血清25-羟维生素D浓度检测对膝骨关节炎临床诊疗意义

目的：研究与探讨血清25－羟基维生素D浓度检测对膝骨关节炎临床诊疗的指导意义。方法随机抽取2011年6月至2011年10月以及2012年6月至2012年10月期间骨科门诊主诉有膝关节疼痛患者1174名,采用罗氏诊断试剂盒检测患者血清中的25－羟基维生素D浓度。结果1174例患者平均年龄（53．61±15．10）岁,血清25－羟维生素D浓度平均值为15．55 ng／ml,维生素D缺乏者（＜20 ng／ml）占48．12％（524例）,其中严重缺乏者（＜10 ng／ml）占26．35％（287例）。2011年测得血清25－羟基维生素D浓度平均值为13．27 ng／ml（参考值为11．10～42．90 ng／ml）;2012年测得血清25－羟基维生素D浓度平均值为22．53 ng／ml（参考值为20～32 ng／ml）。结论血清25－羟基维生素D浓度检测在膝骨关节炎诊疗中具有重要指导意义。本次研究中应用的罗氏诊断血清25－羟维生素D3检测试剂参考值有波动,直接导致2011年度与2012年度同期所检测出的患者血清25－羟基维生素D浓度存在一定的偏差。     

多种生长因子及DMEM培养液对植入脂肪成活率影响的研究

目的：初步探索多种生长因子、DMEM培养液对植入脂肪成活率的影响，为临床应用提供参考。方法：将同条件获取的脂肪颗粒40ml纯化后，等量分5组，分别于生理盐水(对照组)、DMEM液、含20ng／mlbFGF的生理盐水、含2011g／ml IGF-1的生理盐水、含20ng／ml VEGF的生理盐水(以上四组为实验组)中浸润lh。浸润后去杂质，注射于裸鼠背部皮下，每组注射5只裸鼠，每只注射6点，每点0．2ml，15周后，取出移植物，测残留体积和重量，并送病理学检查。方差分析检验比较各实验组与对照组移植物残留体积和重量的差异。结果：DMEM组的移植物残留体积和重量明显较对照组多(P＜0．05)，其他实验组移植物残留体积和重量与对照组无明显差异(P＞0.05)，各组移植物组织病理学特性无明显差异。结论：DMEM可促进植入脂肪的组织量维持bFGF、IGF-1、VEGF等生长因子在本实验条件下显示出促进植入脂肪成活的作用。     

组织工程骨的牛血清白蛋白残余量检测

目的检测体外构建的组织工程骨中的牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)残余量,并探讨减少残余量的方法。方法体外分离培养hBMSCs,将第2代细胞消化、离心、洗涤3次,获取细胞洗涤液样品。取第2代h BMSCs接种于β-TCP支架材料,体外成骨诱导2周,构建组织工程骨。生理盐水浸洗3次,获取洗涤液样品。然后加入PBS,37℃振荡浸提24h,获取浸提液样品。同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液样品作为对照。采用酶联免疫法检测洗涤液与组织工程骨样品浸提液中BSA的残余量,观察洗涤次数与洗涤液中BSA含量的变化关系。结果随洗涤次数增多,洗涤液与浸提液中的BSA含量明显降低。酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料浸提液中BSA残余量分别为(19.54±6.70)ng和(15.67±5.49)ng,单位重量的残余量分别为(0.656±0.213)ng/mg和(0.796±0.205)ng/mg,两组无显著差异(P>0.05)。结论酶联免疫法适用于组织工程骨中BSA残余量的检测。因为支架材料较细胞更易吸附BSA,现有条件下构建的组织工程骨BSA残余量仍然较高,需要进一步探索降低残余量的方法 。     

两种再生医疗手术器械清洗方法的效果比较

目的探讨经济高效的人工清洗程序，提高消毒供应室对全院再生医疗手术器械的清洗质量。方法将480件使用后的再生医疗器械随机分为实验组和对照组，每组含咬合齿类180件和管腔类60件。实验组直接用多酶浸泡后清洗；对照组先用含氯消毒剂浸泡、再用酶浸泡后清洗。清洗后对手术器械进行细菌学、内毒素和残留血检测。结果两组同类器械的细菌学检测结果差异不显著，但内毒素检测和残留血检测存在显著差异（P〈0．05，P〈0．01）。结论对再生医疗手术器械直接采用多酶浸泡后的清洗质量优于先用含氯消毒剂浸泡再用多酶浸泡后的清洗质量，且节省清洗成本，节约清洗时间，减少了化学消毒剂对环境的污染。     

