NF-κB在早期心肌缺血-再灌流损伤中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在心肌早期缺血-再灌流损伤中的作用.方法将18只山羊随机分为单纯体外循环(CPB)组、缺血-再灌流(IR)组、缺血-再灌流加特异性NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组.建立山羊CPB模型,心脏行缺血60 min,恢复血流-再灌流90 min,PDTC组在心肌缺血前应用PDTC(100 mg/kg).于心肌再灌流后,测量血流动力学数据及测定局部心功能,并应用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡数量,同时采用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测心肌组织中NF-κB的含量.结果缺血-再灌流能引起典型心肌缺血损伤的组织学改变,IR组NF-κB在缺血心肌组织中大量激活,心肌组织中NF-κB的活性水平显著高于CPB组(P＞0.05);而PDTC组再灌流60、90 min后,NF-κB的核转录活性明显减弱,显著低于IR组(P＜0.05);原位末端标记表明,IR和PDTC组中心肌细胞凋亡指数分别为(11.2±0.4)%和(6.4±0.2)%,心肌损伤显著减轻(P＜0.05).结论核转录因子-κB在心肌早期缺血-再灌流损伤中起重要作用,PDTC通过抑制NF-κB的核转录活性,从而减轻了心肌缺血-再灌流损伤.     

核转录因子-κB诱导肿瘤坏死因子-α在肝肺综合征大鼠肺血管内巨噬细胞中的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸对其表达的影响

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠肺血管内巨噬细胞(PIM)内的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC)对其表达的影响.方法 SD大鼠随机分4组:对照组、PDTC对照组、CCI4组、CCI4+PDTC组.取动脉血作血气分析,静脉血测内毒素和肝功能.取肠系膜淋巴结作细菌培养.应用免疫组化方法 观察PIM的粘附、聚集情况,以及TNF-α和NF-κB的蛋白表达和定位.非放射性凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测NF-κB活性,SYBR Green I实时定量PCR方法 检测肺组织中TNF-α的mRNA表达.结果 CCl4组发展成肝肺综合征(HPS)模型,表现为PaO2、PaCO2降低和肺泡一动脉血氧分压(A-aDO2)升高,肝功能异常,内毒素血症.CCl4组肠系膜淋巴结培养阳性率为62.5%(5/8),与CCl4+PDTC组的66.7%(6/9)比较差异无统计学意义(P>0.05).CCl4组超过10个巨噬细胞的血管为60.8%(292/480),而CCl4+PDTC组仅为19.6%(106/540),两组比较差异有统计学意义(P<0.01).对照组和PDTC对照组中肺血管内无巨噬细胞聚集.免疫组化染色NF-κB和TNF-α蛋白均在CCl4组的PIM中表达.CCl4组的NF-κB活性和TNF-α的mRNA表达明显高于对照组、PDTC对照组和CCl4+PDTC组(均P<0.05).结论 NF-κB诱导PIM内TNF-α表达在HPS中发挥重要作用,PDTC通过抑制PIM中NF-κB的活性,降低PIM活性以及其中TNF-α表达,从而改善HPS.     

电针预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能和缺血半暗区Tolls样受体4、核转录因子κB蛋白的影响

目的探讨电针预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的影响及其机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠36只随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)和电针预处理组(n=12)。后两组线栓法制备大鼠脑缺血2 h再灌注模型。电针预处理组在缺血前给予电针百会干预2周。再灌注24 h后,采用改良神经功能缺损评分进行评定,HE染色观察缺血侧脑组织脑损伤程度,Western blotting检测脑缺血半暗区Tolls样受体4(TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果与模型组比较,电针预处理组神经功能缺损评分降低(P0.05),脑组织损伤程度减轻,缺血半暗区TLR4、NF-κB蛋白表达下调(P0.05)。结论电针预处理通过下调缺血半暗区TLR4、NF-κB蛋白表达,诱导脑保护作用,降低炎性损伤程度,改善脑缺血再灌注损伤后大鼠的神经功能。     

