阴道毛滴虫染色标本制作方法探讨

阴道毛滴虫染色标本制作经用实验室培养４８ｈ的滴虫，生理盐水洗涤２次，制成涂片，用复合染液（吉氏染液５ｍｌ＋瑞氏染液６ｍｌ，蒸馏水加至１００ｍｌ）在３６℃温度下，染色６０ｍｉｎ。这种方法可得到染色上的最佳效果。     

阴道毛滴虫标本传统染色方法的改良

阴道毛滴虫染色方法的改进报道甚少。由于其鞭毛着色难以获得理想的效果，因此染色方法的改良仍是制作实验教学标本中值得探讨的问题。我室于1998年底在制作教学标本过程中采用传统吉氏、瑞氏混合液配制各种不同比例的混合染液对经培养后的阴道毛滴虫标本涂片染色，摸索出一种合适的比例浓度，改进了阴道毛滴虫着色效果。     

阴道毛滴虫标本染色方法的探讨

阴道毛滴虫呈世界性分布，根据Brown(1972)估计全世界阴道毛病虫感染者约有1．8亿人。目前感染率有增高趋势，仅美国每年就有400～800万例。阴道毛滴虫是通过直接和间接两种途径进行传播，滴虫性阴道炎是临床上常见的一种妇科疾病，在教学中常用到阴道毛滴虫标本，本文就阴道毛滴虫的制作和染色进行了探讨。     

制作永久性阴道毛滴虫标本染色方法的改进

阴道毛滴虫永久性标本制作和染色方法的报道很多 ,染色效果众说纷坛。多年来 ,我们在制作教学标本的过程中 ,对阴道滴虫的制作和染色进行了一些改进 ,获得较满意的效果。现报道如下。1　材料与方法1.1　虫株来源　无菌操作下取患者含阴道毛滴虫的阴道分泌物 ,接种于 8ｍｌ肝浸汤培养基内 ,加灭活小牛血清 2ｍｌ及青、链霉素适量 ,置 37℃培养箱4 8ｈ ,转种一次。1.2　染色液的配制　 (1)吉氏染色液及瑞氏染色液配制按郑思民方法配制[1] ;(2 )混合染色液配制 :吉氏液 1ｍｌ,ｐＨ 7.0的磷酸缓冲液 5ｍｌ,瑞氏液 2ｍｌ。1.3　制片和染色　 (1)…     

阴道毛滴虫标本传统染色方法的改良

阴道毛滴虫染色方法的改进报道甚少。由于其鞭毛着色难以获得理想的效果 ,因此染色方法的改良仍是制作实验教学标本中值得探讨的问题。我室于 1998年底在制作教学标本过程中采用传统吉氏、瑞氏混合液配制各种不同比例的混合染液对经培养后的阴道毛滴虫标本涂片染色 ,摸索出一种合适的比例浓度 ,改进了阴道毛滴虫着色效果。1　材料与方法1 1　标本来源及培养　无菌操作下取阴道分泌物 ,经镜检查获阴道毛滴虫后 ,接种于 8ｍｌ肝浸汤培养基内 ,并加灭活小牛血清 2ｍｌ及青霉素、链霉素适量 ,置 37℃培养箱 48～ 72ｈ转种一次。1 2　染液的配制　吉氏原液 1ｍｌ,瑞氏原液 0 5ｍｌ,ｐＨ7.0磷酸缓冲     

介绍一种新的阴道毛滴虫染色涂片标本制作方法

滴虫性阴道炎是临床上常见的一种妇科疾病 ,在教学中 ,以往常用的阴道毛滴虫标本的制作方法有直接涂片法和培养法。直接涂片法虽然虫体和鞭毛的染色较好 ,但往往因阴道分泌物及脱落细胞等杂质较多而影响到标本的质量 ;培养法因转种时间不恰当及转种时易造成污染而直接影响到阴道毛滴虫的染色效果。本方法采用人工消化法取得了较好的效果。1　制作方法1 1　消化液的配制　胰蛋白酶 30ｍｇ ,溶于 10 0ｍｌ生理盐水中 ,混匀。1 2　涂片的方法　将在患者处取得的阴道毛滴虫标本 ,加入 3ｍｌ生理盐水于离心管中混匀。 10 0 0转 /分离心 15分钟 ,…     

