补肝肾益气血方对60^Cγ射线所致小鼠骨髓损伤p53、p21^WARF1、caspase-3、CD34蛋白表达的影响

目的：探讨补肝肾益气血方对辐射损伤的防护作用及其机理。方法：设正常对照组、病理模型组、补肝肾益气血方高、低剂量组、阳性药物组5组。补肝肾益气血组给予补肝肾益气血方，阳性药物组给予复方阿胶浆，其余给予生理盐水。灌胃10天后，以60^Coγ射线全身照射小鼠造成辐射损伤，运用免疫组化法观察补肝肾益气血方对辐照小鼠骨髓p53、p21…WAF1、caspase-3、CD34等蛋白表达的影响。结果：该方能抑制受照鼠骨髓有核细胞p53基因突变，降低p53蛋白表达，促进p21…WAF1表达，显著降低Caspase-3表达，增加CD34表达。结论：补肝肾益气血方对60^Coγ射线所致小鼠骨髓损伤有较好保护作用，其作用机理主要为能促进受损骨髓造血机能恢复和改善造血微环境。     

补肝肾益气血方抗辐射损伤的实验研究

目的 :探讨补肝肾益气血方对辐射损伤的防护作用及其机理。方法 :以60 Coγ射线全身照射小鼠造成辐射损伤 ,观察补肝肾益气血方对辐照小鼠外周血常规、骨髓有核细胞数、外周血SOD和GSH·Px活性以及部分免疫功能、血浆和骨髓cAMP含量等的影响。结果 :补肝肾益气血方能升高受照鼠外周血白细胞、网织红细胞和Hb ,可在一定程度上减缓血小板的下降 ;能一定程度升高受照鼠SOD活性 ,显著升高GSH·Px ,使受照小鼠胸腺、脾脏重量均有一定回升 ;明显提高血浆和骨髓组织cAMP含量。结论 :补肝肾益气血方对60 Coγ射线所致小鼠辐射损伤有较好保护作用。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

补肾增效液对辐射损伤小鼠脾组织p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤小鼠p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响。方法:设正常对照组、模型组、中药高、中、低剂量组和阳性药组,共灌胃8天。灌胃7天后,除正常对照组外,其余各组以~(60)Coγ射线照射小鼠造成辐射损伤。造模1天后取脾检测。p53 mRNA表达的检测采用原位杂交法;Caspase-3蛋白表达检测采用免疫组化法。结果:运用病理图像分析系统分析,各用药组均能上调辐射后小鼠脾组织p53 mRNA的表达,且与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01);各用药组能下调Caspase-3蛋白表达,其中,阳性药组、高剂量组和中剂量组与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01)。结论:补肾增效液通过调控与DNA损伤密切相关的p53基因及相关Caspase-3蛋白的表达而促进辐射损伤的修复。     

补肾益髓对辐射损伤小鼠造血功能的影响——对辐射小鼠外周血相影响的研究

目的:探讨补肾益髓方药(益髓生血颗粒)对辐射损伤致小鼠肾虚髓损模型的治疗作用.方法:采用60Co γ射线3.5Gy全身一次性照射,造成小鼠骨髓造血抑制、外周血象有形成分减少,致小鼠肾虚髓损.用益髓生血颗粒高、中、低剂量(含生药23.6,11.8,5.9g·kg-1,ig)照射前预防给药2d,造模后再连续给药14 d.在照射前、照射后1,3,5,7,11,13,15,17,21 d检测外周血象.结果:与模型组比较,阳性药粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在造模后1-17 d白细胞数显著升高(P＜0.05,P＜0.01);益髓生血颗粒各剂量组均能升高白细胞,高、中、低剂量组分别在造模后1,5,7,13,17 d,促进白细胞致升高(P ＜0.05或P＜0.01);照射后各组的红细胞、血红蛋白均有一定程度的下降,G-CSF和益髓生血颗粒各剂量组红细胞数在15,17d高于模型组(P＜0.05或P＜0.01);模型组血小板计数在照后5d开始下降,照后7d达最低值,此后缓慢回升,而用药组动物从照射后5d起较模型组恢复快,其中高剂量组在5,11,13d、中剂量在13 d明显高于模型组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论:益髓生血颗粒各剂量组均能显著升高辐射损伤致小鼠外周血白细胞数,能促进辐射损伤小鼠外周血红细胞、血红蛋白的恢复,促进照射小鼠外周血血小板数的回升,补肾益髓方药具有补肾填精保护骨髓促进造血作用.     

