廿烷五稀酸对肺腺癌细胞的抑制作用实验研究

[目的]研究廿烷碳五烯酸（EPA）对肺腺癌细胞的抑制增殖作用．[方法]在细胞培养、动物实验及临床应用实验基础上，进行细胞凋亡、肿瘤细胞活力及急性毒性实验．[结果]EPA对肺腺癌细胞具有明显地抑制增殖作用，EPA作用后肺腺癌细胞周期的G1，S期细胞百分率明显降低，随时间的延长及剂量增大而效能增强；EPA可引起细胞凋亡；EPA作用后血清TNF-α，IL-6，IL-1水平显著降低．[结论]长期接受EPA治疗可调节机体炎症反应，提高机体免疫力，而且单剂量应用即具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，呈时间-剂量依赖性．     

廿烷五烯酸对人肺癌A-549细胞株的凋亡作用及细胞周期的影响

[目的]观察廿烷五烯酸诱导人肺癌A-549细胞株的凋亡作用及其对A-549细胞周期的影响.[方法]用人肺癌A-549进行体外培养,分为对照组和小、中、大剂量廿烷五烯酸组,分别给予蒸馏水及15,30,60 mg/L廿烷五烯酸,培养48h,观察细胞变化.对照组加入培养液500μL,实验步骤相同.应用FCM进行定量检测细胞凋亡并作细胞周期分析.[结果]对照组细胞培养48 h,凋亡率仅为0.14%±0.05%,未见亚二倍体峰;用15,30,60 mg/L廿烷五烯酸处理48 h时,细胞出现凋亡峰,凋亡率分别为10.50%±0.56%.19.87%±1.34%,30.12%±1.78%,不同质量浓度凋亡率间差异有统计学意义,廿烷五烯酸质量浓度在15～60 mg/L时,G0/G1期和G2/M期细胞百分比下降,S期细胞百分比上升,阻滞周期于S期.[结论]体外实验中,廿烷五烯酸通过干扰细胞周期抑制人肺癌A-549细胞的生长,主要阻滞干S期;抑制肿瘤细胞增殖可能是廿烷五烯酸抗肺癌作用的机制之一.     

廿烷五烯酸作用心房颤动的实验研究

目的:本实验通过动物实验观察廿烷五烯酸(EPA)对房颤大鼠血液指标CD4+T、IL-2、D-D、TXB2的影响,揭示不饱和脂肪酸对房颤的作用。方法:选用健康Wistar大鼠,建立慢性房颤的动物模型,随机分成三组:模型组、EPA组和维拉帕米对照组,并设正常对照组。用药4周后,观察廿烷五烯酸和维拉帕米对房颤大鼠血浆CD4+T、IL-2、D-D、TXB2的影响。结果:模型组与正常对照组比较,血浆D-D、TXB2的含量明显增加(P<0.05)。廿烷五烯酸组和维拉帕米组与模型组比较,明显降低血浆D-D、TXB2的含量(P<0.05),血浆CD4+T、IL-2的含量EPA组增加,与其他组差异明显(P<0.05)。廿烷五烯酸组和维拉帕米组对大鼠血浆D-D、TXB2的含量有改善(P>0.05)。结论:实验表明,廿烷五烯酸可降低房颤大鼠血浆中D-D、TXB2的含量,提示其可有效改善凝血,减少血栓形成;EPA对房颤鼠有提高免疫功能作用。廿烷五烯酸可作为治疗房颤和预防房颤后血栓的方法之一。     

miRNA-34c对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应

目的研究肺腺癌A549细胞中miRNA-34e的辐射增敏效应。方法单独转染miRNA．34e序列或单独照射或转染和照射联合处理细胞后,采用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,藻红B染色法观察细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白的表达。结果转染联合照射处理组的抑制率及凋亡率都较单独转染或单独照射组明显增高（均P〈0．05）,且随miR-34e转染浓度的增加而增高（均P〈0．05）。细胞周期检测结果显示,细胞明显阻滞于G1／G0期（P〈0．05）。联合处理的细胞p53蛋白表达量较单独照射组增加,且呈miRNA．34c浓度依赖性增加（P〈0．05）。结论miRNA-34c对肺腺癌细胞A549有辐射增敏效应,可强化p53蛋白的表达,诱导细胞G1／G0期阻滞和凋亡。     

