乙型肝炎病毒感染者血清抗核抗体检测分析及临床意义

目的检测乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中抗核抗体(ANA)的阳性率并探讨其临床意义。方法采用间接免疫荧光法(IIF)检测120例HBV感染者、82名正常对照者的ANA。结果 120例HBV感染者中ANA阳性率为30.0%,明显高于正常对照组(4.2%);HBV感染组的ANA以低滴度(1∶100)为主,占58.3%;ANA荧光模式以颗粒型(41.7%)最为常见。结论 HBV感染可诱导以低滴度为主的ANA,其在诊断、鉴别诊断及治疗中有一定的意义,发病机制可能与自身免疫有关。     

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验对比检测抗核抗体

50年来,人们对抗核抗体(ANA)的认识不断加深.ANA的现代定义是指细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称,ANA特异性靶抗原逐一被发现并得到纯化.从1957年Holbborow等首先以啮齿动物组织冰冻切片为抗原底物,应用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA以来,许多研究者对ANA检测方法进行了大量研究.目前除了IIF以外,还有酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法、快速胶乳颗粒试剂法等.用IIF检测ANA敏感性高、特异性强,以往临床常规检测ANA一般用免疫荧光法作为筛选试验,但采用的底物不同则结果有差异.常用的两种底物有人喉癌上皮细胞(Hep-2)与鼠肝细胞,目前国内外大多以Hep-2为底物的IIF检测ANA[1].该方法被称为“金标准“,但该方法操作较复杂,读片人要有一定经验.因此,有些单位采用以提取抗原和基因重组抗原为底物的ELISA检测ANA.但是,根据2003年我国48家医院自身抗体检测的质控总结,ANA正确率仅为47%[2],专家提出,自身抗体检测的质控势在必行[3].为比较IIF与ELISA检测ANA的异同,作者对本院80例血清标本同时进行这两种方法检测,报告如下.……     

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析.方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18 U/mL为阳性,12 ～ 18U/mL为可疑,≤12 U/mL为阴性.结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%.经卡方检验 P ＜ 0.01.其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499.结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法.同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性.     

抗核抗体核型与抗核抗体谱检测结果对比分析

目的：分析本实验室抗核抗体（ANA）与抗核抗体谱（ANAs）17项联合检测的情况,并探讨两者之间的相关性。方法分别用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测患者 ANA 和 ANAs,判断其 ANA 核型和 ANAs 结果,并对各荧光核型和各种特异性抗核抗体结果进行统计分析。结果340例 ANA 阳性患者标本中,颗粒型214例,着丝点型51例,胞浆颗粒型28例,核仁型25例,均质型17例,周边型5例,颗粒型是检出的主要核型。ANAs 17项抗体阳性率为82．94％。214例荧光颗粒型标本中,常见的抗体为抗 SSA/Ro52kd（31．78％）、抗 SSA/Ro60k（d30．84％）和抗 SSB/La（19．16％）抗体;17例荧光均质型标本中,常见的抗体为抗核小体（47．06％）和抗组蛋白（41．18％）抗体;抗 CenpB 对着丝点核型的诊断具有较高的特异性,阳性率为92．16％（47/51）。结论不同荧光核型的 ANA 与 ANAs 抗体之间有一定的关系,但并无绝对的规律可寻,两种 ANA 的检测方法,间接免疫荧光法和免疫印迹法联合应用,有助于自身免疫性疾病（AID）的诊断和预后观察。     

2513例抗核抗体与抗核抗体谱检测结果对比分析

目的分析本实验室抗核抗体(ANA)与抗核抗体谱(ANAs)15项联合检测的结果,并探讨两者之间的关系。方法分别用间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(IBT)检测患者ANA和ANAs,判断其ANA滴度、荧光模型和ANAs结果,并对ANA和ANAs检测结果进行对比分析。结果 471例ANA阳性患者标本中,颗粒型161例,均质型110例,胞质型96例、核仁型37例、着丝点型28例,其他型合计39例;滴度为1∶100者196例,占41.61%(196/471),其中ANAs阳性53例,占27.04%(53/196);滴度为1∶320者123例,占26.11%(123/471),其中ANAs阳性67例,占54.47%(67/123);滴度为1∶1 000者152例,占32.27%(152/471),其中ANAs阳性132例,占86.84%(132/152);2 042例ANA阴性标本中45例ANAs检测阳性,阳性率为2.2%(45/2042);高滴度ANA患者血清中ANAs的阳性率高于低滴度(χ2=123.132,P0.05)。结论不同滴度的ANA与ANAs之间有一定的关系,如果以ANA进行过筛,阳性再做ANAs会漏检部分患者,建议IIF和IBT联合应用,防止风湿病的漏诊。     

