HPV_(16)L1-E7重组病毒及其重组质粒免疫后小鼠抗体水平动态变化的研究

目的 :研究人乳头瘤病毒 16型L1 E7重组腺病毒 (rAd5HPV16 L1 E7virus)及其重组质粒 (rAd5HPV16 L1 E7plasmid)经不同途径免疫后小鼠抗体水平的动态变化。方法 :用 2 93细胞扩增rAd5HPV16 L1 E7重组病毒 ,同时制备rAd5HPV16 L1 E7重组质粒 ,分别以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠 ,采用ELISA法测定其血清IgG抗体水平。结果 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒采用不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其中以肌注组产生抗体量最多 ,并且出现最早。结论 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒均能刺激B细胞产生抗体介导的免疫应答 ,免疫途径不同 ,抗体峰值的出现时间亦不同 ,测定抗体的最佳时间亦不同。     

HPV E6/E7 mRNA、p16/Ki67检测在ASCUS中的诊断价值

目的:探讨HPV E6/E7 mRNA、p16/Ki67检测在宫颈细胞学检查为意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)中的诊断价值。方法:回顾分析2015年12月至2017年5月在郑州大学第三附属医院就诊的液基薄层细胞学检查(TCT)结果为ASCUS,并行阴道镜下宫颈组织活检的患者200例。应用杂交捕获技术(HC2)和支链DNA技术(b DNA)行HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA检测。免疫组化法检测宫颈组织中p16/Ki67表达。结果:宫颈高级别病变组(包括CIN2,CIN3,宫颈癌,简称CIN2+)中p16/Ki67、HPV E6/E7mRNA的阳性率与炎症/CIN1组比较,差异有统计学意义(χ2=31. 952,P=0. 000;χ2=11.231,P=0.001),且p16/Ki67表达与CIN2+具有一致性(kappa=0.400,P=0.000)。炎症/CIN1组中,HPV E6/E7 mRNA检测与p16/Ki67检测结果间的差异有统计学意义(P=0.000),但在CIN2+中两者差异无统计学意义(P=0.375)。ROC曲线分析p16/Ki67检测、HPV E6/E7 mRNA检测诊断CIN2+的准确性分别为(AUC=0.800,0.625),均高于HPV DNA检测(AUC=0.579)。结论:HPV E6/E7 mRNA、p16/Ki67表达与宫颈高级别病变密切相关,HPV E6/E7 mRNA检测可望代替HPV DNA成为分流ASCUS的一种有效手段,而p16/Ki67与宫颈高级别病变显著一致,可辅助用于ASCUS患者宫颈组织的病理诊断。     

全酿酒酵母HPV16-E7疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E7重组全酿酒酵母疫苗,评价疫苗的免疫效应。方法将HPV16 E7 cDNA亚克隆人酵母表达载体pYES2／NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗,免疫C57BL／6小鼠。ELISA、MTT、LDH法分别检测疫苗诱导的细胞因子、脾淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答水平。结果全酵母疫苗能够有效表达HPV16-E7蛋白;疫苗小鼠免疫,能够刺激脾淋巴细胞增殖,并诱导出Th1型细胞因子和特异性CTL杀伤效应;免疫效果优于单纯HPV16-E7蛋白免疫（P〈0．01）。结论全酵母疫苗既能表达HPV16-E7蛋白,又能有效诱导特异性CTL免疫应答。研究结果为进一步进行疫苗抗肿瘤疗效研究,提供了实验基础。     

新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变HPV16 E6/E7基因突变序列分析

目的:探讨新疆南部地区维吾尔族妇女HPV16E6/E7基因突变与宫颈病变及宫颈癌发生的关系。方法:提取上述地区40例宫颈癌及80例CINⅠ～Ⅲ组织的HPV16DNA,用PCR扩增其E6/E7基因并对产物测序,然后以德国标准株HPV16DNA为原型进行对比,分析其突变情况。结果:HPV16E6突变中L83V占80.6%(25/31),D25E占16.1%(5/31),E7突变中R77C占33.3%(5/15),N29S占26.7%(4/15)。结论:新疆宫颈病变及其癌变组织中HPV16E6/E7以L83V,D25E,R77C,N29S为主要突变株,欧洲型突变为主,与亚洲型突变同时出现是该地区的主要突变特点。     

