雌激素受体在砷致人支气管上皮细胞恶性转化中的作用研究

目的研究雌激素受体在砷致人支气管上皮细胞恶性转化中的作用。方法以2.5μM亚砷酸钠对人支气管上皮细胞株16-HBE持续染毒60代,从细胞形态、细胞周期分布和软琼脂克隆形成3个方面鉴定细胞的恶性程度。利用qPCR和Western Blot测定细胞雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA和蛋白在亚砷酸钠染毒第0、10、30和60代时的相对表达水平。结果亚砷酸钠持续染毒60代后,细胞呈现不规则形态并出现复层生长,增殖过程中的细胞处于S期和G2/M期的比例高于对照组(P0.01),细胞在软琼脂中的克隆形成数也高于对照组(P0.001)。相比于平行对照组,细胞ERα mRNA在砷染毒第10代和60代时表达升高(P0.01),ERα蛋白在30代和60代时表达升高(P0.01);细胞ERβ mRNA在砷染毒第10、30和60代时表达均升高(P0.05),ERβ蛋白在30代和60代时表达升高(P0.05)。结论砷可能通过改变人支气管上皮细胞中雌激素受体表达水平介导细胞恶性转化的形成。     

雌激素受体家族在生殖器官中的表达与功能

雌激素受体家族包括经典雌激素受体ERα及雌激素受体的新亚型ERβ,二者N末端相异,ERβ有多种异构体;在卵泡生长和成熟的调节过程中主要由ERβ介导雌激素的活性,子宫中所有主要细胞类型,ERα的表达占优势;子宫内膜中ER表达的不同与不孕无直接的关系;卵巢癌患者ERα与ERβ mRNA的比值过高(＞10%)或过低(＜1.5%)时预后较差,在子宫内膜癌的发生过程中ERα与ERβ的比值也发生了变化.     

镉对MCF-7细胞生长和雌激素受体表达影响

目的 观察镉对MCF-7人乳腺癌细胞生长和雌激素受体表达的影响.方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法筛选镉促进MCF-7细胞增殖的最佳作用时间和剂量,用流式细胞术观察细胞死亡情况,划痕实验评价细胞迁移能力,western-blot检测雌激素受体α、雌激素受体β蛋白表达,同时加入雌激素受体阻断剂氟维司群观察细胞增殖和2种雌激素受体表达的变化情况.结果 1μmol/L镉处理24 h和1nmol/L镉处理72 h对MCF-7细胞的促增殖效应最明显,增殖率(PR)分别为133％、138％;l nmol/L镉处理72 h能明显抑制MCF-7细胞死亡,死亡细胞比例为28.5％,低于对照组的44.5％(t=4.557,P ＜0.05);增强细胞迁移能力,划痕伤口愈合率为25.7％,与对照组比较差异有统计学意义(t =5.696,P＜0.05);增加雌激素受体α蛋白的表达;雌激素受体阻断剂能够抑制镉对MCF-7细胞的促增殖作用和拮抗镉对雌激素受体α蛋白表达增加的效应.结论 长时间低剂量处理镉对MCF-7乳腺癌细胞生长有促进作用并可能与激活雌激素受体α表达有关.     

砷对人正常膀胱上皮细胞NFAT2 mRNA表达的影响

用浓度为0、1、2、4、8、10μmol/L的亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞24 h和浓度为0、0.5μmol/L的亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞至40代,应用RT-PCR方法检测活化T细胞核因子(NFAT2 mRNA)的表达水平。结果显示,1μmol/L剂量组染砷24 h后NFAT2 mRNA表达水平显著高于其他浓度组(P0.05);0.5μmol/L浓度砷长期处理细胞40代后引起NFAT2 mRNA表达水平显著增高(P0.05)。提示,长期、低剂量砷处理的人正常膀胱上皮细胞NFAT2 mRNA水平增高。     

