Foxp3+Tregs 在慢性间歇低氧所致肝损伤中的作用

摘要:目的 探讨叉头样转录因子 P3（Foxp3）阳性调节性 T 细胞（Tregs）在慢性间歇低氧诱导的肝损伤中的作用。方法 32 只雄性 Wistar 大鼠随机均分为空白对照组（A 组）、 高脂饮食组（B 组）、 间歇低氧组（C 组）和高脂饮食+间歇低氧组 （D 组）。实验暴露 4 周后留取血标本并分离出肝组织, 采用全自动分析仪检测各组大鼠血总胆固醇（TC）、 低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、 丙氨酸转氨酶（ALT）、 天冬氨酸转氨酶（AST）的水平, 比色法测定肝组织丙二醛 （MDA） 含量, 放射免疫法检测促炎症细胞因子肿瘤坏死因子 （TNF） -α和白细胞介素 （IL） -1β水平, Western blot 法检测肝组织 Foxp3 蛋白表达。结果 各组 TC、 LDL-C 比较均是 B 组高于 A、 C、 D 组, D 组高于 A、 C 组 （均 P＜0.05）,而 A 组与 C 组差异无统计学意义。ALT、 AST、 MDA、 TNF-α、 IL-1β水平比较均是 C 组高于 A 组, D 组高于 A、 B、 C 组（均 P＜0.05）, 而 A 组与 B 组、 B 组与 C 组间差异均无统计学意义。D 组肝组织 Foxp3 蛋白表达水平明显低于其他各组 （P＜0.05）。结论 Foxp3+Tregs 参与在高脂饮食基础上慢性间歇低氧所致的肝损伤的调节, 在此过程中可能起重要的保护性免疫作用。     

慢性间歇低氧对小鼠巨噬细胞补体C3表达及细胞坏死的影响

目的 探讨慢性间歇低氧(CIH)对小鼠巨噬细胞补体C3表达及细胞坏死的影响.方法 采用小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞,以计算机控制低氧培养箱内氧浓度在5.0％和21.0％之间循环以建立CIH模型,并根据是否建立CIH模型分为低氧组和常氧组.在实验48、60、72 h时以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检...     

慢性间歇低氧诱发大鼠高血压模型的建立

目的:观察间歇低氧对大鼠尾动脉收缩压的影响及胸主动脉、肾小动脉病理变化。方法:16只SD雄性大鼠随机分为间歇低氧组(IH)和空白对照组(UC),每组8只,IH大鼠置于间歇低氧舱中,7 h·d~(-1),给予循环充入氮气和空气,每次循环为8 min,间歇缺氧舱内氧浓度波动于8．5%～21%,UC大鼠不予任何特殊处理。分别于实验前及实验d7,14,21．28测量大鼠尾动脉收缩压。d28处死大鼠,取标本观察胸主动脉与肾小动脉病理改变。结果:IH大鼠尾动脉收缩压逐渐升高,从第2周开始显著升高,第2,3,4周时其收缩压分别升高了13．75mmHg (P＜0．01)．22．25mmHg(P＜0．01)和29．87 mmHg(P＜0．01)。实验后两组大鼠之间比较,第1周收缩压无显著差异,第2周后IH大鼠较UC大鼠收缩压明显升高(P＜0．05或P＜0．01)。d28两组大鼠胸主动脉未见明显病理改变,但IH大鼠肾小动脉血管壁在d 28时较UC大鼠明显增厚,并有部分出现肾小动脉硬化。结论:慢性间歇低氧可导致大鼠持续性血压升高,提示阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)引起的长期夜间反复低氧是OSAHS患者高血压发生的重要原因,此模型的建立为OSAHS致高血压机制的深入研究提供了可行手段。     

间歇低氧对大鼠肝脏氧化应激损伤的研究

目的通过建立大鼠模型并测定间歇低氧及持续低氧大鼠肝脏中过氧化产物丙二醛（MDA）水平,探讨睡眠呼吸暂停模式间歇低氧对大鼠肝脏氧化应激损伤的机制。方法雄性Wistar大鼠96只,随机分为3组：间歇低氧组（IH）,持续低氧组（CH）和常氧对照组（SC）。分别于暴露第2、4、6、8周随机抽取8只大鼠麻醉处死,留取肝脏组织,应用化学比色方法检测大鼠肝脏MDA水平。结果大鼠肝脏MDA含量IH组明显高于CH组和sc组（均P〈0．01）,IH及CH组MDA水平随暴露时间延长逐渐增加。结论睡眠呼吸暂停模式间歇低氧能引起大鼠肝脏发生氧化应激反应而导致肝损伤,其损伤程度比持续低氧更为严重,且随时间延长而增加。     