核转录因子-κB在热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

目的探讨热休克预处理抑制氧化应激损伤心肌细胞的分子机制。方法采用1mmol/L的过氧化氢(H2O2)作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞;用总抗氧化能力检测试剂盒及福林酚法检测心肌细胞中总抗氧化能力的变化;用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测热休克蛋白70(HSP70)、αB晶状体蛋白、核转录因子κB(NFκB)抑制物(IκB)含量;免疫组化检测NFκB及HSP70在细胞内的分布情况。结果1与H2O2(1mmol/L,3h)损伤组比,热休克预处理组(43℃1h,恢复6h)的总抗氧化能力明显增加(P均<0.01);2心肌细胞经热休克预处理(43℃1h)后3h,HSP70、αB晶状体蛋白、IκBα的表达均增加,6～12h达高峰,并可维持至24h;3与正常心肌细胞比较,H2O2(1mmol/L)处理的心肌细胞中IκBα的含量明显下降,而热休克预处理则可抑制H2O2所致的这种变化;4H2O2(1mmol/L,30min)可使心肌细胞胞质中的NF-κB及HSP70向胞核移位,若先经热休克预处理(43℃1h,恢复6h)则可使这种移位显著减少。结论热休克预处理可抑制H2O2所致的心肌细胞损伤,其保护作用可能与其诱导HSP70、αB晶状体蛋白及IκBα的表达,从而抑制NF-κB的活化有关。     

核因子-κB对急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及左室局部功能的影响

目的 探讨核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）对急性缺血-灌流心肌细胞凋亡及左室局部功能的影响。方法 4只健康杂种犬随机分为对照组（C组）、缺血-再灌流组（IR组）和缺血-再灌流加特异性NF-抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷组（PDTC组）。IR组于第一对角支以下1cm处套扎左冠状动脉前降支30min,恢复血流再灌流120min,PDTC组在心肌缺血前应用PDTC（100mg／kg）,C组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图中的应变率法测量左室局部收缩功能,Simpson’s双平面法测左室射血分数（EF）,应用脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡指数,免疫组化法及蛋白印迹（western-blot）检测心肌组织中NF-κB的表达。结果 R组NF-κB在缺血心肌组织中表达增高,显著高于C组（P〈0．05）,而PDTC组NF-κB表达明显减弱,显著低于IR组（P〈0．05）;PDTC组心肌细胞凋亡数较IR组明显减少（P〈0．05）;IR组左室前壁缺血节段收缩期峰值应变率（SRpeak）明显减低（P〈0．01）,PDTC组的应变率与IR组比较明显增高（P〈0．05）。射血分数在三组间差异无统计学意义。结论 NF-κB在心肌缺血-再灌流中起重要作用,PDTC通过抑制NF-κB的表达从而减轻心肌缺血-再灌流损伤,改善心功能。     

抑制核因子-κB对Toll样受体4在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织中表达的影响

目的：观察急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠胰腺组织中Toll样受体4（TLR4）的表达情况。并且应用核因子（NF）-κB活化抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）进行干预，观察阻断NF-κB以后，TLR4在ANP大鼠胰腺组织中表达的变化，探讨ANP中TLR4与NF-κB的关系及NF-κB的活性对TLR4表达的影响。方法：72只SD大鼠随机分为假手术组、ANP组和PDTC预处理组。采用胆胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液诱导大鼠ANP模型。PDTC预处理组在建立模型前1h按100mg&#183;kg^-1腹腔注射给药。分别于建模后3h、6h、12h将大鼠分批处死。观察胰腺病理，用免疫组化及WesternBlot检测胰腺组织TLR4与NF-κB表达变化，RT-PCR检测胰腺组织TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达。结果：同假手术组相比，ANP组胰腺组织TLR4、NF-κB表达及TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达明显升高（P〈0.05）；同ANP组相比，PDTC预处理组胰腺组织炎症明显减轻，胰腺组织TLR4、NF-κB表达及TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论：TLR4和NF-κB在ANP大鼠胰腺组织中的表达水平明显增高，PDTC抑制ANP大鼠胰腺组织中NF-κB表达的同时，下调TLR4蛋白水平表达和TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达。TLR4和NF-κB是介导炎症反应的枢纽，因而它们在ANP发生发展中起重要作用。TLR4和NF-κB可能不是简单的上下游关系，其关系还需进一步研究。     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

