肝纤维化大鼠转化生长因子β1/Smad蛋白的动态表达及意义

目的 探讨转化生长因子TGF-β1/Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用.方法 50只健康雄性SD大鼠分为2组:正常组和模型组,模型组大鼠利用40％ CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达.结果 ①肝组织病理:与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生.模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义(P＜0.05);②TGF-β1/Smad基因蛋白:免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(TβR-Ⅰ)、Smad2/3、Smad7蛋白表达均显著增强(P＜0.01),模型组大鼠肝脏TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P ＜0.05或0.01);模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P＜0.05或0.01).结论 肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1/Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展.     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1／Smad蛋白的动态表达及意义

目的探讨转化生长因子TGF—β1／Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用。方法50只健康雄性SD大鼠分为2组：正常组和模型组,模型组大鼠利用40％CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF—β1／Smad蛋白表达。结果①肝组织病理：与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生。模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义（P〈0．05）;②TGF—β1／Smad基因蛋白：免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF—β1、转化生长因子βI型受体（TβR—I）、Smad2、3、Smad,蛋白表达均显著增强（P〈0．01）,模型组大鼠肝脏TGF—β1、TβR-I、Smad。和Smad,之间存在正相关关系（P〈0．05或0．01）;模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF—β1、TβR—I、Smad2/3和Smad,之间存在正相关关系（P〈0．05或0．01）。结论肝组织TGF—β1／Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1／Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展。     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝脏Smads分子表达的影响

目的: 探讨丹芍化纤胶囊对大鼠实验性肝纤维化Smad2/3、Smad4和Smad7表达的影响,从而评价Smad分子作为抗纤维化靶点的应用价值。方法: 雄性Wistar大鼠48只分为正常组(n=16)、肝纤维化模型组(n=16)、丹芍化纤胶囊治疗组(n=16),除正常组外,其余采用CCl₄、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组予以丹芍化纤胶囊(1 g/kg)灌胃治疗8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT),光镜下观察肝组织纤维化程度,检测尿羟脯氨酸(Hyp)排出量,同时用免疫组化SABC法、免疫印迹(Western blotting)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR) 法检测肝组织中Smad2/3、Smad4和Smad7的蛋白及mRNA的表达。结果: 治疗组与肝纤维化模型组比较,肝脏指数、血清HA及ALT显著下降,肝纤维化程度显著减轻,尿Hyp排出明显增加。治疗组肝组织中Smad7的蛋白和mRNA的表达水平与肝纤维化模型组相比均显著增高,而Smad2/3、Smad4的蛋白表达与肝纤维化模型组相比则明显降低,但mRNA水平仅轻度下降,与肝纤维化模型组比较差异不显著。结论: 中药丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化可能主要是通过调节Smad7的基因转录和蛋白质翻译,从而发挥其反馈性抑制TGF-β/Smad促纤维化信号转导作用,这可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化的作用机制之一;Smad7可能是丹芍化纤胶囊作用的一个药物靶点。     

复方红景天防治肝纤维化的实验研究

目的研究复方红景天对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织TGF-β1基因表达的影响。方法80只SD大鼠随机分组:①空白对照组;②肝纤维化模型组;③复方红景天高剂量组(简称H组);④复方红景天中剂量组(简称M组);⑤复方红景天低剂量组(简称S组)。每组各16只。以CCl4腹腔注射法诱导大鼠肝纤维化,干预组大鼠在造模的同时给予复方红景天灌胃,正常对照组给予橄榄油皮下注射和生理盐水腹腔注射,8周实验结束时处死动物。酶联免疫吸附法检测血清TGF-β1水平,HE染色及免疫荧光观察大鼠肝组织病理学变化和胶原沉积,免疫组化法检测TGF-β1基因表达情况。结果治疗组大鼠肝组织内纤维组织及胶原沉积明显减少。结论复方红景天干预性治疗能够有效地减少大鼠肝组织胶原沉积,使其血清TGF-β1水平下降,并抑制TGF-β1基因表达,干扰TGF-β1介导的肝纤维化信号转导。     

实验性肝纤维化TGF-β1／Smad的表达及γ-干扰素对其的作用CSCD

目的观察Y-干扰索（IFN-Y）对四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制。方法30只雄性大鼠用CCl4诱导致肝纤维化,随机分成2组（模型组、IFN-Y治疗组）,连续用药12周,观察肝组织病理、血清透明质酸（hyaluronicacid,HA）、血清转化生长因子B,（transforminggrowthfactorβ1,TGF—β1）、肝组织切片TGF—β1、转化生长因子BI型受体（transforminggrowthfactorBreceptor,T13R·I）、Smad2/3,,的表达。结果①肝组织病理：与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生。模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义（P〈0．05）;Y-干扰素治疗组纤维化程度较模型组显著改善,差异有统计学意义（P〈0．05）;②肝纤维化指标（HA、TGF—β1）：Y-干扰素治疗组大鼠HA及TGF—β1较模型组均降低（P〈0．05）,③TGF—β1／Smad基因蛋白：免疫组织化学检测显示,与模型组相比,IFN-Y治疗组大鼠肝脏中TGF-β1、TβR—I和Smad,蛋白表达均显著减弱,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IFN-Y治疗组具有显著抗肝纤维化作用,对TGF—β1／Smad信号转导通路的影响可能为其作用机理之一。     

姜黄素抑制肝纤维化大鼠脂质过氧化物的生成及肝脏TGF-β1和PDGF的表达

目的： 观察姜黄素对肝纤维化过程中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）的生成及转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血小板源性生长因子（PDGF）表达的影响，探讨姜黄素预防肝纤维化的作用机制。方法: 采用四氯化碳腹腔注射方法，每周3次，共8周制作大鼠肝纤维化模型，同时每只大鼠按每100 g体重分别给予20 mg、10 mg、5 mg姜黄素灌胃处理，每周3次，共8周；设立正常组、肝纤维化组和阳性对照组。8周后处死大鼠，留取大鼠肝脏和血清。比色法检测血清ROS水平；硫代巴比妥酸（TBA）法检测肝组织匀浆中MDA含量；免疫组化方法检测各组大鼠肝组织中TGF-β₁、PDGF的表达水平。结果: 模型组大鼠血清ROS水平明显升高，姜黄素可显著降低ROS水平（P＜0.05）；姜黄素组大鼠肝组织中MDA含量明显低于模型组（P＜0.01）；模型组大鼠肝组织中TGF-β₁、PDGF大量表达，姜黄素可明显抑制上述因子的表达（P＜0.01）。结论: 姜黄素可抑制肝脏脂质过氧化物的形成以及TGF-β₁和PDGF的表达，从而发挥预防肝纤维化的作用。     

BMSCs调节TGF-β1/Smad通路对肝硬化大鼠免疫调节功能的作用研究

目的：探究BMSCs调节TGF-β1/Smad通路对肝硬化大鼠免疫调节功能的作用。方法：36只大鼠随机分为对照组、模型组和BMSCs组,每组12只。模型组和BMSCs组大鼠通过四氯化碳构建肝纤维化模型,BMSCs组大鼠尾静脉注射BMSCs(3×10~6个)。检测各组大鼠肝功能指标,HE和Masson染色检测肝组织损伤和纤维化情况,流式细胞术检测外周血中Th17细胞和Treg比例。Western blot、RT-qPCR检测胶原蛋白(Col)Ⅰ、ColⅢ、TGF-β1和Smad水平。结果：模型组大鼠ALT、AST、纤维化水平、肝组织ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1和Smad mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)。BMSCs组ALT、AST、纤维化水平、肝组织ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1和Smad mRNA和蛋白水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠Th17细胞占比和Th17/Treg显著高于对照组,Treg水平显著低于对照组(P<0.05)。BMSCs组Th17水平和Th17/Treg显著低于模型组,Treg水平显著高于模型组(P<0.05...     

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的:研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾纤维化大鼠TGF-β1-Smad通路的影响,借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法:雄性SD大鼠18只随机分为3组,假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量;HE染色和电镜观察肾组织病变;采用RT-PCR检测肾组织TGF-β1 mRNA水平;蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体(TβRI)、转化生长因子II型受体(TβRII)、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多;病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多;肾组织TGF-β1mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较,中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少;肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻;肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论:抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路,抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化,减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。     

TGFβ1，CTGF信号转导通路的变化在实验性小鼠肝纤维发生中的作用

 摘要：目的 探讨实验性肝纤维化小鼠肝组织中TGFβ1,CTGF信号转导通路的变化及意义。方法30只C57BL6/J小鼠随机分为正常对照组、肝纤维化模型组,采用10%的CCL4橄榄油腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型,对照组给予生理盐水灌胃,共造模8周。观察血清ALT、HA水平,HE染色、Masson染色观察肝组织炎症及纤维化程度,免疫组化法和RT-PCR法对肝组织α-SMA、TGFβ1、TGFβRⅡ、Smad3,Smad7,CTGF蛋白和mRNA水平进行检测,并与对照组肝组织进行比较。结果 模型组小鼠血清ALT及HA水平明显高于对照组;模型组小鼠肝组织α-SMA、TGFβ1、TGFβRII、Smad3、CTGF蛋白表达和TGFβ1、Smad3、CTGF mRNA表达明显高于对照组,而模型组肝组织Smad7蛋白和Smad7 mRNA表达较对照组小鼠显著降低。结论 TGFβ1和CTGF信号转导通路过度活化,Smad7表达和负调节TGFβ、CTGF信号转导通路的功能被抑制可能与肝纤维化的发生和发展密切相关。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

鳖甲煎丸对肝硬化模型大鼠糖脂代谢紊乱和肝纤维化的影响

目的观察鳖甲煎丸对肝硬化模型大鼠肝功能及血清GLU、TG、TGF-β1、CTGF、PDGF的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝硬化糖脂代谢紊乱及肝纤维化的作用机制。方法 SD大鼠30只适应性饲养1周后,随机分为空白组10只、造模组20只。空白组自由喂养,造模组采用四氯化碳复合法诱导构建肝硬化门脉高压症大鼠模型大鼠。选择16只造模成功的肝硬化模型大鼠随机分为模型组和鳖甲煎丸组,每组8只。模型组自由喂养,鳖甲煎丸组以中成药鳖甲煎丸0.9 g/kg剂量灌胃干预8周,每日1次。取大鼠肝脏组织和下腔静脉血,肝组织切片后采用苏木精-伊红(HE)及Masson染色电镜下观察肝组织纤维化情况,采用试剂盒检测大鼠血清AST、ALT、TP、ALB、TBil、GLU、TG、TGF-β1、CTGF、PDGF水平。结果 (1)空白组大鼠肝细胞结构完整、排列整齐,未见明显细胞变性、坏死;模型组大鼠肝细胞排序混乱,出现明显脂肪变性,肝脏汇管区可见大量胶原纤维增生,小叶结构破坏明显,肝组织出现明显的条索样改变;鳖甲煎丸组大鼠肝组织纤维增生明显改善,仅见少量纤维组织增生,肝小叶结构完整,肝小叶结构破坏得到不同程度修复,小叶间隙缩窄,肝细胞排列规整、未见明显脂肪变性。(2)与空白组比较,模型组AST、ALT、TP、ALB、TBil、GLU、TG、PDGF、TGF-β1、CTGF差异有统计学意义(P0.01);经过8周的干预,鳖甲煎丸组AST、ALT、TBil、GLU、TG、PDGF、TGF-β1、CTGF显著低于模型组(P0.01),ALB水平显著高于模型组(P0.01),TP水平与模型组差异无统计学意义(P0.05)。结论鳖甲煎丸能显著改善肝硬化模型大鼠的肝功能和糖脂代谢紊乱,作用机制可能与调控PDGF、TGF-β1、CTGF等纤维化细胞因子有关。     

卵巢切除对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化形成的影响

为探讨卵巢切除对CCl4 诱导大鼠肝纤维化形成的影响 ,采用CCl4 诱导雌性大鼠肝纤维化动物模型 ,观察卵巢切除及雌激素替代治疗 (苯甲酸雌二醇 1mg kg)对肝脏胶原沉积和I、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响 ,并分别检测血清学标志及肝脏组织学等变化。结果显示CCl4 模型组大鼠肝脏发生典型的肝纤维化改变 ,卵巢切除组的肝脏胶原沉积更为明显 ,肝脏表达I、Ⅲ型胶原及血清肝纤维化指标也明显高于CCl4 摸型组 (P <0 0 5 ) ,而雌激素干预及替代治疗则可抑制肝纤维化的形成。表明卵巢切除加速CCl4 诱导大鼠肝纤维化的形成 ,其发生可能与卵巢分泌的雌激素对肝纤维化的抑制作用有关。     