白藜芦醇对间歇低氧大鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察白藜芦醇对间歇低氧大鼠胰岛素抵抗的影响,探讨其可能的作用机制。方法 8周龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,对照组(A组)、间歇低氧组(B组)、白藜芦醇低剂量组[C组,6 mg/(kg·d)]、白藜芦醇中剂量组[D组,30 mg/(kg·d)]、白藜芦醇高剂量组[E组,60 mg/(kg·d)]。C组、D组、E组大鼠间歇低氧4周,同时按不同剂量白藜芦醇灌胃。实验结束后,测大鼠空腹胰岛素和血糖水平,取肝脏,采用RT-PCR和Western blot法测定肝脏SIRT1。结果白藜芦醇干预后间歇低氧大鼠的胰岛素抵抗降低,呈剂量依赖性,伴随SIRT1的表达增高,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇能减轻间歇低氧大鼠的胰岛素抵抗,呈剂量依赖性,其可能是通过提高SIRT1的表达起作用。     

慢性间断性低氧对发育期幼鼠认知功能的影响及机制研究

目的 探讨慢性间断性低氧对发育期幼鼠认知功能的影响及其可能机制.方法 21日龄SD雄性幼鼠20只,随机均分为对照组、慢性间断性低氧(CIH)组.CIH组幼鼠在自制缺氧舱内每天缺氧8h,连续缺氧6周.利用Morris水迷宫检测幼鼠认知功能的变化;利用HE染色在光镜下观察海马神经元组织学结构变化.结果 与对照组比较,CIH组幼鼠出现认知功能障碍(P＜0.05);对照组海马神经元形态正常,CIH组海马神经元出现变性坏死.结论 CIH致发育期幼鼠认知功能障碍,其机制可能与海马神经元病理损伤有关.     

间歇低氧的大鼠模型体内的氧化应激、炎症反应导致代谢紊乱发生的机制

目的探讨慢性间歇低氧大鼠体内的氧化应激、炎症反应导致代谢紊乱发生的机制。方法建立慢性间歇低氧的大鼠模型,模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apneahypopnea syndrome,OSAHS）睡眠中发生的慢性低氧、再氧合病理生理过程。将50只雄性SD大鼠,分为慢性间歇低氧组（40只）和空白对照组（10只）。将慢性间歇低氧组的大鼠放入自制的间歇低氧动物舱内,提供间歇低氧（最低吸入氧浓度6%～7%,最高吸入氧浓度20%～21%,各维持时间5～7 s）;将空白对照组大鼠置于相同规格的间歇低氧动物舱内,给予空气脉冲供气。间歇低氧刺激总时间：8 h/d（9AM～5PM）,持续12周。实验结束后,酶联免疫吸附测定法（ELISA法）测定大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和hs-CRP水平;并检测代谢紊乱相关指标如空腹血糖、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHOL）、大鼠尾动脉血压,每一个指标作为一个危险因素,没有危险因素的为正常组,仅有1个危险因素的为低危组,有2个危险因素的为高危组,有3个危险因素的为代谢综合征组（MS组）。结果根据危险因素,将慢性间歇低氧组的大鼠分为正常组,低危组,高危组,代谢综合征组。随着间歇缺氧的时间延长,发生代谢紊乱的危险因素逐渐增加,超氧化物歧化酶（SOD）活性降低,丙二醛（MDA）、hs-CRP的水平逐渐增高,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论间歇缺氧模型大鼠体内氧化应激存在,导致慢性低度炎症反应,可能是导致阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者发生代谢紊乱的重要机制。     

间歇低氧-肺气肿大鼠的炎症及免疫反应特点研究

摘要:目的 建立间歇低氧(IH)-肺气肿大鼠模型, 探讨其引起炎症和免疫反应的特点。方法 60 只 Wistar 大鼠随机分成对照组、 肺气肿组、 IH 组和重叠组(肺气肿合并 IH 组)。每组 15 只。造模成功后使用流式细胞仪测定各组外周血中性粒细胞 （PMN）、 CD3+ CD8+ T 细胞、 CD3+ CD4+ T 细胞凋亡率水平。酶联免疫吸附试验 （ELISA） 法测定血浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α、 白细胞介素 （IL） -6 水平。取大鼠肺泡灌洗液(BALF), 在光镜下计算巨噬细胞、 外周血 PMN 和淋巴细胞比例。采集肺、 肝脏、 胰腺组织和右颈动脉并进行病理评分。结果 重叠组中 PMN、 CD3+ CD8+ T 细胞凋亡率与其他 3 组相比较低, CD3+ CD4+ T 细胞凋亡率、 TNF-α、 IL-6 表达水平最高 （均 P < 0.05）。BALF 中, 肺气肿组巨噬细胞和 PMN 百分比高于其余 3 组 （均 P < 0.05）。重叠组中肺、 肝脏、 胰腺、 右颈动脉内中膜厚度的病理评分高于其他 3组 （均 P < 0.05）。结论 肺气肿合并IH 可产生更严重的系统性多器官炎症和免疫反应。     