抗核抗体核型检测与特异性抗核抗体谱检测的对比分析

目的：探讨抗核抗体核型与特异性抗核抗体谱的相关性。方法回顾分析本院检验科检测的974例抗核抗体结果,分别用间接免疫荧光法（IIF）检测抗核抗体核型,用条带酶免分析法（LIA）检测特异性抗核抗体谱,分析199例 IIF 与 LIA 同时阳性的结果,比较抗核抗体核型与特异性抗核抗体谱的相关性。结果974例标本中 IIF 阳性249例（阳性率25．6％）,LIA 阳性237例（阳性率24．3％）,两种方法检测阳性率差异无统计学意义（P ＞0．05）,IIF 与 LIA 单项或两项阳性287例（29．5％）,高于IIF 或 LIA 单项检测阳性率,差异有统计学意义（P ＜0．05）。249例 IIF 阳性中 LIA 阳性199例（79．9％）,725例 IIF 阴性中 LIA阴性687例（94．8％）。核颗粒型多见抗 Ro-52抗体,胞浆颗粒型多见抗线粒体 M2抗体,核均质型以抗 dsDNA 抗体、抗核小体抗体多见,着丝点型多见抗着丝点抗体,核仁型多见抗 PM-Scl 抗体。结论IIF-ANA 与 LIA-ANA 有较好的相关性,但也有一定差异,两者联合检测能降低漏检率,对自身免疫性疾病的诊断、病情监测及预后判断有重要意义。     

HEP-2细胞为靶细胞的ELISA检测血清抗核抗体

以ＨＥＰ－２细胞株为靶细胞包被塑料微孔扳，运用ＨＲＰ羊抗入ＩｇＧ为二抗对８例活动期ＳＬＥ，１例混合结缔组织病（ＭＣＴＤ），８例类风湿性关节炎，７例风湿性关节炎和３０例健康者做了血清抗核抗体的的ＥＬＩＳＡ检测，同时以间接免疫荧光法作对照。并对高滴度阳性血清作了稀释度与吸光度值的直线回归分析。结果表明，ＥＬＩＳＡ检测血清抗核抗体特异性为９８．５％，敏感性为１００％，值得推广应用     

间接免疫荧光法与化学发光法检测抗核抗体的对比分析

目的 探讨间接免疫荧光法(IIFA)和化学发光法(CMIA)检测抗核抗体(ANA)的异同.方法 确诊为自身免疫性疾病患者血清240例,同时采用IIFA法和CMIA法检测ANA.对两种方法检测结果不符者采用欧蒙印迹法复查抗核抗体谱.结果 IIFA法与CMIA法检测240例ANA阳性率分别为90.83%和78.75%,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法的符合率为77.92%;在53例两种方法检测结果不一致的标本中,41例IIFA(+)CMIA(-)患者抗核抗体谱阳性率仅为14.63%;而12例IIFA(-)CMIA(+)患者抗核抗体谱阳性率高达66.67%,差异有统计学意义(P<0.05);IIFA不同荧光核型中,"其他型" 在两种方法检测符合率方面低于颗粒型、胞浆型、均质型核型(P<0.05).结论 CMIA法检测总ANA的敏感度低于IIFA法,而CMIA法的特异度优于IIFA法,因此将IIFA法作为ANA的筛查方法,再结合CMIA法检测,可在获得荧光核型信息观察抗体滴度的同时,进一步对ANA进行定量.而且应用两种不同方法学原理的实验互相佐证,还可以减少实验误差,提高检测的准确度.     

应用流式细胞术检测抗核抗体

目的建立流式细胞术(flow cytom etry,FCM)检测抗核抗体(an tinuclear an tibody,ANA)的方法。方法收集经间接免疫荧光法(ind irect imm unofluorescen t assay,IIF)测定的55例血清标本作为检测对象,36例健康体检者血清作为阴性对照,采用提取的H e la细胞核作为靶抗原,对所有血清标本进行FCM分析。结果将阳性细胞百分率大于12%的标本定为ANA阳性。IFA和FCM两种方法阴性和阳性的总符合率为92.7%(51/55),FCM测定值随着ANA滴度的增高而增高,并大部分集中于某一个范围。结论FCM分析法具有省时、客观、可定量分析的特点,是ANA检测的一种新方法。     