大黄素补骨脂素对辐射损伤小鼠造血功能的影响

目的通过观察大黄素、补骨脂素对辐射损伤模型小鼠的外周血有形成分、造血干/祖细胞和CD34+细胞表达的影响,探讨益髓生血颗粒治疗地中海贫血的药效物质基础。方法采用60Coγ射线3.5 Gy全身一次性照射,造成小鼠骨髓造血抑制、外周血象有形成分减少,致小鼠肾虚髓损。照射前大黄素、补骨脂素(60mg·kg-1,ig)预防给药2 d,造模后再连续给药14 d。在照射前及照射后的1,3,5,7,11,13,15,17,21 d检测外周血象;并在照后7d分别进行骨髓造血干/祖细胞集落培养(CFU-GM,CFU-E,BFU-E,CFU-Meg)及CD34+细胞检测。结果与照射对照组比较,从造模后第5天开始,G-CSF、大黄素、补骨脂素均表现出明显的促白细胞和血红蛋白升高的作用,但对红细胞均无明显的作用;在照射后7天,G-CSF、大黄素、补骨脂素均表现出显著促进CFU-GM,CFU-E的增殖的作用(P0.001),而对CFU-GM,CFU-E均表现出轻微的抑制作用;此外,三组药物对照射后7 d的小鼠骨髓CD34+细胞均有促进增殖的作用,其中G-CSF(P0.01)和大黄素(P0.05)的作用具有统计学意义。结论大黄素、补骨脂素可一定程度的提高照射损伤小鼠外周血白细胞和血红蛋白的含量,可提高照射后小鼠骨髓造血干/祖细胞及骨髓CD34+细胞的增殖。研究结果提示,大黄素、补骨脂素是益髓生血颗粒的部分有效活性组分,具有提高小鼠造血功能的作用。     

“脾为气血生化之源”生血、统血机制的实验研究

目的:以造血干细胞因子对红系造血系统调节的角度,探讨"脾胃气血生化之源"生血、统血的作用及机制。方法:采用经典的复合因素造模法建立脾气虚证小鼠模型和采用苯皮下注射造模法建立再障贫血模型,运用血细胞计数板镜下计数外周全血细胞数,运用直接免疫荧光标记法检测骨髓CD34+及ELISA法检测血清SCF含量。结果:3组相比较,两模型组小鼠外周血象均明显下降,骨髓CD34+与血清SCF的含量也明显降低;脾气虚证模型组与再障贫血组相比较,再障贫血组小鼠骨髓CD34+与血清SCF的含量的降低程度低于脾气虚证模型组小鼠。结论:脾气虚证小鼠骨髓CD34+与血清SCF的含量明显降低,为脾为气血生化之源提供了现代生物学依据。     

柴胡生血方和逍遥散对辐照后骨髓抑制小鼠造血的影响

目的:研究柴胡生血方和逍遥散促进骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用。方法:方采用60Co-γ射线一次性全身照射小鼠制作骨髓抑制模型,观察柴胡生血方和逍遥散对小鼠外周血象,血清EPO、TPO、GM-CSF,骨髓CD34+等方面的影响。结果:与模型组比较,两方均能不同程度的提高外周血象;两方均能有效调控TPO、EPO、GM-CSF水平,但柴胡生血方的调控作用较逍遥散组更明显;两方均能不同程度提高骨髓CD34+的含量,但逍遥散的提升作用更显著。结论:柴胡生血方和逍遥散均促进辐照后骨髓抑制小鼠造血功能的恢复。     

益髓理血饮对二甲基苯蒽诱导骨髓增生异常综合征模型大鼠骨髓病态造血的影响及机制

目的:探讨中药复方益髓理血饮对二甲基苯蒽(DMBA)诱导的骨髓增生异常综合征(MDS)模型大鼠骨髓病态造血的改善作用及其机制。方法:将清洁级雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、复方皂矾丸阳性组及益髓理血饮低、高剂量组,每组12只。用DMBA诱导建立大鼠MDS模型,于造模第14天开始分组给药,连续30 d。给药后第31天处死各组大鼠,检测各组大鼠骨髓增生程度、病态造血,血清IL-3、TNF-α含量,股骨CD34表达及原始细胞所占比。结果:与正常对照组比较,模型组骨髓增生程度和骨髓病态造血明显,各给药组骨髓增生和病态造血明显改善;模型组血清IL-3含量显著降低(P0.01),TNF-α含量显著升高(P0.01),治疗后各给药组IL-3含量显著升高(P0.05),TNF-α含量降低(P0.05);模型组股骨CD34及髓CD45阳性表达(P0.01),治疗后股骨CD34表达和原始细胞比例均显著降低(P0.05)。以上改善均以高剂量组最为明显。结论:益髓理血饮治疗骨髓增生异常综合征能改善骨髓增生程度和病态造血,升高血清IL-3含量,降低血清TNF-α含量,减少股骨CD34阳性表达,降低股骨原始细胞比例。     