间歇低氧小鼠血清氧化应激指标的变化及N-乙酰半胱氨酸的治疗作用

目的观察间歇低氧(I H)小鼠血清氧化应激指标的变化情况,并探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)的治疗作用。方法随机将50只小鼠分为对照组(A组,20只),IH组(B组,30只),分别造模3d、1周、2周、3周、4周;另设IH4周+NAC组(C组,6只)。检测各组小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)表达水平。结果与A组同期比较,B组MDA表达均升高(P<0.05);造模1周后,SOD、GSH-PX表达均降低(P<0.05)。随低氧时间的延长,B组MDA逐渐升高,SOD、GSH-PX逐渐降低(P<0.05)。与B组比较,C组MDA降低,SOD、GSH-PX升高(P<0.05)。结论 IH可导致机体氧化应激水平增加,而NAC治疗能够改善IH导致的氧化应激反应。     

慢性间歇性低压低氧对成年和幼年大鼠缺血/再灌注心脏保护作用的比较

目的观察慢性间歇性低压低氧(CIHH)对成年和幼年大鼠心脏缺血/再灌注损伤的保护作用的异同点。方法♂成年和新生Sprague-Dawlay(SD)大鼠随机分为4组:对照28d组(CON28)、对照42d组(CON42)、CIHH处理28d组(CIHH28)和CIHH处理42d组(CIHH42)。间歇性低氧处理组动物于低压氧舱分别接受28d、42d模拟3000米海拔高度(PB=525mmHg,PO2=108.8mmHg)的低压低氧处理,每天5h。对照组动物除了不接受低氧处理外,其它处理均与间歇性低氧组动物相同。应用Langendorff离体心脏灌流技术,给予心脏缺血(停灌30min)/再灌注(复灌60min)处理,记录离体大鼠心脏在不同时期的心功能变化。心功能参数包括左室发展压(left ventricular developing pressure,LVDP)、左室压力最大变化速率(maximum changerate of LVDP,±LVdp/dtmax)、左室舒张末压(left ventricularend di-astolic pressure,LVEDP)、冠脉流量(coronary flow,CF)和心率(heartrate,HR)。结果①对成年大鼠,基础状态和缺血/再灌注状态下CIHH28d组各心功能参数与CON28d组相比差异均无统计学意义。CIHH42d组各心功能参数均好于CON42d组,表现为LVDP、LVEDP、±LVdp/dtmax和CF恢复均增加(P<0.05)。②对幼年大鼠,基础状态下,CIHH大鼠CF较对照大鼠明显增多,其余心功能参数与对照大鼠无差异。CIHH大鼠缺血/再灌注后心脏功能的恢复明显好于对照动物,表现为LVDP、LVEDP、±LVdp/dtmax和CF恢复均增加(P<0.05),且CIHH42d组比CIHH28d组心功能改善更明显。结论CIHH可增强成年和幼年大鼠抗心肌缺血/再灌注损伤的能力,具有明显的心脏保护作用,CIHH42d组保护作用更为明显;CIHH的心脏保护作用有明显的年龄差异,在幼年大鼠更易产生保护作用。     

Effect of chronic intermittent hypobaric hypoxia on heart rate variability in conscious rats

To examine the effect of chronic intermittent hypobaric hypoxia (CIHH) on heart rate variability (HRV), male adult Sprague Dawley rats were exposed to hypoxia (oxygen 11.1%) in a hypobaric chamber for 42 days, 6 hours each day, simulating an altitude of 5000 m. The body weight and blood pressure of rats were recorded once a week, electrocardiograms were analyzed continuously using biotelemetry, before, during and after CIHH treatment each day, and HRV was evaluated using spectrum analysis. No significant difference of body weight and blood pressure was found between CIHH and control rats. After 4 weeks of CIHH treatment, total power (TP) and very low-frequency component (VLF) were lower in CIHH rats than in control rats under hypobaric hypoxia condition. During CIHH treatment, low frequency (LF) was higher in 1 week and lower in 5–6 weeks in CIHH rats than control rats under hypobaric hypoxia, but not normoxic conditions. The high-frequency component (HF) was not changed during CIHH treatment, so LF/HF increased initially, and then recovered under the hypobaric hypoxia condition following 3 weeks of CIHH treatment. In addition, the HR was increased in CIHH rats after 4 weeks of CIHH treatment compared with control rats. Furthermore, HRV was altered significantly in control rats, but not in CIHH rats exposed to acute normobaric hypoxia. These data suggest that CIHH treatment modulates cardiac autonomic activity adaptively and inhibits the acute normobaric hypoxia-induced changes in HRV.     

