基于管家基因和水平转移基因的菌株亲缘性分析:60株耐药大肠埃希菌研究

目的:了解1组(60株)耐药大肠埃希菌的菌株亲缘性?方法:对该组耐药大肠埃希菌4种与耐药相关的管家基因和45种水平转移获得与β-内酰胺类?氨基糖苷类?喹诺酮类耐药相关基因以及7种整合子?转座子?插入序列?接合性质粒遗传标记进行检测?并对检测结果进行样本聚类分析?结果:60株耐药大肠埃希菌多态性明显,多数菌株已发生演化?只有6?53号株;10?14号株,7?8?26?40号株3组携带相同基因(同一克隆)?结论:耐药基因的样本聚类分析可识别出具有相同耐药特征的菌株,具有一定的流行病学意义,为追溯耐药菌传播途径提供方便?     

产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷类钝化酶基因aac（6＇）-Ib’的检测

目的了解本地产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷类钝化酶基因携带状况,为探讨其耐药机制提供信息。方法用聚合酶链反应（PCR）法对临床分离的62株产ESBLs并耐庆大霉素的大肠埃希菌,进行aac（6＇）-Ib’氨基糖苷类修饰酶基因检测。结果62株菌中被检出氨基糖苷类修饰酶基因aac（6＇）-Ib’阳性17株,阳性率27.4%,同时耐阿米卡星的3株中,阳性1株。结论本研究样本菌株中部分菌株的氨基糖苷类耐药性可能与氨基糖苷类修饰酶AAC（6＇）-Ib’有关。     

80株大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的：了解临床分离的80株大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的存在状况。方法：采用MH平板法测试14种抗菌药物的敏感性，采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果：80株大肠埃希菌呈现多重耐药，对氨基糖苷类抗生素的耐药率在57．5％-80％之间，氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-I、ant（3”）-I基因的阳性率分别为20％、30％、32．5％、20％。携带1种或1种以上基因的菌株有65株（81．25％）。结论：临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高。     

产ESBLs大肠埃希菌的氨基糖苷抗菌药物耐药性及氨基糖苷类钝化酶基因检测

目的:了解地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖苷抗生素的耐药情况及氨基糖苷类钝化酶基因分布.方法:采用Kirby-Bauer(K-B)纸片法检测38株产 ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星4种氨基糖苷类抗菌药物的耐药情况;并应用PCR方法检测这38株菌6种氨基糖苷钝化酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ib-cr、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ.结果:38株产ESBLs大肠埃希菌对4种氨基糖苷类抗菌药物的耐药率分别为阿米卡星28.9%,奈替米星39.5%,庆大霉素76.3%,妥布霉素76.3%;aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ib-cr、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ阳性率分别为63.2%,36.8%,10.5%,2.6%.未检测出aac(3)-Ⅰ与aac(6′)-Ⅱ基因阳性菌株.结论:产ESBLs大肠埃希菌的氨基糖苷类钝化酶基因以aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ib-cr基因为主,氨基糖苷类钝化酶基因与氨基糖苷类药物耐药性有一定的联系.临床抗感染过程中应该注重耐药机制的研究.     

产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株第1类整合子-基因盒的特征

目的：探讨产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株携带第1类整合子的特征及所含基因盒的种类。方法：采用纸片扩散法对8株产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株进行抗生素耐药性监测;制备细菌转接合子,采用PCR技术鉴定第1类整合子,并对PCR产物测序及结果分析。结果：4株产志贺毒素大肠埃希菌对复合磺胺、四环素、氨苄西林、环丙沙星表现多重耐药,其中2株同时对链霉素和壮观霉素耐药。PCR检测第1类整合子1 000 bp 2株,PCR产物测序1 000 bp整合子携带腺苷酰基转移酶(aadA1)基因盒并存在于7 800 bp可接合质粒上,与sul 1和qacEΔ1基因连锁,分别传递着对链霉素、壮观霉素、复合磺胺和季胺盐类消毒剂的耐药性。结论: 产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株可接合质粒上第1类整合子携带的aadA1耐药基因盒是该菌株对氨基糖苷类抗生素耐药产生和扩散的重要原因。     