从p38MAPK通路探讨复方参鹿颗粒对较低危MDS骨髓患者CD34+细胞凋亡的影响

目的:从p38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路研究复方参鹿颗粒(FSG)对较低危骨髓增生异常综合征(lower-risk MDS)骨髓CD34~+细胞凋亡的影响。方法:将60例lower-risk MDS患者随机分为FSG组和安特尔治疗组,每组30例。干预3个月。观察治疗前后两组患者血常规、骨髓CD34~+细胞凋亡率、骨髓单个核细胞(BMMNC)磷酸化p38(p-p38),p38,丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)3/6,磷酸化p53(p-p53),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2家族相关基因(Bcl-xl)蛋白以及p38 mRNA表达的变化。对照组7例为年龄匹配的非MDS引起的血细胞减少患者。结果:与治疗前比较,FSG组治疗后红细胞计数、血红蛋白量、血小板明显上升(P0.05,P0.01);安特尔组治疗后血红蛋白量有上升趋势,白细胞、红细胞、血小板计数差异无统计学意义。与对照组比较,治疗前FSG组lower-risk MDS骨髓CD34~+细胞凋亡率,p-p38,MKK3/6,p-p53蛋白表达增加,Bcl-xl蛋白表达降低(P0.05,P0.01),p38,Bcl-2蛋白和p38 mRNA表达无差异;FSG治疗后,CD34~+细胞凋亡率,p-p38,MKK3/6,p-p53蛋白表达均降低(P0.05),但p-p38蛋白表达仍高于对照组(P0.05),Bcl-xl蛋白表达增高(P0.05)。安特尔组治疗前后CD34~+细胞凋亡率,p-p38,MKK3/6,p-p53,Bcl-xl蛋白表达差异均无统计学意义。对照组,lowerrisk MDS患者治疗前骨髓p-p38蛋白表达和CD34~+细胞凋亡率呈正相关(P0.01)。FSG组治疗后骨髓CD34~+细胞凋亡率下降与p-p38蛋白表达水平下降呈正相关(P0.01)。结论:FSG通过调控p38MAPK通路抑制骨髓CD34~+细胞凋亡,改善骨髓无效造血。     

补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓CD_(34)~+和细胞因子表达的影响

目的:观察和比较补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血生长因子SCF mRNA、GM-CSF mRNA表达和骨髓CD34+的影响。方法:建立再障小鼠模型,各组小鼠分别胃饲生理盐水、补肾化痰活血中药、康力龙和再障生血片,连续喂养14天后,采集骨髓进行单个核细胞培养,应用流式细胞术检测骨髓CD3+4抗原水平;应用RT-PCR方法检测SCFmRNA、GM-CSF mRNA表达水平。结果:①模型组骨髓CD3+4抗原检测结果显著低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓CD3+4抗原水平明显提高,差异有显著性。②模型组骨髓造血生长因子SCF mRNA、GM-CSF mRNA表达水平均低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓造血生长因子表达水平均明显提高,差异均有显著性。结论:补肾化痰活血方可能通过增强再障小鼠骨髓造血生长因子GM-CSFmRNA、SCFmRNA表达水平,刺激造血细胞分化成熟,达到调控骨髓造血的目的。     

益髓解毒方对 MDS-RA 骨髓培养体系 IL-3、IFN-γ的影响

探讨益髓解毒方对骨髓增生异常综合征难治性贫血(MDS-RA)造血刺激因子和造血抑制因子的影响.通过 Iscove's 液体培养体系培养,观察 MDS-RA 患者骨髓单个核细胞经益髓解毒方不同剂量作用后,培养体系上清液造血刺激因子 IL-3和造血抑制因子 IFN-γ变化.结果:益髓解毒方大剂量组对 IL-3 和 IFN-γ均有促进作用.提示:益髓解毒方有促进造血刺激因子和造血抑制因子恢复动态平衡的良性趋向作用.     

