防石酸奶与市售酸奶降低大鼠尿草酸排泄量的效果比较

目的 评价10种可制作酸奶的乳酸菌在草酸培养液中降解草酸的能力.方法 在5 mmol/L草酸培养液中,分别接种嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、屎肠球菌、乳双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌共10种乳酸菌,培养72 h后检测培养液中草酸浓度和乳酸菌浓度的变化;另设不接种乳酸菌培养的空白对照.结果 经过72 h培养,10种乳酸菌浓度均增加,培养前后差异均有统计学意义(P<0.01).与空白对照相比,所有接种乳酸菌的培养液草酸浓度均下降,其中嗜酸乳杆菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、长双歧杆菌、青春双歧杆菌和乳双歧杆菌培养前后的草酸浓度差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);乳双歧杆菌的草酸降解率(29.03%)最高,屎链球菌草酸降解率(0.23%)最低.相关性分析显示,乳酸菌的增殖倍数与草酸降解率无显著相关性(r=0.435 7, P=0.208 2).结论 10种可制作酸奶的乳酸菌均具有草酸降解能力,草酸降解能力与其在草酸培养液中的增殖能力无相关性.     

乳酸菌分解草酸体外试验与影响因素

目的研究乳酸菌菌种在体外培养基中的草酸分解能力和耐草酸生长能力。方法鉴定6种市售品牌酸奶所含的乳酸菌菌种。将不同品牌的酸奶分别接种在MRS培养基中,37℃、5%CO2培养48h,平板计数法分别测得乳酸菌的浓度,选择乳酸菌浓度最高的酸奶品牌作为研究对象。将各纯菌种和从选定的品牌酸奶中培养所得的混合乳酸菌分别接种在3种不同草酸浓度的MRS液体培养基中,设置空白对照组,培养72h后检测培养基中乳酸菌数量的变化,铬酸钾氧化甲基红催化光度法测量草酸浓度变化。结果市售品牌酸奶均含有3种乳酸菌(保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌),其中味全牌酸奶所含乳酸菌数量最多。经过72h培养,所有培养基中的草酸浓度都有不同程度的下降,但乳酸菌组的降幅明显大于对照组,其中嗜酸乳杆菌组的降幅最大。环境草酸浓度越高,乳酸菌的草酸分解绝对量也越大,但相对分解率越低,乳酸菌繁殖速度减慢。结论市售酸奶中所含的乳酸菌种均具有草酸分解能力,并随着环境草酸浓度的增加而增加;但高草酸浓度使乳酸菌的生长趋缓。     

乳酸菌分解草酸体外试验与影响因素

目的研究乳酸菌菌种在体外培养基中的草酸分解能力和耐草酸生长能力.方法鉴定6种市售品牌酸奶所含的乳酸菌菌种.将不同品牌的酸奶分别接种在MRS培养基中,37℃、5%CO2培养48 h,平板计数法分别测得乳酸菌的浓度,选择乳酸菌浓度最高的酸奶品牌作为研究对象.将各纯菌种和从选定的品牌酸奶中培养所得的混合乳酸菌分别接种在3种不同草酸浓度的MRS液体培养基中,设置空白对照组,培养72 h后检测培养基中乳酸菌数量的变化,铬酸钾氧化甲基红催化光度法测量草酸浓度变化.结果市售品牌酸奶均含有3种乳酸菌(保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌),其中味全牌酸奶所含乳酸菌数量最多.经过72 h培养,所有培养基中的草酸浓度都有不同程度的下降,但乳酸菌组的降幅明显大于对照组,其中嗜酸乳杆菌组的降幅最大.环境草酸浓度越高,乳酸菌的草酸分解绝对量也越大,但相对分解率越低,乳酸菌繁殖速度减慢.结论市售酸奶中所含的乳酸菌种均具有草酸分解能力,并随着环境草酸浓度的增加而增加;但高草酸浓度使乳酸菌的生长趋缓.     

