miR-146a-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6抑制缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬

目的探究miR-146a-5p靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬的影响。方法将mimic-NC质粒、miR-146a-5p mimic质粒、pc-TRAF6质粒、miR-146a-5p mimic质粒联合pc-TRAF6质粒分别转染N2a细胞,然后构建氧、葡萄糖剥夺(OGD) 1 h/再灌注(R) 24 h模型进行体外实验观察。另取雄性C57BL/6小鼠90只,分为6组(n=15),将上述不同的质粒分别注射至小鼠右脑室,制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型进行体内实验观察。采用qRT-PCR方法检测miR-146a-5p和TRAF6表达,苏木精-伊红染色观察脑组织损伤情况,并进行神经功能评分,流式细胞术检测N2a细胞凋亡,TUNEL检测海马神经元凋亡,蛋白免疫印迹法检测TRAF6、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Beclin1、Atg7和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达。结果①OGD/R和MCAO后miR-146a-5p低表达,而TRAF6高表达,且miR-146a-5p靶向负调控TRAF6;②miR-146a-5p过表达后,MCAO致中脑损伤显著减轻、神经功能改善(P 0. 01);③miR-146a-5p过表达后,可明显降低OGD/R和MCAO神经元凋亡率,下调cleaved caspase-3、Bax、Beclin1、Atg7和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(P 0. 01)。结论 miR-146a-5p过表达通过靶向负调控TRAF6抑制缺血性脑卒中神经元凋亡和自噬。     

刺槐素通过自噬调控ROS/NLRP3信号通路对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的 基于自噬/ROS/NLRP3炎症小体信号通路，探讨刺槐素(Acacetin)对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤后的小胶质细胞保护作用机制。方法 培养小鼠小胶质细胞(BV2),分为正常对照组、OGD模型组和OGD+Acacetin组(10μmol)。缺氧6 h复氧24 h后采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测BV2细胞活性；乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞的死亡率；活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内ROS水平；Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1、NLRP3、caspase-1和IL-1β等蛋白的表达。结果 刺槐素能增加OGD/R损伤后小胶质细胞的存活率，减少LDH的释放，降低ROS的生成，增加LC3-Ⅱ和beclin-1蛋白的表达，进一步下调NLRP3、caspase-1和IL-1β的表达。结论 Acacetin能减轻OGD/R后小胶质细胞的损伤从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用，其作用机制可能与抑制ROS的产生、激活自噬、抑制NLRP3炎症小体有关。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的大鼠海马神经元氧糖剥夺后凋亡的影响

目的 探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对体外培养大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)后凋亡的影响.方法 体外培养乳鼠海马神经元并分为正常对照组、OGD组、GM-CSF 1 ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml和100 ng/ml组;制备OGD模型,并给与相应剂量的GM-CSF干预.应用流式细胞仪及Annexin V/PI双染色法检测神经元凋亡率,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性了解神经元细胞膜损伤程度,RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达.结果 与正常对照组相比,OGD组细胞凋亡率及LDH活性明显升高(均P＜0.01);与OGD组相比,除GM-CSF 1 ng/ml组外,GM-CSF各浓度组神经元凋亡率及LDH活性明显降低(均P＜0.01),其中GM-CSF 20 ng/ml组对神经元凋亡影响最显著.与正常对照组比较,OGD组Bcl-2 mRNA表达明显下降,Bax mRNA表达显著升高,Bcl-2/Bax降低(均P＜0.01);与OGD组比较,GM-CSF 20 ng/ml组Bcl-2 mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax增加(均P＜0.01).结论 GM-CSF能够有效地抑制OGD后海马神经元的凋亡,20 ng/ml抗凋亡的效果最佳.其神经保护作用机制可能与其调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达有关.     