慢性间断性低氧对大鼠肝脏细胞色素P450的影响

目的观察慢性间断性低氧对大鼠肝脏P450同工酶的影响。方法♂SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组分别低氧3、7、14、28d。采用酶法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,分光光度法测定大鼠肝微粒体红霉素N-脱甲基酶(ERD)、苯胺羟化酶(ANH)活性,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝脏细胞色素P4503A2、2E1的mRNA表达水平。结果慢性间断性低氧对血清ALT和AST活性无明显影响;低氧7d后,大鼠肝脏ERD和ANH活性明显升高,28d时诱导率分别为155·5%和42·2%;同时CYP3A2和CYP2E1mR-NA的表达水平,也分别增加了220·5%和102·8%。结论慢性间断性低氧能明显增加大鼠肝脏ERD(CYP3A2)和ANH(CYP2E1)活性,其机制可能与其在转录水平上提高肝脏CYP3A2和CYP2E1的基因表达水平有关。     

慢性间歇性低压低氧对发育大鼠主动脉舒张的影响

目的探讨慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对发育大鼠胸主动脉舒张功能的影响及作用机制。方法新生♂Sprague-Dawlay大鼠,随机分为8组:CIHH处理(CIHH)、CIHH后1周(CIHH-p1)、CIHH后2周(CIHH-p2)、CIHH后3周(CIHH-p3)、对照(Con)、1周对照(Con-1)、2周对照(Con-2)与3周对照(Con-3)。CIHH大鼠给予42 d、每天5 h、模拟海拔3 km的低压低氧处理。制备胸主动脉环,描记舒张活动。结果CIHH明显增强动脉环内皮依赖性舒张(P<0.05),此效应至少可维持3周时间(P<0.05);CIHH明显减弱急性低氧对动脉环舒张的抑制(P<0.05);CIHH对胸主动脉环舒张的增强效应及抗低氧作用可被前列环素抑制剂吲哚美辛、K ATP通道阻断剂格列本脲和氧自由基清除剂Tempo所阻断。结论CIHH处理增强发育大鼠主动脉内皮依赖性舒张,并对抗急性低氧对舒张的抑制,此作用与K ATP通道开放、前列环素和氧自由基作用有关。     

心肌热休克蛋白在发育大鼠慢性间歇性低压低氧中的心脏保护作用

目的探讨慢性间歇性低压低氧(CIHH)对发育大鼠心脏的保护作用及其热休克蛋白所起的作用。方法新生♂SD大鼠20只,随机分为两组:CIHH处理组(CIHH)和对照组(CON)。CIHH动物(连同母鼠)接受56 d相当于海拔3 000 m的低压低氧处理(5 h/d)。应用导管法描记左心室功能及血液动力学,包括左室峰压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压力最大变化速率(±LVdp/dtmax)、动脉收缩压(SAP)和心率(HR),并观察急性低氧/复氧对其影响。应用半定量RT-PCR技术检测各组动物心肌热休克蛋白27(HSP27)、热休克蛋白70(HSP70)和热休克蛋白90(HSP90)mRNA的表达。结果①基础状态下,CON组动物与CIHH组动物之间左心室功能和血液动力学无差异(P>0.05);急性低氧/复氧导致发育大鼠LVSP、±LVdp/dtmax、SAP降低,HR减慢(P<0.05),但CIHH大鼠各参数变化明显小于CON动物(P<0.05)。②基础状态下,CIHH动物心肌HSP70 mRNA表达明显高于CON动物(P<0.05);急性低氧/复氧状态下,CIHH动物心肌HSP27和HSP70 mRNA表达高于CON动物(P<0.05)。结论 CIHH可通过促进心肌热休克蛋白27和热休克蛋白70表达,增强发育大鼠心肌抗急性低氧/复氧损伤能力。     

慢性间歇性低氧动物模型的比较

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)导致的慢性间歇性低氧(CIH)是引起或加重多种心脑血管病的重要病理因素。建立CIH动物模型,通过控制动物呼吸的环境气体氧浓度的方法模拟间歇性低氧条件,是研究CIH相关心血管疾病发病机制的重要方法之一。该文从实验动物、气体控制仪器、气体种类及浓度、间歇性低氧处理时间、缺氧循环模式等方面总结及对比了近年来CIH动物模型的造模方法,以求为OSAHS相关心血管疾病的动物实验研究提供参考。