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目的构建重组质粒TAZ-pcDNA3.1及TAZ-pEGFP-C2,并应用Western Blot检测TAZ蛋白在细胞内的表达情况,初步探索TAZ分子促进细胞增殖和迁移的作用机制。方法通过PCR扩增获得TAZ基因片段,胶回收后连接T载体,蓝白斑筛选,转化,提质粒,酶切,用T4DNA Ligase连接,亚克隆进入pEGFP-C2和pcDNA3.1获得新的重组质粒,分别转染HEK293细胞,智能型荧光细胞监测仪观察TAZ分子在细胞内的分布情况,Western Blot检测其在细胞内的表达情况。结果重组质粒经双酶切鉴定和测序证明构建成功,荧光照片显示TAZ分子分布在细胞核和细胞浆中,Western Blot检测结果表明转染有重组质粒TAZ-pcDNA3.1的HEK293细胞中有大量TAZ蛋白表达。结论成功构建了两种重组质粒,并初步验证了TAZ蛋白的细胞定位,为进一步研究其促进增殖和迁移的作用机制奠定了基础。 相似文献
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目的:探讨血清CEA检测在消化道恶性肿瘤诊断中的应用价值。方法:选择我院2010年1月至2012年12月期间收治的150例消化道恶性肿瘤患者,同时选择40例健康体检者,取两组人员的血清CEA检测结果,分析血清CEA检测在消化道恶性肿瘤诊断中的临床价值。结果:50例健康志愿者的血清CEA无1例阳性。CEA在各种消化道恶性肿瘤患者血清中的表达水平均显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。血清CEA在结直肠癌患者血清中的表达阳性率为62.5%(25/40),在胰腺癌患者血清中的表达阳性率为47.06%(16/34),在肝癌患者血清中的表达阳性率为33.33%(10/30),在胃癌患者血清中的表达阳性率为32.61%(15/46)。结论:在不同类型的消化道恶性肿瘤患者中,CEA具有一定的特异性。其在直肠癌患者中的表达率最高,其次为胰腺癌患者,再次分别是肝癌和胃癌。血清CEA检测在消化道恶性肿瘤诊断中具有较高的应用价值。 相似文献
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目的:探讨TAZ蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。方法:收集2010年6月-2013年1月在云南省第一人民医院胸心外科手术切除且经病理确诊的62例非小细胞肺癌组织为试验组,以癌旁组织(距肿瘤缘>5cm)和21例肺良性肿瘤组织为对照组,采用蛋白质印迹法(westem blot,WB)检测TAZ蛋白表达情况并分析。结果:蛋白质印迹法检测到TAZ蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达量高于癌旁及肺良性肿瘤组织,差异有统计学意义(P=0.000,0.008,P<0.05)。非小细胞肺癌患者TAZ蛋白表达在肿瘤大小及分化程度分组比较,差异有统计学意义(P=0.036,0.011,P<0.05)。结论:TAZ可能与非小细胞肺癌的发生、发展相关;TAZ可能成为预测肺癌预后的指标及治疗靶点。 相似文献
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消化系肿瘤是临床上最常见的恶性肿瘤,是多种基因联合作用的结果。Livin作为凋亡抑制蛋白家族的新的一员,能直接抑制凋亡的核心物质caspase蛋白酶的活性,从而抑制细胞凋亡。Livin在消化系恶性肿瘤中呈高表达,与肿瘤的发生、发展密切相关。以Livin为靶点的基因治疗为消化系肿瘤的治疗提供了一个新的方向。现对Livin的分子结构、作用机制及其在消化道肿瘤中的研究进展等方面进行综述。 相似文献
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目的:探讨Yap蛋白、TAZ蛋白在结直肠癌发生、发展中的作用及与预后的关系。方法采用免疫组化Envision两步法检测96例结直肠癌组织及30例正常结直肠黏膜组织中Yap和TAZ蛋白的表达;分析两种蛋白的表达与临床病理特征与生存期的影响。结果 Yap蛋白、TAZ蛋白在结直肠癌组织中的表达分别为64.6%、67.7%,而正常结直肠组织的表达率为20.0%、23.3%,差异有统计学意义( P<0.01)。两者均与患者肿瘤大小、分化程度、淋巴转移、Dukes分期有关(P<0.05),而与年龄、性别无关(P>0.05);两者在结直肠癌组织中的表达呈正相关( rs=6.297,P<0.05);Yap蛋白阳性者5年生存率低于Yap蛋白阴性者,差异有统计学意义(χ2=4.496,P<0.05),TAZ蛋白阳性者5年生存率低于TAZ蛋白阴性者,差异有统计学意义(χ2=3.953,P<0.05)。结论 Yap蛋白、TAZ蛋白与结直肠癌组织的大小、分化程度、淋巴转移Dukes分期有关,两者表达呈正相关,两者蛋白对判断结直肠癌的生存期有指导意义。 相似文献
