血清乳腺珠蛋白与乳腺癌的相关性及临床意义探讨

目的探讨血清人乳腺珠蛋白(hMAM)水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测68例乳腺癌患者、40例其他癌症患者(前列腺癌、胃癌、卵巢癌、直肠癌各10例)、35例良性乳腺疾病患者以及40名体检正常女性(正常对照组)血清hMAM水平并做比较。将68例乳腺癌患者按临床TNM分期、是否存在雌激素受体(ER)表达、是否有腋窝淋巴结转移以及是否绝经分别分组并做比较。通过受试者工作特征(ROC)曲线确定乳腺癌血清hMAM的Cut-off值。结果血清hMAM的ROC曲线下面积为0.825,即诊断乳腺癌的可信度为82.5%[95%可信区间(CI):72.6%~92.4%];当hMAM的Cutoff值为8.43 ng/mL时,敏感性和特异性分别为76.5%、82.9%。乳腺癌组血清hMAM水平及阳性率明显高于良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组(P0.05),而良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组之间差异均无统计学意义(P0.05)。Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率(55%、75%)明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者(25%、40%,P0.05),但hMAM水平无差异(P0.05)。有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率(88%)明显高于无转移的患者(30%,P0.05),但hMAM水平无差异(P0.05)。不管乳腺癌患者血清中是否存在ER、原癌基因C-erb-2表达及是否绝经,其hMAM水平及阳性率均无差异(P0.05)。结论 hMAM的表达与乳腺癌临床分期和是否有腋窝淋巴结转移相关;检测乳腺癌高危人群血清hMAM水平有助于提高乳腺癌的早期诊断和癌微转移的早期发现。     

人乳腺珠蛋白的研究进展

人乳腺珠蛋白(hMAM)为乳腺组织特异性蛋白，是一种新的可能具有临床应用前景的乳腺癌标志物。近几年国内外研究者对hMAM在乳腺、淋巴结、外周血和骨髓中的表达及其与乳腺癌的关系做了大量工作，结果不尽相同，提出了不同的观点。现对hMAM及其基因在乳腺癌检测中的研究现状作一综述。     

人乳腺珠蛋白在乳腺癌中的表达

目的 探讨人乳腺珠蛋白(mammaglobin A,MGA)在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化EnVision法检测MGA在87例原发性乳腺癌及其癌旁乳腺组织、20例转移性乳腺癌中的表达,并观察其与临床病理指标的关系.结果 MGA在87例原发癌和癌旁乳腺组织的阳性率分别为70.1%和74.7%(P＞0.05),但原发癌中强阳性者显著高于癌旁乳腺(P＜0.01).MGA的表达与淋巴结转移、ER和PR状态有显著相关性(P＜0.05).MGA在原发或转移癌的不同年龄组、组织学类型、组织学分级、TNM分期、c-erbB-2中的表达差异均不显著.结论 MGA表达于原发和转移乳腺癌,可用于临床病理辅助诊断.MGA表达与腋窝淋巴结、ER和PR状态相关,可用于辅助判断预后.     

乳腺癌腋窝淋巴结的超声诊断与人乳腺珠蛋白基因检测

目的 检测乳腺癌腋窝淋巴结(ALN)中人乳腺珠蛋白基因(hMAM)的表达,探讨超声对诊断ALN的价值及hMAM的临床应用价值。 方法 以超声发现的10例乳腺癌患者的23枚ALN作为试验组,术前对其标记,术后对离体标本行常规病理及hMAM mRNA的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测。以6枚无乳腺癌病史患者的颈部或ALN作为对照组。 结果 10例乳腺癌组织的hMAM均呈阳性;23枚淋巴结中病理阳性率26.09%(6/23),hMAM表达阳性率78.26%(18/23),二者差异有统计学意义(P<0.05);6枚对照组淋巴结病理为反应性增生或正常,hMAM表达均阴性。 结论 超声可以实时观察ALN并预测其良恶性;hMAM的RT-PCR检测可显著提高乳腺癌ALN转移的检出率。     