HPV E6/E7 mRNA检测在LBC-/HPV+女性临床管理中的应用价值

目的:探讨HPV E6/E7 mRNA检测在LBC-/HPV+女性临床管理中的应用价值。方法:收集2017年12月至2019年9月在临沂市人民医院自愿接受液基细胞学(LBC)联合HR-HPV DNA(包含HPV16/18分型)或HPV E6/E7 mRNA检测进行宫颈癌筛查,结果为LBC-/HPV+且后续转诊阴道镜及组织病理学检查患者628例,以病理诊断结果为金标准,分析比较两种HPV检测方法对LBC-/HPV+患者人群发生高级别及以上宫颈病变(≥HSIL)的风险预测能力。结果:628例LBC-/HPV+患者中,共检出≥HSIL患者80例(12.74%),其中以30～39岁组检出率最高(17.89%)。490例HR-HPV DNA阳性患者≥HSIL总检出率为10.00%(49/490),双+组检出率最高(14.89%,14/94);138例HPV E6/E7 mRNA阳性患者≥HSIL总检出率为22.46%(31/138),16/18/45+组检出率最高(37.78%,17/45)。HPV E6/E7 mRNA阳性组发生≥HSIL的相对危险度(RR值)是HR-HPV DNA阳性组的2.246倍(95%CI为1.493～3.379);16/18/45+组发生≥HSIL的RR值是16/18+组患者的3.169倍(95%CI为1.786～5.622);HPV E6/E7 mRNA其余11型+组发生≥HSIL的RR值是HR-HPV DNA其余12型+组的2.170倍(95%CI为1.115～4.222),差异均有统计学意义(P0.05)。结论:HPV E6/E7 mRNA检测尤其是16/18/45分型检测是LBC-/HPV+患者人群发生≥HSIL的有效风险预测指标,其评价效能优于包含HPV16/18分型的HR-HPV DNA检测;HPV E6/E7 mRNA有望作为HR-HPV DNA阳性但16/18分型阴性患者的进一步分流指标。     

HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS患者临床分层处理价值评价

目的:探讨HPV E6/E7 mRNA检测在意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)人群进一步处理措施中的分层管理价值。方法:对112例ASCUS患者,同时行HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA检测以及阴道镜下活检。结果:(1)ASCUS患者宫颈活检结果分布于宫颈炎及宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ病变中。(2)HPV E6/E7 mRNA检测ASCUS中高级别病变的敏感性(94.44%)与HPV DNA检测相比差异无统计学意义(P0.05)。而特异性(45.74%)高于HPV DNA检测(18.89%),差异有统计学意义(P0.05)。(3)随着宫颈病变级别升高,HPV E6/E7 mRNA载量增加,且各级别病变间差异有统计学意义(P0.0083);HPV DNA载量在各级别病变中的差异无统计学意义(P0.0083)。(4)ROC曲线确定的HPV E6/E7 mRNA诊断高级别宫颈上皮内瘤变(CINⅡ~+)的最佳诊断临界点为543.64 copy/ml,曲线下面积为0.780。结论:ASCUS病理结果具有多样性,HPV E6/E7mRNA检测不仅可以检出其中的高级别宫颈病变,减少了不必要的阴道镜检查及活检,还能及时发现潜在高级别宫颈病变,避免高危患者漏诊。     

人乳头状瘤病毒E6、E7蛋白与机体免疫机制的关系

机体感染人类乳头状瘤病毒(human papollomavirus,HPV)后,80%以上会在9～16个月内自然消退,只有10%～15%的高危型HPV持续感染宫颈上皮,并最终发展为宫颈癌[1].HPV E6、E7等基因编码蛋白可以激活全身和局部的免疫反应,消除病原体.本文就HPV E6、E7蛋白的致病机制和在治疗性疫苗中的应用,及其在体内引起的以细胞免疫反应为主的全身及局部反应作一综述.     