细胞间粘附分子-1表达水平对心肌缺血再灌注损伤的影响及核转录机制的实验研究

目的:研究心肌缺血-再灌注时心肌组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达对中性粒细胞浸润的影响及与核因子-κB活性变化的关系.方法:将新西兰兔152只分为缺血-再灌注组(IR)、吡咯基二硫氨基甲酸酯(PDTC)预处理组(IR+PDTC)和假手术对照组(Sham).每组又分缺血前(0),再灌注后30、60、90、120、240、360 min时相点.用免疫印迹法(western blot)检测心肌组织ICAM-1的表达,凝胶电泳迁移率分析检测心肌组织NF-κB的活性,髓过氧化酶法(MPO)定量测定心肌组织中浸润的中性粒细胞.结果:在心肌缺血-再灌注后早期心肌组织的NF-κB 活性即明显增高并保持在高水平状态;心肌ICAM-1的表达在心肌再灌注120 min开始增高,并与中性粒细胞浸润升高有相关性;而PDTC能抑制NF-κB的活化、心肌ICAM-1的表达及中性粒细胞浸润.结论:心肌缺血-再灌注时心肌组织NF-κB被活化,启动ICAM-1的表达而参与缺血-再灌注损伤的发生过程.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对肝癌细胞株Hep3B增殖的影响

目的 探讨抗氧化剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrro1idine dithiocarbamate,PDTC)对肝癌细胞株Hep3B增值的影响及作用机制.方法 采用四甲基偶氨唑蓝(MTT)法,检测不同浓度PDTC、吡柔比星(pirarubicin)及PDTC预处理后联合吡柔比星对Hep3B细胞存活率的影响.电泳迁移率变动分析(EMSA)检测核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活性及PDTC对该活性的影响.结果 MTT结果示:PDTC能有效抑制肝癌细胞株Hep3B的增殖,并有浓度依赖性.不同浓度的PDTC作用后Hep3B细胞存活率差异均有统计学意义(P＜0.01).单用1μg/ml吡柔比星作用后,细胞存活率(87.3土5.4)%,用PDTC预处理后,细胞存活率为(58.6±3.7)%,其差异有统计学意义(t=7.592,P＜0.01),PDTC预处理能明显增强吡柔比星的细胞毒作用.EMSA结果示,PDTC浓度依赖性地抑制NF-κB的激活,不同浓度的PDTC作用两两相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 PDTC能抑制肝癌细胞株Hep3B的增殖,增强吡柔比星的细胞毒作用,其主要作用机制是抑制NF-κB的激活.PDTC有望用于肝癌的化学预防,联合化疗药可进一步提高化疗的疗效.     

吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐对缺血再灌注所致肝损伤的保护作用

目的：探讨吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐(PDTC)对肝脏缺血再灌注(HIR)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法：Wister大鼠随机数字表法分为：HIR组，PDTC保护(HIR PDTC)组。HIR组阻断肝左叶及肝中叶的人肝血流60min后再灌注，PDTC组先经阴茎背静脉注射PDTC 120mg／kg后立即按HIR组致伤。分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后1，3，6，12h NF-κB活性及TNF-α表达，并用赖氏法检测血浆中ALT含量。另取大鼠20只，亦随机数字表法分为HIR组和PDTC保护组，观察ALT动态变化及生存率。结果：损伤后NF-κB结合活性明显升高，并于再灌注后3h达到高峰，TNF-α表达增加，同时血浆中ALT含量亦明显丹高，PDTC保护组NF-κB活性减弱，TNF-α表达减弱，ALT水平降低。PDTC保护组ALT异常时间缩短，生存率增加。结论：PDTC能通过抑制NF-κB的激活，减少致炎因子的基因表达与合成释放，减轻炎细胞浸润，从而对HIR所致ALI起到保护作用，有利于HIR损伤的康复。     