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目的:探索PDZ结合基序转录共激活因子(TAZ)参与张应力促进间充质干细胞(MSCs)骨向分化的调控作用及分子机制。方法:原代培养人牙周膜细胞(hPDLCs)。利用Flexcell系统对hPDLCs体外加载12%,0.5 Hz张应力,实时荧光定量PCR及Western blot检测hPDLCs中TAZ及成骨标志物核心结合因子α1(Cbfα1)、I型胶原(COL I)、骨钙素(OCN)、锌指结构转录因子(OSX)的表达变化;蛋白质免疫共沉淀检测TAZ与Cbfα1的结合情况。结果:加载12%,0.5 Hz张应力24 h及48 h时显著促进hPDLCs的TAZ、Cbfα1、COL I、OSX、OCN mRNA及蛋白表达水平(P<0.05)。蛋白质免疫共沉淀证实TAZ与Cbfα1的结合量显著增加。hPDLCs转染TAZ siRNA 72 h,加载12%,0.5 Hz张应力24 h,TAZ蛋白水平及张应力所促进的细胞成骨蛋白表达下降。结论:张应力作用下TAZ通过上调Cbfα1的表达与转录活性诱导hPDLCs骨向分化。 相似文献
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Hippo信号通路在进化上高度保守,哺乳动物细胞中该信号通路的核心成员包括MST1/2激酶、LATS1/2激酶和效应蛋白YAP/TAZ。虽然YAP/TAZ及其下游相关研究相对较多,但Hippo信号通路的上游调控因子并不明确,是目前该通路研究的热点方向之一。另外,Hippo信号通路可与Wnt和Notch等其他信号通路发生交叉对话,并在控制器官大小、维持组织稳态、促进组织修复再生等过程中扮演重要角色。Hippo信号通路异常可能会导致多种肿瘤的发生,尤其是肝癌、结直肠癌和胃癌等消化系统肿瘤,其成员在消化系统肿瘤中的异常表达与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等过程密切相关。Hippo信号通路对肝脏的修复再生至关重要,其失活会导致原发性肝癌的发生,YAP在肝癌中的促肿瘤作用机制主要依赖于TEAD介导的基因转录。Hippo信号通路对于维持肠道稳态也很重要,其失调会导致结直肠癌的发生及复发。在原发性和转移性胃癌中,YAP/TAZ的表达显著上调,但具体分子调控机制并不清楚。本文总结了近年来Hippo信号通路的发现、上游调控因子及其在消化系统肿瘤发生发展过程中的作用和分子调控机制,并对未来的研究方向进行初步探讨。 相似文献
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目的:构建人真核表达的TAZ慢病毒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ,转染293FT 细胞获得重组慢病毒颗粒,探讨TAZ对成骨前体细胞MC3T3-E1 分化的调控作用。方法:将已经过测序验证的含有TAZ基因慢病毒入门质粒pENTR(tm)221-TAZ通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中。对重组质粒进行酶切鉴定,并在细胞中验证表达。将该重组载体和其他PackingMix 3 个质粒载体充分混合,用阳离子脂质体转染293FT 细胞,培养和待细胞完全裂解后收集富含TAZ基因的病毒颗粒上清液,取适量上清液感染MC3T3-E1细胞,采用杀稻瘟菌素Blastcidin 筛选,建立稳定过量表达 TAZ 蛋白的 MC3T3-E1/TAZ细胞系。用条件培养基诱导 MC3T3-E1和 MC3T3-E1/TAZ细胞系向成骨细胞定向分化,von Kossa 和茜素红染色观察MC3T3-E1和MC3T3-E1/TAZ细胞的成骨分化。结果:凝胶电泳和测序结果均证明TAZ重组慢病毒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ构建正确,并能在细胞中正确表达。与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染MC3T3-E1细胞。Von Kossa 染色和茜素红染色, MC3T3-E1/TAZ细胞系中生成的磷酸钙比MC3T3-E1细胞系中生成的磷酸钙多。结论:成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ,并能在细胞中正确表达;成功包装了TAZ病毒,并获得过表达TAZ的MC3T3-E1细胞;过表达TAZ促进MC3T3-E1向成骨细胞分化。 相似文献
