骨髓间充质干细胞治疗感音神经性聋的基础研究进展

多种因素引起的内耳毛细胞及与之相连螺旋神经元的受损死亡,产生感音神经性聋。在目前有关治疗的研究中,能否通过细胞移植方法在所需部位定向产生内耳细胞,成为近年来研究热点。本文从骨髓问充质干细胞的生物学特性及在内耳感音神经性聋治疗中的基础研究方面做一综述。     

神经干细胞耳蜗移植与感音神经性耳聋基因治疗

神经干细胞具有低免疫原性、自我更新及多潜能分化等特性。此外,神经干细胞可转染神经营养因子基因等目的基因,并能整合于宿主细胞,长期稳定表达外源性基因。因此,神经干细胞可以作为内耳基因治疗的一个理想载体,通过转染神经营养因子基因,并移植于耳蜗,在感音神经性耳聋的治疗中可能具有潜在的应用价值。     

骨髓间充质干细胞在耳鼻喉头颈外科的应用

干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,其定向分化是生物体发育、生长和修复的基础.骨髓间充质干细胞是一种成体细胞,具有易从骨髓中分离纯化和体外扩增、自我更新及多向分化能力等特点,便于自体移植、无免疫反应,是最有前途的组织工程种子细胞之一.在细胞工程和组织工程方面的研究中有广泛的应用,对骨髓间充质干细胞在耳鼻咽喉头颈外科的应用及研究现状作一综述.     

骨髓间充质干细胞治疗感音神经性耳聋相关实验技术体系建设概要

感音神经性耳聋是由于内耳感觉细胞的损伤造成的,其治疗一直是耳科医生十分棘手的问题。近年来,利用干细胞修复内耳感觉细胞在国内外大量的研究中取得了诸多重要进展,特别是骨髓间充质干细胞,有易分离、低免疫源性、无致瘤性等优点,极具临床应用价值。但目前国内外各个研究小组从干细胞的制备,诱导到移植内耳的方法均有差异,未形成统一的流程,不利于其学术交流和实验结果大样本收集。本文集中介绍谢鼎华课题组在国家973项目干细胞治疗耳聋的实验技术体系标准制定课题的基础研究方法,并综述目前本领域国际最新动态,初步提出骨髓间充质干细胞治疗感音神经性耳聋的技术方法和质量控制措施的推荐方案,为最终临床安全、规范化运用干细胞治疗耳聋提供依据。     

iPSCs定向分化的内耳毛细胞与支持细胞间相互作用的研究

目的利用诱导多能性干细胞定向分化的内耳毛细胞和支持细胞探究这两种体外诱导分化细胞之间的相互作用。方法首先,利用细胞单层贴壁两步诱导法将三株i PS细胞(野生株、MYO7A缺陷株、MYO7A校正株)向内耳祖细胞及内耳毛细胞诱导分化,探究i PSCs定向分化内耳毛细胞的过程中是否有支持细胞的产生;其次,通过细胞免疫化学的方法探究体外分化的内耳毛细胞和支持细胞间的相互作用;最后,将表达绿色荧光蛋白(EGFP)的上皮样内耳祖细胞以圆窗膜穿刺的方法移植到白化荣昌猪的内耳中观察分析移植细胞在体内的迁移、分化以及在体内形成的联系。结果三株i PS细胞诱导分化为内耳毛细胞的过程中均有一部分细胞分化为支持细胞;对分化细胞进行E-cadherin、N-cadherin和ZO-1的免疫荧光检测结果显示,E-cadherin、N-cadherin和ZO-1在支持细胞-支持细胞连接和支持细胞-毛细胞连接间都有表达;移植4周后,耳蜗免疫组织化学结果显示,三株不同来源的移植细胞均有少量细胞成功迁移到了毛细胞受损部位—柯底氏器,并表达毛细胞标志性蛋白MYO7A。移植细胞之间以及移植细胞与宿主细胞之间有E-cadherin、N-cadherin和ZO-1的表达。结论 i PSCs诱导分化的内耳毛细胞和支持细胞在体内、外均能形成钙粘连接和紧密连接。这些研究结果对毛细胞取代法治疗耳聋策略的完善与发展有一定的科学意义。     

内耳毛细胞再生与神经干细胞

本文对内耳神经干细胞或神经前体细胞的培养,内耳毛细胞再生的细胞来源及外源性神经干细胞内耳移植的研究现状进行简要阐述.     