人乳腺珠蛋白的研究进展

人乳腺珠蛋白 (hMAM)为乳腺组织特异性蛋白 ,是一种新的可能具有临床应用前景的乳腺癌标志物。近几年国内外研究者对hMAM在乳腺、淋巴结、外周血和骨髓中的表达及其与乳腺癌的关系做了大量工作 ,结果不尽相同 ,提出了不同的观点。现对hMAM及其基因在乳腺癌检测中的研究现状作一综述     

乳腺微小导管原位癌淋巴结广泛转移1例

患者女性,61岁.左腋窝包块并逐渐增大,伴左肩部、颈部酸困不适.行左腋窝包块穿刺细胞学检查见可疑腺癌细胞.查体:左腋窝及左锁骨下可触及多个结节.全身淋巴显像检查示左上肢淋巴回流异常,考虑左腋窝淋巴结肿瘤侵犯可能性大.B超示左腋窝淋巴结肿大,右腋窝及双乳腺未见异常.乳腺钼靶检查示左乳腺外侧象限小叶增生,右乳腺未见异常.     

乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达

[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白（hmnan mammaglobin，hMAM）基因并诱导其表达，为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础，从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA，通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增hMAM基因编码序列．将扩增产物克隆至PGEM-T载体中，DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因，与相同酶切的表达载体pQFA0连接、筛选、鉴定，构建pOE40-hMAM融合表达质粒，以硫代半乳糖苷（IPTG）诱导在大肠杆菌M15中表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应（PCR）扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明，插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTFG的诱导下，M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40hMAM表达成功。     

乳腺微小钙化在乳腺癌诊断中的意义

目的探讨钼靶乳腺摄影对乳腺微小钙化在不同乳腺疾病中的诊断价值。方法回顾性分析212例乳腺X线钼靶片显示微小钙化病例,全部经手术病理证实,其中乳腺恶性病变131例,良性病变81例。采用9项指标分析钙化,运用χ2检验评价各项指标对乳腺癌的诊断价值。结果微小钙化判断乳腺癌最有价值的指标为:①每平方厘米微小钙化数目(N/S)>20;②微小钙化总数目>30;③钙化点间密度不均、大小不一;④钙化形态为细沙型、混合型、蠕虫样或粗颗粒型;⑤微小钙化合并肿块;⑥如合并肿块钙化灶分布于肿块内外。结论乳腺X线片中微小钙化形态学表现、密度、大小、数目及合并肿块对乳腺癌的诊断具有重要价值。     

定量PCR方法检测儿童ALL微小残留病

为深入研究儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微小残留病（ＭＲＤ）的生物学特性及病程中ＭＲＤ的动力学变化，有必要对体内ＭＲＤ水平进行定量。本文拟就国外近年来定量ＰＣＲ方法检测儿童ＡＬＬ ＭＲＤ的研究进展作一简介，主要对各种方法的原理，特点及定量ＭＲＤ检测的临床意义予以综述。     

人乳腺珠蛋白基因表达和趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断中的应用

目的探讨人乳腺珠蛋白(HMAM)、趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例女性体检者、134例良性乳腺肿瘤患者、129例乳腺癌患者和104例其他肿瘤患者外周血中HMAM mRNA,化学发光法检测CA153,ELISA检测CXCL16,分析三种标志物与乳腺癌患者临床组织学分期的关系、手术前后的差异及联合检测在乳腺癌诊断中的应用。结果乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平高于对照组和良性乳腺肿瘤组,HMAM和CA153水平高于其他肿瘤组(P<0.05)。乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平在手术后均下降,Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。HMAM的检测特异性最强,CXCL16的检测灵敏度最高;CA153和CXCL16联合检测可提高灵敏度和阴性预测值;HMAM、CA153和CXCL16联合检测的特异性和阳性预测值高于CA153和CXCL16联合检测,HMAM、CA153和CXCL16联合检测的灵敏度、阳性预测值和阴性预测值高于单一指标检测(P<0.05)。结论HMAM和CA153对乳腺癌预后有一定的预测作用,HMAM、CA153、和CXCL16对术后随访有意义,联合检测有助于提高对乳腺癌诊断的早期诊断。     

