全长新基因PPIL3的获得及在人脑胶质瘤中的表达

目的 运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中1条基因进行初步研究.方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对681F05克隆子进行Northern blot,原位杂交和生物信息学分析.结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经northern blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达.原位杂交得到相同的结果.BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%.cDNA序列分析发现这两上克隆是同一个基因(命名为cyclophilin-like gene (PPll3))的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPll3b).结论 基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性.681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因.     

人脑胶质瘤中连接蛋白基因表达及其临床意义

目的探讨人脑胶质瘤连接蛋白(Cx)43、32基因表达及其临床意义。方法对8例正常脑组织和50例人脑胶质瘤采用Northern印迹和免疫组织化学法检测。结果人脑胶质瘤Cx43mRNA及其蛋白表达阳性率分别为54％、52％，Cx32仅在1例低恶度少枝胶质细胞瘤及1例混合性星形一少枝胶质细胞瘤中表达。Cx43mRNA及其蛋白表达水平随肿瘤恶性程度升高而下降。结论Cx基因在人脑胶质瘤中表达可下降或缺失，与肿瘤的病理类型及恶性程度呈负相关，可作为某些肿瘤的病理诊断参考指标之一。     

大肠癌患者粪便标本的端粒酶活性研究

目的 探讨通过粪便途径筛查大肠癌的可行性和新方法。方法 应用聚合酶链端粒重复扩增（PCR－TRAP）银染技术,研究了43例大肠癌患者粪便中脱落细胞的端粒酶活性表达。结果 62．8％的大肠癌患者粪便标本中有端粒酶阳性表达。患者粪便标本中端粒酶阳性表达与其大肠癌Dukes分期、淋巴结转移和癌肿部位未见显著相关（P＞0．05）。1例结肠腺瘤患者粪便标本端粒酶表达阳性,其腺瘤组织也存在端粒酶活性表达。粪便端粒酶检测的敏感性、特异性和阳性预测值分别为62．8％、95．7％和96．4％。结论 PCR－TRAP银染检测大肠癌患者粪便脱落细胞的端粒酶活性表达为改善大肠癌筛查方法和大肠癌诊断作了新的尝试。     

人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白的表达及其临床意义

化疗是综合治疗胶质瘤的重要方法。肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药性 (ｍｕｌｔｉ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)严重影响了化疗效果。多药耐药基因(ｍｄｒ1 )编码的膜糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)是ＭＤＲ的主要形式[1 ] 。我们对 30例脑胶质瘤中Ｐ ｇｐ含量进行测定并探讨其表达与病人临床特点的关系。一、材料与方法1 .一般资料 :本组病例 30例 ,其中男 1 7例 ,女 1 3例。年龄 1 4～ 63岁 ,平均 45.4岁。 2 5例位于大脑半球、2例位于小脑、2例位于胼胝体、1例位于侧脑室。按病理恶性程度分为 3级 :低度恶性 (星形、少突胶质细胞瘤 ) 1 2…     

葡萄糖转运体在脑胶质瘤中的表达及其意义

目的 观察葡萄糖转运体(GLUT1、GLUT3)在脑胶质瘤中的表达及其意义。方法 应用Northern blot技术检测不同级别脑胶质瘤葡萄糖转运体mRNA表达情况，用Western blot检测葡萄糖转运体的蛋白水平。结果 Ⅰ／Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤GLUT1 mRNA／肌动蛋白(actin)mRNA分别为0．12、0．17、0．21；4．2kb GLUT3 mRNA／actin mRNA分别为0．178、0．568、0．710；2．7kb GLUT3 mRNA／actin mRNA分别为0．075、0．216、0．406。随着脑胶质瘤分级的增高，GLUT1／actin转录物比率有随之增加的趋势，但无显著相关。4．2kb GLUT3是2种转录物中丰度较高的一种，2种转录物的GLUT3／actin比率与胶质瘤的分级呈线性正相关。结论 恶性胶质瘤细胞可能分泌某种因子增强GLUTs mRNA表达，但抑制GLUT1 mRNA翻译而促进GLUT3蛋白表达，使GLUT3成为供应恶性胶质细胞能量代谢底物的主要载体。     