骨髓基质干细胞豚鼠内耳移植初步观察

目的建立骨髓基质干细胞(marrow stromal cell，MSC)内耳移植技术，研究内耳细胞移植的可行性。方法将豚鼠骨髓基质干细胞分离培养，用4，6-联脒-2-苯基吲哚(4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)荧光标记，采用显微注射技术在耳蜗底周鼓阶钻孔，通过钻孔处缓缓注入细胞，术后14天处死，行耳蜗石腊切片，荧光显微镜及HE染色观察移植细胞成活情况。结果骨髓基质干细胞内耳移植成活，并贴壁生长。结论成功地建立了骨髓基质干细胞内耳移植技术，为进一步研究MSC在内耳的分化和表达奠定了重要的基础。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向内耳毛细胞样细胞分化的研究

目的 探讨体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向耳蜗毛细胞样细胞分化的可行性.方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并加以鉴定.分离出生1～3 d的乳鼠耳蜗Corti器,与骨髓间充质干细胞在体外共培养14 d.通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学染色对分化细胞的特异性分子指标(myosinⅦa、math1及calretinin)进行鉴定.结果 免疫细胞化学染色显示诱导分化后的细胞myosinⅦa、math1和calretinin表达阳性,RT-PCR提示分化后的细胞可表达毛细胞的标志物myosinⅦa和math1.结论 体外培养的骨髓间充质干细胞可诱导分化为具有毛细胞分子标志物的毛细胞样细胞.     

干细胞来源及内耳导入途径的研究进展

移植干细胞来源的选择、干细胞定向诱导分化、内耳移植途径的选择及移植后内耳功能恢复状况的评估是干细胞临床应用的研究热点。干细胞种类选择以及移植途径不同是影响内耳移植安全性及内耳功能恢复效果的两个重要因素,也是目前研究干细胞移植治疗耳聋的重点。本文就上述两者对感音神经性耳聋的治疗机制的相关文献进行综述,从而为耳聋传统治疗方案提供更新的指导。     

诱导性多能干细胞与内耳移植

感音神经性聋是耳科常见病,其发病机制是内耳毛细胞及螺旋神经节细胞的减少或缺失所致,目前对于这一疾病的治疗研究中细胞移植已成为热点,特别是诱导性多能干细胞的发现为感音神经性聋的治疗带来了新的希望。本文就诱导性多能干细胞与内耳移植进行综述。     

干细胞移植在治疗感音性耳聋方面的研究进展

感音性耳聋常由毛细胞及其相联系的螺旋神经节不可逆转的缺失导致.干细胞移植是近年一个发展很快的研究领域,它通过向受体组织植入干细胞以修复或替代受损退变的组织从而恢复正常生理功能.将干细胞植入内耳的研究将给感音性耳聋的治疗带来新希望.本文就近年来着重在再生和保护毛细胞及其相联系螺旋神经节的方面的干细胞移植研究进展作一综述.     

干细胞移植与感音神经性聋

绝大多数感音神经性聋是由于耳蜗感觉上皮和螺旋神经节神经元的退行性变导致的,通过于细胞移植来补充螺旋神经节神经元是治疗聋病的理想选择之一.随着干细胞研究的深入,给感音神经性聋的治疗带来了希望.本文就干细胞内耳移植与螺旋神经节神经元的修复方面的进展作一综述.     

干细胞治疗耳聋研究进展

干细胞治疗耳聋是近些年耳科的研究热点之一,本文通过对干细胞耳聋治疗相关的文献进行综述,从干细胞用于内耳结构的替代或修复的基础、干细胞植入的方式、干细胞移植安全性方面,对干细胞治疗耳聋的可行性进行论述,认为干细胞的内耳移植治疗已具备一定的基础,在移植前需对细胞的分化进行更精准的控制,并且可以与传统的治疗方式(如人工耳蜗植入术)结合使用。     

骨髓间质细胞在神经系统中应用的研究现状

骨髓间质细胞（mesenchymalstemcells，MSC）也称为间充质干细胞，是一种具有非常好的应用前景的干细胞，它不但具有一般干细胞的特点：可以不断的自我更新，在一记的条件下可以分化为不同种类细胞，如骨、软骨、肌肉、神经细胞、肺细胞等，而且作为一种细胞治疗方法，它已经成功的应用于临床，治疗包括儿童成骨缺陷、骨髓抑制后的恢复治疗等。更重要的是骨髓问质细胞可以直接通过简单的骨髓穿刺来获得，简单、方便，不会造成严重的并发症，不会产生移植排斥反应。近年来，对MSC的研究逐渐深入，对其在神经系统中应用的研究也逐渐增多，我们在这里对MSC在神经系统中应用的研究现状进行综述。     

干细胞内耳移植径路研究进展

内耳毛细胞和（或）螺旋神经元的损伤是引起感音神经性聋的主要原因,而在哺乳动物中以上损伤是不可再生和修复的,因此干细胞内耳移植替代受损的毛细胞和（或）螺旋神经元治疗由此引起的感音神经性聋已成为耳科学研究方面的重点和热点问题。其中移植径路的不同直接影响到移植细胞的迁移、增殖及分化效能。本文就干细胞内耳移植的手术径路做一综述。     