大肠埃希菌多重耐药与Ⅰ类整合子的关系

目的 监测大肠埃希菌临床分离株的耐药性,了解大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的流行情况和分子特性.方法 临床分离114株大肠埃希菌经全自动细菌分析系统鉴定并检测耐药性,应用PCR法扩增质粒DNA上Ⅰ类整合子,对PCR产物进行酶切分析和DNA测序.将序列结果在GenBank中搜索,确定Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类和排列.结果 细菌耐药率＞50%,且大多为多重耐药菌(耐受3种以上抗生素).在58株细菌的质粒DNA上检测到Ⅰ类整合子序列,大小约600～3 500 bp,各含1～3个Ⅰ类整合子.整合子中最常见的基因盒为dfrl7(甲氧苄啶耐药基因)与aadA5(链霉素、壮观霉素耐药基因),最主要的基因盒排列为dfrl7-aadA5.绝大多数携带甲氧苄啶耐药基因盒的菌株对复方新诺明耐受,大多数携带链霉素、壮观霉素耐药基因盒的菌株对链霉素不敏感.结论 目前临床分离的大肠埃希菌耐药性强,并广泛存在Ⅰ类整合子.菌株携带基因盒和耐药表型之间有较好的对应关系,基因盒介导了细菌耐药性.细菌的多重耐药率与Ⅰ类整合子的阳性率相关.     

肠杆菌科细菌mcr-1流行病学研究

目的探讨临床常见肠杆菌科细菌携带质粒介导多黏菌素耐药基因（mcr-1）的情况,为医院感染防控提供依据。方法收集2018年1月至2022年3月浙江省台州医院临床分离得到的菌株共1980株,包括大肠埃希菌1400株,肺炎克雷伯菌580株。采用PCR检测mcr-1基因;利用微量肉汤稀释法和E-test法检测抗生素对mcr-1阳性菌株的最低抑菌浓度;采用接合试验检测mcr-1基因在可转移质粒上的位置;通过提取细菌DNA基因组进行全基因组测序,并对测序结果进行多位点序列分型、质粒Inc分型和耐药基因识别等分析。结果在1400株大肠埃希菌中,共检测出6株携带mcr-1,阳性率为0.43%;580株肺炎克雷伯菌,仅1株检出mcr-1,阳性率为0.17%。其中5株菌株接合试验成功。6株大肠埃希菌的ST型分别是ST648、ST95、ST359、ST602、ST453、ST156,肺炎克雷伯菌是ST25。质粒Inc分型结果显示不同菌株携带相同类型质粒,提示该类质粒可以在菌株间水平传播。耐药基因分析发现7株细菌均携带大量的耐药基因,其中1株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时携带mcr-1和碳青霉烯耐药基因。结论mcr-1在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分离率相对较低,然而考虑到含有mcr-1的质粒在不同细菌之间水平传播的潜力,以及mcr-1与同一质粒内的多个耐药基因整合的能力,在临床环境中要加强对多重耐药菌的管理。     

基于高通量测序的多重耐药大肠埃希菌HX43耐药分子机制分析

目的通过高通量测序法对多重耐药大肠埃希菌HX43进行耐药分子机制的研究。方法用Illumina Miseq平台对HX43进行高通量测序,用Edena、RAST、Res Finder、MLST和BLAST等生物信息学工具或数据库进行数据分析,获得耐药基因相关序列数据。结果 HX43对多种临床常用抗生素均不敏感,仅对碳氢霉烯类药物敏感。对高通量测序数据的分析研究发现,该菌存在多种耐药基因,包括β-内酰胺类耐药基因3个(blaCMY-42、blaCTX-M-14和blaOXA-30),氨基糖苷类耐药基因5个(aac(3)-IIa、aad A5、strA、str B和aac(6')-Ib-cr),喹诺酮类耐药基因1个(aac(6')-Ib-cr),磺胺及甲氧苄啶类耐药基因3个(sul1、sul2和dfrA17),四环素耐药基因1个(tet(B)),氯霉素耐药基因2个(cat B3和cml A1),大环内酯类耐药基因2个(erm(B)和mph(A))。对包含blaCMY-42的contigs进行分析,发现该基因与ISEcp1插入序列、blc和sug E等基因相关联。质粒分型发现HX43携带5种不相容群的质粒。多位点序列分型(MLST)分析发现HX43属于ST3835,为国内外较少见的序列型。结论高通量测序技术可准确获得临床菌株抗生素耐药的相关基因信息,为临床抗菌治疗提供重要的实验室数据支持。     

大肠埃希菌的耐药性和质粒谱型研究

目的检测大肠埃希菌的耐药性及其对应的质粒图谱，探讨其耐药机制以便正确指导临床用药。方法使用4类（11种）抗生素测试152株致病性大肠埃希菌的耐药情况，K—B法进行药敏试验，碱裂解法抽提标本质粒后凝胶电泳分析。结果152株致病性大肠埃希菌中128株（84．21％）产生耐药，且耐2种以上药物；其中126株检出1—5个大小不等的质粒，有典型的多态性，质粒分布在1．0—30．0Kb范围内，以23Kb、9．41Kb为主。结论大肠埃希菌耐药率高、耐药谱广，其耐药性可能与菌体中含有分子量23kb、9．4kb的质粒有关。     