人脑胶质瘤差异表达的基因的获得及一条全长新基因的克隆

目的运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中一条基因进行了初步的研究。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对681F05克隆子进行了Northernblot,5’RACE和生物信息学分析。结果通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northernblot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp10蛋白同源性分别为52%和72%。cDNA序列分析发现这两上克隆是同一个基因[命名为cyclophilinlikegene(PPIL3)]的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPIL3b)。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性。681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

靶向hTERT 人工miRNA 表达框架的构建及其对HepG2 细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：构建针对hTERT基因的人工miRNA表达框架,并验证其对HepG2细胞端粒酶活性的抑制作用。 方法：应用融合PCR技术针对不同位点设计并构建3个靶向hTERT的人工miRNA表达框架,对各表达框架鉴定后,将其单独或两种共转染HepG2细胞,采用TRAP-银染法和TRAP-二聚体蝎形探针荧光定量PCR法检测细胞端粒酶活性。 结果：3个针对hTERT基因的人工miRNA表达框架均成功构建,单独或共转染HepG2细胞后,HepG2细胞的端粒酶活性均被不同程度的抑制,且两种表达框架共转染的抑制作用明显大于单独转染,差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论：靶向hTERT基因的人工miRNA表达框架能有效而特异抑制HepG2细胞端粒酶活性,多位点联合抑制是一种有效的实验方案。     

端粒逆转酶（hTERT）及端粒酶在膀胱癌诊治中的进展

手术前的明确诊断对制定治疗方案和判断预后非常关键，能否找到一种灵敏度高并且特异性强的膀胱癌早期和术前诊断方法以及预后指标已成为当前的研究热点。端粒酶在包括膀胱癌在内的大多数恶性肿瘤高表达，近年来又将端粒逆转酶(hTERT)进行了深入研究。本文综述了端粒酶和端粒逆转酶(hTERT)在膀胱癌诊治方面的研究进展。     

全长新基因人核糖体蛋白L14.22在人脑胶质瘤中的研究与体外表达

目的运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对507E08克隆子进行了Northern blot,生物信息学分析,蛋白表达和氨基酸测序。结果通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northern blot 证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。原位杂交得到相同的结果。BLASTn和BLAST分析显示,507E08基因为全长新基因,长度为2 002 bp,共编码203个氨基酸。本基因命名为人核糖体蛋白L14．22。经原核表达,在SDS-PAGE胶上获得一条22×103的条带,氨基酸序列分析显示,结果N-端15个氨基酸与序列所示的N-端15个氨基酸残基完全相同。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度, 高敏感等特性。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

胶质瘤单链抗体的基因构建及表达

单链抗体 (ＳｃＦｖ)因其能较好地保持对抗原亲和活性 ,分子量小 ,穿透力强 ,抗原性弱 ,且易与效应分子相拼接 ,是构建免疫毒素和双功能抗体的较理想元件。我们在已克隆抗胶质瘤单抗ＳＺ39重链可变区 (ＶＨ)和轻链可变区(ＶＬ)基因的基础上 ,构建了抗人脑胶质瘤ＳｃＦｖ基因 ,并克隆于表达载体ｐＧＥＸ 5Ｘ 1,在大肠杆菌中诱导表达 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :(1)菌种与质粒载体 :ｐＧＥＭ Ｔ 39ＶＨ、ｐＧＥＭ Ｔ 39ＶＬ为含有ＶＨ、ＶＬ基因的克隆质粒 ,由本室构建。ｐＳＷ1 ＳｃＦｖ为含有一编码疏水性多肽接头 (Ｇｌｙ4 …     

精子发生中的端粒与端粒酶

端粒长度、端粒酶活性在生精细胞分化与增殖的各个阶段各不相同 ,从精原细胞到精子的成熟过程中 ,端粒酶活性的不断下降与端粒长度的依次增加呈负相关 ,在成熟精子细胞和精子中 ,端粒酶活性完全丧失。近年来研究表明 ,在少精子症和生精细胞成熟阻滞的无精子症病人之间 ,睾丸中端粒酶活性表达水平相近。人端粒酶活性、端粒酶逆转录酶为精子发生高度敏感和特异的标志 ,特别对原发性无精子症病人睾丸灶性精子发生的诊断具有重要的临床意义。     

胃癌端粒酶活性检测的临床意义

目的　探讨端粒酶在胃癌组织中的活性及其临床意义。方法　应用银染 Ｔ Ｒ Ａ Ｐ 方法检测９４ 例胃癌组织、１２ 例胃腺瘤、９ 例胃溃疡和５８ 例癌旁正常胃粘膜中端粒酶活性。结果　９４ 例原发胃癌组织中检出端粒酶阳性８１ 例,阳性率为８６ ．２ ％ 。正常粘膜无１ 例检测到端粒酶表达,１２ 例胃腺瘤有１例表达端粒酶阳性,在９ 例胃溃疡组织中有１ 例检测到端粒酶表达,１２ 例胃腺瘤有１ 例表达端粒酶阳性,在９ 例胃溃疡组织中有１ 例检测到阳性端粒酶表达。胃癌与正常粘膜组端粒酶表达率差异有显著性（ Ｐ＜ ０ ．００１） 。端粒酶活性与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和 Ｔ Ｎ Ｍ 分期无明显相关（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。结论　测定胃癌端粒酶活性对胃癌的诊断有一定意义。     

Telomerase activity in adrenal cortical tumors and pheochromocytomas with reference to clinicopathologic features

Telomeres consist of short repeated sequences that are shortened on continuous cell proliferations and synthesized by telomerase, an RNA-dependent DNA polymerase. Recent molecular studies have reported that telomerase is activated in most human cancers, whereas it is not detected in most somatic cells. These findings indicate that the positive telomerase activity is closely related to the malignant potential of human tumors. In several types of human tumors, including adrenal cortical tumors and pheochromocytomas, it is very difficult to predict the malignant potential using conventional histopathologic examination. To determine whether telomerase activity is useful as a diagnostic marker, we examined telomerase activity in adrenal cortical tumors and pheochromocytomas with special reference to their clinicopathologic features. Using a highly sensitive polymerase chain reaction (PCR)-based detection method, telomerase activity was demonstrated in one of 13 adrenal cortical tumors and two of seven pheochromocytomas, whereas all seven normal portions of adrenal gland failed to showed any telomerase activity. Although none of the tumors examined in this study was associated with metastasis, these three telomerase-positive tumors were accompanied by clinicopathologic features suggesting malignant potential. Telomerase activity might be a potential marker for estimating the biologic characteristics of adrenal cortical tumors and pheochromocytomas. Received: 8 August 1997 / Accepted: 31 July 1997     

神经上皮肿瘤中端粒酶活性及其调节

目的 研究神经上皮肿瘤的端粒酶活性及其RNA和人端粒酶逆转录酶（h TERT)的表达水平,为其临床诊断和治疗开拓思路。方法 改良端粒重复序列扩增法及RT－PCR法检测65例神经上皮肿瘤患者肿瘤标本的端粒酶活性及其RNA和hTERT表达水平,并与8例正常脑组织的标本进行对照。结果 神经上皮肿瘤端粒酶阳性率为61．5％（分别r＝0．607,r＝0．678,均P＜0．01）。结论 端粒酶活性及hTERT与神经上皮肿瘤恶性程度有关;hTERT是调节端粒酶活性的关键酶。     

大肠癌细胞端粒酶活性及端粒动力学研究

目的 探讨端粒动力学改变与端粒酶活化间的关系及其在大肠癌形成演化过程中的作用。方法 采用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测５８例大肠癌及其中３０例相应癌旁组织、远癌切端肉眼正常粘膜组织和６例良性大肠疾患端粒酶活性。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ－ＥＣＬ法对上述３０例大肠癌患者Ｔ、Ｐ、Ｎ不同位点和６例良性大肠疾患的粘膜进行平均端粒长度测定结果 Ｔ组ＴＲＦＳ值较Ｐ、Ｎ组明显缩短,而端粒酶活性表达Ｔ组（９１．４）,     