大鼠砷暴露致雌激素效应及对甲状腺功能的影响

目的 探讨大鼠砷暴露和雌激素受体(estrogen receptor α, ERα)抑制剂干预后,对雌激素及其受体和甲状腺相关激素及受体的影响,阐释砷的甲状腺毒性作用途径。 方法 大鼠亚砷酸钠饮水染毒,并给予雌激素受体抑制剂(ICI182780)干预。通过ELISA检测大鼠血清雌二醇(estradiol, E2)、总三碘甲状腺原氨酸(total triiodothyronine, TT3)、总甲状腺素(total thyroxine, TT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)水平;透射电镜观察大鼠甲状腺组织病理形态学结构改变;实时荧光定量法检测甲状腺组织ERα、甲状腺激素受体α(thyroid hormone receptor α, TRα)相对表达量。蛋白免疫印迹法检测甲状腺组织TRα蛋白水平。 结果 砷暴露后雌性大鼠E2表达水平较对照组上升(P<0.05),雌雄大鼠低砷组ERα、TRα相对表达量较对照组均下降(P<0.05)。高剂量砷暴露后雌性大鼠TSH、TT3及TRα表达水平较对照组上升,TT4较对照组下降(P<0.05)。ICI182780可降低雌性大鼠E2表达水平的上升,也对砷暴露大鼠TT4、TSH、ERα、TRα表达的改变有反向调节作用(P<0.05)。 结论 低砷暴露对雌性大鼠有明显的雌激素效应,高砷暴露可造成大鼠甲状腺功能紊乱或损伤。ERα可能是体内砷暴露发挥雌激素效应的主要途径之一。ICI182780可拮抗砷暴露导致的雌激素效应并缓解甲状腺功能的损伤。     

雌激素受体家族在生殖器官中的表达与功能

雌激素受体家族包括经典雌激素受体ERα及雌激素受体的新亚型ERβ,二者N末端相异,ERβ有多种异构体;在卵泡生长和成熟的调节过程中主要由ERβ介导雌激素的活性,子宫中所有主要细胞类型,ERα的表达占优势;子宫内膜中ER表达的不同与不孕无直接的关系;卵巢癌患者ERα与ERβ mRNA的比值过高(>10％)或过低(<1.5％)时预后较差,在子宫内膜癌的发生过程中ERα与ERβ的比值也发生了变化。     

Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用

目的 探索Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用,为砷中毒的人群防治提供依据。方法 收集贵州省兴仁县雨樟镇交乐病区砷中毒人群以及格沙屯正常人群分别作为砷中毒组和对照组,实时荧光定量PCR检测各组人群Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平。同时,分别以不同剂量亚砷酸钠、不同时间处理MIHA细胞,流式细胞术测定细胞周期改变情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平和蛋白表达情况。在上述实验基础上,针对Gadd45β和Gadd45γ基因分别设计的siRNA作用于染砷的MIHA细胞,反向验证Gadd45β和Gadd45γ基因在砷致细胞周期改变过程中的影响。统计学分析采用独立样本t检验比较两组间差异,采用单因素方差比较多组间差异。结果 人群实验研究发现,与对照组相比,砷中毒患者Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平升高（t = 2.576,P = 0.011;t = 2.312,P = 0.022）;MIHA细胞中,随亚砷酸钠染毒剂量、染毒时间增加,细胞G2/M期比例明显升高（F剂量 = 340.136,P＜0.001;F时间 = 49.194,P＜0.001）;在相对较低亚砷酸钠浓度（低于20 μmol/L）、一定时间内（低于48 h）Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA和蛋白表达水平随染砷剂量、染砷时间升高而升高,超过该浓度范围和作用时间后,出现表达下降的现象（Gadd45β:F剂量-蛋白 = 37.568,P＜0.001;F剂量- mRNA = 9.771,P＜0.001;F时间-蛋白 = 61.144,P＜0.001;F时间- mRNA = 46.366,P = 0.001;Gadd45γ:F剂量-蛋白 = 12.989,P = 0.001;F剂量- mRNA = 23.613,P＜0.001;F时间-蛋白 = 27.425,P＜0.001;F时间- mRNA = 37.969,P＜0.001）。转染siRNA分别下调Gadd45β和Gadd45γ的表达后,细胞周期都出现G2/M期比例下调（t = 3.053,P = 0.038;t = 14.47,P＜0.001）。结论 砷致Gadd45β和Gadd45γ基因表达水平升高在其诱导MIHA细胞出现G2/M期阻滞过程中发挥重要作用。     