表皮生长因子对肿瘤坏死因子α致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的了解肿瘤坏死因子α（TNF-α）导致HaCaT细胞凋亡过程中过氧化物酶体增殖物激活受体B（PPAR[3）的表达情况，探讨表皮生长因子（EGF）对HaCaT细胞的保护机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组（不作任何处理）、TNF—α小剂量组（10ng／ml TNF-α处理）、TNF—α大剂量组（20ng／mlTNF-α处理）、EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF—α大剂量组，后2组先用20ng／mlEGF培养4h后，再分别予以10、20ng／ml TNF—α处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（easpase．3）荧光检测试剂盒测定caspase-3的活性，噻唑蓝比色法检测细胞存活率。以5、10、20、40ng／ml的EGF处理HaCaT细胞，采用反转录．PCR和蛋白质印迹法检测PPAR[3mRNA及其蛋白的表达。结果与TNF-α小剂量组[（32±6）％]、TNF-ct大剂量组[（57±6）％]比较，EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF-α大剂量组细胞凋亡率[（20±3）％、（28±4）％]明显下降（P〈0．01），caspase-3活性降低、存活率上升（P〈0．01）。20ng／mlEGF处理细胞时，PPAR[3mRNA及其蛋白表达最强。结论EGF在抑制TNF-α导致的HaCaT细胞凋亡的同时，亦增强细胞中PPARβ的表达。     

β1转化生长因子浓度对体外诱导骨髓间充质细胞构建软骨的影响

目的 探讨β1转化生长因子（TGF-β1）浓度对体外诱导猪骨髓间充质细胞（BMSCs）构建组织工程化软骨的影响，明确TGF-β1诱导剂量对细胞分化的作用，为体外软骨构建提供适宜的诱导因子应用浓度参数。方法 抽取8周龄猪髂嵴骨髓，应用贴壁法分选单个核细胞，体外培养扩增后获得BMSCs，收集第2代细胞，以5×10^7个／cm。细胞的密度接种到聚羟基乙酸（PGA）制成的圆柱形三维支架材料上（直径5mm，厚度2mm），7d后应用不同浓度TGFβ1（A组：5ng／ml、B组：10ng／ml、C组：20ng／ml、D组：50ng／m1）与IGF-1（50ng／m1）及地塞米松（40ng／m1）组成诱导剂，分别进行体外诱导培养。8周后取材行大体观察，体积、湿重及聚合蛋白多糖（GAG）定量，组织学及Ⅱ型胶原免疫组织化学等检测。结果 B、C、D组形成细胞材料复合物组织学结构较为类似，有明显的软骨陷窝，分布有大量Ⅱ型胶原及GAG；A组软骨陷窝结构较少，胞外基质染色较浅。B、C、D组的组织湿重、体积和GAG含量均明显高于A组。结论 诱导三维支架上的BMSCs体外构建组织工程化软骨过程中，10ng／ml的TGF-β1诱导浓度具有良好的促分化效能，TGF-1的促分化作用并未表现出明显的剂量依赖性。     

正常人血清前列腺特异性抗原水平的研究

目的：评价年龄与血清前列腺特异性抗原（PSA）水平的关系。方法：采用免疫放射分析（IRMA）测定226例正常男性各年龄组血清PSA水平。结果：30～39岁组血清PSA为（0．88±O．47）ng／ml，40～49岁组为（0．87±0．34）ng／ml，50～59岁组为（0．99±0．57）ng／ml，60～69岁组为（1．12±0．78）ng／ml，＞70岁组为（1．12±0．83）ng／ml，各组间血清PSA浓度无显著性差异（P＞0．05）。结论：当前列腺体积在正常范围内时，血清PSA水平与年龄无直接关系。     