线粒体分裂抑制剂通过抑制自噬加重OGD/R损伤

目的探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)处理对原代培养的皮层神经元缺血再灌注损伤的作用及其机制研究。方法在原代培养的小鼠皮层神经元上建立氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型模拟体内缺血再灌注损伤,根据再灌注时间长短检测自噬的发生情况,并进一步选取自噬发生最明显的时间点。然后分别采用自噬抑制剂-3-MA、自噬激动剂-雷帕霉素(rapamycin)、Mdivi-1以及联合rapamycin和Mdivi-1进行干预,分别从mRNA以及蛋白水平检测自噬相关分子的改变,并同时检测神经元损伤情况。结果 OGD/R处理后,神经元自噬随再灌注时间增长而上调,在OGD 2 h/R 24 h时,Beclin 1以及微管相关轻链蛋白3 II/I(LC3 II/I)比值均达峰值(P0.001,P0.01)。细胞活力结果显示,rapamycin可减轻OGD/R损伤(P0.01),Mdivi-1则会加重OGD/R损伤(P0.05),但rapamycin可通过增加自噬来减轻Mdivi-1造成的损伤(P0.05)。蛋白检测结果显示,OGD/R处理后,Mdivi-1可明显降低神经元细胞内Beclin 1和LC3 II的表达(P0.05)。结论 Mdivi-1可能通过抑制自噬的发生,从而加重神经元OGD/R损伤。     

PINK1介导的线粒体自噬在小鼠皮层神经元氧糖剥夺后表达和意义

目的探究不同时长氧糖剥夺(OGD)后小鼠皮层神经元中线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)表达的时空动态改变。方法 C57BL/6J小鼠皮层神经元原代培养7 d,以OGD不同时长(0 h、2 h、4 h、6 h、8 h)作为观察时间点。倒置显微镜下观察神经元形态变化;MTT比色法检测神经元存活率;蛋白印迹法(Western blot,WB)观察LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin表达的时间变化;免疫荧光观察PINK1OGD后表达的空间改变。结果 OGD严重损伤神经元活性,且随着时间延长细胞活性呈进展性下降趋势;OGD后自噬标志性分子LC3-Ⅱ和PINK1开始升高(4 h达到峰值)(P0.05),后进行性下降,而Parkin表达逐渐下降(P0.05);PINK1在胞浆可见均匀表达,在OGD后荧光强度短暂增高,并随OGD时间逐渐减弱。结论不同时长OGD可造成不同程度神经元损伤,并激活PINK1介导的线粒体自噬,PINK1可能通过影响线粒体在脑缺血损伤的病理生理过程中发挥作用。     

Netrin-1通过下调氧糖剥夺诱导的人神经母细胞瘤自噬促进细胞存活

目的通过建立体外人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧糖剥夺(oxygen and glucose deprication,OGD)模型模拟脑梗死后神经元缺血缺氧环境(OGD),探索神经导向因子Netrin-1是否影响OGD后细胞的生存,以及自噬在其中的可能作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,检测Netrin-1对细胞活性及自噬的影响。使用自噬诱导剂雷帕霉素、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤干预自噬水平,同时构建过表达Netrin-1受体UNC5H2-HA基因的HEK293T细胞;CCK-8试剂盒检测细胞活性,免疫印迹检测自噬相关标志物(Beclin 1、LC3、p62)的表达及免疫荧光检测LC3斑点的形成。结果与OGD对照组相比,Netrin-1及3-甲基腺嘌呤的干预均显著提高细胞活性,伴有LC3-Ⅱ斑点形成减少;相反,雷帕霉素增加LC3-Ⅱ斑点的同时抑制细胞活性,并减弱了Netrin-1提高细胞活性的作用。过表达UNC5H2-HA细胞较对照质粒组相比,LC3-Ⅱ表达增加;同时进行Netrin-1干预后仅过表达组出现LC3-Ⅱ表达下降,p62表达上升。结论 Netrin-1可能通过受体UNC5H2下调OGD损伤的人神经母细胞瘤自噬而提高细胞活性。     