一般问题

20050710兔骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨组织的实验研究/黄定强…//临床耳鼻咽喉科杂志.2005,19(4).168～169,172目的:探索兔骨髓间充质干细胞向软骨组织转化的条件,为组织工程寻找新的工程化软骨。方法:用密度梯度离心法和贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞,并传代扩增后,用离心三维培养法在成软骨诱导剂下进行诱导培养,并分别在诱导培养第7、14、21天取出标本并进行组织切片,对标本行免疫组织化学、原位杂交检测。结果:骨髓间充质干细胞经7、14、21天的离心三维诱导培养后,培养管出现软骨外观组织块,组织学切片可见软骨陷窝,进行Ⅱ型胶原…     

骨髓间充质干细胞的成软骨分化机制及其临床应用

骨髓间充质干细胞具有向软骨分化的能力，并且来源方便、没有免疫排斥等优点．已作为新型种子细胞倍受关注。同时，利用该干细胞进行软骨再造也是近年来软骨组织工程主要的发展方向之一。现将近年来该干细胞向软骨的分化机制及临床应用的研究进展作一综述。     

IFN-γ转染骨髓间充质干细胞治疗喉乳头状瘤的实验研究

目的 研究IFN-γ转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗喉乳头状瘤的效果.方法 采用Ad5-IFN-γ-GFP重组腺病毒将IFN-γ转粢到骨髓间充质干细胞中,用Western blot检测细胞上清液中IFN-γ的表达水平.将IFN-γ转染的骨髓间充质干细胞注射到小鼠喉旁组织,第1、3、7、14、28天取骨髓和喉旁组织用real-time PCR检测小鼠骨髓和喉旁组织中IFN-γ的mRNA水平.所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理.结果 当感染复数(MOI) =100和转染时间为72 h时,细胞上清液中IFN-γ的表达水平分别达到峰值.注射空白培养液和注射空白小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的骨髓和喉旁组织中,IFN-γ基本不表达.注射病毒转染后的mBMSCs后,骨髓和喉旁组织中都开始大量表达IFN-γ,并且表达量随着注射时间的延长而增加.讨论 IFN-γ转染骨髓间充质干细胞能够促进肿瘤细胞表面MHC Ⅰ和Ⅱ类抗原分子的表达,从而增强机体免疫调节作用和抗肿瘤效应.比单纯外源性IFN-γ治疗的不良反应小,表达持久,而IFN-γ编码基因没有整合到全身染色体基因组上,具有很好的安全性.因此,IFN-γ转染骨髓间充质干细胞治疗喉部肿瘤有望取得新的突破.     

干细胞与感音神经性耳聋

随着干细胞研究的深入,特别是近年来内耳干细胞的发现,为感音神经性耳聋的治疗带来了希望,本文就内耳干细胞的研究进展以及干细胞在感音神经性耳聋治疗的应用前景作一综述。     

体外诱导人脐带间充质干细胞向内耳毛细胞样细胞分化的研究

目的 探讨并建立一种体外定向诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells ,hUC-MSCs)向内耳毛细胞样细胞分化的方法.方法 采用组织贴壁法培养获得hUC-MSCs,流式细胞仪鉴定其表面标记物;神经干细胞诱导阶段分为对照组(DFNB基础诱导培养基)、实验1组(DFNB基础诱导培养基+20 ng/ml EGF+20 ng/ml bFGF)、实验2组(DFNB基础诱导培养基+20 ng/ml EGF+20 ng/ml bFGF+琼脂糖包被),培养3~5天后采用免疫荧光法检测各组标记蛋白Nestin的表达;内耳毛细胞样细胞诱导分化阶段,分为对照组(DFNB基础诱导培养基+明胶包被)、诱导组[DFNB基础诱导培养基+20 ng/ml EGF+1 μM全反式维甲酸/全反式维生素A酸(all trans retinoic aid,ATRA)],培养4周后采用qRT-PCR和免疫荧光法检测各组毛细胞标记物Math1、MyosinⅦa、Brn3c的表达.结果 在神经干细胞诱导阶段,对照组、实验1组均无神经球结构,实验2组中hUC-MSCs分化3 d后细胞有明显神经球样结构,且Nestin阳性细胞数更高(P<0.05);而向内耳毛细胞样诱导分化4周后,诱导组毛细胞标记物Math1、MyosinⅦa、Brn3c的mRNA和阳性细胞数的表达水平明显升高(P<0.05).结论 体外诱导人脐带间充质干细胞先向神经干细胞方向分化再向内耳毛细胞分化方向诱导,可有效提高毛细胞标记物MyosinⅦa、Brn3c、Math1的表达水平,促进hUC-MSCs向类毛细胞样细胞分化,可能为将来感音神经性聋的内耳移植治疗提供更为适合的种子细胞.