D2期前列腺癌中雄激素受体的表达及意义

应用免疫组化SABC法，检测29例D_2期前列腺癌组织中雄激素受体的含量，并观察患者治疗前生活状态、骨转移程度、血浆前列腺特异性抗原、血浆睾酮和血红蛋白浓度等参数与患者预后之间的关系。结果发现：11例雄激素依赖性前列腺癌组中雄激素受体含量、血红蛋白、睾酮浓度分别为（51．0±14．8）％，（119．0±19．0）g/l，（9．8±7．9）ng／ml。而在18例雄激素非依赖性前列腺癌组中则分别为（32．2±118）％，（97．9±18．2）g/l，（4．0±6．4）ng／ml。雄激素受体含量、血红蛋白、睾酮浓度两组相比较，有显著性差异。（2）前列腺特异性抗原、生活状态、骨转移程度在雄激素依赖性前列腺癌组中分别为（122．8±70．5）ng／ml，1．5±0．7，1．4±0．5，在雄激素非依赖性前列腺癌组中则分别为（123．3±52．9）ng／ml，1．8±0.6，1．88±0.7，统计学分析两组没有差异（P＞0．05）。以上结果提示：D_2期前列腺癌组织中雄激素受体含量越高，治疗效果越好。雄激素受体含量的高低是预测晚期前列腺癌患者雄激素阻断治疗效果的良好指标。     

血清／尿PSA比值对血清PSA处于“灰区”中前列腺癌的诊断价值

目的探讨血清前列腺特异性抗原（sPSA）与尿前列腺特异性抗原（uPSA）比值（s／uPSA）对血清PSA处于诊断“灰区”—sPSA于4．0～10．0ng／ml（放射免疫法范围）前列腺癌的诊断价值。方法选择血清PSA（sPSA）于诊断“灰区”的共191例前列腺疾病患者，采用放射免疫方法检测其尿PSA（uPSA）水平，根据前列腺活检结果分为前列腺癌组（PCa组，n=76）和良性前列腺增生症组（BPH组，n=115），比较两组s／uPSA比值以及两组间sPSA和s／uPSA比值的受试者运算特性曲线（ROC）面积。结果BPH组与PCa组的sPSA分别为（5．20±1．09）ng／ml和（6．41±2．12）ng／ml，uPSA分别（3．57±0．97）ng／ml和（2．17±0．61）ng／ml，sPSA和uPSA在BPH组与PCa组两者间差别均无统计学意义（t=0．91，t=1．24，P〉0．05）;BPH组与PCa组的s／uPSA分别为（2．32±0．61）和（4．13±1．09），PCa组s／uPSA比值明显高于BPH组，差别具有统计学意义（t=4．17，P〈O．01）。s／uPSA比值和sPSA的ROC曲线下面积分别为0．836和0．703。在保持95％敏感性时，s／uPSA比值和sPSA的特异性分别为77．1％和39．6％。结论在血清PSA值4．0～10．0ng／ml范围内，s／uPSA比值较sPSA更好地检出前列腺癌：在保持同一敏感性时，s／uPSA较sPSA具有更高的特异性。     

尿激酶及其受体对膀胱癌细胞系侵袭转移影响的体外研究

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及其受体（uPAR）与膀胱癌侵袭转移的关系。方法：对BIU-87、T24及EJ细胞系进行体外培养，夹心抗体ELISA法测定细胞培养上清及细胞溶解产物uPA含量，对培养细胞团块行uPAR免疫组化测定，并进行体外人工基底膜侵袭检测。结果：BIU-87、T24和EJ细胞培养上清uPA检测结果分别为（11．77±3．65）ng／ml、（8．70±2．45）ng／ml、（105．9±8．60）ng／ml，EJ细胞培养上清uPA明显高于BIU87和T24细胞系（P〈0．001）。细胞溶解产物uPA结果分别为（1．15±0．40）ng／ml、（0．78±0．34）ng／ml、（1．92±0．56）ng／ml，EJ细胞溶解产物uPA含量明显高于BIU-87、T24细胞溶解产物（P〈0．02，P〈0．01）。EJ细胞uPAR蛋白主要弥散于细胞质，着色强度与数量明显多于T24细胞（P〈0．01），而BIU-87细胞基本无着色。EJ细胞具有浸润Matrigel的能力，BIU-87、T24无浸润Matrigel能力。结论：肿瘤细胞有uPA的分泌或来源并同时表达uPAR在体外即具备浸润能力，uPA系统在膀胱肿瘤的浸润转移过程中起重要作用。     