线粒体自噬参与NLRP3介导的炎症反应在脑卒中康复中的作用

目的 分析线粒体自噬和NLRP3介导的炎症反应在脑卒中康复中的作用。方法 雄性SD大鼠随机分为6组：假手术组(Sham)、Sham+雷帕霉素(RAPA)组、再灌注后6 h组(I/R 6 h)、I/R 6 h+RAPA组、再灌注后24 h(I/R 24 h)和I/R 24 h+RAPA组。建立短暂性大脑中动脉闭塞模型,以刺激大鼠的缺血/再灌注(I/R)损伤。分析缺血核心皮质区域不同类型神经细胞中caspase-1阳性细胞表达情况。以BV2细胞为研究对象,在缺氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)条件下检测NLRP3表达,并测定线粒体膜电位。结果 I/R损伤后6 h,切割的caspase-1主要在小胶质细胞中表达[(88.4±1.1)%],而在24 h时主要在神经元[(63.4±2.2)%]中表达。在OGD/R后,BV2细胞中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化随着时间的推移而减少。暴露于OGD/R后24 h, BV2细胞表现出低膜电位的百分比。与OGD/R组相比,RAPA能够挽救线粒体的损伤(P<0.05),并且RAPA可抑制OGD/R诱导的BV2细胞中NLRP3、切割的caspase-1和切割...     

CircTLK1通过miR-424-5p/FBXO3轴对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨环状RNA TLK1(CircRNA TLK1,CircTLK1)对氧糖剥夺/复氧(Oxygen glucose deprivation/Reoxygenation,OGD/R)诱导的神经元HT22损伤的影响以及对微小RNA(microRNA,miR)-424-5p/F-box蛋白3(F-box protein 3,FBXO3)的调控作用。方法 将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、sh-NC组、沉默环状RNA TLK1(Silencing circular RNA tlk1,sh-circTLK1)组、sh-circTLK1+抑制剂NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh NC组、sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组,除对照组外其余各组细胞均行OGD/R操作,细胞计数试剂盒8(Cell counting Kit 8,CCK-8)法测定HT22细胞活力; 脂连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Adiponectin V-fluorescein isothiocyanate,Annexin V-FITC)细胞凋亡试剂盒测定HT22细胞凋亡; 测定HT22细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)漏出率; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qRCR)法测定HT22细胞miR-424-5p,FBXO3 mRNA水平; 蛋白免疫印记法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2关联基因X(B lymphoma-2 gene association X,Bax)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)、FBXO3水平; 双荧光素酶测定CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3靶向关系,并使用RNA下拉实验验证CircTLK1与miR-424-5p关系。结果 与对照组比较,OGD/R组miR-424-5p,HT22细胞活力降低(P<0.05),circTLK1,FBXO3 mRNA水平,HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与OGD/R组比较,sh-circTLK1组HT22细胞活力增加(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平,LDH漏出率降低(P<0.05); 与sh-circTLK1组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组细胞活力降低(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率升高(P<0.05); 与sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂组比较,sh-circTLK1+miR-424-5p抑制剂+sh FBXO3组细胞活力升高(P<0.05),HT22细胞凋亡率、Bax,Cleaved caspase-3水平、LDH漏出率降低(P<0.05); CircTLK1与miR-424-5p以及miR-424-5p与FBXO3均存在靶向关系。结论 CircTLK1沉默可能通过调控miR-424-5p/FBXO3对OGD/R诱导的HT22细胞损伤来发挥保护作用。     

左旋丁基苯酞对乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧后脑胶质细胞数量及IL-1β蛋白表达的影响

目的观察左旋丁基苯酞(L-3-n-butylphthalide,l-NBP)对原代培养乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后脑胶质细胞数量及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的影响。方法采用DMEM培养基体外培养乳鼠脑胶质细胞,免疫细胞化学鉴定培养细胞类型,建立脑胶质细胞OGD/R损伤模型,通过测定细胞OGD/R时乳酸脱氢酶(LDH)释放量,评估脑胶质细胞OGD模型。OGD 24h/R 24 h后,采用MTT法测定脑胶质细胞数量,并观察l-NBP对OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量的影响;采用间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组脑胶质细胞IL-1β蛋白表达。结果 OGD 4 h组、OGD 8 h组、OGD 12 h组、OGD 24 h组脑胶质细胞LDH释放量均比正常对照组明显增多(P<0.01);OGD不同时间组组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量较对照组明显增加(P<0.01);l-NBP 500μmol/L组脑胶质细胞数量较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P<0.05)。OGD 24 h/R 24 h组IL-1β蛋白表达比对照组明显增多(P<0.05);l-NBP 100和500μmol/L组IL-1β蛋白表达较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P<0.05)。结论 l-NBP能减少乳鼠脑胶质细胞OGD/R后细胞数量以及IL-1β蛋白的表达。     

二氢杨梅素减轻氧糖剥夺/再灌注所致的神经元氧化应激损伤及机制

目的探讨二氢杨梅素对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)导致的神经元氧化应激损伤的影响和可能的作用机制。方法体外培养大脑皮质原代神经元细胞,建立OGD/R损伤细胞模型。利用不同浓度的二氢杨梅素处理神经元细胞,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平。以超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)为细胞氧化水平的指标。细胞核质分离方法检测核因子E2相关因子(Nrf2)核/质转位情况,免疫印迹法检测血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白表达。结果与OGD/R组相比,二氢杨梅素处理组细胞生存率显著提高,ROS和MDA水平降低,SOD活性增高。同时二氢杨梅素处理增高了HO-1的蛋白表达并影响Nrf2的核质转位。结论二氢杨梅素通过激活Nrf2/HO-1抗氧化通路抑制OGD/R所致的原代神经元细胞氧化应激损伤。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后调控基因Bcl-2、Bax的表达及与细胞凋亡的关系

目的:本研究旨在探讨Bcl-2及Bax蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的变化及与细胞凋亡的关系。方法:雄性Wistar大鼠56只,随机分为假手术组、缺血15分钟再灌注1、6、12、24、48、72小时组。采用大鼠四条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法观察不同再灌注时间组海马CAl区细胞凋亡的变化。采用免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达水平的变化。结果:脑缺血损伤后随再灌注时间延长凋亡细胞逐渐增多,至再灌注48小时达到高峰,72小时后减少。Bcl-2表达至再灌注12小时达高峰,再灌注24~72小时组逐渐减弱。Bax表达至48小时达高峰,再灌注72小时减少。结论:Bcl-2于再灌注早期表达增强,Bax于再灌注中期表达增强,Bcl-2/Bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

HIF-1α/Beclin1-Mediated Autophagy Is Involved in Neuroprotection Induced by Hypoxic Preconditioning

Hypoxic preconditioning (HPC) exerts a protective effect against hypoxic/ischemic brain injury, and one mechanism explaining this effect may involve the upregulation of hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1). Autophagy, an endogenous protective mechanism against hypoxic/ischemic injury, is correlated with the activation of the HIF-1α/Beclin1 signaling pathway. Based on previous studies, we hypothesize that the protective role of HPC may involve autophagy occurring via activation of the HIF-1α/Beclin1 signaling pathway. To test this hypothesis, we evaluated the effects of HPC on oxygen-glucose deprivation/reperfusion (OGD/R)-induced apoptosis and autophagy in SH-SY5Y cells. HPC significantly attenuated OGD/R-induced apoptosis, and this effect was suppressed by the autophagy inhibitor 3-methyladenine and mimicked by the autophagy agonist rapamycin. In control SH-SY5Y cells, HPC upregulated the expression of HIF-1α and downstream molecules such as BNIP3 and Beclin1. Additionally, HPC increased the LC3-II/LC3-I ratio and decreased p62 levels. The increase in the LC3-II/LC3-I ratio was inhibited by the HIF-1α inhibitor YC-1 or by Beclin1-short hairpin RNA (shRNA). In OGD/R-treated SH-SY5Y cells, HPC also upregulated the expression levels of HIF-1α, BNIP3, and Beclin1, as well as the LC3-II/LC3-I ratio. Furthermore, YC-1 or Beclin1-shRNA attenuated the HPC-mediated cell viability in OGD/R-treated cells. Taken together, our results demonstrate that HPC protects SH-SY5Y cells against OGD/R via HIF-1α/Beclin1-regulated autophagy.     