高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA与其DNA检测在子宫颈病变中的对比研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)E6/E7 m RNA及HPV DNA检测与宫颈病变的关系。方法选取2013年1月至2015年12月在青岛市市立医院妇科门诊行宫颈癌联合筛查的两组女性:LCT+HRHPV DNA(HC2组,n=2 417);LCT+HR-HPV E6/E7 m RNA(E6/E7组,n=2 906)。细胞学ASCUS+或HPV阳性转诊阴道镜行宫颈活检。计算HPV m RNA E6/E7与HPV DNA在不同病理结果中的阳性率、病毒载量及在CIN2+中的一致率。结果 (1)在病理正常、CIN1、CIN2、CIN3和ICC中E6/E7 m RNA阳性率分别为61.36%、76.00%、92.11%、96.00%和100.00%,随病变程度加重而升高(P0.05)。正常病理结果中E6/E7组HPV的阳性率低于HC2组(χ2=7.764,P=0.005)。(2)E6/E7组病毒载量的中位数和四分位数在不同病理结果中分别为629.72(339.31,2 122.94),1117.33(319.17,3 101.88),1 537.12(422.19,4 219.05),3 396.59(1 217.32,6 316.81),10 860.43(3 473.19,29 662.29),随着病变程度加重逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05)。(3)在CIN2+患者中,E6/E7组和HC2组的一致率为82.64%,Kappa值=0.69。结论 HPV E6/E7阳性率与HC2一样随着宫颈病变程度的加重逐渐升高。HPVE6/E7 m RNA与HPV DNA诊断CIN2+的一致性较好。HPV E6/E7载量可能反映病变程度,但还需进一步临床验证。     

宫颈癌及其癌前病变组织中FHIT蛋白异常表达与HPV16E6、HPV16E7蛋白表达的相关性

目的 探讨宫颈癌中三联脆组(FHIT)蛋白表达与HPV16 E6、E7蛋白表达的相关性.方法 采用免疫组化SP法对四川大学华西第二医院1999年1月至2003年2月的15例正常宫颈、25例宫颈上皮内瘤变(CIN)以及61例浸润性宫颈鳞癌组织标本进行FHIT蛋白、HPV16E6、HPV16 E7蛋白表达的检测.结果 (1)在正常宫颈上皮、CINI～II、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中,FHIT 蛋白阳性表达率分别为100%(15/15)、71.43%(10/14)、36.36%(4/11)、14.75%(9/61),P＜0.05;HPV16E6蛋白阳性表达率分剐为0(0/15)、7.14%(1/14)、36.36%(4/11)、59.02%(36/61),P＜0.05;HPV16E7蛋白阳性表达率分别为20.00%(3/15)、42.86%(6/14)、63.64%(7/11)、57.38%(35/61),P＞0.05.(2) 宫颈病变组织中FHIT蛋白的阳性表达与HPV16E6蛋白阳性表达呈负相关(P＜0.0l,r=-0.449),与HPV16E7蛋白表达无相关性(P＞0.05).结论 宫颈癌中FHIT 蛋白的异常表达与HPV16 E6蛋白表达有关,FHIT蛋白和HPV16E6蛋白的联合检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.     

HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS患者分流管理的随访研究

目的:通过对细胞学检测结果为意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)患者进行随访,探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测对其分流管理价值。方法:2015年12月至2017年8月在郑州大学第三附属医院行宫颈液基细胞学检查(TCT)的患者共40013例,对其中符合纳入标准的297例ASCUS患者,同时行HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA检测及阴道镜下活检,并对活检病理阴性且符合纳入标准的119例患者随访至少1年,分析HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS患者的分流管理价值。结果:40013例患者经TCT诊断结果为阳性者共1191例,其中ASCUS 734例,其检出率为1.83%。297例ASCUS患者阴道镜下活检病理结果为正常者136例,LSIL 108例,HSIL 50例,宫颈癌3例。HPV E6/E7 mRNA检测ASCUS中HSIL及宫颈癌的敏感性(88.68%)与HPV DNA检测(98.11%)比较,差异无统计学意义(P0.05),而特异性(42.21%)高于HPV DNA检测(17.21%),差异有统计学意义(P0.001)。1年后随访结果:TCT结果正常且高危型HPV阴性者82例,高危型HPV阳性和(或)TCT结果≥正常但经阴道镜检查评估并行子宫颈活检组织病理检查诊断为正常者17例、LSIL 14例、HSIL 6例。HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测相比较,预测1年后HSIL的敏感性均为100%,而特异性分别41.59%、12.39%,差异有统计学意义(χ~2=24.45,P0.001)。HPV E6/E7 mRNA检测诊断病变进展的ROC曲线下面积(AUC)为0.712,高于HPV DNA检测(AUC=0.563)。结论:ASCUS的病理活检结果分布于宫颈炎至宫颈癌的各个阶段,HPV E6/E7 mRNA检测不仅能检出其中的HSIL,而且可预测宫颈病变的进展。     

