16S—23S rDNA间隔序列PCR与RELP对分支杆菌临床分离株的鉴定价值

为阐明分支杆菌同种临床分离株不同菌株之间以及与标准株之间１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔序列是否有差异，以及结核分支杆菌耐药性和１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔序列有无关系。本文对５８株结核分支杆菌临床分离株（２０株敏感株，３８株耐药株）和淡黄、副偶然、母牛等分支杆菌的临床分离株的１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔序列进行了扩增，并对扩增产物进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳及限制性内切酶ＨａｅⅢ、Ｍｓｐ     

16S—23S rDNA间隔区序列PCR扩增及探针杂交用于偶然分支杆？…

目的 从基因水平上确认福建省南平市注射后偶然分支杆菌暴发感染的致病菌,并建立ＰＣＲ结合ＤＮＡ探针杂交快速鉴定偶然分支杆菌的方案。方法 根据偶然分支杆菌１６Ｓ－２３Ｓ ｒＤＮＡ间隔区序列,设计合成一段寡核苷酸探针,采用ＰＣＲ扩增、ＲＦＬＰ和ＤＮＡ斑点杂交技术,对２９例偶然分支杆菌临床分离株进行鉴定。结果 ２９例偶然分支杆菌临床分离株均被ＰＣＲ扩增出一条约４７０ｂｐ的ＤＮＡ条带,ＤＮＡ探针杂交也出现特     

16s～23s rDNA间隔区序列聚合酶链反应鉴定术后龟分支杆菌暴发感染

目的　从基因水平上确认深圳市某医院术后暴发感染的致病菌,并建立一套快速的ＰＣＲ方法鉴定龟分支杆菌脓肿亚种。方法　根据分支杆菌的１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列,设计合成一对引物和龟分支杆菌脓肿亚种ＤＮＡ探针,采用ＰＣＲ 和ＤＮＡ 斑点杂交技术,对５３ 株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株进行ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ杂交。在此基础上,采用１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增体系检测２５９份临床标本,对部分标本做ＤＮＡ探针斑点杂交反应。结果　５３ 株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株均被扩增出一条特异的３８０ ｂｐ ＤＮＡ 带和出现特异的杂交斑点。２５９ 份临床标本,ＰＣＲ 扩增阳性率为６０－６％ 。结论　在基因水平上确认此次引起院内术后暴发感染的致病菌为龟分支杆菌脓肿亚种。１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增检测体系灵敏、特异,能鉴定龟分支杆菌。     

16s—23srDNA间隔区序列聚合酶链反应鉴定术后龟分支杆 …

目的 从基因水平上确认深圳市某医院术后暴发感染的致病 ,并建立一套快速的ＰＣＲ方法鉴定龟分支杆菌脓肿亚种。方法根据分支杆菌的１６￣２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列,设计合成卫对引物和龟分支杆菌脓肿亚种ＤＮＡ探针,采用ＰＣＲ和ＤＮＡ斑点杂交技术,对５３株龟分支杆菌脓肿亚种临床分离株进行ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ杂交。在此基础上,采用１６￣２３ｓｒＤＮＡＰＣＲ扩增体系检测２５９份标本,对部分标本做ＤＮＡ探针斑点杂交反     

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系，这有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究     

结核分支杆菌利用福平药物敏感性的直接快速检测

探讨利用分子生物 学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段）,运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法,检测４５株结核分支杆菌临床分离株,对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析,运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患痰标本进行直接快速检测,并与药敏试验结果做对照分     

rDNA探针杂效检测病人痰标本中结核杆菌的研究

目的 应用结核分枝杆菌特异的ｒＤＮＡ探针杂交检测痰标本中的结核杆菌ｒＤＮＡ,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物ｂ对结核分枝杆菌１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ间隔区序列进行扩增,同时加入生物素标记制成２５０ｂｐ的ｒＤＮＡ探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究,并对９０分结核病人,３０份非结核病人痰标本的ＰＣＲ产物进行了斑点杂交检测。结果 ｒＤＮＡ探针检测引物ｂ增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

鼠疫耶尔森氏菌16S-23SrRNA基因间区分析

目的　发展一种快速准确的鉴定鼠疫菌的方法。方法　 Ｐ Ｃ Ｒ 反应加限制性内切酶消化的方法。结果　对来自不同疫源地的 １０３ 株鼠疫菌 １６ Ｓ２３ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因间区进行扩增,均可扩出两条长为 １ １４６ｂｐ 及 １ ０９０ｂｐ 的片段,扩增产物用限制性内切酶 Ｔａｑ Ｉ, Ｍ ｓｐ Ｉ消化后的酶切图谱相同。而对照菌株小肠结肠炎耶尔森氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,大肠杆菌,痢疾杆菌,霍乱弧菌的扩增产物及酶切图谱与鼠疫菌均不相同。结论　鼠疫菌 １６ Ｓ２３ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因间区高度同源,基本为两种类型,长度分别为 １ １４６ｂｐ 及 １ ０９０ｂｐ,其他菌株与其明显不同;该方法将有助于快速准确的鉴定鼠疫菌。     

DNA指纹技术方法学的建立及在结核分支杆菌菌株鉴定中的应用

目的探讨结核分支杆菌ＤＮＡ指纹技术的方法学及其在结核分支杆菌菌株鉴定中的应用。方法以结核分支杆菌染色体ＤＮＡ插入序列ＩＳ６１１０为基础,根据不同来源的结核分支杆菌菌株ＤＮＡ相异的ＩＳ６１１０拷贝数和相对分子质量,应用增强化学发光标记技术对结核分支杆菌ＤＮＡ酶切产物进行杂交和检测。结果不同来源的５０例结核患者临床分离株具有相异的ＤＮＡ指纹图谱。同一患者痰和膝关节脓培养阳性的结核分支杆菌菌株ＤＮＡ指纹图谱有较大的差异。人工诱导的结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ氧氟沙星耐药株和敏感株有一致的ＤＮＡ指纹图谱。结论应用ＤＮＡ指纹技术进行结核分支杆菌株水平的鉴定是完全可行的     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.