市售酸奶中乳酸菌的分离鉴定及耐药性分析

目的了解市售酸奶中乳酸菌对常见抗生素药物的敏感性及多重耐药情况。方法从市售酸奶中分离鉴定乳酸菌,采用K-B纸片扩散法检测菌株对抗生素的敏感性。结果从45份市售酸奶中分离鉴定出91株乳酸菌,其中43株嗜热链球菌、36株保加利亚乳杆菌、5株植物乳杆菌、7株嗜酸乳杆菌。91株乳酸菌对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、四环素、复方新诺明、万古霉素等呈现出不同程度的耐药性,70. 33%(64/91)表现出多重耐药性。结论市售酸奶中乳酸菌已具有一定程度的耐药性,且多重耐药。加强对酸奶产品乳酸菌耐药性的监测和安全性评价已势在必行。     

青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌对实验性结肠炎恢复期的治疗作用

目的通过建立DSS诱导的恢复期UC小鼠模型,探讨青春双歧杆菌和嗜酸乳杆菌维持UC缓解的作用。方法 6～8周龄雌性BABL/c小鼠50只,体重（20.0±2.0）g,随机分为5组：正常对照组、嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌组、柳氮磺胺吡啶组和生理盐水对照组,每组10只。除正常对照组外,采用自由饮用2.5%DSS（相对分子质量3.6万～5万）7d建立小鼠UC模型,并从实验第1d开始,给予青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌（浓度均为2×108CFU/10g）和SASP（15mg/10g）灌肠治疗17d,观察小鼠一般情况、粪便隐血,计算疾病活动指数（DAI）;实验结束时处死动物,测量全段结肠长度、行组织病理学检查并进行组织学评分。结果青春双歧杆菌、嗜酸乳酸杆均能维持实验性结肠炎的缓解,从第10d开始其DAI积分均明显小于生理盐水对照组（P〈0.05）;而且青春双歧杆菌有利于体重恢复,在第11d开始体重迅速增加;嗜酸乳酸杆菌在组织学改善方面效果更显著。结论青春双歧杆菌和嗜酸乳酸杆菌能有效地维持实验性结肠炎的缓解,而且两者的作用有所差别。     

血浆5-HT水平、血清钾离子浓度及肠道菌群与功能性便秘的相关性

目的 探究血浆5-羟色胺(5-HT)水平、血清钾离子浓度及肠道菌群与功能性便秘的相关性。方法 选取商丘市中医院2020年1月至2021年9月收治的67例功能性便秘患者作为试验组，同时选取67例同期正常排便者作为对照组。对比两组血浆5-HT水平、血清钾离子浓度和肠道菌群数量；对比两组Wexner便秘评分(WCS);采用Pearson相关性分析血浆5-HT、血清钾离子以及肠道菌群数量与WCS评分的相关性。结果 试验组患者血浆5-HT和血清钾离子水平均低于对照组(P<0.05),双歧杆菌和乳酸菌数量低于对照组(P<0.05),肠球菌和肠杆菌数量高于对照组(P<0.05),WCS评分高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析发现：血浆5-HT水平、血清钾离子浓度、双歧杆菌以及乳酸菌数量与WCS评分呈负相关，肠球菌和肠杆菌数量与WCS评分呈正相关(P<0.05)。结论 血浆5-HT、血清钾离子浓度以及双歧杆菌以及乳酸菌数量与功能性便秘层度呈负相关；肠球菌和肠杆菌数量与功能性便秘层度呈正相关。     

青海部分牧区牦牛传统乳制品中优势乳酸菌的鉴定

目的本文旨在从青海牧区传统乳制品中分离牦牛乳优势乳酸菌,获得青海地区传统乳制品乳酸菌物种资源,构建青海地区乳酸菌种群系统发育树,鉴定其优势菌种属。方法从青海省玉树州、果洛州、黄南州等牧区采集传统乳制品,富聚培养、筛选分离乳酸菌,通过形态学特征和生理生化实验,并结合16S rRNA基因序列测定,进行系统进化分析。结果从12份样品中分离到乳酸菌纯菌种9株,发现来源于三种不同属菌株：嗜热乳酸链球菌属（5株）、粪肠球菌属（3株）、侧孢短芽孢杆菌属（1株）。结论玉树州、果洛州、黄南州等地区牦牛传统乳制品中嗜热乳酸链球菌（55.6%）为优势菌种,粪肠球菌属（33.3%）以及侧孢短芽孢杆菌属（11.1%）为次级菌种。     