亚砷酸钠暴露对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞雌激素受体α表达的差异研究

目的研究亚砷酸钠(Na As O2)暴露对雌雄ICR胎鼠鼠肺Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法孕期20 d的ICR胎鼠,分辨雌雄,以Ⅰ型胶原酶分离AECⅡ,以免疫黏附法和差速贴壁法纯化细胞,以免疫荧光法鉴定纯度;以0.5、1.25、5μmol/L Na As O2分别处理AECⅡ12 h和24 h;以不含Na As O2的培养基处理AECⅡ12 h和24 h作空白对照组,每组分设6个重复剂量。以实时荧光定量PCR检测各组ACEⅡ内ERαm RNA表达情况,以western blot检测各组ERα蛋白的表达情况。结果免疫荧光显示纯化后AECⅡ纯度为85%±5%;经Na As O2处理12 h,雌性AECⅡ中各剂量组ERαm RNA和中、高剂量组的蛋白表达高于同剂量组雄性(P0.05);雌性各剂量组ERαm RNA和蛋白表达均高于同性别对照组;雄性中剂量组蛋白表达高于雄性对照组。经Na As O2处理24 h,雌性低剂量组ERαm RNA表达和中、高剂量组蛋白表达高于同剂量组雄性(P0.05);雌雄各剂量组ERαm RNA和中高剂量组蛋白表达均高于各自对照组,雌雄对照组之间ERαm RNA和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠暴露可致雌性胎鼠AECⅡ内ERα表达高于雄性。     

饮水型砷暴露人群ERβ mRNA的表达及意义

目的测定不同饮水型砷暴露人群血液雌激素受体β(ERβ)mRNA表达水平,分析ERβmRNA表达水平与砷致心脏损伤的关系,进一步探讨砷的内分泌干扰效应。方法采用分子流行病学调查方法,在饮水型地方性砷中毒病区选择调查对象273人,依据饮水砷浓度分为高、中、低和对照4个剂量组,运用实时荧光定量RT-PCR技术,检测其血液ERβmRNA表达水平。结果人群ERβmRNA表达量随着饮用水砷浓度及尿砷含量的增加而上升(r分别为0.159和0.21,P0.05);随水砷浓度的增加Q-Tc间期延长患病率上升(χ2=4.35,P=0.037),各组ERβmRNA表达水平与Q-Tc间期延长患病率变化趋势一致;Tp-Te间期随水砷浓度的增加而延长(r=0.199,P=0.023),同样也随ERβmRNA表达的增加而延长(r=0.205,P=0.019);各组心律失常患病率几乎与ERβmRNA表达水平变化趋势同步。结论长期砷暴露可潜在地影响人体ERβ基因表达,砷致Q-Tc间期和Tp-Te间期延长与干扰ERβ基因表达可能有密切联系。     

雌激素受体家族在生殖器官中的表达与功能

雌激素受体家族包括经典雌激素受体ERα及雌激素受体的新亚型ERβ,二者N末端相异,ERβ有多种异构体;在卵泡生长和成熟的调节过程中主要由ERβ介导雌激素的活性,子宫中所有主要细胞类型,ERα的表达占优势;子宫内膜中ER表达的不同与不孕无直接的关系;卵巢癌患者ERα与ERβmRNA的比值过高（＞10％）或过低（＜1．5％）时预后较差,在子宫内膜癌的发生过程中ERα与ERβ的比值也发生了变化。     

二羟环氧苯并芘诱导16HBE细胞转化最佳实验方案

目的　采用客观又简单的软琼脂细胞集落形成率的指标来探索二羟环氧苯并芘诱导 16 HBE细胞转化的理想实验方案 ,构建恶性转化的细胞模型。方法　根据细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量 ,以不同剂量二羟环氧苯并芘 1次或多次处理细胞 ,观察培养的不同阶段转化灶出现情况 ,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征 ,比较各组转化细胞的集落形成率。结果　以 0 .1、0 .5、1.0、2 .0 μmol/ L的剂量 ,对细胞多次间断染毒 ,传代 15次 ,是二羟环氧苯并芘诱导 16 HBE细胞恶性转化的理想方案 ,其集落形成率分别为 2 .0‰、5 .5‰、7.0‰、10 .5‰ ,剂量 -反应关系呈现良好的直线相关 ,r=0 .9741,P<0 .0 5。结论　二羟环氧苯并芘能诱导人支气管上皮细胞 16 HBE转化 ,构建理想的恶性转化的细胞模型     

