庚型肝炎病毒NS3蛋白大肠杆菌中的表达

目的 获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３抗原。方法 从重组质粒Ｉｗｑ２利用反应扩增出ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ３基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ诱导重组工程菌,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对重组蛋白进行鉴定。结果 酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧ     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

庚型肝炎病毒（ＧＢＶＣＨＧＶ）是近年发现的疑似致人类肝炎的新型单股正链ＲＮＡ病毒,发病呈全球性分布,在人群中有一定的感染率。目前诊断主要以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）为主,有必要研制特异的抗ＧＢＶＣＨＧＶ抗体诊断试剂。杆状病毒的多角体蛋白基因编码表达的蛋白,占感染细胞蛋白总量的比例较高,可使外源基因得到高效表达。由于昆虫细胞能够识别并正确进行诸如信号肽切除、磷酸化、糖基化等蛋白质表达后加工修饰,使得表达的蛋白接近天然蛋白,具有很高的生物活性。ＢａｃｔｏＢａｃ表达系统表达含有６…     

庚型肝炎病毒NS5区部分基因的表达及其在EIA中的 …

目的 在大肠杆蓖中表达ＨＧＶ ＮＳ５抗原,以建立ＨＧＶ抗体血清学检测方法。方法 利用扫转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法从人血浆中分离庚型肝炎病毒ＮＳ５部分基因,克隆到ｐＲＳＥＴ Ａ载体,经酶切初步鉴定后进行ＤＮＡ序列分析,结果表明克隆序列正确。以ｐＰＲＯＥＸ－１为表达载体,转化ＤＫ５α,诱导表达后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量（Ｍ     

庚型肝炎病毒NS5区部分基因的表达及其在EIA中的初步应用

目的　在大肠杆菌中表达HGVNS5抗原 ,以建立HGV抗体血清学检测方法。方法　利用反转录PCR(RT PCR)法从人血浆中分离庚型肝炎病毒NS5部分基因 ,克隆到pRSETA载体 ,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析 ,结果表明克隆序列正确。以pPROEX 1为表达载体 ,转化DH5α ,诱导表达后进行SDS PAGE和Westernblot分析。结果　克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量 (Mr)约 2 0× 10 3 的可溶性蛋白 ,其氨基端含有 6个组胺酸肽段 ,可经Ni NTA亲和层析纯化。免疫印迹分析表明 ,该表达产物可与HGV感染患者体内的HGV抗体特异性结合。结论　克隆了HGVNS5部分基因并获得初步表达 ,表达的HGVNS5蛋白具有特异抗体结合活性 ,为建立检测HGVNS5抗体的血清学方法奠定了基础     

鼠抗丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

鼠抗丙型肝炎病毒ＮＳ３蛋白单克隆抗体的制备及鉴定潘秀珍唐家琪李越希李先富（南京军区军事医学研究所，南京２１０００２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是严重危害人民身体健康的病原。感染ＨＣＶ的病人血液中，很难直接检测到病毒抗原，只能通过检测病人血液中特异性抗体来...     

庚型肝炎病毒NS5区基因序列测定和分析

目的为了研究哈尔滨市庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构（ＮＳ５）区基因结构特征。方法对阳性标本进行了庚型肝炎病毒ＮＳ５区１８６核苷酸的基因扩增、分子克隆和序列分析，并利用基因分析软件处理结果。结果分离出的２株ＨＧＶＮＳ５区基因序列之间同源性为９５２％，而与国外报道的３株ＨＧＶ序列比较同源性在８４４％～９２４％，变异较大。结论提示ＨＧＶ有不同的基因型，这有待于对各区基因序列进行全面检测，综合判断之后才能确定。分离出的阳性株为从１９８４年肝炎患者血中分离，肯定了我市在８０年代就有庚型肝炎病毒感染存在     

庚型肝炎病毒NS5区优势抗原表位的表达及其抗原性的初步评价

目的 表达庚型肝炎病毒（HGV）基因且NS5区部分基因重组抗原，分析其抗原性。方法 分别亚克隆了HGV NS5a、NS5b以及NS5b与C区嵌和的基因至pThoiC表达载体上，构建成3个重组表达质粒，分别大肠埃希菌JM109（DE3），用IPTG诱导表达重组蛋白。表达产物经纯化后采用Western blot和间接ELISA方法分析3个重组蛋白的抗原性。结果 经酶切和序列分析鉴定正确，3种表达蛋白均高效表达且相对分子质量与预期大小相符。Western blot分析和间接ELISA试验表明，3种表达蛋白均能与抗－HGV阳性血清发生特异性反应。将应用重组蛋白检测的抗－HGV抗体与混合重组抗原（包括C区合成肽、NS5a合成肽、NS3区基因重组抗原）的检测结果进行了比较，在混合重组抗原阳性的22份血清中，P5a检出率为68％（15／22），P5b检出率为91％（20／22），Pc-5b检出率为73％（16／22）。在70份阴性标本中，3种抗原的检出率分别为P5a:7%(5/70);P5b:1%(1/70);Pc-5b:6%(4/70)。3个重组抗原单独检出阳性的标本，其中有一部分经RT－PCR检测亦为阳性。结论 原核表达的NS5区蛋白所检测的抗－HGV抗体不能完全被其他区段的抗原所覆盖，是免疫诊断HGV感染所必需的抗原表位之一。     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

中国大陆庚型肝炎病毒NS区部分基因序列分析及变异 …

目的 研究中国庚型肝炎患者分离的病毒基因的特异性及变异规律。方法 应用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从１６例庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染住院病人血清中扩增了ＨＧＶＮＳ５区部分基因片段。经纯化后采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。     

肝细胞癌中丙型肝炎病毒NS3抗原和HBsAg的表达

肝细胞癌中丙型肝炎病毒ＮＳ３抗原和ＨＢｓＡｇ的表达汪荣泉周子成杨建民房殿春作者单位：６３００３８重庆第三军医大学西南医院消化科１９９６年９月１８日收稿１９９７年６月１７日修回原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）是我国目前最常见的恶性肿瘤之一，血清学和分子流行病学...     