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目的 探讨转录共激活因子(TAZ)在结直肠癌患者外周血与肿瘤组织中表达,分析其关系及临床意义.方法 选取经病理确诊为结直肠癌并行根治性手术患者85例为手术组,手术后确诊复发的患者35例作为复发组,同时选取年龄性别相匹配的健康人50例为对照组.取结直肠癌患者肿瘤组织及正常黏膜组织石蜡标本,采用免疫组织化学染色检测TAZ表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组外周血中TAZ的水平.结果 手术组患者术前外周血中TAZ水平明显高于对照组(P<005),手术后TAZ水平较对照组无明显变化(P>0.05),复发组患者外周血TAZ水平明显高于手术组术前(P<0.05).手术组患者肿瘤组织中TAZ表达明显高于正常黏膜组织(P<0.05),复发组患者肿瘤组织中TAZ表达高于手术组(P<0.05).手术组和复发组患者肿瘤组织与外周血TAZ水平呈正相关性(P<0.05).结论 监测TAZ水平对及时了解肿瘤复发有明显的参考价值. 相似文献
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在我国大肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,大肠癌的浸润和转移是导致患者治疗失败和死亡的主要原因。我们通过研究survivin、p53的表达在不同病理类型大肠癌组织中的差别来探讨survivin、p53在癌组织浸润转移过程中的相关分子机制。 相似文献
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惠桃 《内蒙古医科大学学报》2023,(3)
目的:探讨胃苏颗粒(WSG)对幽门螺杆菌诱导的慢性萎缩性胃炎(CAG)动物模型的影响及其作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和WSG低、中、高剂量组。除对照组外,其余组建立幽门螺杆菌感染的CAG模型。从第8周开始,WSG每日灌胃WSG(8、16、32? mg/kg),连续4周。试验结束时,通过HE染色评估胃黏膜损伤的组织病理学改变。采用qPCR和Western blot分析胃组织中LATS2、TAZ 的mRNA和蛋白表达。此外,用幽门螺杆菌感染GES-1细胞,并用WSG对其进行干预。采用CCK-8试验分析细胞活力,并分析Hippo/TAZ信号通路表达情况。结果:干预4周后,WSG各剂量组胃粘膜损伤明显减轻,胃粘膜糜烂长度明显缩短,UI评分和炎症评分均呈剂量依赖性降低(P<0.01)。幽门螺杆菌可显著增加TAZ的表达,并降低 LATS2的表达。WSG治疗以剂量依赖的方式逆转了TAZ和 LATS2表达的变化,特别是与CAG组相比,WSG中、高剂量的TAZ和 LATS2蛋白和mRNA表达表现出显著差异(P<0.05)。与幽门螺杆菌感染组相比,40 μM(83.44±5.46)和20 μM WSG组(75.47±8.31)的GES-1细胞活力显著增加(P<0.05)。qPCR和免疫荧光染色的结果显示,WSG干预增加了GES-1细胞中LATS2、WWC2表达,但降低了TAZ表达。此外,WWC2 siRNA预处理削弱了WSG诱导的LATS2活化,并促进了TAZ的表达(P<0.05)。结论:幽门螺杆菌诱导CAG的形成与Hippo/TAZ信号通路有关,WSG通过抑制Hippo/TAZ信号传导发挥了其胃肠道保护作用。 相似文献
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目的:探索成骨转录共刺激因子TAZ(Tafazzin)激动剂TM?25659对人脂肪干细胞(adipose?derived stem cells,ADSCs)在体内外成骨分化和骨形成过程中的生物学作用。方法:分离培养人ADSCs,通过蛋白质免疫印迹、实时定量PCR检测ADSCs成骨、成脂分化及TM?25659干预后不同时间点TAZ的表达变化,茜素红和油红O染色分别验证其成骨和成脂效果;以β?磷酸三钙(β?tricalcium phosphate,β?TCP)材料为载体负载成骨诱导和TM?25659预处理后的ADSCs植入裸鼠体内,6周后利用苏木精?伊红染色、Masson三色染色和免疫组织化学染色法检测比较ADSCs体内成骨效果。结果:人ADSCs体外成骨分化过程中TAZ表达上调,而在成脂分化中其表达降低。TM?25659促进ADSCs中TAZ的表达,并增强ADSCs体内成骨及骨生成能力。结论:TAZ是促进ADSCs成骨分化的关键调控因子之一,以TAZ为药物靶点可促进ADSCs的骨再生及修复。 相似文献