Human papillomavirus type 16 E2 and E6/E7 variants

OBJECTIVES: Polymorphisms in human papillomavirus (HPV) type 16 have been shown to be related to geographic areas and are broadly classified as European (E), African (Af), Asian (As), or Asian-American (AA). Certain variants have been reported as being more likely to cause cervical disease; our objectives were to identify new HPV16 polymorphisms, to determine the linkage of the E2 and E6/E7 regions and to determine the minimum sequence necessary to classify variants. METHODS: We sequenced the complete E2, E6, and E7 regions in all HPV16-positive cervical samples identified in a case-control study of pre-invasive cervical disease. RESULTS: In the 100 samples analyzed, only one new polymorphism was identified, a synonymous change, T3205A, in region E2. The frequency distribution of variants in the sample set was 37 European prototypes and 27 E-G350, 16 AA, 5 Af1, 2 Af2, 8 E-C109G, 3 E-G131G, and 2 As. As shown by others, region E7 varied much less than E6 and E2. CONCLUSIONS: In each case, E2 changes were linked to the expected E6/E7 changes, and there was no evidence for recombination. The linkage between E2 and E6/E7 allows variant classification to be based on a short E6 sequence (nt 109-350).     

高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA在宫颈细胞学ASCUS/LSIL/ASC-H分流中的意义

目的:比较高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA检测在宫颈病变筛查中的诊断性能。探讨其在宫颈细胞学ASCUS/LSIL/ASC-H分流中的意义。方法:收集2016年5月至11月就诊于清华长庚医院妇科的液基细胞学结果为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者251例,分别行宫颈脱落细胞HR-HPV DNA、HR-HPV E6/E7mRNA检测,并行阴道镜检查及宫颈活体组织检查,以组织学病理为金标准。结果:HRHPV E6/E7 mRNA阳性率在ASCUS、LSIL和ASC-H中分别为18.34%(20/108)、28.82%(30/102)和39.51%(17/41)。宫颈活检病理结果子宫颈低级别病变(湿疣/CIN1组)与高级别病变(CIN2/3)组的HR-HPV E6/E7 mRNA阳性率比较,差异有统计学意义(P=0.0125)。以子宫颈活检的组织学诊断结果为金标准,HR-HPV E6/E7 mRNA筛查子宫颈高级别病变的特异性及阳性预测值均明显高于HPV-DNA。ASCUS/LSIL/ASC-H中,HRHPV E6/E7 mRNA检测筛查宫颈高级别病变的ROC曲线面积均大于HPV-DNA,诊断效能优于HPV-DNA。结论:HPV E6/E7 mRNA检测诊断宫颈高级别病变的特异性及阳性预测值高于HPV-DNA,能辅助宫颈细胞学筛查及HPV-DNA,提高宫颈高级别病变诊断的特异性,在细胞学检查阶段对患者做出有效分流,预测宫颈高级别病变。     

hrHPV E6/E7 mRNA用于宫颈癌机会性筛查的临床价值

目的:研究hrHPVE6/E7 mRNA在宫颈筛查中的准确性,探索其用于宫颈癌机会性筛查的临床价值。方法:选取2013年1月至2015年12月在青岛市市立医院及城阳区人民医院妇科门诊行机会性筛查的女性共7791例,年龄25~65岁。所有受试女性均行宫颈液基薄层细胞学检查(LBC)。每位受试者同时行HPV检测,根据采取的HPV方法不同分为3组:HC2组(2417例),HPV分型组(2456例),E6/E7组(2906例)。比较4种筛查方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阴道镜转诊率、CINⅡ+/CINⅢ+检出率。结果:E6/E7检测CINⅡ+/CINⅢ+的灵敏度分别为93.02%和94.83%,NPV分别为99.52%和99.88%,与HC2及HPV分型之间无统计学差异(P0.05)。E6/E7检测CINⅡ+/CINⅢ+的特异度分别为90.20%和86.90%,与LBC、HC2及HPV分型两两比较均有统计学差异(P0.01)。以HC2和HPV分型为参照时,E6/E7检测CINⅡ+/CINⅢ+的RR均1。E6/E7的阴道镜转诊率为14.73%,低于另两种HPV检测方法,高于LBC,差异有统计学意义(P0.01)。3种HPV检测方法的CINⅡ+/CINⅢ+检出率无统计学差异(P0.05)。结论:hrHPV E6/E7 mRNA与HC2和HPV分型相比,灵敏度相同、特异度高,阴道镜转诊率低,CINⅡ+/CINⅢ+检出率无差别,可用于宫颈癌的机会性筛查。     

hrHPV E6/E7 mRNA检测用于宫颈癌联合筛查的横断面研究

目的:研究hrHPV E6/E7 mRNA在宫颈癌联合筛查中的准确性,探索其用于宫颈癌联合筛查的临床价值。方法:选取2013年1月至2015年12月在青岛市市立医院和青岛市城阳区人民医院妇科门诊行宫颈癌机会性筛查的女性共6223例。根据宫颈筛查方法分组:宫颈液基薄层细胞学检查(LBC)+HC2组(LBC+HC2组);LBC+HPV分型组;LBC+hrHPV E6/E7 mRNA(LBC+E6E7组)。比较3种HPV+细胞学联检策略和细胞学单独筛查的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阴道镜转诊率、CIN2+/CIN3+检出率及曲线下面积(AUC)。结果:LBC+E6E7联检CIN2+的灵敏度、特异度、PPV、NPV、阴道镜转诊率、CIN2+/CIN3+检出率分别为91.28%、95.50%、56.07%、99.43%、9.64%和5.40%;CIN3+分别为93.10%、92.06%、19.29%、99.85%、9.64%和1.86%。3种联合筛查策略之间比较,上述指标均无统计学差异(P0.05)。LBC+E6E7联检CIN2+/CIN3+的AUC分别为0.969和0.973,大于LBC单筛,差异有统计学意义(P0.05)。结论:hrHPV E6/E7 mRNA与细胞学联合筛查的准确性与HC2、HPV分型+LBC联检无明显差异,可作为HPV-DNA的替代用于宫颈癌机会性筛查的联检方案。     

Effects of E2 and E2/norgestimate hormone therapy on elevated baseline lipids

OBJECTIVE: To evaluate lipid effects of estradiol/ norgestimate hormone therapy in postmenopausal women with elevated lipid levels. STUDY DESIGN: Postmenopausal women were randomized to E2, 1 mg/intermittent norgestimate (NGM) 90 microg (n = 31), or opposed E2, 1 mg (n = 36), in a 12-month trial. A subset analysis was conducted on participants with unfavorable baseline lipid levels, either total cholesterol (TC) levels > 200 mg/dL, high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels < 40 mg/dL, low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) levels > or = 160 mg/dL or triglyceride levels > or = 150 mg/dL. Mean changes and categorical shifts were assessed on fasting blood samples collected at baseline and at 7 and 12 months. RESULTS: Twelve-month mean changes from baseline in women treated with E2/NGM included a 19.8% increase in HDL-C and decreases of 13.4% in LDL-C, 17.5% in triglycerides and 3.3% in TC. Women with poorer lipid profiles at baseline showed the greatest benefit. Results were similar in women randomized to unopposed E2. CONCLUSION: E2/NGM and unopposed E2 were similarly beneficial in modifying lipid fractions in women with unfavorable baseline levels.     

Outcomes of pregnancies complicated by beta-thalassemia/hemoglobin E disease

Objective

To assess the outcomes of pregnancies affected by beta-thalassemia/hemoglobin E (β-thal/HbE) disease.

Methods

A retrospective cohort study was conducted with 54 women with singleton pregnancies complicated by β-thal/HbE disease only. The controls-to-cases ratio was 2:1.

Results

Although maternal outcomes were similar in both groups, gestational age at birth and birth weight were significantly lower in the study group and the cesarean delivery rate was significantly higher in that group (relative risk [RR], 2.1). The incidences of fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight were also significantly higher in the study group, with RRs of 2.8, 2.7, and 5.6, respectively.

Conclusion

Pregnancies affected by β-thal/HbE disease were significantly associated with an increased risk of fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight.