苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/Vin的细胞生物学影响

目的:探讨中药苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/Vin的细胞生物学作用及其抗肿瘤作用机制。方法:MTT法检测苦参碱对两细胞的半数抑制浓度(IC₅₀值)及其逆转K562/Vin细胞对长春新碱的耐药作用,并绘制细胞生长曲线变化。免疫组化方法测定细胞表面P-糖蛋白表达。光镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察细胞结构变化。RT-PCR检测端粒酶基因hTERT-mRNA表达。结果:苦参碱对K562、K562/Vin细胞的IC₅₀值分别为3.4、4.6mmol·L ^-1。4.0mmol·L ^-1苦参碱可抑制两细胞的生长;2.0mmol·L ^-1苦参碱可降低K562/Vin细胞表面P-糖蛋白表达,增强长春新碱对K562/Vin的细胞毒性,其逆转耐药倍数为492.4倍。苦参碱作用后K562、K562/Vin细胞在光镜、电镜下均可见凋亡的形态学变化。苦参碱作用后K562细胞hTERT-mRNA表达受抑,并与药物作用浓度相关。结论:苦参碱可增强长春新碱对K562/Vin细胞的毒性,并诱导K562、K562/Vin细胞凋亡,同时可抑制K562细胞hTERT-mRNA表达,提示苦参碱可为一有效抗肿瘤药物。     

吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系侵袭力的影响

目的: 通过体外实验的方法探讨非甾体类抗炎药吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系侵袭能力的影响。方法:Hep-2细胞经吲哚美辛作用后,撤药培养,绘制生长曲线,并用软琼脂集落形成实验检测肿瘤细胞非锚着生长能力,琼脂糖滴法检测肿瘤细胞移动能力,单层细胞侵袭实验计算肿瘤侵袭指数。结果:吲哚美辛作用后的Hep-2细胞软琼脂集落形成数目减少,细胞移动能力下降,单层细胞侵袭指数降低。结论:吲哚美辛能抑制人喉癌Hep-2细胞系的侵袭性。     

人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞衰老

 摘要:目的 探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导白血病K562细胞衰老及其机制。方法 MTT比色法筛选细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,并以此浓度和作用时间进行细胞衰老的相关机理研究。流式细胞术检测细胞增殖周期; SA-β-Gal染色检测阳性细胞;Colony-Assay检测集落形成能力;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测蛋白表达;透射电镜观察细胞超微形态。结果Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使K562细胞阻滞于G2/M期;并显著提高SA-β-Gal染色阳性细胞百分率（P＜0.05）;降低细胞形成集落的能力;衰老相关蛋白P53、P21、P16、RB表达上调（P＜0.05）;端粒长度缩短（P＜0.05）;胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大,异染色质凝集等衰老形态学变化。结论 Rg1可能经由P53-P21-Rb、P16-Rb信号通路诱导K562细胞衰老。     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2、PCNA蛋白表达的影响

目的：观察苦瓜蛋白是否具有诱导K562细胞凋亡的生物学活性，探讨苦瓜蛋白对K562细胞Bcl-2及PCNA表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞12～72小时，CCK-8检测其对细胞生长的影响；流式细胞术（AnnexinV）、细胞形态学（光镜及电镜）等方法检测细胞凋亡；同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用；流式细胞术及形态学观察（光镜及电镜）证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡，且随着作用时间的延长细胞凋亡率逐渐升高。苦瓜蛋白处理组K562细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达分别为0．33％和98．36％，对照组分别为74．03％和97．63％。结论：苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显抑制作用，其作用主要通过诱导K562细胞产生细胞凋亡．而不是抑制细胞增殖。苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡过程中，Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制研究

目的 初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制.方法 甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响;CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测低浓度丰加霉素作用下的K562细胞凋亡率;PI 单染流式细胞仪检测药物作用后细胞的周期分布改变;Western免疫印迹和实时定量PCR检测周期相关分子表达水平变化.结果 低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞具有较强的集落形成抑制作用;可明显抑制K562细胞的生长,呈时间-剂量依赖性;尽管短时间(48 h)的药物处理仅出现轻度的细胞凋亡和周期阻滞,但10 nmol/L和30 nmol/L的丰加霉素长时间(7 d)作用后,K562细胞G0/G1期比例分别是(62.3±1.7)%和(76.9±0.7)%,与对照组(38.9±1.1)%相比差异具有高度统计学意义(P＜0.01);低浓度丰加霉素长时间作用后诱导K562细胞周期相关分子P16蛋白水平和转录水平的高表达.结论 丰加霉素在低浓度,长时间作用于人白血病K562细胞后,具有较强的集落形成抑制和生长抑制作用,此作用可能与诱导细胞周期相关分子p16高表达,导致细胞G0/G1期阻滞有关.     