黄芪甲苷通过AKT-mTOR信号通路促进脑缺血的自噬改善脑缺血再灌注损伤

目的研究黄芪甲苷对脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法将72只健康SD大鼠随机分成假手术组、I/R组、雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量(20 mg·kg~(-1)、50 mg·kg~(-1)、100 mg·kg~(-1))组。除假手术组外,各组分别采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠I/R模型。观察脑梗死面积、细胞形态,免疫组化及Western blot检测海马神经元凋亡和自噬水平。结果 I/R组、雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组Bederson评分与假手术组比较,均有差异有统计学意义(P0.05);雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组Bederson评分均低于I/R组(P0.05)。雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组大鼠的脑梗死面积明显小于I/R组。雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组的海马凋亡阳性细胞数减少、凋亡率降低(P0.05)。与I/R组比较,雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组的神经细胞核双层膜结构尚完整,细胞器结构破坏较少。I/R组、雷帕霉素和黄芪甲苷不同剂量组与假手术组比较,caspase-3和P62水平均升高,Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclinl、ATG5和LAMP2蛋白相对表达量均降低;I/R组与雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组比较,caspase-3和P62水平显著升高(P0.05),Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclinl、ATG5和LAMP2蛋白相对表达量均降低。结论黄芪甲苷可减轻细胞结构损伤,减少脑梗死面积,减轻细胞坏死及凋亡,增加自噬水平,降低凋亡水平。黄芪甲苷通过AKT-mTOR信号通路促进脑缺血的自噬改善脑I/R损伤。     

缺血性脑卒中患者外周血CBX7的表达水平变化及其通过Nrf2/HO-1通路对神经元凋亡的影响

目的 探讨Polycomb chromobox7(CBX7)对氧糖剥夺/再灌注(Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)神经元的影响及其可能的作用机制.方法 收集缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)组患者和体检健康人群(对照组)外周血,分离外周血单个核细...     

15d-PGJ2对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤小胶质细胞活化及神经细胞凋亡的影响

目的 观察PPAR-γ激动剂15d-PGJ2对糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑缺血再灌注损伤小胶质细胞活化及神经细胞凋亡的影响。方法 成年SD大鼠80只,随机分为4组:(1)假手术组;(2)正常血糖脑缺血组;(3)糖尿病脑缺血组;(4)糖尿病脑缺血+15d-PGJ2干预组。采用链脲佐菌素诱导糖尿病,应用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型。糖尿病脑缺血组+15d-PGJ2干预组在成功制备糖尿病大鼠模型后给予15d-PGJ2 200 μg·kg^-1·d^-1腹腔注射21 d后应用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,再灌注后3 h腹腔注射15d-PGJ2 400 μg·kg^-1,以后6 d每天给予15d-PGJ2 200μg·kg^-1·d^-1腹腔注射。每组分别于24 h、7 d各处死一批大鼠,并随机分为2组:一组行免疫组化法检测小胶质细胞CD68的表达水平及ELISA检测TNF-α与IL-1β水平,另一组用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞计数。结果 正常血糖脑缺血组、糖尿病脑缺血组、糖尿病脑缺血+15d-PGJ2干预组与假手术组比较,再灌注24 h、再灌注7 d CD68阳性面积、TNF-α与IL-1β水平、神经细胞凋亡率均明显增加(P<0.05); 糖尿病脑缺血组在再灌注24 h、再灌注7 d CD68阳性面积、TNF-α与IL-1β水平、神经细胞凋亡率明显高于正常血糖脑缺血组(P<0.05); 糖尿病脑缺血+15d-PGJ2干预组再灌注24 h、再灌注7 d CD68阳性面积、TNF-α与IL-1β水平、神经细胞凋亡率低于未干预组(P<0.05)。结论 糖尿病脑缺血组与正常血糖脑缺血组相比较CD68阳性面积更大、TNF-α与IL-1β水平更高及神经细胞凋亡率更高; 15d-PGJ2可减少糖尿病脑缺血大鼠小胶质细胞激活、减少炎症因子分泌、降低神经细胞凋亡率。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2蛋白在大脑皮质的表达

目的观察bcl-2蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注(FCIR)后表达的变化。方法大脑中动脉内线栓法(MCAO)建立缺血再灌注(IR)模型,用免疫组化(SP)法观察bcl-2蛋白不同时间的表达。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化。结果脑缺血2h再灌注2hbcl-2表达升高(P<0.01),IR6h达到高峰,IR12h开始下降。结论随着脑缺血再灌注时间延长脑损伤加重,bcl-2蛋白表达减少,bcl-2蛋白表达增加对细胞存亡有重要意义。     

HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制研究

目的探讨HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制。方法利用小鼠海马神经元细胞系HT22为研究对象,HT22细胞经氧糖剥夺再灌注损伤及Grasp65过表达干预后,采用MTT法检测细胞存活率;Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡;并应用细胞免疫荧光技术观察高尔基体的形态;应用Western blot技术检测GM130和GAAP蛋白的表达。结果氧糖剥夺再灌注可导致HT22细胞的活性显著降低(P0.05),凋亡率显著增高(P0.05);并可导致高尔基体形态的异常,随着再灌注时间的延长,高尔基体逐渐发生碎裂,尤其以再灌注12 h和24 h最为明显;GM130、GAAP的表达水平在氧糖剥夺再灌注后出现下降,特别是在再灌注12 h、24 h后出现了显著下降(P0.05)。过表达Grasp65后,HT22细胞在氧糖剥夺再灌注所致高尔基体碎裂出现减少(P0.05),碎裂程度减轻,同时GM130和GAAP的表达均显著增加(P0.05),HT22细胞的存活率大大提高(P0.05),凋亡率显著降低(P0.05)。结论缺血再灌注损伤的细胞模型中,同样发生了高尔基体的碎裂;过表达Grasp65可以减轻氧糖剥夺再灌注损伤所致的高尔基体碎裂,并可以减少HT22细胞的凋亡,其机制可能与上调GM130和GAAP的表达有关。     

MicroRNA-124-3p alleviates cerebral ischaemia-induced neuroaxonal damage by enhancing Nrep expression

Objective: Ischaemic stroke has a high death rate and frequently results in long-term and severe brain damage in survivors. miRNA-124-3p (miR-124-3p) treatment has been suggested to reduce ischaemia and play a vital function in avoiding neuron death. An investigation of the role of miR-124-3p, in the ischaemia damage repair or protection in the middle cerebral artery occlusion (MCAO) model and oxygen-glucose deprivation/reperfusion (OGD/R) model, was the purpose of this research. Methods: The expression of miRNA and mRNA in the MCAO model was predicted using bioinformatics analysis. The OGD/R neuronal model was developed. We examined the influence of a number of compounds on the OGD/R model in vitro using gain- and loss-of-function approaches. Results: For starters, miR-124-3p and Nrep level in the MCAO model were found to be lower in the model predicted by bioinformatics than in the sham-operated group. And then in the OGD/R model, miR-124-3p treatment reduced OGD/R neuronal damage, increased neuronal survival, and reduced apoptosis in cell lines. Moreover, we further looked at the impact of miR-124-3p on downstream Rnf38 and Nrep using the OGD/R model. Western blot analysis and dual-luciferase reporter assays indicated that miR-124-3p binds and inhibits Rnf38. Finally, although Nrep expression was reduced in the OGD/R model neuronal model, it was shown that miR-124-3p administration reduced apoptosis and increased neuronal activity, particularly with regard to axon regeneration-related proteins. Conclusion: Our studies have shown that miR-124-3p may reduce neuronal injury by preventing Rnf38-mediated effects on the Nrep axis.     

Comparison of the anti-apoptotic effects of 15-and 35-minute suspended moxibustion after focal cerebral ischemia/reperfusion injury

Heat-sensitive suspended moxibustion has a neuroprotective effect against focal cerebral ischemia/reperfusion injury, but the underlying mechanisms remain unclear. The duration of heat-sensitive suspended moxibustion(usually from 30 minutes to 1 hour) is longer than traditional suspended moxibustion(usually 15 minutes). However, the effects of 15-and 35-minute suspended moxibustion in rats with cerebral ischemia/reperfusion injury are poorly understood. In this study, we performed 15-or 35-minute suspended moxibustion at acupoint Dazhui(GV14) in an adult rat model of focal cerebral ischemia/reperfusion injury. Infarct volume was evaluated with the 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride assay. Histopathological changes and neuronal apoptosis at the injury site were assessed by hematoxylin-eosin staining and terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick end labeling assay. Caspase-9 and caspase-3 expression at the injury site was detected using immunofluorescent staining. Bax and Bcl-2 expression at the injury site was assessed using western blot assay. In the 35-minute moxibustion group, infarct volume was decreased, neuronal apoptosis was reduced, caspase-9, caspase-3 and Bax expression was lower, and Bcl-2 expression was increased, compared with the 15-minute moxibustion group. Our findings show that 35-minute moxibustion has a greater anti-apoptotic effect than 15-minute moxibustion after focal cerebral ischemia/reperfusion injury.