PCR技术在新冠病毒核酸检测中的应用

自2019年12月底以来,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新冠肺炎(COVID-19)疫情在全世界范围内暴发.新冠病毒具有较强的传染性,因此快速、准确地检测新冠病毒是阻断疾病传播、防控新冠疫情的关键.目前国内外已经出现了多种新冠病毒核酸检测方法,其中聚合酶链式反应(PCR)是主流的方法.文章总结了新冠病...     

两例输入性新冠肺炎患者核酸检测结果分析

目的:对连云港市两例确诊新型冠状病(SARS-CoV-2)毒感染者的核酸检测结果进行分析,探讨新型冠状病毒患者核酸检测与病毒传染性因素的相关性.方法:对连云港市收治的两例境外输入性新冠感染病例住院期间及出院后随访核酸检测结果进行比较,回顾性分析在疾病初期诊断、治疗出院、出院后居家隔离、追踪观察过程中患者临床病例及其核酸检测结果.结果:两例患者自发病后核酸检测阳性天数明显不同,核酸检测Ct值随病程延长,数值明显升高.结论:两例患者症状严重程度不同,排毒时间长短不同,这为新冠防控提供一定的数据参考.     

新型冠状病毒核酸检测实验室生物安全风险评估与防控

新型冠状病毒核酸检测实验室生物安全是新型冠状病毒核酸检测的重要保障,也是控制新型冠状病毒感染疫情的关键环节之一。本文从新型冠状病毒的病原学特点、实验室接触可能产生的风险、仪器设备风险、枪头等锐器风险、人员风险等多方面科学评估实验室的生物安全风险,总结防护经验,为应对将来可能发生的重大呼吸道传染病的实验室核酸检测所采取的个人安全防护措施提供参考,以提高我国整体应对核酸检测实验室突发公共卫生事件的能力。     

当前新冠病毒的主要检测手段

2019年,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)被报道,随后疫情在世界上各个国家和地区暴发且迅速流行.COVID-19的传染性强、病死率高,为有效控制疫情的发展,新冠病毒的检测至关重要,国内外各研究团队及机构已研发出各种检测新冠病毒的有效手段和仪器设备,本文从背景原理、应...     

气膜实验室在大规模核酸筛查背景下的建设实践

自新型冠状病毒肺炎疫情暴发以来,我国坚持以“动态清零”为总方针开展疫情防控工作,在多地开展了大规模新型冠状病毒核酸检测筛查(以下简称新冠大筛)工作。其间,以第三方医学独立实验室为代表的新冠病毒核酸检测医疗队(以下简称检测医疗队)发挥了重要的作用,其所使用的移动式实验室快速地增补了各地核酸检测实验室的检测能力,并为各地公立医院支援的检测医疗队提供了临时实验室。移动实验室是指可快速完成临时搭建并实现核酸检测功能的医学实验室,具有可实现快速建设、成本较低、方便运输、安装简易等优势及特点;其中单体检测能力最大的为气膜实验室,24h检测能力基本以8万管样本起步,通常应用在进行人口规模在百万级以上的市或区级的筛查场景。我国气膜实验室的使用报道,最早见于2021年6月广州新冠大筛工作的新闻中。一年来,工作人员摸索出了一部分气膜实验室的搭建与运营管理经验：组织管理、场地搭建、布局规划、配置能力、信息路径、生物安全等方面,为快速投入新冠大筛工作奠定了基础。     

社区大规模核酸采样护理管理策略优化的实践与探讨

新型冠状病毒肺炎疫情期间,海军特色医学中心对社区大规模核酸采样的护理管理策略进行不断完善和优化,构建以护理部为引导,感控科、医疗工程科、信息科、保障部、心理科等多元力量积极参与的专家主体结构,压实责任,本着快速、有序、安全的原则,致力于完善医用防护物资应急管理体系,体现适度超前的储备意识;建立外出核酸采样人员机动库,提高应急效率;优化“人、物、环境”消杀流程,筑牢防控防线;规范外出核酸采样感染防控指引,降低感染风险,探索一种客观、快捷、高效的核酸采样管理路径,取得初步成效,为常态化疫情防控下应对大规模核酸采样工作奠定了良好基础。     

5例普通型新冠肺炎患者临床诊治分析与病毒核酸追踪

目的 探讨延安市新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎,NCP)患者流行病学史、临床特征等。方法 回顾性分析延安市第二人民医院2020年1月23日至2020年2月22日收治的5例确诊新冠肺炎患者的流行病学特点、临床症状、实验室检查、CT影像表现及治疗转归等资料。结果 延安市5例NCP患者年龄18~60岁,平均年龄42岁,男性4例(80%),女性1例(20%),均有明确的流行病史,其中2例(40%)属于家庭聚集性发病;临床上可见乏力(5,100%)、发热(4,80%)、咳嗽、咳痰(3,60%)、咽干咽痛(2,40%)、腹泻(2,40%)、胸痛(1,20%),其中以乏力为首发症状的3例(60%)、发热3例(60%)、咳嗽2例(40%);实验室检查中4例(80%)可出现淋巴细胞减低,血沉、C反应蛋白升高,3例(60%)治疗过程中出现丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)升高,较少出现白细胞、中性粒细胞、降钙素原升高;胸部CT双肺均有典型磨玻璃样改变,多见于肺下叶、外带,且变化较快,3例(60%)于病程后期出现肺部纤维化病灶;鼻拭子、咽拭子、肛拭子、粪便核酸检测平均阴转时间为9.4 d、9 d、＞31.25 d、＞34 d;5例患者均为普通型病例,给予抗病毒、抗感染、对症等治疗,均好转出院,平均住院时间16.8天。结论 延安市NCP患者以输入型为主,以男性居多,人群普遍易感,临床以普通型为主,以乏力、发热(中等热度)为主要首发症状,实验室检查多见淋巴细胞减低,C反应蛋白、血沉升高,有典型的胸部CT表现以及病毒核酸检测阳性,给予抗病毒、抗感染、对症等治疗后均好转出院。     

昆明地区COVID-19患者多种生物样本的病毒核酸检测结果

目的 通过国产2019-nCoV(新型冠状病毒)核酸测定试剂,测定确诊的COVID-19(新型冠状病毒肺炎)患者的多种生物样本内SARS-CoV-2核酸的携病毒情况,对机体不同系统中SARS-CoV-2的状态展开观察,并分析其临床价值,为诊断和治疗提供参考.方法 收集昆明市第三人民医院53例确诊的新型冠状病毒肺(COV...     

献血者核酸筛查情况分析

目的：分析枣庄市献血者的核酸检测情况,为以后更好的开展核酸检测工作提供依据。方法ALT检测合格及酶联免疫法检测乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒阴性的献血者标本9901例,进行HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA的联合混样检测,对混样阳性的标本再进行拆分检测。并对拆分乙肝HBV-DNA阳性的样本进行乙肝两对半血清学的酶联免疫检测。结果共完成9901例标本的核酸混样检测,拆分阳性的标本7例,阳性率为0.071%(7/9901)。HBcAb阳性或HBcAb阳性伴HBsAb强弱阳性占71.40%(5/7),而HCV-RNA、HIV-RNA均阴性。对7例HBV-DNA阳性的标本进行乙肝两对半检测,结果显示：HBcAb阳性2例（28.5%),HBcAb阳性伴HBsAb强弱阳性3例(42.9%),HBsAg弱阳性伴HBsAb阳性1例(14.3%),两对半结果全部阴性1例（14.3%)。结论常规检测后的献血者依然有传染性的可能,核酸检测可有效降低传染性的风险。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒临床诊断效能评估

目的: 了解三种严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒的检测效果及临床诊断效能。方法: 采集40例临床诊断为2019冠状病毒病（COVID-19）和16例非COVID-19住院患者的咽拭子样本。采用湖南圣湘生物科技有限公司（以下简称“圣湘公司”）、硕世生物科技股份有限公司（以下简称“硕世公司”）、深圳华大基因股份有限公司（以下简称“华大基因”）SARS-CoV-2核酸RT-PCR检测试剂盒检测上述样本并分析其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值。比较一步裂解法和磁珠法、两种不同核酸提取仪（圣湘公司Natch CS S12C全自动核酸提取系统和西安天隆科技有限公司NP968-C核酸提取仪）磁珠法提取咽拭子样本中病毒核酸的效果及其RT-PCR检测结果的阳性符合率、阴性符合率、总符合率及Kappa值。结果: 圣湘公司试剂盒检测SARS-CoV-2核酸的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为95.00%、87.50%、95.00%、87.50%和0.825,硕世公司试剂盒分别为90.00%、87.50%、94.74%、77.78%和0.747,华大基因试剂盒分别为82.50%、81.25%、91.67%、65.00%和0.593。一步裂解法和磁珠法提取的病毒核酸检测结果阳性符合率、阴性符合率、总符合率和Kappa值分别为95.24%、100.00%、96.43%、0.909,但一步裂解法仅耗时25 min,而磁珠法需180 min。两种不同核酸提取仪磁珠法提取的RNA检测结果阳性符合率、阴性符合率、总符合率和Kappa值分别为85.00%、100.00%、89.29%和0.764。结论: 圣湘公司试剂盒检测SARS-CoV-2核酸效果略优于其他两家公司试剂盒。一步裂解法提取咽拭子样本中总RNA具有操作简单、省时和检测结果符合率较高的优点。     

新型冠状病毒核酸荧光型RT-RAA检测方法的建立及其评价

目的 建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)荧光型RT-RAA快速检测方法.方法 以体外转录SARS-CoV-2的RNA为模板,利用单链DNA结合蛋白、重组酶和DNA聚合酶,在40.5℃恒温下,快速完成orf1ab基因和S基因序列片段的扩增,并用已知新冠核酸阳性和其他呼吸道病毒感染患者咽拭子标本进行初步评价.结果 该...     

深圳市新型冠状病毒肺炎患者发病初期临床特点分析

目的 分析新型冠状病毒肺炎患者发病初期临床表现特点,为临床诊断治疗提供参考依据。方法 选取2020年1月22日—2月16日到深圳市龙岗区人民医院特殊发热门诊就诊患者为研究对象,按新型冠状病毒核酸检测结果,阳性为COVID-19患者组和阴性为非COVID-19患者组,分析两组基本情况、临床表现、就诊前用药、实验室检查和影像学特征,并进行统计学分析。结果 COVID-19患者组17例,其中男性9例,女性8例,有基础疾病9例,有明确的流行病学史15例、CT影像学异常16例（占94.12%）,就诊前使用过抗感染、退烧药10例（占58.83%）;两组WBC、NEUT#和LYM#差异有统计学意义（P< 0.05）;从两组实验室检查的不同水平分布比较,两组WBC和影像学特征差异有统计学意义（P<0.05）。结论 结合流行病学史、就诊前用药情况、外周血WBC、NEUT#、LYM#以及影像学特点有利于为临床医师早期诊断新型冠状病毒肺炎提供参考依据,做到早诊断、早隔离、早治疗。     

新型冠状病毒核酸PCR检测假阳性核酸污染类型的鉴别方法

目的 探讨新型冠状病毒核酸检测实验室出现污染类型的内部鉴定方法。方法 通过脱氧核糖核酸酶(deoxyribonuclease, DNase)的处理、去除反转录步骤等手段观察DNA质粒型质控品、RNA假病毒型质控品以及阳性患者核酸标本的扩增反应情况变化。结果 DNase处理1∶5、1∶25、1∶125和1∶625四个稀释度的DNA质粒型阳性质控品在15 min以上均有很好的清除作用,对RNA型的作用不大,可用于验证DNA型污染;去除反转录步骤对RNA型假病毒质控品的靶基因扩增有明显的影响,而对DNA型没有作用,可用于验证RNA型污染。结论 通过结合DNase和去除反转录步骤的方法可以鉴定出新型冠状病毒核酸实验室污染成分的类型。     

