外周血中检测乳腺癌细胞株hMAM表达的方法探讨

目的建立逆转录结合荧光定量PCR(FQ-PCR)检测外周血乳腺癌细胞hMAM基因表达方法,了解其监测乳腺癌细胞微转移的应用价值。方法克隆目的片段,制备标准品并作测序验证。培养乳腺癌MDA-MB453、MCF7细胞株,制成血液标本模型,GAPDH基因为内对照,逆转录结合FQ-PCR检测乳腺癌细胞株血标本模型和10例乳腺癌患者外周血的hMAM表达。结果电泳和测序证实,克隆产物系预期的目的片段。FQ-PCR标准曲线的相关系数为-1.0;用103copies/μl标准品重复检测5次,x±s:718.9±120.5,CV16.7%;MDA-MB453细胞的血标本作灵敏度试验,相当于104个血细胞中含1个乳腺癌细胞可检出阳性。未检测到MCF7细胞的hMAM表达。10例乳腺癌患者,淋巴结转移的5例中,3例hMAM表达阳性、2例阴性;无淋巴结转移的5例中,1例hMAM表达阳性、4例阴性。结论本方法可有效监测外周血中微转移的乳腺癌细胞,发现不同乳腺癌细胞系hMAM表达程度差异大。     

CK-19 mRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用

目的探讨细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用。方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和RT-PCR检测45例健康女性、40例良性乳腺肿瘤和86例乳腺癌患者外周血中CK19mRNA水平并进行对比分析。结果CK19mRNA在乳腺癌组表达高于良性乳腺疾病组(P<0.01),乳腺癌淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.01)。FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度和特异性均显著高于RT-PCR法。结论FQ-PCR检测CK19对乳腺癌诊断灵敏度和特异性较高,可有效监测乳腺癌微转移和疗效。     

钼靶联合hMAM、BRCA-1表达水平检测对乳腺癌的诊断价值

目的 探讨钼靶联合乳腺癌人乳腺珠蛋白(hMAM)基因、乳腺癌易感基因-1(BRCA-1)表达水平对乳腺癌的诊断价值.方法 选取2016年1月至2019年8月在该院就诊的乳腺癌患者150例纳入肿瘤组,另选取同期良性乳腺肿瘤患者100例纳入良性组.通过受试者工作特征(ROC)曲线分析单独及联合应用钼靶及hMAM、BRCA-...     

探讨CA153、TSGF、OPN不同组合对乳腺癌诊断的价值

目的探讨癌抗原153（CA153）、恶性肿瘤特异性生长因子（TSGF）和骨桥蛋白（OPN）的不同组合在乳腺癌诊断中的临床应用价值。方法采用电化学发光检测CA153,化学比色法检测TSGF,酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测OPN。结果乳腺癌患者血清CA153、佟GF、OPN水平及阳性率明显高于正常对照组及乳腺良性肿瘤组（P〈0．01）。CA153对乳腺癌的敏感性为32．3％,特异性为95．8％;TSGF对乳腺癌的敏感性为75．6％,特异性为94．0％;OPN敏感性为78．5％,特异性为92．5％,三者联合检测的敏感性为96．7％,特异性为79．2％。结论CA153、TSGF、OPN对乳腺癌有一定的实用价值,三者联合检测有明显的互补性,可明显提高乳腺癌的阳性诊断率。     

CA15-3与TSGF及CEA联合检测对乳腺癌的诊断价值

目的探讨血清肿瘤相关抗原15-3（CA15-3）、癌胚抗原（CEA）和血清恶性肿瘤特异性生长因子（TS-GF）联合检测对乳腺癌诊断的临床价值。方法采用2005年8月至2008年8月本院住院收治的乳腺癌患者150例,做为乳腺癌组;正常对照组148例进行上述指标检测并比较。结果乳腺癌组与正常对照组上述指标检测值经统计学方法比较,有显著差异性（P〈0．05）。各项单独检测率与3项联合检测经统计学方法比较,有显著差异性（P〈0．05）。结论各单项检测敏感性较低,3项联合检测大大提高了对乳腺癌的早期诊断率,对乳腺癌诊断具有重要意义。     

乳腺癌组织中原癌基因BMI-1及人表皮生长因子受体-2表达与外周血微转移的关系

目的 观察乳腺癌患者乳腺癌组织中原癌基因BMI-1、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)阳性表达情况,探讨乳腺癌组织BMI-1、HER-2与外周血微转移的关系.方法 89例乳腺癌患者,均采用实时荧光定量PCR法检测人乳腺珠蛋白mRNA相...     