两种量子点标记用于抗核抗体检测的对比研究与评价

目的对比研究两种不同粒径量子点(QDs)标记抗体在抗核抗体(ANA)检测中的成像效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655和QD605标记第二抗体(二抗),用间接免疫荧光分析(IIFA)检测114例自身免疫病患者和30例健康对照者血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗为对照。单特异性ANA用免疫印迹法(IBT)确认。比较和评价各法应用效果。结果经对114例患者血清研究发现,两种QD标记二抗均可见与FITC标记二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,但ANA滴度略显不同,对核颗粒型与胞浆颗粒型ANA测定灵敏度以QD655为最高,QD605次之,FITC标记二抗相对较弱。而对核均质型、核仁型与核着丝点型ANA测定灵敏度高低依次为FITC、QD655和QD605标记二抗。相关分析结果显示,两种QD与FITC标记物检测ANA滴度结果均呈高度正相关,r值分别为0.834、0.832(P均<0.01)。两种QD标记二抗对核颗粒型、胞浆颗粒型荧光模式与FITC标记二抗检测结果阳性符合率均为100%;而核均质型与核仁型检测,阳性结果符合率为80.6%～84.4%。30例用FITC标记二抗检测ANA阴性血清中,两种QD标记二抗检测均见1例ANA阳性。两种QD与FITC标记物检测ANA总符合率均超过90.0%,有高度的一致性(Kappa值均>0.75)。结论 QD655和QD605标记二抗用于ANA检测总体结果稳定、灵敏、可行;QDs粒径越大其标记二抗测定ANA灵敏度越高,但对某些低滴度免疫荧光核型(包括核均质型、核仁型与核着丝点型)ANA有漏检可能。     

间接免疫荧光法及免疫印迹法检测抗核抗体在SLE中的临床价值

目的研究间接免疫荧光法(IIF)筛查的抗核抗体(ANA)和免疫印迹法(IBT)检测的特异性ANA谱在系统性红斑狼疮(SLE)患者的相关性和临床意义。方法对80例SLE患者(SLE组)、80例其他风湿病患者(疾病对照组)及80例健康体检者(健康对照组)分别采用IIF、IBT检测血清中的ANA。结果 SLE组ANA阳性率(96.25%)显著高于疾病对照组(32.50%)和健康对照组(5.00%),差异有统计学意义(P0.05);SLE组荧光模式主要是颗粒型(43例,53.75%)、均质型(16例,20.00%)、胞浆颗粒型(14例,17.50%)。SLE组ANA的阳性率为97.5%,其中抗nRNP/Sm抗体、抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体、抗Rib-P抗体阳性率均显著高于疾病对照组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 ANA和ANA谱联合检测对SLE的诊断及治疗具有重要意义。     

2325例患者抗核抗体核型与抗核抗体谱检测结果分析

目的探讨抗核抗体(ANA)核型与抗核抗体谱(ANAs)检测的临床应用价值。方法分别采用间接免疫荧光法(IIF)和线性免疫印迹法(LIA)对2 325例自身免疫性疾病(AID)确诊及疑似患者ANA和ANAs进行检测,分析ANA核型和ANAs检测结果。结果 2 325例患者中,检出ANA阳性896例,阳性率为38.54%,女性患者阳性率(45.46%)高于男性患者(18.46%,P0.05),常见荧光核型为核颗粒型、核均质型、核仁型;检出ANAs阳性816例,阳性率为35.10%,阳性率较高的分别为抗干燥综合征(SS)-B抗体、抗Ro-52抗体、抗SS-A抗体等。两种方法检测结果一致率为91.66%。结论 IIF法ANA检测结果和LIA法ANAs检测结果具有一定的相关性,但并不完全一致;二者联合检测具有互补性,可提高检出率,避免漏诊。     

吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶诱导K562细胞凋亡机制的探讨

为探讨吲哚乙酸（indole-3-acetic acid IAA）和辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase HRP）共同作用诱导k562细胞凋亡的可能机制,应用MTT法和DNA末端标记法（TUNEL）分别检测IAA/HRP对k562细胞增殖及诱导k562细胞凋亡的影响;用化学方法检测了不同IAA浓度结合HRP作用下细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量的变化;应用DCFH-DA探针通过共聚焦显微镜检测药物作用下细胞内自由基的产生情况.研究结果表明：MTT和TUNEL显示IAA/HRP能明显抑制K562细胞的增殖,诱导K562细胞凋亡,其诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关（r=0.971,P＜0.01）,且随IAA浓度的增加,细胞内SOD活力、MDA量也随之升高;DCFH-DA探针检测表明,胞内自由基水平的荧光强度也随IAA浓度的增加而呈明显上升趋势.结论：IAA结合HRP能抑制K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能与IAA/HRP作用下K562细胞内自由基的产生增加有关.     