氨基甾体H42649对K562白血病细胞的抑制增殖和诱导分化作用

目的观察氨基甾体H42649对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用。方法采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察10-8～10-4mol/L浓度的H42649对K562细胞增殖能力的影响;采用Wright-Giemsa染色,联苯胺染色和流式细胞术评价10-6mol/L浓度的H42649对K562细胞的诱导分化作用。结果不同浓度的H42649连续作用K562细胞1～5 d后,细胞计数和集落计数明显减少;第5 d处理组的MTT值显著低于对照组,并呈剂量依赖关系;10-6mol/L浓度的H42649对K562细胞作用5d后,联苯胺染色A值升高(P<0.01),形态学观察其趋向成熟分化,流式细胞术检测药物处理4 d后K562细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为84%。结论氨基甾体H42649能显著抑制K562细胞的增殖并诱导其向红系分化,提示该药可作为一种新型慢粒白血病细胞的诱导分化剂。     

灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)诱导K562细胞发生细胞核介导的细胞凋亡的研究

目的:探讨重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)诱导K562细胞发生细胞凋亡相关机制的研究。方法:采用MTT法检测rLZ-8对K562细胞的体外杀伤作用;通过Annexin V/PI双染检测细胞凋亡率;应用钙离子荧光探针Fluo-3/AM染色,检测了rLZ-8作用K562细胞后细胞内钙离子浓度变化,分光光度法测定细胞caspase-3活性,还利用激光扫描共聚焦显微镜确定了rLZ-8在K562细胞内的亚细胞定位。结果:rLZ-8可明显杀伤K562细胞,并诱导其发生细胞凋亡;rLZ-8可提高K562细胞内的caspase-3活性,进一步确证了细胞凋亡的发生;激光扫描共聚焦显微镜下观察,rLZ-8可定位在细胞核中,并引起细胞内钙离子水平升高。结论:rLZ-8具有诱导K562细胞发生凋亡的作用,这种杀伤肿瘤细胞的作用可能与rLZ-8可富集在细胞核上的特性有关。     

蛇六谷提取物抑制K562细胞增殖并诱导分化的作用

目的:探讨蛇六谷提取物(TuAKe)抑制人慢性髓系白血病K562细胞增殖和诱导分化的作用机制。方法:不同浓度的TuAKe处理K562细胞,MTT比色法和半固体集落形成实验检测K562细胞的增殖能力;瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b、CD14和CD42b的阳性表达率;Western blot法检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和红系分化核转录因子GATA-1的蛋白表达水平。结果:TuAKe能够抑制K562细胞增殖,改变细胞形态,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b、CD14和CD42b阳性表达率,上调GATA-1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达(P0.05)。结论:TuAKe可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导K562细胞多向分化。     

8-硝基白杨素对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察8-硝基白杨素(8-NOChR)抑制体外培养人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：体外培养人宫颈癌Hela细胞系细胞。MTT比色法测定Hela细胞增殖活性。软琼脂培养克隆形成法检测Hela细胞集落形成能力。AO/EB染色荧光显微镜观察Hela细胞凋亡形态学改变。DNA凝胶电泳观察梯形DNA条带。结果：MTT比色测定显示,8-NOChR抑制Hela细胞增殖,呈剂量依赖性。软琼脂培养克隆形成法检测表明,8-NOChR显著抑制Hela细胞集落形成,呈剂量依赖性。AO/EB染色荧光显微镜观察发现,8-NOChR诱导Hela细胞呈现典型凋亡细胞形态特征。8-NOChR（30μmol/L）处理Hela细胞72h,琼脂糖凝胶电泳出现“梯形”DNA条带。结论：8-NOChR具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导细胞凋亡作用     