补肾增效液对60Coγ射线小鼠脾淋巴细胞DNA损伤的影响

目的探讨以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤的防护作用.方法设正常对照组、病理模型组、阳性药物组、中药大、中、小剂量组共6组.灌胃8天,于给药7天后造模,以60Co γ射线全身照射小鼠造成辐射损伤,采用脾细胞DNA提取及凝胶电泳方法,观察中药对辐照小鼠脾淋巴细胞DNA损伤及凋亡的影响.结果补肾增效液能降低脾淋巴细胞DNA裂解率.各用药组脾淋巴细胞DNA的裂解率与病理模型组比较,阳性药物组和中药小剂量组差异极显著(P＜0.01),中药大剂量、中剂量组与之比较差异显著(P＜0.05).结论补肾增效液能较好地抑制60Co γ射线所致小鼠脾淋巴细胞凋亡,对辐射损伤有良好保护作用.     

扶正抗癌汤对肝癌小鼠突变型p53基因和巨噬细胞CD_(68)表达的影响

目的:通过实验研究扶正抗癌汤对H22模型小鼠的抑瘤率、突变型p53基因及巨噬细胞CD68的影响,探讨其抑瘤率,提高机体免疫功能的机理。方法:50只小鼠,随机抽取10只作为正常对照组(A),其余40只采用每只右腋皮下接肿瘤细胞悬液0.2mL再随机分成4组,每组10只,分别设为:模型对照组(B),替加氟组(C),扶正抗癌汤大剂量组(D),扶正抗癌汤小剂量组(E)。于接种瘤细胞悬液24h候开始给药,连续给药14d,经口灌胃14d后,取瘤体称重,计算抑瘤率;用免疫组化法检测各组突变型p53基因和巨噬细胞表达。结果:扶正抗癌汤各组与模型组相比肿瘤体积缩小,扶正抗癌汤大剂量组对H22模型小鼠的抑瘤率为33.32%,用药两周扶正抗癌汤大小剂量组各治疗组瘤组织p53表达显著下降,其中替加氟组及扶正抗癌汤大剂量组与模型对照组比较具有非常显著性差异(P<0.01);巨噬细胞CD68检测结果示:扶正抗癌汤大剂量组与模型对照组比较,具有极其显著性差异(P<0.01)。结论:扶正抗癌汤特别是大剂量组对H22肝癌型小鼠肿瘤有一定的抑瘤作用。扶正抗癌汤大剂量组在抗肿瘤下调抑制细胞凋亡的突变型P53基因同时促进巨噬细胞CD68的表达。     

补康灵对辐射损伤小鼠造血功能的影响

目的:探讨补康灵对辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法:50只小鼠被随机分为5组:正常对照组、辐射对照组、补康灵低、中、高剂量组。实验组小鼠在60Coγ射线4 Gy照射后,补康灵组分别灌胃9,18,36 g.kg-1,其余2组给予生理盐水,连续给药10 d,照射后第5,10天检测血象。10 d后处死小鼠,观察补康灵对骨髓DNA含量、骨髓有核细胞数、脾结节的影响。结果:60Coγ射线照射后小鼠外周白细胞、血小板数减少,补康灵给药后,中、高剂量组小鼠外周白细胞、血小板数升高,中、高剂量组骨髓DNA含量吸光度(A)为(1.05±0.27),(1.22±0.26);骨髓有核细胞数为(5.12±1.22),(6.01±1.35)×106/L,脾结节(7.67±1.56),(8.52±2.12)个,均比辐射对照组明显增加(P<0.05)。结论:补康灵照射后给药能促进辐射损伤小鼠造血功能的恢复。     

金仙胶囊的生血作用及其机制研究

目的:探讨金仙胶囊对环磷酰胺致骨髓抑制小鼠的生血作用及其机制。方法:将小鼠分为金仙胶囊10、20、30 g/kg组及G-CSF阳性对照组、正常对照组、模型组,各组分别给予相应药物,正常对照组与模型组给予等体积溶媒。在给药第8天,除正常对照组外,各组均腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg。末次给药后24 h,检测其外周血细胞数量及IL-1α、IL-6水平;处死小鼠,取双侧股骨,用流式细胞仪检测骨髓CD34-LSK细胞数,并计算各组CD34-LSK细胞占骨髓细胞的百分率。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠外周血WBC、PLT及血清IL-1α显著降低,而IL-6和骨髓造血干细胞CD34-LSK比例显著升高(P0.01)。金仙胶囊20、30 g/kg能显著升高模型小鼠外周血WBC、PLT及血清IL-1α水平,降低IL-6水平和骨髓造血干细胞CD34-LSK比例(P0.01)。结论:金仙胶囊对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制具有较好的保护作用,其作用机理可能与调节血液IL-1α及IL-6水平,促进骨髓造血功能有关。     

血府逐瘀口服液对放射损伤后小鼠骨髓微血管的影响

目的观察血府逐瘀口服液对放射损伤后小鼠骨髓微血管的影响.方法以 60 Co γ射线照射小鼠建立骨髓微血管放射损伤模型并将小鼠随机分为 A组 (正常对照组 )、 B组 (照射模型组 )、 C组 (血府逐瘀口服液低剂量组 )、 D组 (血府逐瘀口服液高剂量组 )和 E组 (复方丹参注射液组,阳性对照组 ),采用分光光度计法分别测定提取的各组小鼠股骨骨髓 Hb溶液标本的光密度 (OD)值;鼠尾采血测定外周血 RBC、 WBC和 Hb含量;并分别监测骨髓毛细动脉根数、面积和骨髓造血组织容量百分率.结果血府逐瘀口服液能明显降低放射损伤小鼠骨髓和外周血 Hb含量,提高外周血 RBC和 WBC的数量以及增加骨髓毛细动脉根数、面积和骨髓造血组织容量百分率.结论血府逐瘀口服液能明显修复和保护放射损伤小鼠骨髓微血管.     

补肾生血法对慢性再障患者表达整合素αLβ2/CD 11a水平影响的研究

目的:探讨补肾生血法对慢性再生障碍性贫血(简称慢性再障,CAA)患者粘附分子αLβ2/CD 11a表达水平的影响.方法:将60例慢性再障患者随机分为实验组和对照组,分别给予补髓生血颗粒和康力龙,采用RT-PCR方法检测αLβ2/CD 11a和的mRNA表达,流式细胞术(FCM)检测骨髓造血干祖细胞αLβ2/CD 11a的表达水平.结果:CAA患者造血细胞αLβ2/CD 11a表达异常,补髓生血颗粒剂对造血细胞αLβ2/CD 11a的表达水平有调节作用,与康力龙组比较无显著差异.结论:CAA可能存在造血干祖细胞与骨髓微环境功能缺陷,骨髓造血干祖细胞粘附分子水平异常导致其与骨髓基质细胞间的粘附功能降低,从而影响造血,所以调节骨髓造血千祖细胞粘附分子的表达,改善骨髓造血干祖细胞与骨髓基质细胞/细胞外基质间的粘附功能从而促进骨髓造血功能恢复可能是补髓生血颗粒治疗CAA的作用机理之一.     

藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞瘤p53、Bcl-2基因表达的影响

目的:研究藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞株p53、bcl-2基因表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测p53、Bcl-2基因表达。结果:藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌SGC-7901细胞p53和Bcl-2表达阳性灰度值分别为185.48±1.05,124.05±1.53,95.51±0.19;103.41±1.01,104.05±1.23,90.52±1.09。结论:藤梨根提取物能够抑制人胃癌SGC-7901细胞p53和Bcl-2的表达。     

芪莲舒痞方影响CAG癌前病变大鼠突变型p53、Syk、Survivin表达的实验研究

目的观察芪莲舒痞方对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠突变型p53、脾酪氨酸激酶(Syk)、Survivin表达的影响,探讨芪莲舒痞方的作用机理。方法采用"MNNG+雷尼替丁+乙醇+饥饱失调"的综合方法复制Wistar大鼠CAG癌前病变模型,按随机数字表法分为正常组、模型组、芪莲舒痞(QLSP)大、中、小剂量组和胃复春(WFC)组,分别给予药物干预后,免疫组化S-P法检测突变型p53、Syk、Survivin的表达。结果 (1)突变型p53表达:除QLSP大剂量组外,其余各组突变型p53蛋白阳性表达率较正常组均显著增强(P0.01);QLSP大剂量组、WFC组突变型p53蛋白阳性表达率较模型组显著降低(P0.01或P0.05)。(2)Syk表达:模型组、WFC组、QLSP中、小剂量组Syk阳性表达率较正常组显著减少(P0.01);QLSP大剂量组Syk阳性表达率较模型组显著增多(P0.01)。(3)Survivin表达:胃复春组、QLSP大剂量组Survivin阳性表达率较模型组显著减弱(P0.05或P0.01)。结论芪莲舒痞方能抑制突变型p53、Survivin的表达,增强Syk的表达,这可能是其逆转CAG癌前病变的作用机制之一。