健康学生大肠埃希菌第1类整合子的鉴定及特征

目的：探讨健康学生肠道大肠埃希菌携带第1类整合子的分布及所含基因盒的特征。方法：常规方法分离大肠埃希菌;纸片扩散法对10种抗生素进行耐药性监测和分析;PCR鉴定第1类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析。结果：从97份标本中鉴定出大肠埃希菌76株,其中25株（32.8%）为多重耐药,耐药谱为复合磺胺-氨苄西林-四环素-红霉素-链霉素。25株中有14株(56.0%)鉴定出1类整合子,1 800 bp 10株, 750 bp 4株。PCR产物测序得知1 800 bp整合子携带aadA1-dfrA14-orf基因盒,传递对氨基糖苷类-磺胺类抗菌药物的耐药性;750 bp整合子携带dfrA14基因盒,传递对磺胺类抗菌药物的耐药性。结论: 不同种类的1类整合子存在于健康人大肠埃希菌中,携带耐药基因盒,决定多重耐药性。      

汕头地区产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性动态分析

目的：探讨汕头地区革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率及耐药性．为指导临床合理使用抗生素提供依据。方法：收集2009年至2011年汕头地区大肠埃希菌1547株和肺炎克雷伯菌837株,采用Vitrk-2全自动分析系统进行ESBLs检测和药敏实验、结果：2009-2011年大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率分别为65．9％、72．9％、71．0％和30．2％、38．4％、33．1％：2010年与2009年产ESBLs菌株分离率比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;2009-2011年产ESBLs菌株对多种抗生素具有较高的耐药率;耐药率最低的是碳青霉烯类（亚胺培南和厄他培南）;除碳青霉烯类外,产ESBLs菌株耐药性比较差异无统计学意义（P〉0．05）．产ESBLs菌株对多种抗生素的耐药率明显比不产ESBLs菌株鬲（P〈0．05）结论：汕头地区产ESBLs菌株检出率高;产ESBLs菌株耐药性严重,动态监测对临床     

大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶检测及耐药基因型分析

目的了解宁夏医科大学附属医院大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的分离率、耐药性和基因型。方法收集2008年1月-2008年12月住院患者分离的标本281株,采用K-B法进行药敏试验,采用PCR技术分别检测TEM、CTX-M基因。结果在281株大肠埃希菌中,有186株大肠埃希菌产超广谱ESBLs,产酶率为66.2%。在186株ESBLs菌株中有111株为TEM型,占59.7%,有66株为CTX-M型,占35.5%。结论产ESBLs株大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性较为严重,而且存在多重耐药;本地区临床标本分离的产ESBLs大肠埃希菌流行的主要基因型是CTX-M型和TEM型。     

耐药大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶和16S rRNA甲基化酶基因的分析

目的：了解耐药大肠埃希菌（drug-resistant Escherichia coli,DR-ECO）氨基糖苷类修饰酶和16S rRNA甲基化酶基因的分布,探讨该菌对氨基糖苷类药物耐药的分子机制。方法：采用PCR法检测20株DR-ECO中15种氨基糖苷类修饰酶基因和7种16S rRNA甲基化酶基因,并用PCR直接全自动荧光法对阳性产物进行测序。结果：20株DR-ECO中,18株检出氨基糖苷类修饰酶基因;其中,aac（3）-Ⅱ、aac（6＇）-Ⅰb、ant（3″）-Ⅰ、aadA4/5和aph（3＇）-Ⅰ的阳性检出率分别为25%、25%、5%、65%和55%;只有1株检出rmtB型16S rRNA甲基化酶基因,阳性率为5%,其余基因型均未测出。结论：本组DR-ECO对氨基糖苷类药物的耐药主要与aadA4/5和aph（3＇）-Ⅰ等氨基糖苷类修饰酶基因相关,而与16S rRNA甲基化酶基因无明显关系。     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子遗传标记研究

目的了解我院大肠埃希菌（ECO）的Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-sull基因存在状况。方法对临床分离的34株ECO菌，采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-sull基因。结果34株ECO菌qacE△1-sull基因阳性有28株（82．4％）。结论本组34株ECO菌药敏实验显示，β-内酰胺酶和氨基糖苷类抗生素耐药性高与Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-sull基因高检出率有关。     