PcDNA3.1-rhGM-CSF表达质粒的构建及其对K562细胞生长与分化的影响作用

目的:观察GM-CSF对髓系白血病细胞(K562)生长、分化的影响作用。方法:采用PCR、T-A克隆及基因定向克隆技术,将rhGM-CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体中,构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核表达载体。经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定确认,转染人K562髓系白血病细胞、72小时后采用细胞形态学检测、MTT试验、免疫组化技术观察和分析PcD-NA3.1-rhGM-CSF在K562细胞中的表达及其影响该细胞生长与分化的作用。结果:①成功构建PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;②重组质粒PcDNA3.1-rhGM-CSF能在K562细胞中表达,并诱导K562细胞向单核细胞系、巨噬细胞系分化;③K562细胞增殖受到明显抑制。结论:成功构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;转染K562细胞能向单核细胞系、巨噬细胞系分化。     

鲨鱼软骨制剂对人不同细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的　研究鲨鱼软骨制剂 (SCP)对人胃癌细胞 (MGC80 3)、红白血病细胞 (K5 6 2 )、人结肠高分化腺癌细胞 (THC 890 8)、人乳腺癌细胞 (MCF 7)和人脐静脉血管内皮细胞 (VEC340 )的生长抑制作用 ,探讨其作用机制。方法　采用盐酸胍抽提 ,丙酮分级沉淀 ,烘干 ,微孔滤膜过滤等步骤从鲨鱼软骨粉中提取鲨鱼软骨制剂 (SCP) ;MTT法检测不同浓度的SCP对体外培养的MGC80 3细胞系、K5 6 2细胞系、THC 890 8细胞系、MCF 7细胞系和VEC340细胞系的生长抑制作用 ;Hoechst33342 /PI荧光双染法检测细胞凋亡。结果　SCP明显抑制MGC80 3、K5 6 2、THC 890 8、MCF 7和VEC340五种细胞系的生长 ,其IC50 值分别为 0 5mg/ml、0 7mg/ml、1mg/ml、1 5mg/ml和 2mg/ml。凋亡细胞比例在用药后 4 8h分别达 79 9%、4 4 6 %、78 9%、6 3 3%和 4 4 8%。结论　SCP能直接抑制不同肿瘤细胞生长 ,又能抑制血管内皮细胞的生长 ,其作用机制与细胞凋亡有关。     

地西他滨抑制K562白血病细胞增殖和诱导分化的作用

目的:观察地西他滨(DAC)抑制白血病K562细胞生长和诱导分化的作用。方法:不同浓度的DAC处理K562细胞。MTT法和半固体集落生成实验检测K562细胞增殖能力;瑞氏染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率;Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、细胞周期负调控因子P27、红系分化核转录因子GATA-1及粒系分化核转录因子PU.1蛋白的表达水平。结果:DAC能够减少K562细胞集落形成的数量,降低细胞活力,减少核质比,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率,上调P27、GATA-1和PU.1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达。结论:DAC可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导多向分化。     

可调控型反义基质金属蛋白酶9表达抑制人黑色素瘤细胞侵袭转移表型的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9与肿瘤转移的相关性。方法 利用基因重组技术构建反义MMP—9 cDNA四环素可调控型表达载体,用脂质体法转染反义MMP—9至转移性人黑色素瘤细胞株WM451(高表达MMP—9)。检测转染后细胞MMP—9表达水平的改变以及体外生长、侵袭、裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果 转染反义基因后,WM451细胞MMP—9的表达及活性明显下降,同时MMP—2的表达也受到一定抑制,细胞生长速度、体外侵袭能力及棵鼠体内成瘤性及自发转移能力均受到一定程度抑制;运用四环素可以抑制四环素负调控逆转录病毒载体上的外源基因的表达。结论 反义MMP—9基因下调MMP—9的表达,可使人黑色素细胞转移能力受到一定程度的抑制,说明MMP—9在人黑色素瘤细胞转移过程中起重要作用。同时,四环素负调控逆转录病毒载体可以调控外源基因的表达。     

中药露蜂房醇提取物对人红白血病K562细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的：研究中药露蜂房(Nidus Vespae，NV)醇提取物对K562细胞的作用及其机制。方法：利用^3H-TdR掺入、透射电镜、原位末端标记(TUNEL)技术、免疫组织化学和图象分析等方法。结果：不同浓度NV醇提取物对。K562细胞生长具有明显抑制作用(27％～56％)。NV醇提取物组K562细胞呈典型的凋亡形态学改变，其Bcl-2蛋白表达显著减弱、Bax蛋白表达显著增强。结论：中药NV醇提取物可明显抑制K562细胞增殖，其作用机制可能是通过Bcl-2、Bax的表达，从而诱导白血病细胞凋亡。     