Comparison of ANA endpoint dilution using the PolyTiter immunofluorescent titration system and conventional serial dilution

The PolyTiter immunofluorescent titration system (PolyTiter system), an attachment for conventional fluorescent microscopes, facilitates immunofluorescent antinuclear antibody (IFA-ANA) testing by using calibrated light attenuation to determine the semiquantitative endpoint dilution or titer of ANA-positive specimens. The objective of this study was to compare the determination of ANA titer using the PolyTiter system to that of the conventional serial dilution method. A total of 172 consecutive ANA-IFA positive serum specimens, including the four most common pattern types, were evaluated in parallel by two readers to determine the dilution endpoint. The two methods produced equal dilution endpoints in 78 specimens (45%), within 1-dilution endpoint in 121 specimens (70%), and within 2-dilutions endpoint in 158 specimens (92%). The conventional method consistently produced a more conservative dilution endpoint than the PolyTiter system for three of the four patterns evaluated (i.e., centromere, nucleolar, and speckled vs. homogeneous). The PolyTiter system demonstrated satisfactory performance in comparison to the current standard for determining ANA dilution endpoints, while significantly reducing operator labor, time, and materials usage.     

复发性流产患者甲状腺抗过氧化物酶抗体和抗心磷脂抗体阳性对受孕能力及早期妊娠结局的影响

目的:探讨复发性流产(RSA)患者甲状腺抗过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗心磷脂抗体(ACA)对受孕能力、早期妊娠结局的影响。方法:以2010年7月至2013年2月非妊娠RSA患者183例为研究对象,根据首诊时检测的ACA和TPOAb阳性情况分为ACA阳性组(组I,n=75)、ACA和TPOAb均阳性组(组Ⅱ,n=27)、TPOAb阳性组(组Ⅲ,n=81),比较1年内三组受孕能力及早期妊娠结局。结果:组l的自然妊娠率和早期妊娠成功率均显著高于组Ⅱ和组Ⅲ(P均0.001)。结论:在ACA阳性RSA患者中,常并存TPOAb阳性,且与受孕能力下降、自然流产存在明显关系,建议对RSA患者常规行甲状腺自身抗体检测。     

间接免疫荧光检测系统性红斑狼疮患者血清抗巨核细胞抗体

本研究通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗巨核细胞抗体,以探讨SLE患者发生血小板减少的发病机制。应用间接免疫荧光法检测36例SLE伴血小板减少患者中的血清抗巨核细胞抗体,并与30例血小板正常的SLE患者和30名正常人对照。结果表明,血清抗巨核细胞抗体阳性在36例SLE伴血小板减少患者中占7例(19.4%),在30例血小板计数正常的SLE患者中有2例(6.7%),及在正常人中有1例(3.3%),后者与SLE伴患者血小板减少患者相比,差异有统计学意义p=0.046),但伴有或不伴有血小板减少的SLE患者之间差异无统计学意义(p=0.132)。结论 :SLE患者血清存在抗巨核细胞的自身抗体,并与部分患者发生血小板减少有关,应扩大病例数作出肯定结论 ,进一步了解SLE所致血小板减少的机理。     

不同单克隆抗体检测封闭抗体的结果比较

目的 比较不同厂家单克隆抗体检测封闭抗体的结果差异.方法 使用BD公司及贝克曼-库尔特(BC)公司的复合CD4/CD8/CD3三色荧光抗体,对30例反复自然流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)患者进行流式细胞术封闭抗体(Blocking antibody,BA)检测,用kappa系数评价两种抗体检测结果的一致性,用McNemar检验比较两种抗体的差异及其对临床决策的影响.结果 经McNemar检验,当以BA单项阴性为需要接受主动免疫治疗的标准,则两组差异有统计学意义(P＜0.05);若以BA双项阴性为需要治疗的标准,则两组差异无统计学意义(P＞0.05);两种抗体检测结果一致性较差,kappa系数=0.2.结论 两种单克隆抗体检测封闭抗体的结果存在差异,实验室应明确使用抗体的厂家,尤其是对同一患者治疗前后检测封闭抗体变化时应使用相同厂家的抗体.     

EB病毒EA/IgA抗体定量检测在鼻咽癌血清学诊断中的意义

目的采用酶联免疫吸附法(EL ISA)定量测定EB病毒抗早期抗原的IgA水平(EA/IgA)在鼻咽癌血清学诊断中的临床价值。方法用EL ISA法定量检测血清EB病毒EA/IgA水平,其中鼻咽癌134例,头颈部其它恶性肿瘤56例,鼻咽部非癌疾病47例,健康对照组50例。结果被检血清中鼻咽癌组EA/IgA检测结果阳性率50%,平均值x-=53.27u/m l,特异性100%,健康对照组检测结果平均值x-=3.50u/m l。结论EB病毒EA/IgA抗体定量检测对鼻咽癌具有高度的特异性(100%),是一项较好的临床诊断辅助指标。