灰霾天气细颗粒物对人支气管上皮细胞凋亡的影响

[目的]探讨灰霾天气细颗粒物（PM2.5）对人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells,16-HBE）凋亡的影响。[方法]分别以8、16、32、64、128μg/mL浓度的PM2.5作用于16-HBE 24、48、72h,检测PM2.5对16-HBE细胞存活率及凋亡率的影响。[结果]染毒24、48、72h后,64、128μg/mL组细胞存活率均明显低于对照组（P〈0.05）,细胞凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;72h各浓度组细胞存活率均低于24h相应处理组（P〈0.05）,当染毒浓度大于8μg/mL时,72h各浓度组细胞总凋亡率与24h相比均明显增加（P〈0.05）。[结论]灰霾天气细颗粒物PM2.5对16-HBE具有细胞毒性,能诱导其凋亡,且具有剂量和时间反应关系。     

甲基丙烯酸环氧丙酯致人支气管上皮细胞恶性转化研究

目的 研究潜在致癌化学物甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱发人支气管上皮细胞恶性转化的作用.方法 分别采用1、2、4、8μg/ml浓度的GMA多次处理人支气管上皮细胞(16HBE),连续动态地观察细胞形态学的改变,通过刀豆凝集素A(conA)试验、软琼脂集落形成试验、电镜扫描和裸鼠体内致瘤性试验观察细胞的恶性转化表型,并运用免疫化学方法对细胞和肿瘤组织来源特性进行鉴定.试验同时设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和三甲基胆蒽(MCA)阳性对照组.结果 1～8 μg/ml浓度范围的GMA多次攻击可使16HBE细胞发生恶性转化,转化率随染毒剂量的增加而升高,其中8μg/ml染毒组的转化率(8.48×10-6)与对照组(4.5×10-7)相比差异有统计学意义(P<0.01).转化细胞失去接触抑制呈交错重叠生长并能在软琼脂上形成集落,各剂量组的集落形成率随染毒剂量的增加而升高,其中2、4、8μg/ml染毒组的集落形成率分别为1.20‰、2.35‰和5.70‰,与溶剂对照组(0.30‰)相比差异有统计学意义(P<0.01).转化细胞对conA的凝集敏感性增加,扫描电镜下细胞表面微绒毛增多、变粗、变长.将转化细胞接种于裸鼠皮下可形成肿块,经病理组织学检查诊断为鳞状上皮细胞癌.16HBE细胞和肿块组织经免疫组织化学检测角蛋白呈阳性表达.结论GMA可在体外诱发16HBE细胞发生恶性转化.     

miR - 93 - 5p抑制呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的机制研究

目的 研究miR - 93 - 5p是否通过靶向Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1A（PPM1A）基因抑制呼吸道合胞病毒（RSV）感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。方法 将人支气管上皮细胞16 - HBE分为NC组、RSV组、miR - NC+RSV组、miR - 93 - 5p + RSV组、si - NC + RSV组、si - PPM1A + RSV组、pcDNA - NC + RSV组、pcDNA - PPM1A + RSV组、miR - 93 - 5p + pcDNA - NC + RSV组、miR - 93 - 5p + pcDNA - PPM1A + RSV组,利用脂质体Lipofectamine 2000进行miR - NC、miR - 93 - 5p、si - NC、si - PPM1A、pcDNA - NC、pcDNA - PPM1A的转染,并以RSV感染细胞。应用实时荧光定量PCR检测miR - 93 - 5p和PPM1A mRNA表达,western blot测定PPM1A、Cleaved - caspase - 3蛋白表达,ELISA分析TNF - α、IL - 6和IL - 1α分泌,流式细胞仪评估细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶活性检测验证miR - 93 - 5p对PPM1A的靶向调控。结果 与NC组比较,RSV组细胞16 - HBE中miR - 93 - 5p表达量减少,PPM1A mRNA和PPM1A蛋白、Cleaved - caspase - 3蛋白表达量、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌和细胞凋亡率增加。miR - 93 - 5p + RSV组细胞16 - HBE中Cleaved - caspase - 3蛋白水平、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌和细胞凋亡率低于miR - NC + RSV组。miR - 93 - 5p靶向调控PPM1A的表达。与si - NC + RSV组比较,si - PPM1A + RSV组细胞16 - HBE中Cleaved - caspase - 3蛋白水平、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌和细胞凋亡率降低,而pcDNA - PPM1A + RSV组结果与之相反。与miR - 93 - 5p + pcDNA - NC + RSV组比较,miR - 93 - 5p + pcDNA - PPM1A + RSV组提高细胞16 - HBE的Cleaved - caspase - 3蛋白水平、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌、细胞凋亡率。上述差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 miR - 93 - 5p通过靶向PPM1A基因,抑制RSV感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。     