简并引物在扩增GBV-C/HGV NS3高度变异区的应用

目的试图比较简并引物扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ３变异较大的区域的作用。方法设计了简并引物和减温（ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ）ＰＣＲ扩增程序以对目的基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行克隆及测序。结果该方法能够检测基因变异约达２１％的区域。结论提示该法是一项有效的了解基因家系的技术。     

庚型肝炎病毒（HGV／GBV—C）NS3区基因序列的多变性

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病人血清中检测庚型肝炎病毒。采用５６个循环周期的减温ＰＣＲ方法对ＮＳ３区基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行了克隆、测序。在ＮＳ３区，ＨＧＶ与样品之间核苷酸的同源性在８２．０％～９１．４％之间；而ＧＢＶ－Ｃ与样品之间的同源性为７８．４％～８４．２％之间。ＮＳ３区变异较大，这种变异可能与ＨＣＶ的基因变异的趋势相类似。     

丙型肝炎病毒基因组部分E2／NS1蛋白基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组的部分Ｅ２／ＮＳ１蛋白（氨基酸３６４－５１２）。表达蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，主要表达带的分子量在～４３０００左右。表达蛋白用于检测已用Ｃ３３ｃ及Ｑ２２检测过的血清，发现Ｅ２ＮＳ１引抗体阳性率占Ｃ３３ｃ及Ｑ２２抗体阳性血清的２０％，尚没有发现单独Ｅ２／ＮＳ１抗体阳性的血清。     

丙型肝炎病毒非结构区NS3基因在大肠埃希菌中的可诱导性表达

目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）NS3基因的原核细胞表达载体。实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法 应用聚合酶链反应（PCR）技术，以美国HCV-H株全长cDNA质粒为模板，扩增获得NS3基因片段，克隆到原核表达载体pET-30C( )中，构建原核表达载体pET-NS3，转化BL21（DE3）宿主菌，以IPTG诱导，获得NS3蛋白的可诱导性表达，以HCVNS3的单链可变区抗体（ScFv)证实表达的NS3蛋白的特异性，结果 以HCVNS3基因序列特异性引物，PCR扩增获得1893bp的NS3DNA征段，插入pET-30C( )表达载体，转化BL21（DE3）受体菌，经培养，IPTG诱导，获得了重组HCVNS3蛋白的表达，以HCVNS3的ScFv证实了表达的重组蛋白HCVNS3的特异性。结论 以大肠埃希菌表达了HCVNS3的重组蛋白质。     

Humoral immune response to recombinant viral NS3 protein in patients with hepatitis C

Full-length recombinant NS3 protein was used in a test system for detection of specific antibodies in the sera from patients with hepatitis C. Possible antigenic determinants in NS structure were predicted. It was demonstrated that serological analysis requires enzyme immunoassay with full-length NS3.__________This revised version was published online in July 2005 with the addition of the issue titleTranslated from Byulleten’ Eksperimental’noi Biologii i Meditsiny, Vol. 139, No. 1, pp. 89–93, January, 2005     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测     

Hepatitis C virus NS3/4A protease blocks IL-28 production

Type I interferons (IFNs), including IFN-α, -β, and -ω, play a critical role in innate immune responses against viral infection. IFN-λ, including IL-29, IL-28A, and IL-28B, recently identified as a new subfamily of IFN named type III IFN, has also been demonstrated to suppress virus replication in vitro and in vivo. However, the molecular mechanisms that regulate the induction of type III IFNs during viral infection remain elusive. Here, we demonstrate that IL-28 (IFN-λ 2/3) IFN production, similar to type I IFN, represents a primary and direct host response to HCV genomic RNA transfection. IL-28 (IFN-λ2/3) induction by HCV genomic RNA was dependent upon the activation of NF-κB and IRF3. We identified a minimal IL-28 promoter region consisting of putative NF-κB and IRF3-binding sites. Furthermore, we showed that HCV infection can inhibit HCV genomic RNA-induced IL-28 expression, and that the viral NS3/4A protease activity was responsible for this inhibitory effect. Our results present important evidence for the control of type III IFN response by HCV, and shed more light on the molecular mechanisms underlying the persistence of HCV infection.     

丙肝病毒NS5A蛋白对NS5B的RdRP活性影响的研究

丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 -复性方法 ,纯化大肠杆菌表达的重组组氨酸 NS5 A融合蛋白。 GST结合洗脱实验 (GST pull- down assay)研究 NS5 A和 NS5 B是否结合。以不同的摩尔浓度比 ,将纯化的 NS5 B和 NS5 A蛋白混合 ,检测 NS5 A对 NS5 B的 Rd RP活性的影响。获得高得率的纯化 His- NS5 A蛋白。重组 NS5 A蛋白可在体外与NS5 B结合并抑制后者的 Rd RP活性。本研究报道了纯化重组 His- NS5 A蛋白的变性 -复性方法 ,结果显示纯化的重组 NS5 A在体外可与 NS5 B相互结合 ,并明显抑制 NS5 B Rd RP活性。提示了 HCV NS5 A在病毒复制中的可能作用。