人参皂甙Rg3在体外对白血病K562细胞增殖和诱导分化的影响**

背景：文献报道人参皂甙Rg3具有抗肿瘤作用,但对白血病作用研究很少。 目的：观察人参皂甙Rg3对白血病K562细胞的作用,并探讨其相关机制。 方法：以白血病K562细胞为靶细胞,实验分为对照组和人参皂甙Rg3组,人参皂甙Rg3组分别添加10,20,40,80,       100 mg/L Rg3。 结果与结论：MTT检测结果显示,不同浓度人参皂甙Rg3组K562细胞生长抑制率均显著高于对照组(P < 0.05~0.01)。NBT结果显示,人参皂甙Rg3组培养1,2,3 d K562细胞还原率均高于对照组(P < 0.01);人参皂甙Rg3组部分K562细胞体积变小,核仁消失,同时阳性细胞增多,细胞向成熟分化;流式细胞仪检测显示人参皂甙Rg3组培养2 d细胞周期G2期增高了3.84倍。提示人参皂甙Rg3在体外可抑制K562细胞增殖活性,其机制可能与人参皂甙Rg3将K562细胞周期阻滞在G2期,使细胞不能进行正常的有丝分裂,从而抑制细胞增殖有关。      

Colorimetric determination of inhibition of hematopoietic progenitor cells in soft agar

In vitro colony forming unit (CFU) assays have been used to measure the effects of compounds that regulate the growth of hematopoietic progenitor cells. These assays are time consuming and subjective and are therefore not amenable to high throughput of large numbers of compounds. Here we have shown that the traditional murine bone marrow CFU assay can be modified into a robust non-subjective colorimetric assay format. 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) was added after colony formation in an agar based 96-well plate culture system. Optical density correlated with increasing cell input concentrations in the presence of growth factor. The linearity of this response was equivalent to the standard CFU assay. Several hematopoietic inhibitors were tested in both assays. Effects on colony number and size were compared to optical density. Compounds that reduced colony numbers with little effect on colony size had identical IC(50) values in both the colorimetric assay and CFU assay. The IC(50) values of compounds that also decreased colony size did not correlate in the two assays. These results demonstrate the utility of the colorimetric assay to rapidly screen for compounds that specifically inhibit hematopoietic progenitor cell colony formation in vitro.     

新型人趋化素样因子超家族成员8对肿瘤细胞增殖和EGFR表达的影响

目的:研究新型细胞因子CKLFSF8对肿瘤细胞增殖及EGFR表达的作用。方法:首先利用RT-PCR了解CK-LFSF8基因在肿瘤细胞株BGC823和K562中的表达,然后在脂质体介导下将CKLFSF8基因转染这两种肿瘤细胞,倒置显微镜观察细胞生长,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测肿瘤细胞中EGFR的表达。结果:两种肿瘤细胞生长过程中均可测到CKLFSF8基因的表达。转染CKLFSF8后对BGC823和K562的增殖均有抑制作用,与空白对照组和空质粒组有统计学意义(P<0.05);CKLFSF8转染前后BGC823和K562细胞EGFR阳性率对比有统计学意义(P<0.05)。结论:CKLFSF8基因转染对肿瘤细胞的增殖和EGFR的表达有明显抑制作用,可望在肿瘤治疗中发挥重要作用。     

兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性*

背景：以往研究表明骨髓间充质干细胞的获取来源主要是股骨或髂骨,但下颌骨来源骨髓间充质干细胞的研究至今少有报道。 目的：观察兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞体外分离、培养及其生物学特性。 方法：体外分离培养兔下颌骨骨髓间充质干细胞,取第2或3代检测。MTT法检测细胞增殖,克隆形成试验检测细胞的克隆形成率变化,并对其进行成骨和成脂肪诱导分化。 结果与结论：MTT法检测细胞增殖,细胞生长曲线显示下颌骨骨髓间充质干细胞经历潜伏期、对数生长期和平台期。细胞克隆形成实验显示,细胞呈成纤维集落形成单位外观。茜素红、油红O染色结果显示,成骨诱导、成脂诱导后形成钙结节及脂滴。结果证实,兔下颌骨分离出的骨髓间充质干细胞有强大的自我复制及增殖能力,具有多向诱导分化的潜能。