肺结核合并呼吸道感染的288株病原菌分布及耐药性分析

目的通过对288株肺结核合并呼吸道感染的病原菌分布及其耐药性情况进行统计分析,以指导临床合理用药。方法对2012年7—12月肺结核合并呼吸道感染患者送检痰标本中分离鉴定的致病菌288株及药敏试验结果进行归纳分析。结果肺结核继发呼吸道感染的患者痰标本中共培养出288株菌株,革兰阴性菌226株,占78．47％,革兰阳性菌株18株,占6．25％,真菌44株,占15．28％。革兰阴性菌中肺炎克雷伯杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌为主;革兰阳性菌主要为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌;真菌主要为白色念珠菌。药敏结果细菌种类情况各不相同,用药应根据细菌种类来确定。结论肺结核合并呼吸道感染的病原菌以革兰染色阴性菌为主。检出病原菌对抗菌药物的耐药性较强,临床医生应根据细菌培养和药敏结果采取合理抗生素治疗。     

大肠埃希菌质粒型AmpC酶基因的检测分析

目的 调查大肠埃希菌质粒型Ampc酶基因的存在状况。方法 采用MH药敏平板对40株临床分离的大肠埃希菌进行抗菌药物敏感试验和ESBLs纸片法确诊，PcR方法检测DHA和ACT-1型Ampc酶基因。结果 40株大肠埃希菌呈多重耐药，20株ESBLs阳性菌AmpCM基因阳性率90％，20株ESBLs性菌Ampc酶基因阳性率45％，40株大肠埃希菌ACT-1和DHA基因阳性率分别为57．5％，40．0％，有12株大肠埃希菌同时携带ACT-1和DHA基因。结论 临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重，质粒型AmpC酶基因携带率高。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药机制

目的 调查广泛耐药鲍曼不动杆菌（Extensively drug Resistant Acinetobacter Baumannii,XDR-ABA）临床分离菌株中氨基糖苷类修饰酶基因、16SrRNA甲基化酶基因和外排泵基因的存在情况.方法 收集2011年1-12月临床标本中分离的XDR-ABA菌20株,采用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应（PCR）方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因和外排泵基因adeB.结果 20株XDR-ABA菌均检出aac（6＇）-Ⅰb、ant（2＂）-Ⅰ、ant（3＂）-Ⅰ、aphA1和adeB外排泵基因,其余5种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因和均未检出.结论该组20株XDR-ABA菌耐多种氨基糖苷类药物与细菌产aac（6＇）-Ⅰb、ant（2＂）-Ⅰ、ant（3＂）-Ⅰ、aphA1 4种氨基糖苷类修饰酶和存在adeABC外排泵系统相关.     

脐分泌物细菌分布及药敏分析103例

目的研究婴幼儿脐部感染菌的分布及药敏特点,指导临床合理使用抗生素。方法应用VITEK—AMS自动微生物鉴定仪、药敏卡、药敏纸片进行鉴定及药敏试验。结果共分离出G^＋菌62株,其中头状葡萄球菌21株（19．8％）,木糖葡萄球菌18株（17．0％）,G—b菌株44株,其中大肠埃希氏菌17株（16．0％）,肺炎克雷伯菌14株（13．2％）其他如华纳葡萄球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、不动杆菌属等均占一定比例。G^＋病原菌对青霉素、庆大霉素耐药率较高。对万古霉素、环丙沙星、利福平敏感性较高。G山菌对氨苄西林、头孢唑啉、氨基糖苷类耐药率较高。对亚胺培角、氧氟沙星、环丙沙星敏感性较高。结论脐分泌物中,头状葡萄球菌、木糖葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌感染率较高,而且对第三代抗生素耐药性增加。所以,临床医生应根据药理结果,合理有效的选用抗生素。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性分析

目的:了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据。方法:2005年9月~2006年6月,收集临床分离产ESBLs大肠埃希菌63株,采用琼脂平皿稀释法进行MIC测定。结果:产ESBLs大肠埃希菌对碳青霉烯类和哌拉西林/他唑巴坦普遍敏感,对哌拉西林和喹诺酮类耐药率分别为98.41%和90.48%,对头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢西丁、头孢噻肟和头孢曲松耐药率依次为34.92%、36.51%、44.45%、55.56%、82.54%和84.13%。结论:我院产ESBLs大肠埃希菌耐药明显。     

SHB基因与甲状腺功能亢进症Graves病的相关性研究

目的通过对Src同族结构域编剧者蛋白B基因（SHB）的单核苷酸多态（SNP）检测,研究SHB基因与甲状腺功能亢进症（甲亢）Graves病的相关性。方法使用PCR测序方法,对正常人群、甲亢Graves患者SHB基因的启动子、外显子以及临近的内含子进行检测,确定该基因是否与汉族人甲亢Graves病患者相关。结果所测SHB基因片段总长度5679个碱基,发现7个SNP,其中高频、低频SNP分别是6个、1个,其中第6个外显子区有一个SNP在甲亢Graves患者群与正常人群的差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论SHB基因单核苷酸多态可能与甲亢Graves病的发病有关。