25例新型冠状病毒核酸复阳患者检查指标分析

目的:分析25例达出院标准的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)复检新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸阳性(简称复阳)患者的临床表现、实验室指标。方法:回顾性分析2020年1—4月在湖北医药学院附属东风医院收治的25例复阳患者不同时间点临床资料。结果:淋巴细胞(LYM)在各时期均有明显差异(均P<0.05);与确诊时比,复阳和出院时超敏C反应蛋白(hs-CRP)明显降低(均P<0.05),复阳时Ct值、白细胞(WBC)明显升高(均为P<0.05),中性粒细胞比值、淋巴细胞比值、降钙素原在各时间点均无统计学差异(均P>0.05);影像学显示复阳时患者肺部病灶较出院时进一步吸收或无明显差异。结论:复阳患者以LMY和WBC进行性升高,hs-CRP进行性下降为特点。各指标均较前趋好,推测复阳可能对患者无致病作用,但其传染性还待深究,管理部门需加强对COVID-19出院患者的随访和管理。     

经9次核酸检测终确诊的新型冠状病毒肺炎患者1例分析

目前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情在全球蔓延,形势严峻,并对全球公共卫生事业构成巨大挑战,快速准确的诊断COVID-19对疫情的防控有重要意义。本文报道1例COVID-19患者的调查和确诊过程,以对COVID-19确诊和疫情防控提供有价值的参考。患者为赴渝务工于2020年1月23日返乡人员,在渝期间,其同工地的一同事确诊为COVID-19,之后该工地接连有另外8位同事被确诊。患者返乡后2月2日被当地疫情防控单位采取医学隔离。患者于隔离后不久出现咳嗽,阵发性,干咳为主,偶可咳出黄色痰液等COVID-19相关临床症状,遂被当地新型冠状病毒肺炎定点医疗单位收治,后经市级新型冠状病毒肺炎诊治专家组远程视频会诊转入四川大学华西医院资阳医院。患者先后经历9次核酸检测,在前8次核酸检测均为阴性的情况下,于第9次核酸检测结果为阳性,2月21日最终确诊为新型冠状病毒肺炎。     

超重或肥胖对新型冠状病毒核酸转阴时间的影响

目的 探讨成年新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）确诊患者与无症状感染者的体质量指数（body mass index, BMI）水平与其新冠病毒核酸转阴时间的关系。方法 动态纳入2021年2月—2021年11月成都市公共卫生临床医疗中心收治的无症状感染者与COVID-19确诊患者。收集研究对象的流行病学与临床特征资料,连续监测其住院期间的新冠病毒核酸检测情况,记录核酸转阴时间。采用t检验或者秩和检验、χ²检验或者Fisher确切概率法分别考察各组变量的分布特征及不同变量间的联系,将不同BMI分组间分布存在差异（P<0.05）的变量纳入多因素Cox比例风险回归模型。结果 本次研究共纳入253名研究对象,年龄18~63岁,年龄的M（P₂₅,P₇₅）为37.00（30.00,47.00）岁,男女比例为4.16∶1。研究对象的BMI为（23.97±3.33）kg/m²,50.59%（128/253）的研究对象超重或肥胖,超重者占78.13%（100/128）。所有研究对象的新冠病毒核酸转阴时间在1~71 d,M（P₂₅,P₇₅）为7.0（2.0,18.0） d （P<0.001）,其中消瘦或体重正常者、超重或肥胖者新冠病毒核酸转阴时间的M（P₂₅,P₇₅）分别为5.00（2.00,19.00） d、8.00（2.00,17.75） d。多因素Cox比例风险回归结果显示,BMI水平可能与核酸转阴时间无关（HR=1.090,95%CI：0.843~1.410,P=0.510）。结论 成年无症状感染者与COVID-19确诊患者中,以中青年男性为主,超重或肥胖现象较为普遍。尚且不能认为超重或肥胖是新冠病毒核酸转阴时间的独立影响因素。     

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

3例新型冠状病毒无症状感染者核酸和特异性IgM/IgG抗体联合诊断分析

目的 探讨新型冠状病毒(简称新冠病毒)核酸检测联合特异性IgM/IgG诊断3例新冠肺炎无症状感染者的临床价值.方法 回顾性分析深圳罗湖区人民医院收治的3例新冠肺炎无症状感染者的基本情况、流行病史、实验室检查等研究资料,定期监测患者住院期间临床症状直至病愈出院.结果 3例无症状感染者属于重点监测人群且均为青壮年,其中病例...