脂多糖对中性粒细胞核转录因子-κB活性的影响

目的：探讨在脂多糖（LPS）刺激下,中性粒细胞核转录因子-κB（NF-κB）活性变化及其抑制因子（IκBα）的影响。方法：离体培养人中性粒细胞,分为来普霉素B（LMB）干预组（A组）、LPS刺激组（B组）和LPM＋LPS组（C组）。各组分别在刺激后0、15、60、120min,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,用Western-blot检测细胞核、浆中IκBα含量。结果：A组中各时相点NF-κB活性无明显变化;同一时相点细胞核、浆之间,以及不同时相点细胞核之间、细胞浆之间IκBα含量无明显变化。B组LPS刺激后,NF-κB活性较0点时明显增强;细胞核、浆中各时相点IκBα较未刺激时显著降低;细胞核、浆中呈现一致性变化。C组NF-κB活性于60min时点后,较B组同时相点明显受抑制;胞浆中IκBα于60min时较B组明显减少,而核中IκBα于60min后较B组明显增加。结论：NF-κB活性与核中IκBα含量呈负相关;IκBα在中性粒细胞存在核浆穿梭,通过抑制IκBα核浆穿梭,可显著降低NF-κB活性。     

吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐对缺血再灌注所致肝损伤的保护作用

目的:探讨吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐(PDTC)对肝脏缺血再灌注(HIR)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:Wister大鼠随机数字表法分为:HIR组,PDTC保护(HIR+PDTC)组。HIR组阻断肝左叶及肝中叶的入肝血流60min后再灌注,PDTC组先经阴茎背静脉注射PDTC120mg/kg后立即按HIR组致伤。分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后1,3,6,12hNF-κB活性及TNF-α表达,并用赖氏法检测血浆中ALT含量。另取大鼠20只,亦随机数字表法分为HIR组和PDTC保护组,观察ALT动态变化及生存率。结果:损伤后NF-κB结合活性明显升高,并于再灌注后3h达到高峰,TNF-α表达增加,同时血浆中ALT含量亦明显升高,PDTC保护组NF-κB活性减弱,TNF-α表达减弱,ALT水平降低。PDTC保护组ALT异常时间缩短,生存率增加。结论:PDTC能通过抑制NF-κB的激活,减少致炎因子的基因表达与合成释放,减轻炎细胞浸润,从而对HIR所致ALI起到保护作用,有利于HIR损伤的康复。     

经皮电刺激夹脊穴对大鼠脊髓损伤后神经胶质纤维酸性蛋白及炎症反应的影响

目的观察经皮电刺激对脊髓损伤后大鼠胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、核因子-κB(NF-κB)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。方法 90只健康成年Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组(A组,n=30)、经皮电刺激组(B组,n=30)和对照组(C组,n=30)。采用Allen法复制大鼠T_9急性脊髓损伤模型,于术后1 d、3 d和7 d对各组大鼠行后肢运动功能BBB评分和斜板试验;免疫组织化学染色检测脊髓GFAP、NF-κB及IL-6的表达。结果术后3 d、7 d,B组大鼠BBB评分和斜板试验成绩均明显优于C组(t3.349,P0.01)。术后各时间点,B组GFAP、NF-κB及IL-6表达均显著低于C组(t20.815,P0.001)。结论经皮电刺激可有效抑制炎症反应,抑制脊髓损伤后大鼠脊髓组织GFAP的表达,从而促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复。     