肺炎衣原体Taqman探针实时荧光定量PCR检测法

目的针对Cpn0308基因建立检测肺炎衣原体的Taqman探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法根据肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308基因序列设计引物和Taqman探针,建立Taqman FQ-PCR检测体系,对反应体系进行优化,进行灵敏度、特异性、重复性评价;并与商品化肺炎衣原体核酸检测试剂盒检测临床标本进行对比分析。结果肺炎衣原体Taqman FQ-PCR方法的引物浓度300 nmol/L,探针浓度200 nmol/L,Mg~(2+)4.0 mmol/L为最优反应条件;灵敏度为8.36×102copies/μL;该法对常见几种呼吸道病原菌及沙眼衣原体无交叉反应;重复性试验中4个浓度变异系数均小于3%。自建方法与商品化试剂盒对呼吸道感染组、心血管疾病组及正常对照组标本检出率分别为10%vs 10%(χ~2=0.167,P0.05),44.44%vs 40.74%(χ~2=0,P0.05),6.67%vs 3.33%(χ~2=0,P0.05),各组阳性率间差异无统计学意义;2种方法的总阳性率(16.54%vs 14.96%)比较差异无统计学意义(χ~2=0.071,P0.05)。结论本研究建立的Taqman探针实时荧光定量PCR检测肺炎衣原体的方法灵敏度好,特异性高,重复性好,可应用于临床肺炎衣原体核酸检测。     

钼靶联合hMAM、BRCA-1表达水平检测对乳腺癌的诊断价值

目的 探讨钼靶联合乳腺癌人乳腺珠蛋白(hMAM)基因、乳腺癌易感基因-1(BRCA-1)表达水平对乳腺癌的诊断价值.方法 选取2016年1月至2019年8月在该院就诊的乳腺癌患者150例纳入肿瘤组,另选取同期良性乳腺肿瘤患者100例纳入良性组.通过受试者工作特征(ROC)曲线分析单独及联合应用钼靶及hMAM、BRCA-...     

献血者HCV RNA实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立快速检测献血者中丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的方法。方法利用体外转录制备的HCV RNA转录体进行病毒RNA抽提方法及抽提效率的比较;将RNA转录体与正常血清进行不同数目的混合,对最佳混合标本数进行了摸索;建立HCV荧光定量PCR方法(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR),并对献血者进行混合标本HCV核酸检测。结果确定了比较理想的病毒RNA抽提方法;用于HCV核酸检测的混合标本数为24例;建立的荧光定量PCR方法能最低检测出10个copies/ml;采取24例混合血标本方法,FQ-PCR检测HCV RNA,576例ELISA检测HCV阴性的献血者未检测出HCV RNA。结论初步建立了献血者HCV感染的混合标本荧光定量PCR检测方法。     

CD44和EPCR mRNA在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤干细胞标记物CD44和EPCR在乳腺癌组织中的相关性及其与乳腺癌临床病理特征的关系。 方法选取2015年1月至4月在北京大学深圳医院行乳腺癌切除术的46例女性患者,用实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检测非特殊型浸润性乳腺癌及其配对癌旁正常乳腺组织中CD44及EPCR的mRNA表达水平,分析其与临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。 结果（1）荧光定量RT-PCR结果显示CD44 mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义（t=2.486,P=0.017）,在ER阳性乳腺癌明显低于ER阴性组、在正常乳腺样型的三阴型乳腺癌明显高于非正常乳腺样型的三阴型组,差异具有统计学意义（t=-2.332,P=0.024;t=-4.209,P<0.01）,但与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关（P>0.05）;（2）EPCR mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义（t=4.028,P<0.01）,与乳腺癌的肿瘤大小（t=2.998,P<0.01）、组织学分级（t=4.082,P<0.01）、淋巴结转移（t=2.152,P=0.037）、临床分期（t=-2.378,P=0.022）、ER（t=-5.585,P<0.01）,PR（t=-3.896,P<0.01）及增殖指数Ki67（t=2.197,P=0.033）相关,差异具有统计学意义。但与患者的年龄及HER2无关（P>0.05）,在三阴型（尤其是基底样型）乳腺癌及Luminal B型乳腺癌中的相对表达水平也明显高于非三阴型组及非Luminal B型组,差异具有统计学意义（t=9.163,P<0.01;t=3.653,P=0.003）;（3）在乳腺癌中,CD44及EPCR mRNA的表达呈显著正相关（r_s=0.540,P<0.01）。 结论乳腺癌干细胞标志物CD44及EPCR在乳腺癌组织中均明显表达上调,2者具有正相关,但EPCR与更多的临床病理特征相关,提示EPCR可更好地预测乳腺癌的淋巴结转移及较高临床分期等不良预后,并推测CD44及EPCR可能所标记为2种不同表型的乳腺癌干细胞。     