苯并(a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘诱发人支气管上皮细胞恶性转化

以不同浓度的苯并 (a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘 (BPDE)多次处理人支气管上皮细胞 16HBE ,并观察转化细胞的恶性特征。发现BPDE可诱导 16HBE细胞恶性转化 ,形成转化灶。转化灶细胞失去接触抑制 ,排列紊乱 ,无方向性 ,交叉重叠生长。转化的细胞可在软琼脂上生长 ,各浓度处理组细胞集落形成率均显著高于对照组 ,有良好的剂量—反应关系。经BPDE处理的细胞在裸鼠体内成瘤 ,病理学诊断为鳞状细胞癌。本实验以反式BPDE成功地诱发了人支气管上皮细胞恶性转化 ,为后期进一步研究其致癌的分子机制、寻找致癌相关基因提供了理想的生物学材料。     

NiCl2诱导人支气管上皮细胞系恶性转化的研究

目的 建立NiCl2诱导永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的模型，为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法 通过克隆形成率实验确定NiCl2诱导16HBE细胞转化浓度后，对16HBE细胞进行分阶段多次染毒，每隔20d染毒1次，每次染毒24h。染毒12次后，通过软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。结果 经NiCl2多次处理，16HBE细胞至75代时，细胞生长速度加快，排列紊乱，失去接触抑制，出现复层生长，并可在软琼脂上生长，且呈剂量一反应关系，但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内成瘤，病理组织学证实为低分化鳞状细胞癌。结论NiCl2具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力。     

雌孕激素受体在上皮性卵巢肿瘤中的表达和意义

目的:分析雌、孕激素受体(ER、PR)在上皮性卵巢肿瘤中的表达情况,探讨其与上皮性卵巢肿瘤发生、发展的关系,明确ER、PR在上皮性良、恶性卵巢肿瘤以及上皮性卵巢恶性肿瘤中不同的临床分期、病理分级、病理类型中的表达,从而对上皮性卵巢肿瘤的诊断、内分泌及基因治疗提供依据,以利于制定个体化的治疗方案。方法:对60例上皮性卵巢肿瘤患者病理切片采用免疫组化SP法测定ER、PR;采用SPSS软件χ2检验、四格表确切概率法进行统计学处理。结果:①在上皮性卵巢良性肿瘤(22例)中ER阳性率27.27,PR阳性率22.72,阳性率较低;在上皮性卵巢恶性肿瘤(38例)中的阳性率较高(ER76.32、PR71.05),两者比较,χ2=13.79、χ2=13.07,P<0.01,均有显著性差异。②在上皮性卵巢恶性肿瘤中不同临床分期ER、PR的表达不同,随着临床期别的上升ER、PR的阳性率呈下降趋势。早(Ⅰ、Ⅱ)、晚(Ⅲ、Ⅳ)期比较,四格表确切概率法P>0.05,无显著性差异。③在上皮性卵巢恶性肿瘤中ER、PR在不同的病理分级中的阳性表达率不同,在高分化组的阳性率最高,在低分化组阳性率最低,P>0.05,无统计学意义。④在上皮性卵巢恶性肿瘤中不同病理类型的ER、PR表达不同,浆液性(21例)与粘液性(15例)肿瘤均呈高表达,但无显著性差异,P>0.05。结论:①ER、PR的阳性表达在上皮性卵巢良、恶性肿瘤之间有显著性差异。在上皮性良性肿瘤中呈低表达,而在上皮性恶性肿瘤中呈高表达。②ER、PR阳性表达在上皮性卵巢恶性肿瘤不同的临床分期、病理分级、病理类型中的表达不同,但无显著性差异。③临床工作中通过对它们的评价制定个体化治疗方案,指导治疗、判断预后。     