回生口服液调控Wnt通路CyclinD1影响人肺腺癌细胞增殖的机制

目的：研究回生口服液调控Wnt信号传导通路细胞周期蛋白D1（CyclinD1）影响人肺腺癌细胞（LAC）增殖的机制。方法：制备高、中、低剂量（11．6g／kg,5．8g／kg,2．9g／kg）回生口服液含药血清,与人肺腺癌细胞系共同培养,MTT法检测含药血清对肺腺癌细胞的抑制率,流式细胞仪检测肺腺癌细胞周期相对分布;建立C57BL／6人肺腺癌荷瘤小鼠模型,予回生口服液高、中、低剂量治疗,免疫组化法检测小鼠移植瘤肺腺癌细胞Cyclin—D1阳性表达水平。结果：与阴性对照组比较,回生口服液高、中剂量组及顺铂组含药血清对肺腺癌细胞的生长抑制率明显增高,且干预的肺腺癌细胞G1期细胞比例明显增高,s期、G2期细胞比例明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;回生口服液中、高剂量及顺铂（DDP）治疗组小鼠肺腺癌细胞内CyclinD1阳性表达率明显低于模型组（P〈0．01）。结论：回生口服液可明显抑制人肺腺癌细胞生长,使癌细胞停滞于细胞周期的G1期,并可明显降低肺腺癌细胞内CyclinD1的阳性表达。     

肺腺癌A549细胞STAT3基因沉默对细胞周期分布和凋亡水平变化的影响

目的：研究沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期分布状况和细胞凋亡水平变化及其意义。方法：利用流式细胞仪（FCM）检测RNA干扰（RNAi）技术沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期状况和细胞凋亡水平变化。结果：STAT3沉默后,肺腺癌A549细胞大量处于G0／G1期（P〈0．05）,而S、G2／M期的细胞相对减少（P〈0．05）;并且细胞凋亡明显增多,前48h增长明显（R0．05）,48h后增长趋于平稳（P〉0．05）,但仍能较长时间维持较高水平。结论：STAT3siRNA能阻断A549细胞的细胞周期,使细胞周期停留在G0／G1期,不能进入S期,不能完成DNA的合成,无法进入M期,未完成细胞的分裂,并能诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,提示STAT3的表达与A549细胞的细胞周期和凋亡密切相关。     

苯乙酸钠对肺癌A549细胞生长的影响

目的:研究抗肿瘤药物苯乙酸钠(NaPA)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549抑制率、细胞周期和凋亡的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、流式细胞仪等方法,观察不同浓度NaPA对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。结果:NaPA对A549有明显的生长抑制作用,且呈剂量时间依赖性,最大抑制率可达79%。NaPA可阻滞A549细胞的细胞周期,使G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡,凋亡率最高可达30.5%。结论:苯乙酸钠抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过NaPA使细胞周期抑制于G1/G0期和诱导细胞凋亡而实现。     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的探讨α-干扰素(IFN-α)对人肺腺癌细胞株A549细胞周期和P53蛋白表达的影响。方法用2种不同质量浓度IFN-α(25μg/L，100μg／L)处理人肺腺癌A549细胞，并设空白为对照。用流式细胞仪测定IFN-α对A549细胞细胞周期的影响，用免疫荧光标记法测定P53蛋白的表达。结果IFN-α作用后的A549细胞，细胞周期明显改变，s期细胞数显著降低，且P53蛋白表达明显减少。结论IFN-α能阻止A549细胞细胞周期的进程，抑制P53蛋白的表达。     

槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响.方法采用MTT试验、流式细胞仪检测槲皮素对体外培养的人肺腺癌A549细胞的抑制作用和细胞周期的变化,电镜观察超微结构变化,免疫组化技术检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果MTT结果显示槲皮素对体外培养的A549具有明显的增殖抑制作用,且具有一定的浓度和时间依赖性;流式细胞仪检测发现,30μg/ml槲皮素作用A549细胞48h后能将细胞阻滞于G0/G1期,且在细胞周期G1峰的左侧出现了凋亡峰;电镜观察发现有凋亡的特征性改变;免疫组化结果显示,槲皮素使Bcl-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论槲皮素能抑制肺腺癌A549细胞的生长,阻止细胞由G0/G1期向S期和G2/M期移行并诱发细胞凋亡,其诱发A549细胞凋亡的机制可能与上调促凋亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达有关.     

反义P~(53)基因和mdm_2基因对肺腺癌细胞恶性表型双重抑制作用的实验研究

目的研究反义P53基因和mdm2基因对肺腺癌细胞中突变型P53的双重抑制,并观察其抑制肺腺癌细胞生长和促进恶性表型逆转作用。方法利用能表达反义产P53和mdm2基因的逆转录病毒表达载体在脂质体介导下,将PDOR－mdm2基因转染含有PDOR－FP53的肺腺癌GLG-82细胞中。经G418筛选获得GLG-82细胞同时含有反义P53基因和mdm2基因的克隆,这种双重转染的GLC－82细胞命名为PDOR－FP53／mdm2,并与导入空载体PDOR－neo和GLC-82亲本细胞作比较。通过DNA、RNA杂交观察外源基因转染细胞中表达情况,细胞生长曲线测定和3H－TdR掺入、软琼脂培养集落形成试验、流式细胞仪测定观察其对肺腺癌GLC-82细胞恶性表型的抑制作用。结果DNA、RNA杂交证实反义P53和mdm2基因转染GLC－82细胞成功并获得表达。细胞生长曲线测定和3H-TdR掺入试验结果表明,转染PDOR-PP53／mdm2基因的GLC-82细胞较转染PDOR-neo的GLC-82细胞活力减弱、增殖能力下降、DNA合成受阻、软琼脂培养集落形成率低。细胞周期分析结果显示,转染PDOR－FP53／mdm2的细胞G1期峰增高和S期峰降低,提示DNA合成减慢,细胞增殖受到抑制。结论反义P53基因和mdm2基因对肺腺癌细胞恶性表型有双重抑制作用。     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

转染EGFRL858R的肺腺癌细胞中IL-6和VEGF表达水平及其意义

目的: 探讨肿瘤细胞癌基因表皮生长因子受体(EGFR)L858R型突变与肺腺癌恶性转移患者癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的关系及其意义。方法: 将含EGFRL858R全长基因质粒的载体转染EGFR野生型肺腺癌细胞系H460(EGFRL858R-H460组),空载体转染H460细胞作为对照组(Vec-H460组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平。将含IL-6siRNA的载体转染带有EGFRL858R型突变的细胞系H1975(IL-6siH1975组),转染空载体的H1975细胞作为对照组(Vec-H1975组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中VEGF蛋白表达水平。结果: 与Vec-H460组比较,EGFRL858R-H460组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平明显升高(P<0.01);与Vec-H1975组比较,IL-6siH1975组细胞组IL-6和VEGFmRNA表达水平明显降低(P<0.01),VEGF蛋白表达强度明显降低。结论: 肺腺癌细胞系中EGFRL858R型突变可升高肺腺癌患者癌细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,其中IL-6mRNA水平升高可能是VEGFmRNA表达水平升高的原因,这些变化可能是EGFRL858R型突变参与肺腺癌恶性转移进程的途径之一。     

腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应

目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC－82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC－82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的G1期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因（Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。     

腺病毒介导的p53和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用

目的：研究ｐ５３基因和顺铂联合应用对胆管癌细胞的作用。方法：将重组体腺病毒ｐ５３和顺铂联合作用于人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９，对ｐ５３基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果：用Ａｄ－ＬａｃＺ进行复组腺病毒转导效率的检测，发现当ＭＯＩ为１００以上时，重组腺病毒可使９０％以上的培养的人胆管癌ＱＢＣ９３９细胞被传导，用ＲＴ－ＰＣＲ方法，在胆管癌ＱＢＣ３９细胞系中ｐ５３无表达。重组体腺病毒能介导外源基     

白介素-17通过拮抗γ-干扰素的作用促进小鼠肝癌细胞的生长与增殖

目的探讨白介素（IL-17）与γ-干扰素（IFN-γ）的相互作用对小鼠肝癌细胞Hepa1-6 生长的影响。方法IL-17 单独或与 IFN-γ联合干预小鼠Hepa1-6细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布情况,Western blot检测细胞 增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1、P21及P16的表达,以及胞内信号分子p38MAPK、ERK1/2和Stat1的磷酸化水平。结果IFN-γ 可显著抑制Hepa1-6细胞的生长,明显增加细胞G0/G1期的比例,同时减少PCNA和Cyclin D1蛋白,并增加P21蛋白的表达。 IL-17单独应用不影响Hepa1-6细胞的生长,但它可显著拮抗IFN-γ的作用。与IFN-γ单独处理组相比,IL-17与IFN-γ联用可以显 著降低细胞G0/G1期的比例;明显增加PCNA和Cyclin D1,同时降低P21蛋白的表达。IL-17不影响细胞Stat1的磷酸化水平, 但可以抑制IFN-γ所引发的p38MAPK及ERK1/2的磷酸化。结论IL-17可与IFN-γ的作用相拮抗从而显著促进肝癌细胞的生长。     

基因治疗与化疗联合应用对人肺腺癌GLC-82细胞作用的实验研究

目的 探讨基因治疗和化疗联合应用提高肿瘤疗效的可能性和初步机制。方法 将重组腺病毒载体（Ａｄ）介导的ｐ５３基因（Ａｄ－ｐ５３）与化疗药顺铂（ＣＤＤＰ）或三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）联合,通过细胞生长和存活的抑制实验,流式细胞分析,末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记检测,逆转录－聚合酶链反应,免疫组织化学检测,以及裸鼠皮下移植瘤模型的治疗实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用及可能机制。结果 Ａ     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

血清外泌体miR-20b-5p miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用

目的 探究血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用价值。方法 选取2015年12月至2018年12月河南科技大学第一附属医院胸外科收治的124例非小细胞肺腺癌患者为观察组，另选取120例同期于本院接受体检的健康体检者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链法(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-20b-5p、miR-107表达水平，受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-20b-5p、miR-107水平检测对非小细胞肺腺癌的早期诊断价值，Kaplan-Meier生存分析研究miR-20b-5p、miR-107水平与患者预后的关系。结果 观察组的血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，血清外泌体miR-20b-5p、miR-107检测诊断非小细胞肺腺癌的AUC值分别为0.766、0.821,最佳截断值分别为1.81、1.27。观察组患者中，117例完成随访，7例失访。随访3年后，64例患者死亡，53例患者存活。根据患者的生存状态绘制ROC曲线，确定miR-20b-5p、mi...     

肺腺癌高、低转移细胞系Anip973、AGZY83-a中野生型p53基因过表达研究

目的探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶性肿瘤基因治疗中的作用。方法应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ,并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位末端标记、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ等技术检测分析。结果野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用,野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显高于低转移细胞系ＡＧＺＹ８３－ａ。结论外源性野生型ｐ５３基因的过表达,可以有效抑制上述肿瘤细胞的增殖,同时对高转移肺腺癌细胞系的抑制作用更加显著。