核因子-κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的研究核因子-κB (NF-κB) 活化在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤中的作用和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的作用. 方法实验动物随机分成3组,对照组,ANP组,PDTC组,然后逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制作ANP模型.观察血清淀粉酶、动脉血氧分压(PaO2)、胰腺、肺组织病理变化、NF-κB抑制蛋白IκBα及NF-κB p65 mRNA在肺组织的表达.结果 应用PDTC后,PDTC组与ANP组比较,血清淀粉酶明显下降,由(8 231.20±848.70)U/L降至(4 205.20±1 611.49)U/L;PaO2升高,由(80.70±8.05)mmHg升至(86.80±3.58)mmHg;胰腺、肺组织损伤减轻;NF-κB迅速活化,肺组织中IκBα表达升高,NF-κB p65 mRNA表达下降.结论 NF-κB活化在ANP肺损伤发病机制中起作用,抑制NF-κB活化可改善大鼠ANP肺损伤.     

重组人促红细胞生成素对大鼠颅脑损伤后NF-κB表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对创伤性颅脑损伤(TBI)后脑组织NF-κB活性及NF-κB mRNA表达的影响,探讨其在继发性颅脑损伤中的作用。方法 84只雄性SD大鼠建立颅脑损伤模型,随机分为颅脑损伤组(TBI组,n=42)和rhEPO治疗组(TBI-rhEPO组,n=42),于预定时间点行神经功能损伤评分(NSS),通过光镜观察创伤灶及周围脑组织变化,采用免疫组化方法检测脑组织中NF-κB及TNF-α的表达情况,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达情况。结果颅脑损伤后12 h至7 d,TBI-rhEPO组NSS始终低于同一时间点TBI组(P<0.05);TBI组大鼠不同阶段NF-κB蛋白表达及mRNA表达明显升高,NF-κB表达水平与TNF-α表达水平呈正相关关系(r=0.519,P<0.05),且与组织炎症损伤程度一致,TBI-rhEPO组不同阶段NF-κB蛋白及mRNA表达均明显低于TBI组(P<0.05)。结论颅脑损伤早期应用rhEPO,可能通过抑制NF-κB活性,降低NF-κB、TNF-α的表达,从而抑制继发性炎症反应,减轻继发性颅脑损伤。     

核因子-κB在大鼠烧伤后中性粒细胞致心功能损害中的作用

目的 探讨大鼠烧伤早期核因子-κB(NF-κB)活化对中性粒细胞(PMN)在心肌组织中聚集和发生损害作用的影响.方法 将170只Wistar大鼠随机分正常对照组(20只)、烧伤组(90只)、烧伤后吡咯烷二硫代氨基甲酸盐干预组(PDTC组,60只).后两组大鼠均于背部造成35%体表总面积Ⅲ度烧伤后,立即腹腔注射等渗盐水,且PDTC组同时皮下注射PDTC 250 mg/kg.对照组除不烧伤外,其余处理同烧伤组.伤后1、3、6、12、24 h,凝胶电泳迁移率分析法检测心肌组织NF-κB活性;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌组织白细胞介素8(IL-8)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达;八导生理记录仪记录左心室最大收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)及心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和下降速率(-dp/dtmax);并测定心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性.对照组作相同检测.数据采用SPSS 10.0统计软件行单因素方差分析.结果 烧伤组大鼠心肌组织NF-κB活性伤后迅速增高,伤后1 h达峰值(20.27±3.43)×104积分灰度值(A),明显高于对照组[(2.18±0.38)× 104A,P＜0.01],伤后24 h仍高于对照组(P＜0.01).伤后3、6、12、24 h心肌组织ICAM-1和IL-8mRNA表达、MPO活性均较对正常对照组明显升高(P＜0.01),:LVSP、±dp/dtmax明显低于正常对照组(P＜0.01),而LVEDP高于正常对照组(P＜0.01).与烧伤组比较,PDTC组上述指标指标均有明显的改善(P＜0.01).结论 严重烧伤可活化心肌组织NF-κB,从而上调黏附分子和趋化因子等的合成和释放,导致PMN在心肌组织中聚集,引起心肌功能损害.     

抑制脊髓内NF-κB/p65对骨性关节炎后期产生的痛觉过敏的影响

目的:研究核转录因子kappa B/p65(nuclear factor-kappa B/p65,NF-κB/p65)在骨性关节炎(osteoarthritis,OA)导致的痛觉敏感中的作用。方法:6~8周SD雌性大鼠,体重250~300 g,随机分为生理盐水对照组、骨性关节炎模型组和鞘内给予NF-κB阻滞剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)模型组(n=30),并于造模前1天和造模后7、14、21、28天测定大鼠的机械痛阈,测定完成后处死大鼠,采用Western blotting的方法检测NF-κB/p65在各组大鼠脊髓内的表达情况。结果:模型组大鼠脊髓内NF-κB/p65的表达量较对照组明显增加,大鼠机械痛阈的变化趋势与其相一致;与模型组相比,在大鼠骨性关节炎后期鞘内注射PDTC能够明显改善机械痛敏。结论:NF-κB/p65在骨性关节炎大鼠脊髓内表达量显著增加,抑制脊髓内NF-κB/p65的表达能明显改善骨性关节炎大鼠的机械痛敏。     

吡咯二硫氨基甲酸酯预处理对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的：吡咯二硫氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）通过阻断NF-κB下游炎性因子的释放,从分子水平、组织水平和移植肺功能评估等方面来考察其在大鼠移植肺缺血再灌注损伤中是否具有保护作用。方法：SD雄性大鼠30对,每只质量200~300g。分为两组（对照组和PDTC干预组）。每个组又按供肺的保存时间分为0h、2h、6h、8h和12h共5个亚组。每个亚组行6次成功的肺移植实验,收集实验标本。对照组供肺保存于LPD液中,实验组的保存液中加入逆转录聚合酶连反应PDTC（Sigma公司,40mmol.L-1）。移植术后30min,用Western blot方法检测两组供肺P50表达水平,凝胶迁移试验（EMSA）方法检测核转录因子κB（NF-κB）入核的变化。检测其下游因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和一氧化氮合成酶（iN-OS）的表达水平。同时比较两组气道压力、血气分析氧合指数、湿干重比、HE染色、透射电镜等指标。结果：PDTC干预组和对照组相比,P50的表达无显著差异（P=0.276）。PDTC干预组和对照组相比,NF-κB入核明显的减少,其差异有统计学意义（P〈0.01）;,TNF-α和iNOS表达有显著差异（均P〈0.01）。PDTC干预组与对照组相比较,移植肺的NF-κB入核减少和下游炎症因子TNF-αi、NOS表达上的变化密切相关（TNF-α：r=0.636,P〈0.01;iNOS：r=0.633,P〈0.01）。PDTC干预组和对照组相比,肺移植后30min血气分析氧合指数（P=0.042）、湿干重比（P=0.001）、移植肺的肺损伤评分（P=0.017）,均有显著差异。结论：PDTC预处理能显著降低移植肺细胞因子水平,并进一步改善移植肺功能。其机制可能通过阻断NF-κB的入核来实现的,而非下调NF-κB的表达量。     

二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪(DZX)介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为:①缺氧组;②DZX组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L的DZX的培养液15 min;③DZX+PDTC组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L DZX和500μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的培养液15 min;④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16 h,对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V/PI流式检测凋亡细胞,Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低(P<0.01),Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少;②与DZX组比较,加入PDTC后,流式检测显示细胞凋亡显著增多(P<0.01),Hoechst染色心肌细胞凋亡增多,Western blot检测显示Bcl-2表达减少,Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用;位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。