胶原-硫酸软骨素-透明质酸真皮支架材料修复兔角膜基质缺损的研究

目的探讨以角膜基质细胞与胶原-硫酸软骨素-透明质酸（Collagen-chondroitin sulfate-hyaluronic acid,Co-CS-HA）真皮支架材料复合共培养构建组织工程化角膜基质的可行性,为寻找理想的组织工程角膜支架提供依据。方法先行制备Co-CS-HA真皮支架材料,对其进行扫描电镜、孔隙率、体外降解性、力学性能和细胞增殖的检测和分析。培养兔角膜基质细胞,将其与上述材料复合共培养构建组织工程角膜基质,行兔角膜板层移植。术后大体观察植片和新生血管状况,并于术后第8周取材行组织学观察。结果所制备的Co-CS-HA真皮支架材料为白色海绵状结构,其孔径为（109±11）μm,孔隙均匀并有广泛的交通孔,孔隙率为（94.75±0.39）%。体外降解性和力学性能检测结果显示材料的强度和抵抗酶解的能力显著提高。MTS结果表明,材料对角膜基质细胞的增殖有明显促进作用。兔角膜板层移植后,组织工程角膜植片与宿主角膜组织相融性良好,能够部分修复并填充角膜基质缺损,但直到8周取材时仍留有大量的角膜新生血管。结论本实验室制备的Co-CS-HA真皮支架材料符合支架材料的理化和生物学要求,可一定程度修复兔角膜基质缺损,但在维持角膜的透光度方面仍存有缺陷,眼科应用还需进行更深入研究。     

Irrigation with phosphate-buffered saline causes corneal calcification during treatment of ocular burns

Corneal calcification is a vision-threatening manifestation of calcium containing agents in ocular burn. As we previously reported, our interest was sparked by a particular discrepancy of a case: A patient treated for a non-calcium containing agent in eye burn from exposure to an alkaline mixture of NaOH and KOH, who unexpectedly developed corneal calcification. This current study aims to elucidate whether the 2 min lasting irrigation with a phosphate-buffered saline itself, regardless of rinsing regimen, triggers corneal calcification. The Ex Vivo Eye Irritation Test (EVEIT) system was used on rabbit corneas to replicate the very same phosphate-buffered saline solution the patient was treated with. The rabbit corneas were first burned with 1 M NaOH, rinsed with 4.9% phosphate-buffered saline for 2 min, and were then moisturized with an artificial tear solution for 48 h. All corneas were fluorescein-stained for photo documentation, snap-frozen, lyophilizated, and the electrolyte content was analyzed by Energy-Dispersive X-ray spectroscopy (EDX). The EDX analysis revealed pathological phosphorous in corneal stroma after a single rinsing with phosphate-buffered saline. Ongoing application of artificial tears containing physiological 14.581 mmol Ca²⁺ /l led to macroscopically visible calcification, but only in areas of induced corneal erosion. Regardless of the rinsing protocol neither 2 or 15 min of eye rinsing with phosphate containing rinsing solutions, we have given proof that corneal calcification is a foreseeable effect of the phosphate-buffered saline rinsing of mechanically epithelial damaged and chemically burnt eyes. Thus, it is crucial to legally restrict the formulations of phosphate-buffered salines in the medical treatment of eye burns, corneal erosions or chemical splashes of the eye.     

超滤离心法降低重组人脱细胞真皮基质牛血清白蛋白残留量检测中基质效应的实验研究

目的 探讨采用超滤离心法减少重组人脱细胞真皮基质(recombination human acellular dermal matrix,rhADM)样品浸提液对ELISA方法检测牛血清白蛋白(bovine semm albumin,BSA)残留量的基质效应.方法 清洗rhADM后,制备rhADM生理盐水浸提液.取超滤离心管若干,分别加入1 mg/mL BSA溶液(预饱和方式1,记作PR1)、10μg/mL BSA溶液(预饱和方式2,记作PR2)和rhADM浸提液2 mL(记作rhADM1和rhADM2),1 500×g离心20 min,重复操作3次后取出离心管内管,放入未使用的15 mL离心管中,在PRI和PR2管中加入10μg/mL BSA溶液4 mL,rhADM管中加入rhADM浸提液4 mL,同上法离心后,收集滤液.用ELISA法测定BSA含量.计算不同预饱和方式下10μg/mL BSA溶液的BSA回收率(以未经处理的10μg/mL BSA溶液作为基础样品,分别记作R10和R20);计算滤液稀释倍数的对数与测定吸光度(A)值的相关系数,并与未经超滤离心处理的浸提液检测结果进行比较.结果 采用预饱和方式1处理后,PRI1BSA浓度为(23.80±1.58)μg/mL,R10为(9.04±0.24)μg/mL,BSA回收率为263.4%±16.9%.采用预饱和方式2处理后,PR2 BSA浓度为(8.64±0.24)μg/mL,R20为(8.12±1.01)μg/mE,BSA的回收率为106.5%±3.O%.预饱和方式2的回收率符合检测要求.不同预饱和方式下BSA回收率差异有统计学意义(P＜0.01).经超滤离心处理后,滤液稀释倍数的对数与A值之间的相关性明显提高,相关系数由-0727提高至-0.960.超滤处理后的相关系数符合检测要求.结论 超滤离心处理可以有效减少rbADM样品浸提液的基质效应对BSA残留量检测的影响;样品浸提液自身对超滤离心管的预饱和处理,可得到较为理想的BSA回收率.     

免疫性不育男性精浆白细胞介素6和可溶性细胞黏附分子1分析

目的:检测男性免疫性不育患者精浆白介素6(IL-6)和可溶性细胞粘附分子1(s ICAM-1)水平,探讨炎症细胞因子与男性免疫性不育的关系。方法:按精子膜表面抗体免疫珠试验结果将临床疑为不育症患者分为免疫性不育组(Ig A或Ig G抗体黏附的精子数≥50%)41例、其他原因不育A组(10%≤Ig A或Ig G抗体黏附的精子数50%)37例,其他原因不育B组(Ig A或Ig G抗体黏附的精子数10%)45例。按白细胞过氧化物酶染色结果将免疫性不育患者分为免疫性白细胞阳性组和免疫性白细胞阴性组;选择同期因女方因素不孕前来检查的生育力评估正常的健康男性31例作为对照组。统计分析各组炎症因子精浆表达水平及精浆主要参数的差异。精液液化时间通过肉眼观察和显微镜进行识别判读,精子浓度及活力用计算机辅助精子分析系统,精子存活率采用低渗膨胀实验(HOS),抗精子抗体采用免疫珠试验(IBT);白细胞过氧化物酶染色采用正甲苯胺法,IL-6和s ICAM-1的含量测定采用酶联免疫吸附(ELISA)法。结果:各不育组与对照组比较,精子存活率和前向运动精子百分率有统计学差异(P0.05或P0.01)。免疫性不育组、其他原因不育A组、其他原因不育B组和对照组精浆IL-6(ng/L)、s ICAM-1(ng/ml)水平分别为37.92±17.01、89.15±41.82,22.23±13.77、67.81±33.24,18.75±14.32、53.25±27.09,9.47±5.76、19.46±9.77。各不育组与对照组比较,IL-6、s ICAM-1均有非常显著性差异(P0.01),免疫性不育组与其他原因不育两组分别比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。免疫性白细胞阳性组和免疫性白细胞阴性组精浆IL-6(ng/L)、s ICAM-1(ng/ml)的水平分别为49.25±21.46、104.36±46.41和31.38±15.54、80.38±35.52,两者比较均有统计学差异(P0.05)。结论:男性精浆中IL-6和s ICAM-1升高可能与免疫性不育有关。     

补肾助阳方对植物雌激素致勃起功能下降干预的实验研究

目的:研究补肾助阳方(养精胶囊)对大鼠阴茎勃起功能的影响机制。方法:成年雄性SD大鼠56只,随机分为7组,分别为空白对照组、大豆黄酮组、十一酸睾酮组、西地那非组及养精胶囊(高/中/低)剂量组。空白对照组给予生理盐水灌胃,其余各组100 mg/(kg·d)大豆黄酮灌胃30d。随后各实验组在给予大豆黄酮灌胃的同时,养精胶囊(高/中/低)剂量组分别给予1.26、0.63、0.315 mg/k/d剂量的养精胶囊组方,十一酸睾酮组给予4mg/(kg·d)剂量的十一酸睾酮,西地那非组给予2.5 mg/(kg·d)剂量的西地那非。分别在实验第0、30、60天观察各组大鼠阿扑吗啡诱导的自发勃起反应,记录勃起次数及勃起潜伏期,测定大鼠血清睾酮、黄体生成素水平,并观察大鼠阴茎海绵体组织切片。结果:实验第30天时,所有实验组大鼠阿扑吗啡诱导的勃起次数明显下降,勃起潜伏期延长,有统计学意义(P0.05)。第60天时,大豆黄酮组(1.39±0.42 vs 2.67±0.33)和大豆黄酮及低剂量养精胶囊组(1.33±0.49 vs 2.83±0.61)大鼠阿扑吗啡诱导的勃起次数明显下降(P0.05);阿扑吗啡诱导的大鼠勃起潜伏期只有大豆黄酮组[(16.33±3.11)min vs(8.50±0.93)min]和大豆黄酮及低剂量养精胶囊组[(15.50±3.21)min vs(8.63±1.54)min]明显延长(P0.05),其余各组变化不明显。实验第30天时,所有实验组大鼠血清睾酮、黄体生成素均有显著下降(P0.05)。实验第60d时,大豆黄酮组[(5.34±0.89)ng/ml vs(1.24±0.30)ng/ml]和大豆黄酮及低剂量养精胶囊组[(5.28±1.12)ng/ml vs(2.07±0.76)ng/ml]血清睾酮变化有统计学意义(P0.05)。两组的黄体生成素由(3.62±0.37)ng/ml、(3.79±0.28)ng/ml变为(2.09±0.12)ng/ml、(2.17±0.33)ng/ml,显著下降(P0.05)。切片结果显示对照组大鼠阴茎海绵体内海绵窦数目多,血管清晰可见。大豆黄酮加睾酮组、大豆黄酮加西地那非组和大豆黄酮加中、高剂量养精胶囊组大鼠海绵体与正常对照组相比,海绵窦数目减少。大豆黄酮组和大豆黄酮加低剂量养精胶囊组大鼠海绵体内海绵窦明显减少,血管少见。结论:使用高剂量养精胶囊治疗后,大鼠阴茎勃起功能恢复,对由植物雌激素引起的勃起功能下降有良好疗效。     

