MAPKs在Bcl-2家族调控细胞凋亡中的作用

Bcl-2家族是细胞凋亡最重要的调控因子之一,在细胞凋亡通路中发挥着重要的调节作用。MAPKs信号传导通路参与的细胞内激酶级联反应是细胞外界信号传递到细胞核内、调节基因表达的重要通路,是细胞质和细胞核信号之间的枢纽。研究表明,MAPKs信号传导通路与Bcl-2家族有着密切的关系。本文就MAPKs如何作用于Bcl-2家族来调节细胞凋亡进行综述。     

Bcl-2家族蛋白与线粒体凋亡路径研究进展

近年来，越来越多的研究显示线粒体在介导细胞凋亡的过程中发挥了极为重要的作用，位于线粒体内外膜间隙的凋亡相关分子的释放是线粒体介导的凋亡过程中关键的分子事件。Bcl-2家族蛋白是以Bcl-2为代表的一组凋亡调节蛋白，能够通过不同的分子机制对线粒体介导的细胞凋亡发挥重要的调控作用。本文旨在对近年来关于Bcl-2家族蛋白调控线粒体凋亡路径分子机制的相关研究进展进行归纳和探讨。     

NF-kBP_(65)及Bcl-2蛋白在植酸诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法:采用AO/EB荧光染色法、彗星实验观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用,Western blot法检测凋亡调控基因Bcl-2及NF-kBP65的表达。结果:荧光染色可见植酸组细胞核染色质成固缩状、串珠状或出现凋亡小体等典型的凋亡细胞形态;植酸组细胞出现了具有凋亡特征的彗星样改变,彗星细胞拖尾率随着植酸浓度的增加呈递增趋势。植酸组细胞中Bcl-2、NF-kB蛋白比对照组表达下降,且呈现剂量-反应关系。结论:植酸对SGC-7901细胞具有诱导凋亡作用,对NF-kB途径的抑制作用可能是其抗癌的机制之一。     

Bcl-2蛋白家族与生殖细胞

自1985年发现Bcl-2基因至现在,对于Bcl-2蛋白及相关蛋白在凋亡中的调节功能研究取得了重大的进展.无论胚胎时期或出生后,哺乳动物的许多组织细胞都会出现凋亡,其中哺乳动物的性腺随生殖细胞的生长发育成熟,精原细胞和精母细胞是发生凋亡比率高的两个阶段.了解生殖细胞凋亡的出现以及调节机制,对于生物学及临床方面都有重大意义.该综述集中介绍Bcl-2蛋白家族在调节两性生殖细胞凋亡中的作用.     

Bcl-2家族参与碘诱发自身免疫性甲状腺炎小鼠甲状腺细胞凋亡

目的研究Bcl-2家族成员在高碘诱发实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)小鼠甲状腺细胞凋亡中的作用,初步探索自身免疫性甲状腺炎的发病机制。方法选取24只4～5周龄雌性NOD-SCID小鼠,随机分为4组,每组6只:对照组、高碘组、聚肌胞苷-聚胞苷酸[Poly(I:C)]组、高碘联合Poly(I:C)组,对照组和Poly(I:C)组自由饮用蒸馏水,高碘组和高碘联合Poly(I:C)组自由饮用0.05%NaI水,持续16周,Poly(I:C)组和高碘联合Poly(I:C)组第11周和第15周的周一、三、五每天腹腔注射一次1μg/μL Poly(I:C) 100μL。16周末取血清和甲状腺,分别利用ELISA法和病理学HE染色法验证EAT模型,TUNEL法和细胞色素C(Cyt-C)免疫组化法检测甲状腺滤泡细胞凋亡情况,real-time qPCR法检测Bcl-2家族成员在小鼠甲状腺中的mRNA表达水平。结果高碘饲养联合Poly(I:C)腹腔注射NOD-SCID小鼠建立了EAT模型;甲状腺滤泡上皮细胞凋亡程度和Cyt-C表达水平与炎症成正相关。高碘组和高碘联合Poly(I:C)组中Bcl-2家族促凋亡成员Noxa、PUMA、Bid的mRNA表达水平显著高于对照组和Poly(I:C)组(P<0.05)。结论线粒体细胞凋亡途径参与高碘诱发EAT的甲状腺细胞凋亡过程,细胞凋亡可能受到Bcl-2家族促凋亡成员Noxa、PUMA和Bid表达上调的调控。     

Bcl-2蛋白家族与生殖细胞

自1985年发现Bcl-2基因至现在,对于Bcl-2蛋白及相关蛋白在凋亡中的调节功能研究取得了重大的进展。无论胚胎时期或出生后,哺乳动物的许多组织细胞都会出现凋亡,其中哺乳动物的性腺随生殖细胞的生长发育成熟,精原细胞和精母细胞是发生凋亡比率高的两个阶段。了解生殖细胞凋亡的出现以及调节机制,对于生物学及临床方面都有重大意义。该综述集中介绍Bcl-2蛋白家族在调节两性生殖细胞凋亡中的作用。     

Bcl-2蛋白在64例大肠癌中的分析

本文采用流式细胞术（ＦＣＭ）研究了Ｂｃｌ－２蛋白在大肠癌中的表达。结果显示肿瘤的Ｂｃｌ－２蛋白表达量（１．３１±０．４１）明显高于正常粘膜细胞（１．０±０．１５），Ｐ＜０．００１；粘液腺癌、腺棘细胞癌和低分化腺癌的Ｂｃｌ－２蛋白表达量（１．４５±０．２１）高于中分化腺癌（１．３１±０．２２），Ｐ＜０．０５；低分化腺癌的Ｂｃｌ－２蛋白表达量（１．４８±０．０８），高于中、高分化腺癌（１．３１±０．２２），Ｐ＜０．０５；浸润型肿瘤的Ｂｃｌ－２蛋白表达量（１．４４±０．２０），高于非浸润型肿瘤（１．３０±０．２２），Ｐ＜０．０２５；异倍体肿瘤的Ｂｃｌ－２蛋白表达量（１．４１±０．２０），高于二倍体肿瘤（１．２４±０．２２），Ｐ＜０．０２５。因此认为，Ｂｃｌ－２蛋白与大肠癌的形成和不良预后相关。     

Bcl-2在儿童骨肉瘤中的表达与细胞凋亡的相关性及临床意义

目的探讨Bcl-2基因与细胞凋亡的相关性及在儿童骨肉瘤发生发展中的作用及临床意义。方法选取1998年1月—2010年3月泰山医学院附属医院、泰安市妇幼保健院收治并确诊的儿童骨肉瘤病例41例,均石蜡病理确诊,将接受规范治疗的患儿(包括手术及术前术后的化疗)纳入本组研究范围,共计36例应用免疫组织化学法对36例儿童骨肉瘤组织,20例骨软骨瘤组织中Bcl-2的表达水平进行检测。单因素分析Bcl-2与患儿性别、年龄、原发肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型、Enneking分期的相关性。采用DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测儿童骨肉瘤及软骨瘤组织中的细胞凋亡,计算凋亡指数(AI)后分析与Survivin及Bcl-2表达的相关性,并对其临床意义进行初步探讨。结果 Bcl-2表达:36例儿童骨肉瘤组织中Bcl-2表达阳性率为47.2%(17/36),对照组20例骨软骨瘤组织中未见表达(P<0.05);Bcl-2阳性表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型无明显相关,与Enneking外科分期及相关,EnnekingI～II期阳性率为30%(6/20),III期阳性率为62.5%(10/16),差异有统计学意义(P<0.05)。说明分期越高,Bcl-2表达越显著。AI范围3.6%～16.4%,均值7.3%,经检验在儿童骨肉瘤组织中细胞AI为(6.66±1.87)%,对照组组为(12.28±3.29)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05),说明骨肉瘤中的细胞凋亡减少。AI在Bcl-2阳性组为(4.68±0.57)%和阴性组(6.53±1.65)%两组间差异有显著性(P<0.05)。Bcl-2的表达与AI呈负相关。采用Kaplan-Meier法绘制Bcl-2阳性组和阴性组生存曲线,提示Bcl-2阳性组生存期显著低于阴性表达者。Cox回归模型进行多因素生存分析显示,骨肉瘤的Enneking分期,Bcl-2的表达水平是儿童骨肉瘤预后相关的独立的重要因素。结论 Bcl-2在儿童骨肉瘤中阳性表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型无明显相关,与Enneking分期相关。Bcl-2的阳性表达缩短骨肉瘤患儿的生存时间。Bcl-2的表达均与AI呈负相关。说明Survivin、Bcl-2蛋白可能阻碍了儿童骨肉瘤细胞的凋亡,促进了肿瘤的分裂增殖。多因素分析显示,骨肉瘤Enneking外科分期及Bcl-2的表达为骨肉瘤重要的预后因素。综合分析以上指标对判断儿童骨肉瘤预后有重要的参考价值。     

Caspase-3在硫化砷诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化砷(As4S4)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的分子机制。方法以不同剂量(7.5、15、30、60mg/L)的As4S4,12、24、36、48、60 h处理Hela细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;Western blot法检测不同剂量As4S4处理Hela细胞后凋亡相关蛋白bcl-2、caspase-3表达的变化;并以流式细胞术检测半胱氨酸酶3(caspase-3)酶活性的变化。结果不同剂量As4S4处理的Hela细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系。24 h时IC50为30 mg/L,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术显示不同浓度As4S4作用Hela细胞24 h后,出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(8.13±1.13)%、(29.58±2.51)%、(46.24±3.92)%、(62.36±4.42)%,对照组没有出现凋亡峰,差异有统计学意义(P<0.01);经As4S4处理后凋亡相关蛋白bcl-2表达下降,caspase-3表达增加;随着As4S4剂量的增加,表达活性caspase-3的细胞百分率逐渐增加,分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.80)%、(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论As4S4体外对Hela细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用,其作用机制可能通过下调bcl-2蛋白表达,活化caspase-3的活性来起作用。     

急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡与Bcl-2表达

目的：探讨急性胰腺炎（AP） 时腺泡细胞凋亡与Bcl-2 表达的关系.方法：SD 大鼠30 只,随机分为假手术组（A 组）,急性水肿性胰腺炎组（B 组）,急性出血坏死性胰腺炎组（C 组）.采用逆行胰胆管穿刺注射法建立急性水肿性与出血坏死性胰腺炎模型.检测造模后12 h 各组的血清淀粉酶活性、腹水情况、胰腺组织大体及镜下病理改变与评分、腺泡细胞凋亡指数（AI）、Bcl-2 蛋白表达情况.结果：⑴ C 组血清淀粉酶活性、腹水量、大体及镜下病理评分显著高于B 组（P〈0.05）,Bcl-2 阳性率、腺泡细胞AI 显著低于B 组（P〈0.05）.⑵ B、C 组中腺泡细胞AI 与大体及镜下病理评分均呈显著负相关关系（P〈0.05）.结论：AP 时腺泡细胞的凋亡是机体的一种自我保护机制,Bcl-2 参与了腺泡细胞凋亡的调控.     

Fas、Bcl-2与胎盘细胞凋亡的关系及在子痫前期发病中的作用

目的 探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨子痫前期的发病机制.方法 用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者20例,轻度子痫前期20例(试验组),同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测.结果 细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达.Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组(P＜0.05);在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见.试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P＜0.05).子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01).结论 子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关.     

Bcl-2、Bax与镉性肾细胞凋亡

Bcl-2、Bax是调控细胞凋亡的结构相似、作用相反的一对胞内蛋白质，二者的比例是决定对细胞抑制作用强弱的关键因素。Bel-2／Bax与镉性肾细胞凋亡的发生、发展及转归密切相关。本文综述了Bel-2、Bax调节细胞凋亡机制及在镉致肾细胞凋亡领域的研究进展。     

057 Bcl-2、Bax与镉性肾细胞凋亡

Bcl-2、Bax是调控细胞凋亡的结构相似、作用相反的一对胞内蛋白质,二者的比例是决定对细胞抑制作用强弱的关键因素.Bcl-2/Bax与镉性肾细胞凋亡的发生、发展及转归密切相关.本文综述了Bcl-2、Bax调节细胞凋亡机制及在镉致肾细胞凋亡领域的研究进展.     

子宫肌瘤细胞缺氧凋亡过程与基质网质膜上钙通道蛋白三磷酸肌醇受体介导胞浆内钙离子浓度变化关系

目的:探讨基质网质膜上钙通道蛋白三磷酸肌醇受体(IP3R)介导胞浆内钙离子浓度变化与子宫肌瘤细胞缺氧凋亡过程的关系。方法:随机选择均采用腹腔镜下子宫阻断手术治疗的子宫肌瘤患者218例采集子宫肌瘤旁及邻近平滑肌组织样本218份,运用RT-PCR、Western blot方法检测并比较子宫肌瘤组织与正常子宫平滑肌细胞中的IP3R、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、凋亡因子细胞色素C(Cytc)、Ca2+表达情况;再将子宫肌瘤细胞组织、正常子宫平滑肌组织分别分成A、B两组,在缺氧条件下培养6 h,A组采用阻滞剂肝素进行阻断实验,B组作为空白组,比较两组中4个样本的IP3R、ER、PR、Cytc、Ca2+表达情况。结果:缺氧处理前,子宫平滑肌组织中的IP3R、ER、PR、Cytc表达水平均显著高于子宫肌瘤组织,且差异具有统计学意义(P<0.05),子宫平滑肌组织中的Ca2+水平与子宫肌瘤组织中的水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧处理后,A组肌瘤组织与平滑肌组织的IP3R、ER、PR、Cytc、Ca2+比较差异无统计学意义(P>0.05);B组的肌瘤组织与平滑肌组织中的IP3R、Cytc、Ca2+比较差异有统计学意义(P<0.05),B组的肌瘤组织与平滑肌组织中的ER、PR比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:经过缺氧处理,可以增加子宫肌瘤组织中的IP3R、Cytc表达水平,从而增加子宫肌瘤组织细胞中的钙离子内流浓度,从而激活了内源性细胞凋亡途径,诱导子宫肌瘤细胞凋亡。     

Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响。结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的。     

COX-2抑制剂NS-398对肝癌HepG2细胞凋亡蛋白Bcl-2和Caspase 3表达的影响

目的探讨选择性环氧合酶2(COX-2)抑制在肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法用选择性COX-2抑制剂NS-398处理HepG2细胞,流式细胞术测定细胞凋亡和半胱氨酸酶3(Caspase3)活性变化;Western blotting法检测不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase3表达变化。结果流式细胞术显示NS-398(0、100、200、300、400μmol/L)作用HepG2细胞24h后,对照组未见凋亡峰,各试验组(100、200、300、400μmol/L)出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%、(60.22±2.03)%,呈明显剂量依赖性(P<0.01),不同浓度NS-398处理后Bcl-2表达下降,Caspase3表达增加,随着NS-398处理浓度的增加,表达活性Caspase3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%、(63.40±0.69)%,呈明显剂量依赖性(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过下调Bcl-2蛋白表达活化Caspase3,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,COX-2抑制也许可作为新的肝癌的治疗方法。     

凋亡抑制基因Bcl-2与牙齿发育

细胞凋亡在胚胎发育、器官形成、肿瘤发生及保持机体的稳态中发挥着至关重要的作用。而细胞调亡受多种基因的调控，调亡抑制基因Bcl-2就是其中一种。在牙齿形态形成过程中，Bcl-2基因是调控细胞增殖、分化、成熟、消亡的重要因素，是牙齿发育的塑形机制之一。     

凋亡抑制基因 Bcl-2与牙齿发育

细胞凋亡在胚胎发育、器官形成、肿瘤发生及保持机体的稳态中发挥着至关重要的作用。而细胞调亡受多种基因的调控 ,调亡抑制基因Bcl 2就是其中一种。在牙齿形态形成过程中 ,Bcl 2基因是调控细胞增殖、分化、成熟、消亡的重要因素 ,是牙齿发育的塑形机制之一     

复发性流产患者子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2表达的相关性研究

目的:探讨子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2与复发性流产患者的相关性。方法:选择20例复发性流产患者作为研究组,以下称RAS组,同期正常计划外受孕者20例作为对照组。采用免疫组织化学方法测定各组子宫蜕膜细胞Fas、Bcl-2蛋白的表达。根据阳性表达率和表达强度进行量化评分,并进行相关性分析。结果:RAS组Fas的表达为(4.67±0.59)明显高于对照组(1.31±0.66)(P<0.001),而Bcl-2的表达为(1.76±0.51)明显低于对照组(4.89±0.41)(P<0.001),且两者的表达呈明显负相关(r=-0.61,P<0.05)。结论:①子宫蜕膜细胞Bcl-2低表达、Fas高表达与复发性流产患者的发生有关。②Fas与Bcl-2在子宫蜕膜细胞中的表达失衡可能是复发性流产患者发生的原因之一。     

von Hippel-Lindau 基因两种异构体在真核细胞中高效表达和对细胞凋亡信号Bax/Bcl-2的影响

目的构建uon Hippel—Lindau（VHL）基因的两种异构体的重组表达载体并研究异构体与细胞凋亡信号之间的关系。方法将VHL基因的两种异构体VHL19、VHL30分别克隆入真核表达载体pcDNA3．1中，测序鉴定。转染293细胞，通过蛋白印记分析细胞内两种异构体高效表达与凋亡信号Bax、Bcl-2之间的关系。结果重组质粒经酶切获得与目的基因大小相当的条带（pVHL30约660bp，pVHL19约500bp），测序结果显示与目的基因完全相同。蛋白印记分析结果显示VHL19和VHL30在293细胞中获得表达，Bax和Bcl-2在空白对照、载体对照和pcDNA3．1-VHL19、pcDNA3．1-VHL30各组细胞之间的表达均没有观察到明显的差异。结论成功构建VHL两种异构体VHL19、VHL30的高效表达质粒，并获得高效表达。当细胞内VHL19、VHL30高效表达时凋亡信号Bax、Bcl-2表达并没有明显变化。