红丝线草对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的影响

目的探讨红丝线草对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的影响。方法用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,不同浓度红丝线草干预后,取肝脏常规制片并HE染色,免疫组织化学方法检测各组大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的情况。结果红丝线草高、中剂量组大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达较模型组明显降低(P<0.05)。结论红丝线草的抗肝纤维化作用,可能与降低TGF-β1及VEGF蛋白的表达而影响细胞外基质的代谢有关。     

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的： 研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾纤维化大鼠TGF-β₁-Smad通路的影响，借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法: 雄性SD大鼠18只随机分为3组，假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型，抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量；HE染色和电镜观察肾组织病变；采用RT-PCR检测肾组织TGF-β₁ mRNA水平；蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体（TβRI）、转化生长因子II型受体（TβRII）、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果: 与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多；病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多；肾组织TGF-β₁ mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较，中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少；肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻；肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论: 抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β₁-Smad通路，抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化，从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化，减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。     

肝纤维化时肝脏OPN和PAI-1的表达变化

目的:研究骨桥蛋白(OPN)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达特征及其在肝纤维化时的变化。方法:采用二甲基亚硝胺制作大鼠肝纤维化模型,大鼠肝脏常规HE和天狼猩红染色,采用SABC法做免疫组织化学染色及Western blotting检测OPN和PAI-1蛋白表达,抽提肝组织总RNA,RT-PCR检测OPN mRNA表达。结果:正常大鼠肝组织OPN和PAI-1表达极弱,肝纤维化大鼠肝脏中OPN表达增强,阳性信号散在或弥漫性分布,主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞浆、枯否氏细胞、汇管区的部分肝细胞、肝窦壁内皮细胞。PAI-1在肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处,肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞,组织纤维间隔处及其外周细胞亦见阳性染色。Western blotting检测正常大鼠肝脏OPN的蛋白表达极低,肝纤维化组OPN的蛋白表达较正常组显著增强(P0.01)。与正常组比,肝纤维化组PAI-1表达也显著增强。RT-PCR检测结果显示,正常大鼠肝脏OPN mRNA表达极低,肝纤维化大鼠肝脏OPN mRNA的表达明显增强(P0.05)。研究结果证明,肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高。结论:肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高,OPN可能会促进PAI-1的高表达,从而抑制ECM降解、加速肝纤维化进程。     

转化生长因子βⅠ型受体对组织纤维化形成及发展的影响

目的探讨转化生长因子βⅠ型受体(TGFβR-Ⅰ)对组织纤维化的形成及发展的影响。方法采用RNA干扰技术阻断人成纤维细胞系HFL-Ⅰ细胞的TGFβR-Ⅰ表达,Western blot法检测RNA干扰前后TGFβR-Ⅰ的表达水平,MTT法分析干扰前后的细胞生长状态,采用动物模型结合HE染色观察RNA干扰阻断TGFβR-Ⅰ表达前后的中毒性肝纤维化模型大鼠的肝脏病理学变化。结果特异性TGFβR-Ⅰ干扰RNA能有效抑制TGFβR-Ⅰ蛋白质合成和成纤维细胞株HFL-Ⅰ细胞的生长,正常鼠肝组织处于纤维化S0期,中毒性肝纤维化模型鼠肝组织处于纤维化S2期,特异性TGFβR-Ⅰ干扰RNA治疗组模型鼠肝组织则呈现纤维化S1期特征。结论抑制TGFβR-Ⅰ的表达可明显减轻中毒性肝纤维化模型大鼠的肝纤维化程度,对进一步优化肝纤维化的预防和治疗策略具有重要意义。     

间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1、α-2抗纤溶酶、运甲状腺素蛋白对肝纤维化的诊断价值及复方汉防己对其影响

目的:探讨间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1(ITIH1)、α-2抗纤溶酶(SERPINF2)、运甲状腺素蛋白(TTR)对大鼠肝纤维化的诊断价值;以及复方汉防己对肝纤维化ITIH1、SERPINF2、TTR的影响.方法:Fisher344大鼠随机分为对照组,造模组,低、中、高剂量复方汉防己干预组.采用RT-PCR和免疫组织化学检测大鼠肝组织ITIH1、SERPINF2、TTR的mRNA及蛋白表达,ELISA法检测其血清含量.H-E染色、Masson三色染色、网状纤维染色观察肝纤维化程度.结果:造模组大鼠血清及肝组织中ITIH1、SERPINF2、TTR蛋白和mRNA的表达较对照组显著减少.复方汉防己干预组大鼠血清及肝组织中3者的表达较造模组均有不同程度升高.病理结果也显示复方汉防己干预组大鼠肝纤维化程度均有不同程度减轻.结论:ITIH1、SERPINF2、TTR对肝纤维化的分级诊断及病情监测具有一定的价值;复方汉防己能明显降低CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度并能升高ITIH1、SERPINF2、TTR蛋白和mRNA的表达.     

益气化瘀柔肝方通过调控NLRP3炎性小体活性缓解CCl_4诱导的大鼠肝纤维化

目的研究益气化瘀柔肝方(Yiqi Huayu Rougan Recipe, YHR)对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化的影响及分子机制。方法将SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组,YHR低、中、高剂量(5.4、10.8、21.6 g/kg)组。末次给药后,收集大鼠血清和新鲜肝脏组织,运用生化法检测大鼠血清ALT、AST、ALP含量;ELISA法检测血清HA、LN、Hyp和促炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平;采用HE染色和Masson染色法观察大鼠肝组织病理变化;采用RT-qPCR和Western blot法检测肝组织TLR4、NF-κB和炎性小体相关分子的mRNA和蛋白表达水平。结果秋水仙碱和各剂量组的YHR均能不同程度的减少大鼠血清酶谱含量以及肝纤维化指标水平,降低促炎性因子水平,且YHR高剂量组最为明显;秋水仙碱组和YHR各剂量组均能显著改善肝纤维化大鼠的病变程度,且肝组织中的TLR4、NF-κB和炎性小体相关分子的表达均减少。结论 YHR具有缓解CCl_4诱导的大鼠肝纤维化的作用,其药效作用机制可能与调控NLRP3炎性小体信号通路活性有关。     

肝纤维化大鼠肝脏中组蛋白修饰水平的变化

目的:观察肝纤维化大鼠肝脏中组蛋白修饰的变化,并探讨其在肝纤维化发生发展过程中可能的作用。方法:雄性Wistar大鼠20只,随机分为正常对照组和肝纤维化组,其中肝纤维化组采用CCl_4皮下注射以制备大鼠肝纤维化模型,正常组注射等量植物油溶液。实验第8周末,股动脉放血处死大鼠,取2组血清,采用生化和放射免疫法测定血清肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST),以及肝纤维化标志物血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的水平;取2组大鼠肝脏,测定肝脏指数;取肝组织常规固定,HE染色和Masson染色观察组织病理改变及胶原纤维沉积情况;Western blot检测2组大鼠肝脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(ColⅠ)表达情况,以及acH4K12、acH3K9、H3K4me2和H3K9me2修饰水平的变化。结果:与对照组相比,模型组大鼠肝脏指数及ALT、AST、HA、LN、ColⅣ和PCⅢ水平明显增高(P0.05);Western blot检测发现,与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝组织的acH4K12修饰水平减少(P0.05),acH3K9和H3K9me2修饰水平及α-SMA和ColⅠ表达明显增加(P0.05),H3K4me2修饰水平的差异无统计学显著性。结论:肝纤维化大鼠肝脏中acH4K12、acH3K9和H3K9me2修饰水平改变可能与某些细胞外基质代谢相关基因转录调控有关,从而参与了大鼠肝纤维化发生。     

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨肝卵圆细胞(HOCs)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路蛋白表达的影响。方法:采用CCl4和复方因素制备HF大鼠模型,取模型组大鼠分离纯化HOCs,从门静脉植入HF大鼠肝组织内,连续观察30d,同时以五灵胶囊为阳性对照。在植入后8d、15d、23d、30d各组大鼠尾静脉采血,酶法测定血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),实验结束取肝组织Masson染色观察肝组织形态学变化,Western blotting检测肝组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(ERK)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-ERK)、转化生长因子β受体Ⅰ(TβRI)、转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)、果蝇MAD类似基因7(Smad7)蛋白的表达。结果:HOCs植入组与五灵胶囊组在植入后15d、23d、30dAST、ALT水平显著降低;肝组织胶原纤维增生程度明显减轻;肝组织表达ERK、p-ERK、TβRI、TβRⅡ蛋白作用显著降低,表达Smad7的作用显著增加。结论:植入HOCs可阻止大鼠HF的进展,其作用机制可能与其抑制肝组织内TGF-β/Smad信号通路p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白的表达有关。