外源性bFGF对兔下颌骨牵张成骨的影响

目的：研究局部应用外源性碱性成纤维细胞生长因子对兔下颌骨牵张成骨的影响。方法：成年白兔30只,随机分Ⅰ、Ⅱ两组（n=15）,用自制的牵张器延长右侧下颌骨3 mm。牵张部位Ⅰ组给外源性bFGF（0.5ml/天×7天,420U/ml）作为实验组,Ⅱ组给等量生理盐水作对照组,牵张结束后不同时期行X线、定量CT、组织学检查。结果：所有动物右侧下颌骨被成功延长,组织学示：Ⅰ组动物新骨生成的速度和数量优于Ⅱ组;定量CT示：固定早期（2周、4周）Ⅰ组骨密度值明显高于Ⅱ组（P＆lt;0.05）。结论：外源性bFGF早期有促进兔下颌牵张成骨的作用。     

单核巨噬细胞集落刺激因子对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：研究单核巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GMCSF）对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,探讨其促进创面愈合的机制并为临床准确定量应用该因子促进创面愈合提供理论依据。方法：分别应用浓度为0、25、50、75、100、150ng/mlGMCSF培养液孵育离体培养的人皮肤成纤维细胞,作用24h后四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞的活性。选择最适浓度GMCSF干预细胞,用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期变化;应用ELISA检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况。结果：GMCSF在浓度为25～100ng/ml之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以50/ml最为显著;成纤维细胞在最适浓度GMCSF干预24h后,细胞大多处于DNA合成前期和合成期;与空白组比较,GMCSF组Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌明显增加（P〈0.01）,且Ⅰ、Ⅲ型胶原比值下降（P〈0.01）。结论：GMCSF在浓度为25～100ng/ml对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,且能刺激成纤维细胞合成大量Ⅰ、Ⅲ型胶原,这可能是其加速创面愈合的机制之一。     

黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其机制探讨

目的：探讨黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及甚可能机制。方法：将体外培养的人肾小管上皮（HK-2）细胞株转板至细胞融合并同步后,分为空白对照组、转化生长因子-β（TGF-β1）刺激组（5ng／ml）、TGF-β1加黄芪100μg／ml组、TGF-β1加黄芪1mg／ml组。作用24h后半定量逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测纤维连接蛋白（FN）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）mRNA;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测上清液中FN的含量;westernblot检测PAI-1的表达。结果：（1）HK-2细胞表达少量FN和PAI-1;（2）HK-2细胞在5ng／ml TGF-β1．刺激下分泌FN、PAI—1mRNA及FN、PAI-1蛋白表达明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;（3）HK-2细胞在TGF-β1和不同浓度的黄芪作用后,可使FN、PAI-1mRNA及蛋白表达减少,与TGF-β1组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,尤以黄芪1mg／mi组为甚。结论：TGF—β1可促进HK-2细胞分泌FN和PAI—1,黄芪可部分拮抗TGF-β1的上述效应。这可能是黄芪预防或改善肾小管间质病变的作用机制之一。     

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.