氟化钠与纳米二氧化钛对人支气管上皮细胞的联合作用

[目的]探讨氟化钠（NaF）与纳米二氧化钛（nano-TiO2）单独及联合染毒对人支气管上皮细胞株（16-HBE）氧化应激及细胞凋亡的作用。[方法]对生长状态良好的16-HBE细胞,单独及混合加入NaF（mg／L,F^-）和nano-TiO2（mg／L）染毒,终浓度分别为：（0．0,0．0）,（10．0,0．0）,（20．0,0．0）,（30．0,0．0）,（0．0,10．0）,（10．0,10．0）,（20．0,10．0）,（30．0,10．0）。72h后,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测16-HBE的存活率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,黄嘌呤氧化酶法测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）,硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）;硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）。[结果]30．0mg／LNaF（以F^-计）单独染毒组及各联合染毒组的16-HBE存活率均较对照组降低（P〈0．05）。30．0mg／LNaF（以F^-计）和10．0mg／Lnano-TiO2联合染毒组的T-SOD低于对照组（P〈0．05）;各联合染毒组的MDA均高于对照组（P〈0．05）;各染毒组NO均高于对照组（P〈0．05）.经单因素方差分析,NaF及nano-TiO2联合染毒对MDA和NO有交互作用（P〈0．05）。20．0、30．0mg／LNaF（以F^-计）的单独染氟组及各联合染毒组的16-HBE细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05）,未发现NaF和nano-TiO2对16-HBE细胞凋亡存在交互作用。单独染氟或氟联合nano-TiO2染毒：氟与T-SOD呈负相关（P〈0．01）;氟与MDA、NO、细胞凋亡率呈正相关（P〈0．05或0．01）。[结论]NaF与nano-TiO2联合染毒可能增大对16-HBE的氧化损伤作用;随着氟浓度增高,16-HBE氧化应激水平及细胞凋亡均加重。     

支气管哮喘患者气道黏膜中肥大细胞雌激素受体表达变化的研究

目的探讨雌激素受体在女性支气管哮喘患者气道黏膜肥大细胞中表达水平的变化。方法12例女性支气管哮喘患者和9例对照亚急性或慢性咳嗽女性患者,经纤维支气管镜取3级支气管黏膜组织,采用抗人肥大细胞类胰酶单克隆抗体标记肥大细胞,抗人雌激素受体（ER）单克隆抗体检测ER的表达,同时采用双标免疫染色对ER在肥大细胞中的表达进行定位分析。结果女性支气管哮喘患者气道黏膜中肥大细胞和雌激素受体阳性细胞数明显高于对照组（P〈0．01）,雌激素受体阳性细胞在形态学上与肥大细胞相似;而且雌激素受体阳性细胞与肥大细胞的位置相吻合。结论提示雌激素可能通过气道黏膜中的肥大细胞雌激素受体表达的变化参与了女性患者哮喘发病机制中的作用过程。     

硫酸镍对永生化人支气管上皮细胞系的恶性转化研究

目的 建立硫酸镍(NiSO4)对永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)的恶性转化模型，为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法 通过克隆形成率实验确定NiSO4对16HBE细胞转化浓度后，对16HBE细胞进行分阶段多次染毒：每隔20d染毒一次，每次染毒24h。染毒12次后，通过软琼脂集落形成实验和棵鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果 经NiSO4多次处理16HBE细胞至75代时，细胞生长速度加快，排列紊乱，失去接触抑制，出现复层生长，并可在软琼脂上生长，且呈剂量反应关系，但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤，病理组织学证实为低分化鳞状细胞瘤。结论 NiSO4具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力。