乳腺癌外周血微转移的临床病理意义

目的通过检测乳腺癌患者外周血肿瘤细胞含量探讨其临床病理意义。方法以人细胞角蛋白抗体和CD45抗体双色免疫标记,应用多参数流式细胞仪方法检测外周血标本中肿瘤细胞含量。结果正常对照组、乳腺良性肿瘤组均未检测到肿瘤细胞。77例乳腺癌患者中64例检测出肿瘤细胞,阳性率为83.1%。Ⅲ+Ⅳ期阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期,差异有统计学意义(P0.05);有淋巴结转移的阳性率高于无淋巴结转移,差异有统计学意义(P0.05)。结论乳腺癌患者外周血中肿瘤细胞含量对指导临床治疗和评估预后可能有重要意义。     

蛋白酪氨酸磷酸酶PRL-3在乳腺癌中表达及意义

目的探讨乳腺浸润性导管癌及乳腺不典型增生组织中蛋白酪氨酸磷酸酶PRL-3表达情况。方法采用SP法及RT-PCR方法检测60份乳腺癌组织及50份乳腺不典型增生组织标本中PRL-3表达情况,分析PRL-3与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系。结果在乳腺癌癌变过程中PRL-3表达阳性率呈递增趋势;PRL-3表达与有无淋巴结转移有相关性（P=0.011）;PRL-3在乳腺癌中表达明显高于乳腺不典型增生组织（P〈0.05）。结论乳腺癌组织中PRL-3在蛋白及基因水平呈高表达,一定程度上提示PRL-3与乳腺癌发生密切相关。     

胃癌患者外周血中CK20的表达及临床诊断意义

应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测182例胃癌患者和40例健康志愿者的外周血中CK20 mRNA的表达。结果胃癌组外周血CK20 mRNA阳性表达率为48.9%,健康志愿者组均表达阴性,差异具有统计学意义（P〈0.01）。胃癌患者外周血CK20 mRNA的阳性表达率与胃癌分化状态、TNM分期相关（P〈0.05）。胃癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为胃癌微转移的判断指标。     

乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达

[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白（hmnan mammaglobin，hMAM）基因并诱导其表达，为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础，从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA，通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增hMAM基因编码序列．将扩增产物克隆至PGEM-T载体中，DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因，与相同酶切的表达载体pQFA0连接、筛选、鉴定，构建pOE40-hMAM融合表达质粒，以硫代半乳糖苷（IPTG）诱导在大肠杆菌M15中表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应（PCR）扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明，插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTFG的诱导下，M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40hMAM表达成功。     

血清TSGF检测对胃癌的诊断价值

目的　探讨血清肿瘤相关物质 (TSGF)检测对胃癌患者的诊断价值。方法　将健康人、十二指肠溃疡及胃溃疡患者血清TSGF检测 ,与胃癌患者血清TSGF检测对照结果的临床资料 ,进行回顾性分析。结果　胃癌患者组血清中TSGF含量水平 ,明显高于健康人、十二指肠溃疡及胃溃疡患者对照组 (P <0 0 1)。结论　血清TSGF检测对胃癌患者的诊断是一种简单、敏感、有效的相关指标 ,对胃癌患者的早期诊断具有一定的参考价值。     

支气管肺泡灌洗液中肿瘤相关物质群对肺部孤立结节鉴别诊断的意义

目的探讨血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤相关物质群(TSGF)对周围型肺部孤立结节(SPN)良恶性鉴别诊断的价值。方法对40例周围型SPN患者行血清和健患双侧支气管肺泡灌洗液TSGF、CEA检测并与40例良性病变进行对照。结果恶性SPN患者血清和健患双侧支气管肺泡灌洗液TSGF、CEA均高于良性患者及对照组，恶性SPN组患侧支气管肺泡灌洗液TSGF、CEA检测值亦高于健侧，患侧BALF中TSGF测定对恶性SPN诊断的特异性达100％，亦高于CEA的73.3％及血清TSGF的86．7％。结论支气管肺泡灌洗液及血清TSGF测定对周围型SPN的良恶性鉴别诊断有一定的价值，尤其健患双侧BALF中TSGF检测对肿瘤有一定的定位诊断作用。     

乳腺癌外周血SBEM和hMAM联合检测的临床意义

目的 探讨乳腺癌患者外周血乳腺小粘蛋白(SBEM)及人乳腺珠蛋白(hMAM)的表达及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测68例乳腺癌患者及20例乳腺纤维腺瘤患者及20例健康志愿者术前血清SBEM和hMAM的水平.结果 乳腺癌组术前血清SBEM和hMAM水平均高于纤维腺瘤组和健康对照组(P均<0.01).有淋巴结转移的乳腺癌患者血清中SBEM和hMAM水平明显高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P均<0.05).Ⅲ期患者血清SBEM和hMAM水平显著高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P均小于0.01).结论 SBEM及hMAM特异性表达于乳腺癌外周血,有可能作为检测乳腺癌外周血微转移的标志物,有望成为判断乳腺癌患者病情发展和预后的新指标.     