鼠毛滴虫代阴道毛滴虫在实验教学中活体的观察

在人体寄生虫学实验教学过程中 ,观察寄生虫标本是一重要的环节 ,阴道毛滴虫玻片标本中虫体的鞭毛不易着色 ,形状固定后又不规则 ,难与阴道其它细胞相区别 ,油镜下观察费时难以寻找 ,为保证实验教学质量 ,解决活标本来源不及时的矛盾 ,我们用鼠毛滴虫代替阴道毛滴虫活标本观察 ,取得了较好的效果。1　材料与方法1.1　材料　 2 0ｇ左右小白鼠 (本单位动物园提供 ) ,洁净载玻片 ,盖片 ,生理盐水。1.2　方法　取小白鼠 ,以脱颈椎致死 ,用剪刀打开小白鼠腹部 ,暴露腹腔找到盲部 ,剪开肠壁 ,用竹棒挑取肠内容物火柴头大小 ,置于滴有一滴生理盐水…     

白头翁体外抗阴道毛滴虫效果观察

目的：探讨中草药白头翁体外抗阴道毛滴虫作用。方法：光镜下观察白头翁水提液（FWE）作用后阴道毛滴虫的形态变化,并用姬氏法染色。结果：随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加,阴道毛滴虫死亡率增高。白头翁水提液24h杀灭阴道毛滴虫的最低有效浓度为1．25mg／ml。药物作用后虫体内空泡增多,颗粒堆积,虫体碎解。结论：白头翁具有较强的抗阴道毛滴虫作用。     

阴道毛滴虫单克隆抗体乳胶快速诊断方法的研究

目的　建立阴道毛滴虫单克隆抗体乳胶快速诊断方法。方法　从阴道中收集分泌物 ,分别用乳胶凝集法和培养方法 ,对 1 97份妇科门诊患者的阴道分泌物标本检测。结果　与培养方法比较 ,乳胶凝集法的敏感性为89.9%,特异性为 95 .5 %,阳性预期值为 6 8.0 %和阴性预期值为 98.8%。结论　该单克隆抗体研制成的乳胶凝集法具有快速、简便及高度的特异性和较好的敏感性 ,能提高临床滴虫性阴道炎的诊断率。     

阴道毛滴虫封存标本制作方法的改进

目的 探索改进阴道毛滴虫封存标本的制作方法 .方法 取附属医院妇科门诊阴道毛滴虫患者的阴道分泌物,在无菌条件下接种于改良的肝浸汤培养基中,加入2 ml无菌健康马血清及5×104 U/ml青霉素,置37℃培养箱内培养,选取转种3代培养36 h的阴道毛滴虫,采用载玻片的包装隔离纸带拖片,经改进的染液染色制片.结果 封片标本中虫体分布均匀,伸展好.细胞浆呈淡蓝色,波动膜、轴柱、鞭毛呈蓝色,核红色,核仁紫红色.结论 采用本方法制作的阴道毛滴虫封片标本虫体结构清晰,形态特征明显.     

阴道毛滴虫新乡株的体外培养

目的观察阴道毛滴虫新乡株在不同的pH值培养基中和不同转种量的培养效果。方法阴道毛滴虫在pH5．8、6．2、6．6、7．0四组不同培养基中37℃恒温培养,每隔24h观察虫数、活率并计算活虫数。培养基pH6．6时,设置不同的转种量,观察虫数、存活率并计算活虫数。结果pH7．0组培养第2．4天虫数、活虫数、存活率均明显低于其它三组,且在培养过程中无明显活虫数及存活率高峰,第1．4天,pH6．6组活虫数、存活率均高于其它三组。转种100万／管和转种10万／管培养24h和48h的阴道毛滴虫存活率和培养48h的阴道毛滴虫活虫数均较高,转种1万／管培养效果较差。结论pH7．0不适宜阴道毛滴虫体外培养,pH6．6时,培养各项指标均较好,可能更适合阴道毛滴虫体外培养。阴道毛滴虫的体外培养转种宜在培养后48h进行．每次接种量以10万／ml为宜。     

阴道毛滴虫cDNA文库的构建和鉴定

目的 :构建阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)全长cDNA表达文库 ,筛选全长目的基因 ,研究与其细胞周期相关基因的结构和功能。方法 :从Tv中提取总RNA ,用ClonTech公司的SMARTTMcDNA文库试剂盒构建其全长cDNA表达文库。结果 :所建文库的初始滴度为6 78× 10 6 pfu mL ,经一次扩增后的滴度为 1 6 8× 10 9pfu mL ,重组率 >98%。结论 :成功构建Tv全长cDNA文库 ,并从该文库中筛选出了与细胞周期相关的基因     

一个含有25 bp内含子的阴道毛滴虫Rab1-like新基因

目的 克隆和鉴定一个新的阴道毛滴虫Rab1-like基因(TvRab1-like)及其内含子.方法 我们从一阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出一个cDNA克隆,它与各物种的Rab家族蛋白有较高的同源性,因此我们进一步用BLASTP、RPS-BLAST、ClustalW和MEGA3等分析软件对该cDNA克隆进行了序列分析和进化树分析;用PCR和RT-PCR等技术分别对该基因组和mRNA进行了扩增和测序分析.结果 序列分析结果表明该cDNA克隆长705 bp,开放阅读框具603 bp,推测肽链含有200个氨基酸.序列比较分析结果提示该cDNA克隆所推测的蛋白质是一个Rab1亚家族的亚型.进化树分析也表明它属于阴道毛滴虫Rab1亚家族.基因组PCR扩增和测序分析表明该基因包含一个25 bp的内含子,该内含子具有阴道毛滴虫和其它真核生物较大内含子所具备的典型的5'GT-AG-3'和分支位点基序.RT-PCR产物及其测序分析表明在该基因的转录本中存在着未剪切和剪切后的mRNA,说明确实有内含子的存在.结论 TvRab1-like基因属于阴道毛滴虫Rab1亚家族,该基因含有一个25 bp的内含子.该内含子是至今发现的最小的阴道毛滴虫基因内含子之一,很可能也是真核生物中最小的内含子.对诸类最低等真核生物内含子的研究将有助于我们理解真核生物内含子的起源和进化.     

影响体外培养阴道毛滴虫因素的探讨

作者报道了影响体外培养阴道毛滴虫的重要因素是ｐＨ５．２～５．４，培养温度３６．５±０．５℃，培养基用前须加抗菌素和小牛血清，以及转种时掌握好培养基中的取虫位置等均系十分关键的因素     

阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达

目的克隆和表达阴道毛滴虫RRas(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能。方法应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45000u。结论成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致。     

阴道毛滴虫长寿保障基因Tv-LAG1的克隆和表达

目的克隆原生动物阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)长寿保障基因[longevityassurancegene1(LAG1)]的同源基因Tv-LAG1。构建Tv-LAG1原核表达重组体及表达其融合蛋白。方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中筛选LAG1的同源基因,用pET41表达载体与Tv-LAG1cDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物用SDS-PAGE法鉴定。用纯化的融合蛋白免疫家兔,获得抗血清,采用Western-blot法对抗体特异性进行分析鉴定。结果成功构建pET41/Tv-LAG1原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白。用融合蛋白免疫家兔获得的抗体能特异性识别Tv-Lag1p/GST融合蛋白。结论Tv-Lag1p/GST融合蛋白获得高效表达,并成功纯化,初步实验证明具有一定的免疫原性,为研究Tv-Lag1p在模式生物阴道毛滴虫的细胞定位以及其功能奠定了基础。     

阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析

目的获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换. 方法提取阴道毛滴虫的总RNA,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库,阳性质粒cDNA克隆进行测序,并用生物软件RPS-Blast,NCBI Blast和ClustalW等对6个读码框架进行序列分析. 结果获得一株开放阅读框为588对碱基的cDNA克隆,推测肽链有196个氨基酸.序列分析表明,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶(Prx1蛋白)及人的自然杀伤增强因子B分别有56%和61%的同源性;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序,N-豆蔻酰化作用位点,脂质运载蛋白信号位点等. 结论该蛋白有＞56%的可能性位于胞浆,和典型2-Cys Prx亚家族有很高(56%～62%)的同源性,很可能是其中的一个新成员.     

阴道毛滴虫衰老相关基因Tv-Sir2-like克隆与序列分析

目的：克隆单细胞模式生物阴道毛滴虫(Tv)Sir2基因，以便探讨其功能。方法：构建Tv cDNA表达文库，筛选出Tv-Sir2-like基因，并对该基因进行序列分析。结果：成功克隆Tv-Sir2-1ike基因。测序及序列分析显示，Tv-Sir2-1ike如基因开放读码框长1116bp，编码371个氨基酸残基的蛋白质。该氨基酸序列与SIR2的同源性最高，并具有SIR2 3个特征性的高度保守结构域。结论：推测Tv-Sir2-like是Sir2的同源基因，其表达产物可能参与Tv转录沉默，并调节Tv的细胞周期。     

阴道毛滴虫与人型支原体共生关系及其临床研究

目的：探讨阴道毛滴虫与人型支原体的共生关系以及共生关系的临床耐药性,以选择更合适的治疗药物。方法：随机对262例诊断为滴虫阴道炎患者及73例生殖道人型支原体感染患者给予常规药物治疗,并对滴虫阴道炎患者进行人型支原体检测。结果：滴虫阴道炎合并人型支原体感染者238例（90.8%）。经药物治疗后,筛选出可能存在阴道毛滴虫与人型支原体共生关系的难治性阴道炎68例患者。结论：阴道毛滴虫与人型支原体存在共生关系,且临床治疗效果较单纯感染治疗效果差。如何更好地治疗难治性滴虫阴道炎,有待进一步研究。