嗜酸乳杆菌高密度培养工艺条件的优化及其评价

目的：探讨嗜酸乳杆菌培养条件,研制出一种菌活性高、密度大、操作简便、易于生产应用的发酵工艺,阐明乳酸菌直投式发酵剂的生产和应用。方法：选取嗜
酸乳杆菌中国株为菌种,根据培养基成分的配比不同,分为实验组和对照组,优化培养条件以及MRS液体培养基的配方,通过紫外分光光度计检测菌液的吸光度（A650）值和活菌数量变化,筛选出最优的工艺过程。结果： 通过筛选确定嗜酸乳杆菌的最佳培养条件是接种量1%,初始pH值6.2,37℃恒温厌氧培养23 h;最适培养基配方为3.5%蛋白胨、0.5%酵母提取物、2%葡萄糖、0.2%柠檬酸铵、0.088%磷酸氢二钠、0.6%乙酸钠、0.025%硫酸锰、0.06%硫酸镁、1%营养因子和0.1%吐温80;由最适培养工艺培养得到的菌种数可达1.43×¹¹ cfu.mL^-1,较传统培养方案相比菌种数增长约1×10¹¹ cfu.mL^-1,且工艺简便易行。结论：实现对嗜酸乳杆菌培养条件和培养基配方的优化,得到嗜酸乳杆菌最优培养工艺条件,菌种的高密度培养可用于
乳酸菌直投式发酵剂的制备和应用。     

培养法检测嗜酸乳杆菌对幽门螺杆菌的拮抗作用

目的：检测嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）的抑制作用。方法：采用固体培养法将Hp分为Hp临床分离菌株组、Hp标准菌株组、培养基对照组及10 g•L^-1乳酸组,分别测定嗜酸乳杆菌上清液对各组Hp作用的抑菌环大小;液体培养法中,分别计数不同时间嗜酸乳杆菌与Hp单纯培养及混合培养菌落数。结果：嗜酸乳杆菌上清液对Hp临床分离株及标准菌株生长的抑菌环直径分别为（2.35±0.05）cm和（2.45±0.05）cm,与10 g•L^-1乳酸组抑菌环［(1.40±0.15)cm］比较差异有显著性（P< 0.05）;液体培养基混合培养12、24、48和72 h 时Hp细菌数分别为(3.67±0.07)×10⁴ 、(3.48±0.18)×10³、(1.70±0.56)×10² 和0 CFU•mL^-1,与Hp单纯培养比较差异有显著性（P< 0.01）。结论：嗜酸乳杆菌在固体及液体培养中均可拮抗Hp的生长。     

微生态制剂在慢性肝病治疗中的应用

目的：探究微生态制剂在慢性肝病治疗中的应用效果。方法：选取2014年7月～2015年8月本院接收患有慢性肝病并接受微生态制剂治疗的200例患者为研究对象。采用回顾分析法详细分析患者的治疗情况。结果：患者中有174例服用枯草杆菌肠球菌二联活菌肠溶胶囊，占87％；有24例服用口服双歧杆菌乳杆菌嗜热链球菌三联活菌片，占12％；2例使用口服双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌散剂，占1％。其中用药时间为10～30天的患者居多，用药目的以治疗腹胀或腹泻的居多，联合用药情况中联合使用促进胃动力药物和间隔两小时以上服用的抗生素居多。结论：微生态制剂在慢性肝病的治疗中得到广泛应用，对其所引起的肠道功能失调具有良好的治疗效果，但也存在用药不合理的现象，需要进一步改善。     

Antibiotic Resistance of Probiotic Strains of Lactic Acid Bacteria Isolated from Marketed Foods and Drugs

Objective To identify the antimicrobial resistance of commercial lactic acid bacteria present in microbial foods and drug additives by analyzing their isolated strains used for fermentation and probiotics. Methods Antimicrobial susceptibility of 41 screened isolates was tested with disc diffusion and E-test methods after species-level identification. Resistant strains were selected and examined for the presence of resistance genes by PCR. Results Distribution of resistance was found in different species. All isolates were susceptible to chloramphenicol, tetracycline, ampicillin, amoxicillin/clavulanic acid, cephalothin, and imipenem. In addition, isolates resistant to vancomycin, rifampicin, streptomycin, bacitracin, and erythromycin were detected, although the incidence of resistance to these antibiotics was relatively low. In contrast, most strains were resistant to ciprofloxacin, amikacin, trimethoprim/sulphamethoxazole, and gentamycin. The genes msrC, vanX, and dfrA were detected in strains of Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Streptococcus thermophilus, and Lactococcus lactis. Conclusion Antibiotic resistance is present in different species of probiotic strains, which poses a threat to food safety. Evaluation of the safety of lactic acid bacteria for human consumption should be guided by established criteria, guidelines and regulations.     