外周血基因转录本检测中2种标本处理方法的比较

目的　选择合理的标本处理方法 ,提高外周血基因转录本检测的灵敏度。方法　 5 3例胃癌患者外周血标本分别以淋巴细胞分离液 (FICOLL)和红细胞裂解液 (RLS)处理后提取RNA ,以荧光定量RT PCR技术检测 β actin基因和CEA基因转录本。 结果　RLS法和FICOLL法定量检测 5 3例外周血标本的 β actin基因转录本的平均浓度分别为 1.19× 10 6和 2 .4 0× 10 5拷贝 /ml,2组测定值差异有显著性 (P <0 .0 1)。RLS法检测 5 3例中 13例为CEAmRNA阳性 ,阳性率为 2 4 .5 % ;FICOLL法检测到 5例阳性 ,阳性率 9.4 % ,RLS法的阳性检出率高于FICOLL法 (P <0 .0 5 )。结论　RLS法分离外周血有核细胞的效果优于FICOLL法 ,有利于提高基因表达检测的灵敏度。     

反转录荧光定量聚合酶链反应联合检测hMAM和BCL-2在乳腺癌诊断中的应用

目的研究反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)和乳腺癌人乳腺珠蛋白(hMAM)基因在外周血循环肿瘤细胞(CTCs)中的表达水平,探讨BCL-2和hMAM 2种乳腺癌相关基因联合检测在乳腺癌诊断中的临床应用价值。方法采用RT-qPCR法,并以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内对照检测健康对照组(55例)、乳腺癌组(171例)和良性乳腺疾病组(91例)外周血CTCs中BCL-2和hMAM的表达水平。结果外周血CTCs中BCL-2和hMAM在健康对照组和良性乳腺疾病组表达水平差异无统计学意义(P0.05),乳腺癌组表达水平高于健康对照组、良性乳腺疾病组,差异有统计学意义(P0.05)。hMAM和BCL-2联合检测灵敏度显著高于单一基因。结论联合检测外周血CTCs中hMAM和BCL-2基因表达水平可提高乳腺癌诊断的灵敏度,有效辅助临床诊断乳腺癌。     

恶性肿瘤相关物质群联合乳腺临床检查在乳腺癌筛查中的应用研究

目的评价恶性肿瘤相关物质群（TSGF）联合乳腺临床检查在乳腺癌早期筛查中的应用价值。方法采取乳胀临床检查方法对共2300名35—69岁妇女进行初筛,可疑阳性病例进一步行TSGF检查。结果可疑阳性病例共69例、TSGF阳性共9例,最后确诊为乳腺癌3例。结论乳腺临床检查联合肿瘤相关物质检测是乳腺癌早期拜查的有效方法之一。     

外周血microRNA-23b作为胃癌筛查分子标志物的价值和应用研究

目的观察和分析外周血microRNA-23b作为胃癌筛查分子标志物的应用价值。方法选取100例接受胃镜病理活检者作为研究对象,根据检查结果将其分为三组,确诊为胃癌者列为胃癌组,共纳入46例;确诊为胃癌前病变者列为癌前病变组,共纳入28例;胃粘膜检查结果基本正常者列为对照组,共纳入26例。应用定量real time PCR检测技术对三组研究对象外周血样本中的miRNA-23b表达水平进行检测和比较。结果对照组研究对象的外周血样本的Log2△Ct值显著高于癌前病变组（P〈0.05）,而且癌前病变组的Log2△Ct值显著高于胃癌组（P〈0.05）;胃癌组、癌前病变组和对照组研究对象外周血样本中的miRNA-23b表达阳性率分别为71.7%、32.1%和3.8%,胃癌组的阳性率显著高于癌前病变组（P〈0.05）,癌前病变组显著高于对照组（P〈0.05）。与胃镜活检结果对比,其阳性预测值为76.7%,阴性预测值为77.2%。结论胃癌患者外周血中miRNA-23b表达水平可反映患者病情的进展程度,且其诊断效率较高,有望成为用于胃癌早期筛查的新型分子标志物。