胰腺癌组织中端粒酶活性的表达

目的　探讨端粒酶活性与胰腺癌之间的关系 ,评价其作为胰腺癌诊断新的肿瘤标志物的可能性。方法　采用重复片段扩增SYBRGreen染色法 ,对 42例胰腺癌癌患者癌组织及其癌旁组织的端粒酶活性进行检测。结果　胰腺癌组织中端粒酶阳性率为 80 .9% (3 4/4 2 ) ,而在癌旁组织中仅 7.1% (3 /4 2 )表达端粒酶活性 ,胰腺癌组织端粒酶活性显著高于癌旁组织 (P <0 .0 0 1)。端粒酶活性的表达与胰腺癌组织的肿瘤大小、淋巴结转移、病理学临床分期及分化程度相关。结论端粒酶活性是特异性较强的恶性肿瘤分子标志物 ,其检测有可能成为胰腺癌诊断和预后判断的有效指标     

膀胱癌组织端粒酶活性的研究

目的　探讨膀胱癌组织端粒酶活性的临床意义。　方法　应用银染端粒重复序列扩增法检测 42例膀胱癌及其癌旁组织的端粒酶活性。　结果　 3例正常膀胱组织端粒酶表达均阴性 ;42例膀胱癌组织中端粒酶表达阳性 35例 (83 .3 % ) ,癌旁组织端粒酶表达阳性 7例 (16 .7% ) ;浸润癌或有淋巴结或远处转移者端粒酶表达阳性率高于非浸润癌或无转移者 ,但差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。　结论　端粒酶是膀胱癌较理想的肿瘤标记物之一。     

TRAP银染法检测端粒酶在胃癌组织中的表达

目的了解胃癌组织中端粒酶表达的状况及其临床意义,研究非放性 TRAP 检测端粒酶的可行性。方法用 TRAP 银染法检测58例胃癌及相应患者的正常胃粘膜,12例胃腺瘤和9例胃溃疡组织的端粒酶表达情况。结果 58例胃癌组织中49(84.5％)例端粒酶表达阳性,正常粘膜无一例检测到端粒酶活性(P<0.001),12例胃腺瘤,9例胃溃疡组织中各有1例检测到端粒酶活性。胃癌组织端粒酶的表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及 TNM 分期等临床病理参数无明显相关(P<0.05)。结论端粒酶是一种较理想的胃癌肿瘤标记物,TRAP 银染法是一种值得推广的检测端粒酶活性的方法。     

乳腺癌端粒长度与端粒酶活性变化的相关性研究

目的　检测乳腺癌及其癌旁组织中的端粒 (TLM )长度、端粒酶 (TLMA )活性的表达 ,探讨乳腺癌端粒长度与端粒酶活性的关系。方法　采用端粒酶重复扩增实验 (TRAP) 银染法检测端粒酶活性 ,以地高辛标记的Southern杂交的方法检测端粒长度。结果　端粒酶活性在乳腺癌TNM分期的进展中由Ⅰ期的 5 9.1%增高到Ⅳ期的 92 .9% ,而端粒长度在乳腺癌TNM分期的进展中不断缩短 ,由Ⅰ期的 (7.5 4± 0 .95 )kb缩短到Ⅳ期的 (5 .0 3± 0 .5 3 )kb。恶性乳腺肿瘤癌旁组织中的平均端粒长度皆位于正常水平。乳腺癌中端粒酶阳性表达组的端粒长度为 (4 .45± 1.3 9)kb显著短于端粒酶阴性组的 (5 .70± 1.2 3 )kb。结论　恶性乳腺肿瘤将端粒酶激活并没有绝对延长其染色体末端的端粒长度 ,而且 ,随着肿瘤的发展端粒片段还会缩短 ,并与端粒酶活性似乎存在着反向的关系。     

膀胱癌端粒酶活性的研究

目的 :探讨端粒酶活性和膀胱癌之间的关系。方法 :采用在PCR基础上建立的TRAP ELISA法对30例膀胱癌及 9例切缘组织和 7例正常膀胱组织中端粒酶活性进行半定量的研究。结果 :膀胱癌组总阳性率为83.3% (2 5 / 30 ) ,与切缘组 11.1% (1/ 9)和对照组 0 .0 % (0 / 7)相比差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;后两者之间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。端粒酶阳性表达率和表达强度与患者年龄、性别、病变部位、肿瘤大小、手术方式等无显著性相关 (P >0 .0 5 ) ,而端粒酶表达强度与细胞病理分级具有相关性 (P <0 .0 5 )。结论 :膀胱肿瘤的端粒长度和端粒酶活性对于判断疾病的恶性程度、预后、监测微小残瘤病灶和预示早期复发均有积极的意义