Non-Fusion and Fusion Expression of β-Galactosidase from Lactobacillus bulgaricus in Lactococcus lactis

Objective To construct four recombinant Lactococcus lactis strains exhibiting high β-galactosidase activity in fusion or non-fusion ways, and to study the influence factors for their protein expression and secretion. Methods The gene fragments encoding β-galactosidase from two strains of Loctobacillus bulgaricus, wch9901 isolated from yogurt and 1.1480 purchased from the Chinese Academy of Sciences, were amplified and inserted into lactococcal expression vector pMG36e. For fusion expression, the open reading frame of the β-galactosidase gene was amplified, while for non-fusion expression, the open reading frame of the β-galactosidase gene was amplified with its native Shine-Dalgarno sequence upstream. The start codon of the β-galactosidase gene partially overlapped with the stop codon of vector origin open reading frame. Then, the recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli DH5α and Lactococcus lactis subsp, lactis MG1363 and confirmed by determining β-galactosidase activities. Results The non-fusion expression plasmids showed a significantly higher β-galactosidase activity in transformed strains than the fusion expression plasmids. The highest enzyme activity was observed in Lactococcus lactis transformed with the non-fusion expression plasmids which were inserted into the β-galactosidase gene from Lactobacillus bulgaricus wch9901. The β-galactosidase activity was 2.75 times as high as that of the native counterpart. In addition, β-galactosidase expressed by recombinant plasmids in Lactococcus lactis could be secreted into the culture medium. The highest secretion rate （27.1%） was observed when the culture medium contained 20 g/L of lactose. Conclusion Different properties of the native bacteria may have some effects on the protein expression of recombinant plasmids. Non-fusion expression shows a higher enzyme activity in host bacteria. There may be a host-related weak secretion signal peptide gene within the structure gene of Lb. bulgaricus β-galactosidase, and its translation pr     

乳链菌肽抗性基因的筛选、分离及鉴定

目的 筛选、分离、鉴定乳链菌肽抗性（NSR）基因。方法 从20份经巴氏消毒的牛奶及未经任何处理的若干新鲜牛奶的混合样品中．在含有添加剂的选择性培养基上筛选含有NSR基因的乳酸乳球菌,用乳酸乳球菌特异性16S rRNA的PCR方法对菌株进行鉴定,进一步用一段保守序列进行NSR基因筛选,并扩增其全序列,分析其基因特征。结果 两种牛奶样品中均可以分离到乳酸乳球菌,并在从新鲜牛奶中分离到的乳酸乳球菌中筛选出30株乳链菌肽抗性菌株,其中3株扩增出NSR基因．琼脂糖凝胶电泳确定其大小为1000bp左右,进一步酶切鉴定及测序确定其确为NSR基因,定位于质粒上。结论 从来源于鲜牛奶的抗乳酸乳球菌菌株中扩增出完整NSR基因,定位于质粒上。     

椰汁体外促双歧杆菌生长作用的研究

目的 探讨椰汁体外对4株双歧杆菌生长的促进作用.方法 利用4株常见的双歧杆菌作为受试菌,以菌液D(600)值、pH值、活菌计数以及发酵牛乳凝乳时间和乳液pH值等为指标,来研究椰汁对4种双歧杆菌增殖和活性的促进作用.结果 按照25％ (V/V)添加椰汁时,4株双歧杆菌菌体浓度(光密度值及活菌计数)均明显高于空白对照组(P＜0.05),其中两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌以及长双歧杆菌甚至高于双歧因子阳性对照组(P＜0.05).4株双歧杆菌发酵含有椰汁的牛乳后,两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌和长双歧杆菌的凝乳时间均较空白对照组和阳性对照组明显缩短(P＜0.05),婴儿双歧杆菌却未出现凝乳现象,但4株双歧杆菌pH值均低于空白对照组和阳性对照组(P＜0.05).结论 椰汁有可能成为一种良好的双歧因子,并可作为双歧杆菌的天然培养基.     

Inhibition of germ tube‘s formation of Candida albicans by lactobacillus spp.

Objective:To investigate the effects of 6 strains of lactobacilli and their main culture metabolites on the morphogenesis of Candida albicans (C. albicans) so as to screen medicinal strains as antifungal agents. Methods: Spent culture supernatant (SC'S) at different culture time points, live lactobacilli, heat-killed bacteria and bacterial short-chain fatty acids (SCFA) with different molarities were incubated with C. albicans respectively. Crystal violet-based germ tube assay was used to detect the germination of C. al-bicans and the inhibitory efficiency of each addition was tested by germination rate. Results: SCS of lacto-bacillus spp. decreased the germination significantly and live bacteria of L. rhamnosus. GG, L. acidophilus 1.050103-12 as well as L. johnsonii JCM1022 could partially inhibit the conversion, however, all the heat-killed bacteria failed to control the germ tube formation. In addition, only butyric acid blocked the conversion of yeast to hypha among all the SCFA. Conclusion: The excellent fungistasis activities make L. rhamnosus. GG. L. acidophilus L050103 12 and L. johnsonii JCM1022 potential strains as antifungal drugs and the inhibition seems to have direct correlation to the metabolites.     

2型糖尿病患者与健康个体间肠道双歧杆菌的差异

目的研究2型糖尿病患者与健康个体之间肠道双歧杆菌是否存在差异。方法收集50例2型糖尿病患者和30例健康志愿者的粪便样品,提取样品中细菌总DNA,根据细菌的16SrRNA序列设计双歧杆菌总菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌的属种特异性引物,并应用实时荧光定量PCR技术对两组人群粪便样品中的以上细菌进行定量检测和分析。结果 2型糖尿病患者组肠道双歧杆菌总菌和青春双歧杆菌的数量较健康对照组均显著减少(P<0.05)。结论 2型糖尿病患者肠道双歧杆菌数量减少。     

嗜酸乳酸杆菌对实验性溃疡性结肠炎治疗的最佳浓度探索及免疫学机制初探

目的:比较不同浓度嗜酸乳酸杆菌治疗实验性溃疡性结肠炎(ulerative colitis,UC)的疗效,分析其对结肠近、远端菌群的影响,寻找治疗UC适宜的嗜酸乳酸杆菌浓度,并探索其免疫学机制。方法:雌性Balb/c小鼠56只,随机分为7组(n=8),葡聚糖硫酸钠(DSS)造UC模型鼠,分别予以不同浓度嗜酸乳酸杆菌、激素、生理盐水干预UC模型鼠,观察小鼠一般情况,计算疾病活动指数(DAI)评分、组织损伤评分,留取小鼠肠道组织进行肠道固生菌群分析,并进行PCR及Western-Blotting检测UC相关的IL-23、IL-17、TNF-α。结果:106CFU/m L浓度级嗜酸乳酸杆菌干预组小鼠UC症状缓解最明显,且远端结肠益生菌(乳酸杆菌和双歧杆菌)数量最多,致病菌(金黄色葡萄球菌)最低;UC相关的IL-23、IL-17、TNF-α无论mRNA水平还是蛋白质水平,均为嗜酸乳酸杆菌干预组最低,尤其以106U/10 g嗜酸乳酸杆菌灌胃组最低。结论:嗜酸乳酸杆菌治疗UC与其在结肠远端有较高浓度乳酸杆菌有关,然而疗效并非与细菌浓度完全正相关,炎性因子IL-23、IL-17、TNF-α与UC疾病严重程度呈正相关,与嗜酸乳酸杆菌对UC的治疗作用相关。     

两株耐酸耐胆盐人肠源菌株的鉴定及系统发育分析

目的对两株来源于健康人肠道的耐酸耐胆盐菌株R92-2和R111进行鉴定和系统发育分析,以筛选优良的宿主菌株为最终构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌奠定基础。方法表型特征分析后,利用16SrDNA两端的保守序列作为PCR引物,扩增两株菌的16S rDNA序列并测序,测序结果于GenBank中Blastn并构建系统发育树。结果表型特征分析初步鉴定两株菌为乳酸菌。R92-2的16S rDNA序列与Weissella cibaria的16SrDNA序列同源性为100%;R111的16S rDNA序列与Enterococcus faecium的16S rDNA序列同源性为100%。结论R92-2为Weissella cibaria;R111为Enterococcus faecium。两株菌有望用于构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌。