脂质体多柔比星治疗淋巴瘤的疗效

目的：探讨脂质体多柔比星用于临床治疗淋巴瘤的疗效以及安全性。方法：选取90例淋巴瘤患者作为研究对象,均采用脂质体多柔比星治疗,对患者临床资料、治疗结果、随访情况等进行回顾性分析。结果：90例淋巴瘤患者治疗总有效率为74.44%,初治者总有效率（79.25%）与复治者（67.57%）相近,组间无明显差异（P >0.05）。常见不良反应为骨髓抑制、心电图异常、心功能异常等;患者随访3年生存率为62.22%,初治者（71.70%）略高于复治者（48.65%）,但组间比较差异无显著性（P >0.05）。结论：采用脂质体多柔比星临床治疗淋巴癌,效果显著,不良反应较小,安全性高,建议在临床可作为治疗淋巴瘤的首选药物进行推广应用。     

吡柔比星与多柔比星治疗晚期乳腺癌的临床对照研究

 目的 使用吡柔比星（THP）和多柔比星（ADM）治疗晚期乳腺癌。对比观察其疗效和毒副作用。方法 48例晚期乳腺癌患者，随机分为治疗组和对照组，治疗组（30例）应用THP为主的联合方案，对照组（18例）应用ADM为主的联合方案，均化疗4个周期以上。结果 THP组有效率（66.7 %）高于ADM组（44.4 %），其毒副作用较ADM组明显轻。结论 THP联合方案治疗晚期乳腺癌有效，疗效与ADM相当或优化，毒副作用较ADM低，作为治疗晚期乳腺癌的一线化疗方案有很好的临床意义和社会效益。     

人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株中微小RNA的表达谱

目的:分析人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株PC9/AB2与亲本细胞株PC9中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的差异.方法:应用Agilent human miRNA芯片分别检测PC9/AB2细胞与PC9细胞miRNA的表达谱,随后采用Agilent Feature Extraction软件分析并筛选差异表达的miRNA,应用生物信息软件预测筛选出的差异表达miRNA的潜在靶基因.应用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)验证芯片检测结果.结果:与PC9细胞比较,PC9/AB2细胞中有36个miRNA表达上调＞2倍,有24个miRNA表达下调＞2倍.RFQ-PCR验证了芯片的结果.软件预测发现,16个miRNA有潜在靶基因,其中11个miRNA的靶基因＞100个.结论:筛选获得的差异表达miRNA可能通过调控其靶基因而参与人肺腺癌细胞对吉非替尼的耐药.     

Octa-arginine-modified pegylated liposomal doxorubicin: An effective treatment strategy for non-small cell lung cancer

The present study aims to evaluate the efficacy of octa-arginine (R8)-modified pegylated liposomal doxorubicin (R8-PLD) for the treatment of non-small cell lung cancer, for which the primary treatment modality currently consists of surgery and radiotherapy. Cell-penetrating peptide R8 modification of Doxorubicin-(Dox)-loaded liposomes was performed by post-insertion of an R8-conjugated amphiphilic PEG–PE copolymer (R8-PEG–DOPE) into the liposomal lipid bilayer. In vitro analysis with the non-small cell lung cancer cell line, A549 confirmed the efficient cellular accumulation of Dox, delivered by R8-PLD compared to PLD. It led to the early initiation of apoptosis and a 9-fold higher level of the apoptotic regulator, caspase 3/7 (9.24 ± 0.34) compared to PLD (1.07 ± 0.19) at Dox concentration of 100 μg/mL. The treatment of A549 monolayers with R8-PLD increased the level of cell death marker lactate dehydrogenase (LDH) secretion (1.2 ± 0.1 for PLD and 2.3 ± 0.1 for R8-PLD at Dox concentration of 100 μg/mL) confirming higher cytotoxicity of R8-PLD than PLD, which was ineffective under the same treatment regimen (cell viability 90 ± 6% in PLD vs. 45 ± 2% in R8-PLD after 24 h). R8-PLD had significantly higher penetration into the hypoxic A549 tumor spheroids compared to PLD. R8-PLD induced greater level of apoptosis to A549 tumor xenograft and dramatic inhibition of tumor volume and tumor weight reduction. The R8-PLD treated tumor lysate had a elevated caspase 3/7 expression than with R8-PLD treatment. This suggested system improved the delivery efficiency of Dox in selected model of cancer which supports the potential usefulness of R8-PLD in cancer treatment, lung cancer in particular.     

一株HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞株的建立及其生物学性质

目的　为研制肺癌疫苗提供适合细胞融合的抗原细胞。方法　用8氮鸟嘌呤(8AG)从小鼠肺癌细胞LA795渐进诱导次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HGPRT)缺陷型细胞株ALA9702,并鉴定其生物学性质及成瘤性。结果　ALA9702细胞在20μg/ml8AG培养液中生长了一年,在HAT培养液中不能形成集落,并保持了来源细胞LA795的生物学性质及成瘤性。结论　ALA9702细胞株稳定表现为HGPRT缺陷型小鼠肺癌细胞,为建立有效的特异性肺癌疫苗治疗提供有利的抗原材料     

2-Methoxyestradiol reverses doxorubicin resistance in human breast tumor xenograft

PURPOSE: 2-Methoxyestradiol (2ME), an endogenous estradiol metabolite, was developed as a novel agent based on its antitumor activity and lack of toxicity. This study was designed to investigate the modulatory effect of 2ME on the antitumor effect of doxorubicin (Dox) in resistant breast tumor xenograft. Resistant MCF-7/Dox cells were implanted subcutaneously in nude mice METHODS: Treatment with Dox 5 mg/kg, 2ME 30 mg/kg and their combination continued twice a week for 2 weeks. RESULTS: Following 28 days from starting the treatment with Dox alone, the change in tumor volume from first day of treatment was 455.6 +/- 16.2%. Combined Dox and 2ME treatment significantly reduced tumor volume to 20.8 +/- 43%. Also, combined therapy resulted in enhanced tumor apoptotic and reduced proliferative activities relative to Dox alone. The apoptotic indices were 0.13 +/- 0.03 and 0.75 +/- 0.06 in Dox alone and Dox + 2ME groups, respectively. For Dox alone group, expression of the proliferative markers PCNA and Ki(67) were 0.78 +/- 0.06 and 0.63 +/- 0.18, respectively. They were significantly reduced to 0.28 +/- 0.1 and 0.12 +/- 0.1 for their corresponding combined Dox and 2ME group. Interaction analysis clearly indicated that 2ME synergies antitumor, apoptotic and anti-proliferative activity of Dox. Examining body weight, hepatic and cardiac histopathology of the different treatment groups revealed no significant signs of toxicity. CONCLUSION: These findings suggest that 2ME reverses Dox resistance, with benign side effects profile.     

洛伐他汀克服非小细胞肺癌PC9细胞株吉非替尼耐药的体外研究

目的:研究联合洛伐他汀(lovastatin)和吉非替尼(gefi tinib)对体外诱导吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9细胞凋亡以及相关蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法:应用洛伐他汀联合吉非替尼处理耐吉非替尼的非小细胞肺癌PC9细胞株后,采用WST-1法检测不同药物处理对PC9细胞增殖的影响,Hoechst33342荧光染色法观察细胞凋亡形态,FCM法观察细胞凋亡状况,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:洛伐他汀联合吉非替尼可在体外诱导耐吉非替尼的PC9细胞凋亡,抑制其细胞增殖;洛伐他汀联合吉非替尼可诱导耐吉非替尼的PC9细胞中磷酸化表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,p-EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase1/2,p-ERK1/2)蛋白表达水平明显下调。结论:在体外诱导吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9中,洛伐他汀可以克服吉非替尼耐药,两者具有良好的协同作用,提示两药联合对于出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的临床治疗可能具有很大的应用潜力。     

Mechanism of drug resistance identified in human lung adenocarcinoma cell line SPC-A1 selected for resistance to docetaxel

Objective  To investigate the mechanism of resistance to docetaxel in human lung cancer. Methods  Human lung carcinoma SPC-A1/Docetaxel cells were derived from parental SPC-A1 cells by continuous exposure to increasing concentration of docetaxel. The drug sensitivity was measured by MTT assay in vitro. The cDNA microarray identified a set of differentially expressed genes, and some genes were confirmed by RT-PCR. P-glycoprotein level was measured by flow cytometry analysis. Results  The results of drug sensitivity measured by MTT assay showed that SPC-A1/Docetaxel cells were 13.2-fold resistant to docetaxel and cross-resistant at varying levels to other drugs. The cDNA microarray results identified a set of differentially expressed genes, which showed 428 genes that were up-regulated and 506 genes that were down-regulated in SPC-A1/Docetaxel cells, and some genes were confirmed by RT-PCR. Flow cytometry analysis suggests expression of P-glycoprotein (P-gp) was more abundant in SPC-A1/Docetaxel cells than in the parental cells and docetaxel selection reduces the apoptotic response. Conclusion  The results suggest that docetaxel selection led to changes in gene expression that contribute to the multidrug resistance phenotype. This work was supported by a grant from the Postdoctor Research Project of Jiangsu Province (No.0602031B)     

奥美拉唑逆转人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的研究

目的:探讨液泡ATPase[vacuolar (H+)-ATPase, V-ATPase]非特异性抑制剂奥美拉唑(omeprazole ,OME)逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的耐药性及可能的作用机制.方法:以非细胞毒性浓度4 μg/mL的OME预处理A549/DDP细胞24 h,再用2 μg/mL顺铂(cisplatin, DDP)处理 A549/DDP细胞.MTT法检测细胞的增殖抑制率,激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)法间接检测细胞内pH值的变化,FCM法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和PTEN的表达,RT-PCR法检测V-ATPase 、Bcl-2和PTEN mRNA的表达.结果:OME具有逆转A549/DDP细胞耐药性的作用,逆转倍数为1.45 (P<0.01);OME预处理后A549/DDP细胞内pH值明显降低,Bcl-2蛋白表达下降,PTEN蛋白表达增加(P<0.01).V-ATPase在亲本A549及A549/DDP细胞中相对表达量分别为0.88±0.00和0.99±0.00 (P<0.01);A549/DDP细胞中V-ATPase在有无OME预处理的情况下的相对表达量分别为1.09±0.00和1.05±0.02,差异无统计学意义.Bcl-2 mRNA相对表达量下降(P<0.01),PTEN mRNA相对表达量增加(P<0.01).结论:V-ATPase在A549/DDP细胞中高表达,OME能部分逆转A549/DDP耐药性,其作用机制可能与上调PTEN和下调Bcl-2 表达有关.     

紫杉醇耐药卵巢癌细胞系的建立及耐药机制研究

目的建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其耐药机制。方法采用梯度浓度递增法诱导建立对紫杉醇（Paclitaxel,TAX）耐药的人卵巢癌细胞耐药株SKOV3／TAX,MTF法检测SKOV3／TAX对SKOV3的耐药指数（resistanceindex,RI）,WesternBlot法检测耐药细胞中凋亡及耐药相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶（polyADP．ribosepolymerase,PARP）的表达情况,探讨其耐药机制。结果成功建立人卵巢癌耐紫杉醇细胞株SKOV3/TAX,耐药指数高达88．46;与SKOV3相比,紫杉醇耐药细胞株形态较不规则,细胞扁平,且贴壁较牢;WesternBlot及免疫荧光实验均证实SKOVMTAX中PARP水平明显下调,且加用TAX后PARP的剪切带较亲本细胞明显减少甚至缺失。结论紫杉醇耐药卵巢癌细胞中PARP蛋白表达明显下调,该下调很可能参与了卵巢癌对紫杉醇的耐药调控。     

YAP 与肿瘤干细胞相关性研究进展*

YAP 是一种多功能蛋白,可以与不同的转录因子相互作用激活基因的表达。YAP 作为活化Hippo途径的关键转录调节蛋白在调节器官大小、细胞自我更新、干细胞和组织特异性祖细胞扩增等方面发挥重要作用,在Hippo途径中MST 1/ 2 激酶和其结合蛋白SAV 共同磷酸化激酶LATS1/ 2,激活的LATS1/ 2 磷酸化YAP 从而抑制YAP 蛋白的活性。近年来,大量的研究已经在胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞中发现YAP 的高表达能够维持干细胞干性并且已经成为维持干性的标志物,随后的研究发现信号通路可能与肿瘤干细胞（CSC）分化密切相关。本文主要讨论YAP 在维持干细胞及肿瘤干细胞干性方面的作用。