两种方法对丙型肝炎病毒检测的对比研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）在检测丙型肝炎病毒（HCV）方面的差异。方法 60例确诊为丙型肝炎的住院患者样本作观察组,80例健康体检人群样本作健康对照组,应用FQ-PCR和ELISA分别对这两组样本进行HCV-RNA和抗HCV抗体（抗-HCV）检测。结果 60例观察组样本中,FQ-PCR和ELISA分别检出阳性54例和49例,阳性率分别为90%和81.67%,80例健康对照组样本中,FQ-PCR和ELISA分别检出阴性80例和77例,阴性率分别为100%和96.25%。结论在检测HCV方面,FQ-PCR比ELISA更具灵敏性和特异性,其结果更加符合患者真实情况,且FQ-PCR检测HCV具有更好的临床应用价值,若两种方法同时使用,则可大大提高临床对丙型肝炎的准确诊断。     

外周血TSGF及hMAM表达指标监测乳腺癌微转移价值初探

目的探索TSGF和hMAM表达指标对乳腺癌细胞外周血微转移诊断的应用价值。方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL液提取总RNA,作RT-PCR并用-βactin监控;确认的cDNA先作普通PCR扩增,再作荧光定量PCR扩增。血清作TSGF检测。结果64例标本有63例确认转录为cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通PCR后再作荧光定量PCR,乳腺癌hMAM表达阳性率为53.3%、良性乳腺肿瘤和正常对照均无阳性,乳腺癌组与良性乳腺肿瘤或正常对照组间hMAM表达有显著差异;淋巴结转移组与未转移组,hMAM表达有显著差异。TSGF阳性率为1.6%,乳腺癌组与良性乳腺肿瘤组及正常对照组间无显著差异。结论二次PCR的灵敏度可成功检出外周血hMAM的表达,而单次PCR法的灵敏度不够;外周血hMAM表达指标可用于监测乳腺癌细胞微转移,但未见TSGF指标对乳腺癌微转移的监测价值。     

实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织中KLK4 mRNA表达

目的探讨KLK4基因在人乳腺癌组织中表达的临床意义。方法用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法检测39例乳腺癌组织和25例正常组织中KLK4 mRNA的表达,以及mRNA表达量与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB-2及肿瘤的转移情况进行相关性分析。结果正常乳腺组织和癌组织KLK4 mRNA的相对表达水平分别为0.0120±0.0044和0.0272±0.0067,两者差异显著(P<0.01);乳腺癌组织中KLK4的相对表达水平在ER( )和ER(-)组分别为0.0269±0.0070和0.0276±0.0067;在PR( )和PR(-)组分别为0.0270±0.0065和0.0275±0.0081;在CerbB-2( )和CerbB-2(-)组分别为0.0270±0.0064和0.0301±0.0074;在肿瘤有、无转移组分别为0.0258±0.0061和0.0276±0.0066,各组间KLK4mRNA表达水平均无显著性差异(P>0.05)。结论在乳腺癌组织中KLK4 mRNA的表达水平显著高于正常乳腺组织,但在肿瘤是否转移,雌激素受体、孕激素受体及CerbB-2阳性和阴性组间无显著性差异。